Identificação dos mecanismos subjacentes à lesão muscular é crucial. Aqui apresentamos a técnica histológica para preparar parafina e congeladas seções do Drosophila músculos do tórax. Isto permite a análise da morfologia do músculo e localização de proteínas e outros componentes celulares do músculo.
A caracterização molecular das distrofias musculares e miopatias em humanos revelou a complexidade da doença muscular e análise genética de especificação muscular, formação e função em sistemas modelo tem fornecido informações valiosas sobre a fisiologia muscular. Portanto, identificar e caracterizar os mecanismos moleculares subjacentes lesão muscular é fundamental. A estrutura do adulto Drosophila multi-fibras de músculos de vertebrados se assemelham músculos estriados 1 e a rastreabilidade genética de Drosophila tornou um grande sistema para analisar a morfologia muscular distrófica e caracterizar os processos que afetam a função muscular em adultos envelhecimento moscas 2. Aqui apresentamos a técnica histológica para preparar parafina e congeladas seções do Drosophila músculos do tórax. Estes preparativos para permitir o tecido a ser marcadas com manchas histológica clássica e rotulado com corantes detectar proteínas, e especificamente criosecções são ideais para a detecção imunohistoquímica de proteínas nos músculos intactos. Isto permite uma análise da estrutura do tecido muscular, a identificação de defeitos morfológicos, e detecção do padrão de expressão para o músculo / neurônio-específica de proteínas nos músculos adulto Drosophila. Essas técnicas também podem ser ligeiramente modificada para o seccionamento de outras partes do corpo.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos ao Prof Eichele por nos permitir usar o crio-micrótomo. Trabalho foi financiado pelo Max-Planck-Gesselschaft.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |