이 문서에서는, 우리는 인간 간암 세포를 타겟팅하는 가장 효율적인 벡터로 adeno – 관련 바이러스 혈청형 3 (AAV3)의 신분증을 설명합니다.
비 병원성 인간 파르 보 바이러스에 따라 재조합 벡터는, adeno – 관련 바이러스 2 (AAV2)가 개발하고, 유전자 치료 임상 실험의 여러 사용 현재되었습니다. 최근 추가 AAV의 serotypes의 숫자도 다양한 크고 작은 동물 모델 1 조직 tropism 선택을 전시 게재된 보유하고있는, 고립되었습니다. 10 가장 일반적으로 사용되는 AAV의 serotypes의 AAV3는 체외에서뿐만 아니라 생체내의 세포와 조직을 transducing에 의해 지금까지 가장 효율적입니다.
AAV3는 바인딩을위한 공동 수용체 세포로 인간 hepatocyte 성장 인자 수용체를 이용하기 때문에 매우 효과적으로 세포 라인 – hepatoblastoma (HB)와 간세포암 (HCC) – 그러나, 우리가 최근에 출판된 연구에, 우리는 AAV3 벡터 인간 간암 transduce 것을 문서화해야 이러한 세포 2,3에서 항목.
이 문서에서는, 우리는 기자의 유전자를 운반 재조합 벡터로 AAV3 인간 간암 세포의 고효율 전달을 달성하는 데 필요한 단계를 설명합니다. 치료 유전자를 운반 재조합 AAV3 벡터의 사용은 결국 인간의 간 암의 가능성 유전자 치료가 발생할 수 있습니다.
비 병원성 인간의 파르 보 바이러스, adeno – 관련 바이러스 (AAV)에 따라 재조합 벡터가 개발하고, 유전자 치료 임상 시험 5 여러 사용 현재되었습니다. 이전에는 10 개의 가장 일반적으로 사용되는 AAV의 serotypes의 일반적으로 AAV3 벡터의 전달 효율은 체외에서 생체내 1 두, 특히 낮은 것으로보고되었습니다. 그러나, 최근 관찰되는 AAV3로 유동세포계측법 2 양적 결정 매우 잘 벡터 transduce 인간 간암 세포 라인, 그 AAV3이에 바인딩 및 항목에 대한 공동 수용체 세포로 인간 hepatocyte 성장 인자 수용체 (hHGFR)를 활용 세포 3, 강하게 특히 일반적으로 인간의 간암 세포에 대한 AAV3의 선택 조직 tropism, 인간 간암 세포를 권장합니다. 그러나, 이후 AAV3 벡터는 또한 정상적인 인간 hepatocytes에게 효율적으로 2 transduce, 생체내에서 암 유전자 치료 응용 프로그램에서 자신의 잠재적인 사용에 부정적인 영향을 것입니다. 이 잠재적인 문제를 우회하는 한 가지 가능한 전략과 관련된 transcriptional 타겟팅 정상 hepatocytes에 의해 선택적으로 종양에 의해 생산되는 유전자 제품을 식별하여 암 세포하지만. 정상 hepatocytes은 일반적으로 매우 소량을 생산 이후 예를 들어, 이전의 연구 결과, α – 페토 프로테인 (AFP)의 혈청 수준이 존재, 진행 및 / 또는 간 암의 특정 유형의 reoccurrence를 추적하기위한 구체적인 표지로 사용하는 것으로 나타났습니다 이 단백질. 사실, 우리는 간암 세포에서 transgene 표현을 대상으로 AFP 프로 모터를 포함하는 AAV3 벡터를 사용한 있지만 정상적 hepatocytes 2, 연구의 현재 간암의 murine 이종 이식 모델에서이 접근 방식의 효능을 테스트하기 위해 진행되고 있습니다. 우리가 추가적인 연구에서 우리는 다양한 AAV의 혈청형 벡터의 전달 효율이 상당히 6-14 바이러스 capsids의 표면 노출 티로신 잔류의 사이트 이동 돌연변이 유발에 의해 증가된 수 있습니다 관찰했습니다. 6 7 표면 노출 tyrosines도 AAV3에 보존되어 있기 때문에, 우리는 이러한 잔류물의 사이트 감독 돌연변이 유발을 수행하고 티로신 – 돌연변이 AAV3 벡터의 전달 효율이 대폭 인간 간암 세포 (게시되지 않은 데이터)에 향상된 것을 관찰했습니다. 연구는 또한 인간 hepatoblastoma 및 간세포암에 대한 마우스 이종 이식 모델에서 티로신 – 돌연변이 AAV3 벡터의 안전성과 효능을 평가하기 위해 현재 진행되고 있으며, 성공적인 경우, 최적의 티로신 – 돌연변이 AAV3의 혈청형 벡터는 인간의 간을를 타겟팅하는 유용하다는 것을 증명하기 수 있습니다 잠재적인 유전자 치료에 대한 암.
The authors have nothing to disclose.
우리는 DRS 감사합니다. 넉넉한 Hep293TT 세포를 제공하는 재조합 AAV3 및 AAV – EGFP의 plasmids, 각각 박사 게일 톰린슨 그들의 종류의 선물 R. 주드 Samulski과 샤오 샤오. 이 연구는 국립 보건원에서 공중 보건 서비스 권한을 부여 부여 R01 HL – 076901, R01 HL – 097088, 및 P01 DK – 058327 (프로젝트 1) (로)에 의해 부분적으로 지원되었다.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | Cellgro | 10-0170CM | ||
PEI | Polysciences | 23966 | ||
Benzonase | Novagen | 70664-3 | ||
HiTrap Q HP column | GE Healthcare | 17-1154-01 | ||
Salmon sperm DNA | Fisher | NC9753983 | ||
Iodixanol gradient | OptiPrep | 1114542 | ||
G-50 Columns | GE Healthcare | 27-5330-01 |