L'identification des mécanismes sous-jacents des lésions musculaires est cruciale. Ici, nous présentons la technique histologique pour la préparation de paraffine et congelés des sections de muscles thoraciques chez la drosophile. Cela permet l'analyse de la morphologie des muscles et la localisation des protéines et autres composants de la cellule musculaire.
La caractérisation moléculaire des dystrophies musculaires et myopathies chez les humains a révélé la complexité de la maladie du muscle et de l'analyse génétique de la spécification musculaire, la formation et de fonctionner dans des systèmes modèles a fourni des informations précieuses sur la physiologie musculaire. Par conséquent, identifier et caractériser les mécanismes moléculaires qui sous-tendent les dommages musculaires est essentiel. La structure de l'adulte de drosophile multi-fibres musculaires ressemblent vertébrés muscles striés 1 et la traçabilité génétique de la drosophile a fait un excellent système pour analyser la morphologie des muscles dystrophiques et de caractériser les processus qui affectent la fonction musculaire chez les adultes du vieillissement des mouches 2. Ici, nous présentons la technique histologique pour la préparation de paraffine et congelés des sections de muscles thoraciques chez la drosophile. Ces préparations permettent de tissus à teindre avec des colorants histologiques classiques et étiquetés avec des colorants protéines détecter, et plus précisément cryocoupes sont idéales pour la détection immunohistochimique des protéines dans les muscles intacts. Cela permet l'analyse de la structure des tissus musculaires, l'identification des défauts morphologiques, et la détection du patron d'expression pour le muscle / neurone-spécifique des protéines dans les muscles pour adultes drosophile. Ces techniques peuvent aussi être légèrement modifiée pour la coupe d'autres parties du corps.
The authors have nothing to disclose.
Nous remercions le Professeur Eichele de nous avoir permis d'utiliser la cryo-microtome. Le travail a été financé par Max-Planck-Gesselschaft.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Stainless steel collars | self-made | Specially constructed | ||
Forceps | Fine Science Tools GmbH | 11295-10 | ||
Aluminum foil | Any | |||
Blade or scalpel | Any | |||
Wheaton macro staining jar | Wheaton Science Products | 900200 | ||
Microtome | Carl Zeiss | Model: Hyrax M25 | ||
Cryo-microtome | Leica | Model CM3050S | ||
60-65°C Incubator | Any | Large enough to hold at least 4 staining jars | ||
Freezing cooler with metal block | Any | Store at -80°C | ||
Super-frost slides | Thermo Fisher Scientific | 9161155 | ||
Cover slips | Any | Recommend 24 X 40 mm | ||
Chloroform | Sigma-Aldrich | 288306 | Analytical grade | |
Glacial acetic acid | Merck | 100063 | Analytical grade | |
Ethanol | Merck | 100983 | Analytical grade | |
Methylbenzoate | Sigma-Aldrich | M29908-500G | Analytical grade | |
Paraplast plus | Sigma-Aldrich | 76258 | Paraffin | |
Tissue-Teck O.C.T. compound | Sakura | 4583 | ||
16% formaldehyde, methanol free | Polysciences | 18814 | ||
Glycerol | Sigma-Aldrich | G5150-1L |