1. Sikker Restraint og skånsom håndtering af dyr er en vigtig del af Experimental Procedures Denne video er designet til at være et supplement til hands-on træning fra institution. Altid være sikker på, at IACUC eller etiske udvalg godkendelse er på plads, før du begynder enhver eksperimentel procedure. Hver person, der arbejder på en protokol bør kende detaljerne i procedurer, der godkendes for det pågældende protokol, og alle andre, som de arbejder. Kør til gnaver med tillid og håndtere dyrene forsigtigt, men fast. Både for-hårdhændet håndtering og forsigtige tilgange kan resultere i bid eller ridser på den, der håndterer eller skader på dyret. Ved håndtering af dyr, er der altid mulighed for utilsigtet udsætning eller dyret bliver droppet. De fleste af disse manipulationer er bedst udføres over en arbejdsflade, således at, hvis dyret tabes eller udslip, er det ikke såret, og kan let genbeskattet. Følg din instituinstitutionelle politikker vedrørende dyr, der kommer i kontakt med gulvet. Aldrig håndtere dyr ved spidsen af halen, da dette kan resultere i en degloving skade af halen. Vær især forsigtig med store rotter eller gravide mus. Brug altid den anden hånd til at støtte kroppen, mens du løfter i halen. Skarpe nåle fungerer bedst, når der gives injektioner. Selv om kanyler til laboratorie gnavere undertiden anvendes til flere injektioner, er det ikke anbefales til en række årsager, mindst som er, at den lille måler ofte betyder, at nålene dull hurtigt. Bliver bidt eller ridset er altid en mulighed, når man arbejder med dyr. Hvis der arbejdes med et stof eller et smitstof, der kan forårsage skader på mennesker, tage ekstra forholdsregler, så manipulere dyr eller agenter i stinkskabe eller biosikkerhed frysere. Blide tilgange og akklimatisering til håndtering, inden du forsøger en procedure kan betale sig i dyr, der er mindre stressede af håndtering. Praksis tilbageholdenhed, før du forsøger sammensatte administration, og praksis indgivelse af stoffer til at styre dyrene før forsøgsdyr. Øve disse teknikker regelmæssigt instills tillid og tillid resulterer i bedre håndtering, mindre stressede dyr og bedre videnskabelige resultater. Med enhver håndtering teknik, hvis dyret er genstridige prøve en anden teknik. Dyret (og handler), kan også drage fordel af at sætte dyret tilbage i buret og prøver igen senere. 2. Manuel Restraint Enhåndsbetjening mus tilbageholdenhed Løfte en mus ved haleroden og placere den på buret låget, wire bar cage top eller en lignende ru overflade. Én hånd mus tilbageholdenhed udføres normalt med den ikke-dominerende hånd, så den dominerende hånd fri til anvendelse. En alternativ metode gør det muligt for teknikeren at bruge deres lab coat eller ensartet ærme dækker underarmen at positioneredyr forud for tilbageholdenhed. Putte den haleroden mellem den 3. og 4. finger, mens forsigtigt at trække tilbage på halen. Dette vil medføre musen at gribe overfladen med alle fire poter og trækkes fremad. Fatter ikke mus ved spidsen af halen, især hvis suspendere hele deres kropsvægt ved deres hale. Dette kan forårsage en degloving skade, hvor huden af halen glide ud. Dernæst fast greb musen fra kraven med den samme hånd, der holder halen. Gribe med pegefingeren og tommelfingeren nær bunden af hovedet og udvide greb ned musens ryg ved at inkorporere den midterste og ringfinger. Vær sikker på at anvende lige nok pres, eller fasthed, på huden rundt om halsen for at forhindre mus i at dreje eller vride ud af tilbageholdenhed, men ikke trække huden så stramt, at dyret ikke kan ånde. Styring af hovedet er afgørende. Hvismusen kan bevæge sit hoved, kan det nå førerens fingre og kan bide. Dette kan forekomme, når nybegyndere håndterer fat i musen for langt ned ad ryggen, snarere end lige bag kraniet. Mus tilbageholdenhed to-hånds Løfte en mus ved haleroden og sted på buret låget, wire bar låget eller ru overflade. En alternativ fremgangsmåde giver teknikeren at bruge deres lab coat eller ensartet muffe dækker underarmen at placere dyret inden tilbageholdenhed. Træk forsigtigt bagud på halen og musen vil forstå overfladen med fire poter og træk fremad. Next, med derimod hurtigt og godt fast musen ved nakkeskindet (se én hånd tilbageholdenhed ovenfor). Med halen i den ene hånd og kraven i den anden, løfte musen og putte det haleroden mellem håndfladen og den 3. eller 4. finger på den hånd holder kraven. Som med den ene hånd metode, gribe fast i kraven for at forhindre mus i at vride eller dreje uden at gribe så fast, at dyret ikke kan ånde. Hvis musen er modstandsdygtig over for scruffing, kan blidt tryk på musens ryg lade hånden til at gå op for et bedre greb. Rat tilbageholdenhed; scruffing Rat scruffing udføres generelt med to hænder, og kun i mindre rotter. Det er ikke en almindeligt anvendt teknik, da rotter er mindre accepterende over scruffing end mus, men det er nyttigt i nogle blodprøvetagningssæt situationer. Fat rotten i halen med den ikke-dominerende hånd og trække let bagud på en ru overflade (som beskrevet ovenfor for mus). Være omhyggelig med at forstå nær haleroden, som rottens hale hud kan falde af, hvis gribes nær spidsen. Holde halen fast i hånden og nærmer kraven af rotten bagfra. For brinle, hvis rottens hale er i handlere 'venstre hånd, ikke nærme rotten fra næsen til kraven det med højre hånd. I stedet nå over venstre hånd, og nærme sig Scruff bagfra. Tryk forsigtigt til bagsiden af rotte over skulderbladene, fat derefter kraven tæt ved bunden af kraniet mellem fingrene og håndfladen. Styring af hovedet er vigtigt at forhindre bid. Rottebid kan medføre alvorlig personskade. Rotter kan vocalize når fastholdes på denne måde. Rat tilbageholdenhed, over skulderen greb Fat rotten i halen med den dominerende hånd og trække let bagud på en ru overflade (som beskrevet ovenfor for mus). En alternativ fremgangsmåde giver teknikeren at bruge deres lab coat eller ensartet muffe dækker underarmen at placere dyret inden tilbageholdenhed. Være omhyggelig med at forstå nær haleroden, som rottens hale skin can kommer fra, hvis grebet nær spidsen. Placer ikke-dominerende hånd over rottens ryg, nærmer bagfra. Tag fat i rotten omkring brystkassen med ringfingeren, pinkie, og tommelfinger. Rotten hoved bør være mellem indekset og midterste fingre. Må ikke komprimere brystkassen. Rotten kan holdes på denne måde med en hånd, hvis kroppen er stabiliseret mod føreren. Rat tilbageholdenhed, under skuldrene greb Fat rotten i halen med den dominerende hånd og trække let bagud på en ru overflade (som beskrevet ovenfor for mus). En alternativ fremgangsmåde giver teknikeren at bruge deres lab coat eller ensartet muffe dækker underarmen at placere dyret inden tilbageholdenhed. Være omhyggelig med at forstå nær haleroden, som rottens hale hud kan falde af, hvis gribes nær spidsen. Placer ikke-dominerende hånd over rpå ryg, nærmer bagfra. Tag fat i rotten omkring brystkassen, lige under skulderbladene. Rottens underarme bør forsigtigt skubbet op med tommel-og pegefinger. Underarmene skal krydse under rottens hage, så det ikke bidende. Må ikke komprimere brystkassen. Rotten kan holdes på denne måde med en hånd, hvis kroppen er stabiliseret mod føreren. Decapicone En Decapicone er en fleksibel, kegleformet stykke tynd plast med et hul i den ene ende. Hullet er lille nok til, at muse-eller rotte kan få sin næse ud af hullet, men ikke resten af kroppen. At begrænse dyret, skal du placere musen eller rotte i en Decapicone af passende størrelse. Skubbe dyret fremad, indtil dens næse rager frem fra hullet i Decapicone. Enten holde posen lukket rundt om halen eller bruge en snoningsbinding at forsegle dyret i keglen. Den Advantage en Decapicone er, at den tynd plast muliggør injektioner gennem materialet. Ulempen er, at materialet ikke ånde og dyr kan blive overophedet. Kun holde et dyr i en Decapicone så længe det tager at udføre proceduren. Akryl / stiv plast harpiksstopperen Plast fastholdelsesanordninger er særligt nyttige, når dyrets hale skal tilgås. Disse kan købes kommercielt eller fremstillet i laboratoriet. Størrelsen bør være passende for dyret fastholdes – Dyret bør ikke være i stand til at vende rundt i fastholdelsesanordningen. Dyret i den fastspændingsanordning ved først forsigtigt at fastholde dyret, derefter slippe