强研究的线虫<em>线虫</em>可transgenically的设计,以表达人类β-淀粉样肽(Aβ)。诱导表达的Aβ<em> C。线虫</em>肌肉导致一个快速,重现性瘫痪的表型,可用于监测治疗,调节Aβ的毒性。
积累的β-淀粉样肽(Aβ)一般认为是阿尔茨海默氏病的诱导,但目前仍不清楚有关的机制(S)的毒性。 Aβ是还交存肌注包涵体肌炎,严重的人类性肌病。激烈的研究线虫线虫可以transgenically设计,以表达人类的Aβ。根据对组织或对Aβ表达的时机,转基因蠕虫可以很容易衡量的,对Aβ毒性的一个读出的表型。例如,泛神经元Aβ的表达的转基因蠕虫的缺陷是联想学习(杜新志等人,2009年),而同构肌肉特异性表达的转基因蠕虫显示一个渐进的,年龄依赖的麻痹表型(Cohen等链接,1995年; 2006年)。一个特别有用的C。线虫模型采用了一个温度敏感突变的mRNA监视系统工程师肌肉温度诱导Aβ的转基因表达,在重现瘫痪表型后,温度升档( 链接等,2003) 。治疗计数器在此模型中Aβ的毒性[例如,一个保护性基因( 哈桑等人,2009年)的表达,或置身于银杏叶提取物(吴等 ,2006)]再现改变温度升档,这些转基因引起的瘫痪率蠕虫。在这里,我们描述了我们的协议,在这种转基因 C.测量瘫痪率线虫模型,特别注意实验变量,可以影响这个测量。
我们所描述的协议,可以有效地用于检测Aβ的毒性化合物影响。发布的例子包括:银杏叶提取物成分的影响(吴等 ,2006)和利血平(Arya等人,2009年)。已对在其他系统中的Aβ的毒性保护的化合物也显示,在此模型中的保护(例如,美金刚,我们未发表的结果)。建立这种模式的一个重要理由是,发达的遗传和分子工具在 C 线虫可以用来调查对Aβ毒性机制。因此,Aβ的毒性作用的特定的突变可以被检测(例如,减少胰岛素样信号引入DAF – 2功能丧失突变,FLOREZ – 麦克卢尔等 。2007年生效),而这种模式也可以用来检查过度表达的转基因(Fonte酒店等,2008)的影响。最近,我们已经取得了广泛使用这种模式,检查单中Aβ的氨基酸替换(未发表数据)的毒性的影响。
这里描述的转基因模型分析的急性Aβ的表达肌肉细胞功能的影响。在麻痹肌肉细胞和它们的肌的时候是完好的;瘫痪的表型是不是肌肉细胞死亡的结果。然而,(〜48小时后最初的升档)后瘫痪肌肉的完整性和最终死亡的蠕虫有一个击穿。我们没有调查这下游的Aβ表达影响,或用作毒性标志。
这里描述的诱导Aβ的表达模式是没有适当的调查治疗方法,调节β-淀粉样蛋白形成本身。虽然同构的Aβ表达形式易被察觉淀粉样蛋白沉积的转基因蠕虫( 仙子等人1998年; Link 等人,2001年),与诱导的Aβ表达的转基因蠕虫很少有淀粉样蛋白沉积,并出现瘫痪的表型淀粉样蛋白沉积 (德雷克等独立。 2003年)。我们的研究结果是一致的观点,急性毒性诱导的Aβ表达的可溶性低聚物Aβ的积累,而不是淀粉样蛋白沉积的结果。
The authors have nothing to disclose.
我们要感谢帮助开发协议,在这里,特别是杜松子酒Fonte酒店,谁开发的原程序的链接实验室的现任和前任成员。这项工作已经从美国国立卫生研究院(AG12423)和阿尔茨海默氏症协会(ZENITH奖)的奖项,以民盟的支持
Reagents | Quantity/2L | Company/Catalogue # | Comments |
NaCl | 6g | Sigma-Aldrich / S9888 | |
Agar | 40g | Sigma-Aldrich / A7002 | |
Peptone | 5g | Sigma-Aldrich / P0556 | |
ddH2O | 2L | ||
1M CaCl2 | 2mL | 147.02mg/mL in ddH2O | |
Uracil | 2mL | 2mg/mL in ddH2O | |
Cholesterol | 2mL | 5mg/mL in ethanol (do not autoclave) | |
1M MgSO4 | 2mL | 246.5mg/mL in ddH2O | |
1M KPO4 | 50mL | 98mg KH2PO4.mL, 48mg K2HPO4/mL in ddH2O, pH | |
Erlenmeyer Flask | VWR |