Användningen av inhemska och minigrisar i naturvetenskap har ökat markant under senare år. Genom att visa hur man utför intubation transuretral urinblåsan kateterisering, femoral artär och ven kateterisering, samt transcardial perfusion strävar vi efter att ytterligare öka värdet av Göttingen minigrisar i biomedicinsk forskning.
Framväxten av Göttingen minigris i forskning om ämnen som neurovetenskap, toxikologi, diabetes, fetma och experimentell kirurgi speglar den nära likheten av dessa djur till människans anatomi och fysiologi 1-6. Storleken på Göttingen minigris tillåter användning av kirurgisk utrustning och avancerade avbildningsmetoder liknande dem som används i människa 6-8. Syftet med denna instruktionsvideo är att öka medvetenheten om värdet av minigrisar inom biomedicinsk forskning, genom att visa hur man utför intubation, transuretral urinblåsan kateterisering, femoral artär och ven kateterisering, samt transcardial perfusion.
Endotrakeal intubering ska utföras när en minigris genomgår narkos, eftersom det upprätthåller en fri luftväg, tillstånd assisterad ventilation och skyddar luftvägarna från aspirat. Transuretral urinblåsan kateterisering kan ge värdefull information om om vätskebalans staten samt njur-och kardiovaskulär funktion under långa kirurgiska ingrepp. Dessutom kan urin kateterisering förhindra kontamination av känsliga medicinsk-teknisk utrustning och smärtsam blåsa förlängning som kan skada djuret och onödigt påverka experimentet på grund av ökad vagala ton och förändrade fysiologiska parametrar. Arteriell och venös kateterisering är användbart för att få upprepade blodprover och övervaka olika fysiologiska parametrar. Kateterisering av femorala fartyg är att föredra framför kateterisering av halsen fartyg för lättillgänglighet, när de utför experiment med frame-baserade stereotaxic neurokirurgi och hjärnröntgen. När du utför fartyget kateterisering i överlevnad studier måste strikta aseptisk teknik användas för att undvika infektioner 6. Transcardial perfusionen är den mest effektiva fixering metoden, och ger framstående resultat vid beredning minigris organ för histologi och histokemi 2,9. För mer information om anestesi, kirurgi och experimentella tekniker i svin i allmänhet hänvisar vi till Swindle 2007. Kompletterande information om Premedicinering och induktion av anestesi, assisterad ventilation, smärtlindring, pre-och postoperativ vård i Göttingen minigrisar är tillgängliga via Internet på http://www.minipigs.com 10. För omfattande information om svin anatomi hänvisar vi till Nickel et al. Vol. 1-5 november.
Denna presentation ger steg-för-steg visuella instruktioner om hur du utför fyra ofta använda rutiner minigris forskning 12,13. Den beskrivna teknikerna kan användas med liten eller ingen anpassning i lantrasen grisar och andra stora djur forskningen såsom hundar och får 14. Aseptisk teknik måste användas för att undvika infektioner, när de utför de beskrivna förfarandena i överlevnad studier.
Induktion av anestesi är viktigt för djurens välbefinnande och vetenskapliga skäl, och bör ge brist på hornhinnan reflexer och bra muskulär avslappning innan endotrakeal intubation görs. Men eftersom anestetika som används för induktion inte anges i fasta doser, men administreras tills önskad effekt har observerats, är det viktigt att noga övervaka djuret på grund av risken för apné, speciellt om du använder propofol 6,10. För intubation, kan användningen av Xylocain spray eller muskelavslappnande underlätta införandet av röret, men användningen av neuromuskulära blockerare bör endast utföras av personal som är väl utbildade i sådana förfaranden så att de överensstämmer med etiska krav. Försiktighet bör iakttas inte traumatize larynx passagen vid intubation, för att undvika endotrakeal svullnad och ödem. Airway ödem kan behandlas med NSAID eller liknande antiinflammatoriska läkemedel 10. Grisar kan intuberade från olika positioner, men med djuret på rygg tenderar att vara lättare för de som regelbundet utför mänskliga intubation, eftersom det presenterar luftvägarna på ett liknande sätt 6. Det vanligaste felet vid intubation är oavsiktlig placering av röret i matstrupen, som ligger precis nedanför larynx passagen när djuret är placerad på ryggen. Notera bör röret aldrig långt utan att först tydligt identifierar arytenoids brosk och stämband.
Transuretral kateter i urinblåsan genom urinröret är lätt gjort i suggor, medan detta förfarande är mycket svårt, kanske omöjligt, för män 6. Det bör noteras att sedan den kvinnliga urinrörets mynning är anterior till slidan, kan de större slidöppningen felaktigt vara kateter. Användning av sterila och desinficering av smörjmedel är lämpligt för överlevnad studier. Dessutom kan smörjmedel med lokalbedövande effekt underlätta kateter förfarande.
När du utför femoral artär och ven catherization, valet av fartyg katetrar och hur de är säkrade skiljer mellan icke-överlevnad och studier överlevnad, särskilt när katetrar implanteras under en längre tid 6. Till exempel katetrar för kroniska implantation bör vara mycket biokompatibla, har retention pärlor eller manschetter för fixering liksom inte traumatize kärlväggen över tiden, vilket medför en trombos eller erosion 6.
I det aktuella videon, använder vi ett slutet system som drivs med komprimerad luft för transcardial perfusion. Ett annat alternativ är att använda ett system som drivs av gravitation. Fördelen med gravitationen system i jämförelse med system som använder tryckluft är att de är enkla, effektiva, och inte utgör någon risk för tryckluft kommer in i kärlsystemet. Men förändringar det hydrostatiska trycket från gravitationen system kontinuerligt under perfusion, och detta kan påverka den histologiska resultaten 15. Beroende på vilken typ av histopatologiska studier man vill utföra, kan det vara fördelaktigt att BEGJUTA djuret med hepariniserat koksaltlösning först. Detta är särskilt importantance när du utför immunofluorescens färgning för att undvika autofluorescens problem som orsakas av erytrocyter. Dessutom, om orgeln av intresse är hjärnan kunde fallande aorta spännas fast för att spara fixativ. Men i grisar, innebär detta steg ytterligare dela upp och kommer att förlänga förfarandet.
The authors have nothing to disclose.
Studien stöds ekonomiskt av Lundbeck stiftelsen, Karen Elise Jensens Stiftelse, The Health Research Fund i Central Danmark regionen och Institutionen för klinisk medicin Århus Universitetssjukhus. Vi erkänner med tacksamhet skickliga hjälp av Donald F Smith, Anders Steen Sørensen, Henrik Sørensen, Asbjoern Ettrup-Christensen, och personalen på Paaskehoejgaard.
Procedure | Equipment | Company | Catalogue-number |
---|---|---|---|
Intubation | |||
Respirator | Datex-Ohmeda S/S Avance, GE Healthcare | 1009-9002-000 | |
Suction with blunt tip | Unomedical | 34091181 | |
Laryngoscope | Miller | 85-0045 (Laryngoscope set) | |
Endotracheal tube 5.5 mm ID | Smiths Medical International Ltd. | 100/199/055 | |
Stylet | Hudson RCI | 5-151001 | |
Syringe 5ml | |||
Stethoscope | Martin | 17-262-00 | |
Bladder catherization | |||
AquaFlate glycerine silicone Foley catheter 8-French with stylet | Rüsch | 178003 | |
Speculum nasal | Martin | 36-859-50 | |
Speculum rectal | Martin | 30-613-15 | |
Blunt-tip forceps | Martin | 13-374-16 | |
Catheter lubricant gel | |||
Cathejell Lidocain | Montavit | CJL08501 | |
Instillagel Comb. | Farco Pharma | 08-40-200 | |
A4 Urine drainage bag | Unomedical | 38 155 1S | |
Adhesive tape | |||
Femoral artery and vein catherization </ | |||
Scalpel | Martin | 10-295-11 | |
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Tissue forceps | Martin | 12-100-14 | |
Small blunt-tip surgical forceps | Martin | 13-375-13 | |
Small self-retaining Tissue retractor | Martin | 15-753-13 | |
Needleholder | Martin | 20-634-14 | |
Surgical swaps | |||
Suture with needle | |||
Saline | |||
Heparine | LEO | 585679 | |
18-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393206 | |
4-French brite tip sheaths with introducer and Seldinger guide wire | Cordis | 154-2629-1/0017 | |
Transcardial perfusion | |||
Pressurized perfusion system | Home made from parts available in most professional hardware stores | ||
Fume extraction system | Gram A/S | 01750000 and 0303700 | |
Perfusant 5L | |||
Blunt-tip surgical scissors | Martin | 11-881-18 | |
Bone shears | F.S.T | 16150-24 | |
Large curved tip self-holding forceps | Martin | 13-421-18 | |
Self retaining sternal retractor | Rudolf Medical | 7520-10 | |
Pentobarbital | The Royal Veterinary and Agricultural University (KVL) | 200 mg/ml | |
22-gauge venflon | BD Venflon Pro | 393202 |