den, med hovedet først, ved åbningen af indretningen. Det kan hjælpe til at sigte enheden opad over buret, som gnavere ofte vil klatre op i en sikker konstruktion, som et rør. Anbring lukket på enden afenhed, og pas på ikke at beskadige dyrets hale, fødder eller testikler. Minimer tid tilbragt i restrainers da dyrene kan overophede. Dyr kan fastholdes på andre måder, såsom ved emballering i en lille håndklæde eller ved simpelthen cupping en hånd over dyret. Teknikker kan justeres til at opfylde behovene hos dyret og arbejder. Altid sørge for at undgå bid og ridser og sikre dyret mod utilsigtet udslip eller fald fra højder. 3. Indgivelse af forbindelse Metoder Dette er på ingen måde en udtømmende liste og andre veje er mulige. Denne protokol er at illustrere de mest almindeligt anvendte veje. Andre veje kan kræve anæstesi af dyret og efter administration smertelindring. Uanset administration anvendte metode, skal du sørge for alle materialer er blevet tilberedt inden fastholdelse af dyr. Vandige materialer er lettere at injicere end tykkere materialer, såsom olie-baseD-forbindelser. Altid injicere tykkere forbindelser meget langsomt for at undgå dislodging nålen fra sprøjten. Almindelige nåle og sprøjter anvendelse overvejelser. Altid opbevare og bortskaffe sprøjter og nåle ordentligt. Hvis du er ny til at bruge sprøjter og kanyler, praksis håndterer sprøjten og injicere før du forsøger at injicere et dyr. Ideelt set vil du være i stand til trygt manipulere sprøjten og nålen med den ene hånd, mens den anden for fastholdelse af dyret. En rolig hånd minimerer nål bevægelse, som minimerer vævsskader. Nålene har et punkt, en affasning, en aksel, og et nav. Sprøjter har en spids, en cylinder og et stempel (figur 1 a og b). Nåle er dimensioneret efter gauge og længde. Jo større sporvidde, jo mindre nålen. Små nåle er meget tilbøjelige til mattering (fra en grat dannes på spidsen) og bør ikke anvendes til gennemboring flerdosisbeholdere (figur 1 c). Vælg altid denkorteste nål, der vil arbejde for at administrere forbindelsen. Nålen er fastgjort til spidsen af sprøjten fra navet. Nogle sprøjter har låsning tips. Sørg altid for sprøjten er sikkert fastgjort til nålen. Nåle er bedst indsat i dyret med den skrå kant op, især for intravenøse injektioner. Aldrig opsummere nåle i hånden. Dette er en almindelig årsag til nålestiklæsioner. Bortskaf kanyler og sprøjter korrekt i mærket affaldsbeholder beholdere. Hvis nåle skal regummieres, enheder er tilgængelige (figur 1 d). Intranasal (IN) Hæmmer dyr som beskrevet ovenfor. Anvendelse af en sprøjte eller pipette, placere en lille mængde af materialet, som skal inhaleres ved næseborene af dyret. Hold øje med det materiale, der forsvinder ind i Nares. Gentag om nødvendigt indtil den ønskede lydstyrke er blevet administreret. Intramuskulær (IM) Begræns the dyr som beskrevet ovenfor. Sørge for en af dyrets bagben er fri og stabiliseret til injektionen. Restraint kan tage to personer. Hvis dyret kan sparke under injektionen, vil muskelskade fra nålen medføre. Nålen skal indsættes vinkelret på huden af dyret. Ved hjælp af en passende størrelse kanyle og nål stikkes nålen ca bevel-dyb og injicere materialet ind i dyrets quadriceps (forsiden af låret) eller laterale låret muskelmasse. Indsprøjt ikke i det bageste muskelmasse som det er muligt at beskadige iskiasnerven. Hvis dyr skal modtage flere IM injektioner, alternative ben. Intraperitoneal (IP) Hæmmer dyr som beskrevet ovenfor. Tip dyrets næse mod gulvet, og udsætter maven til injektion. Find dyrets midterlinjen og mentalt opdele maven i kvadrater (fig. 2). Den nedrekvadranter, især dyrets nederste højre kvadrant, er de passende steder til intraperitoneale injektioner. Den nederste højre kvadrant er valgt på grund af manglen på anatomisk vigtige strukturer. Ved hjælp af en passende størrelse kanyle, materialet injiceres i dyret. Hvis dyr skal modtage gentagne IP injektioner, skifte injektionsstedet. Subkutan (sc, SQ) Hæmmer dyr som beskrevet ovenfor. Dyret skal være fastholdt løst nok til, at huden kan anvendes. Hvis dyr skal håndteres rutinemæssigt efter SC injektion, skal du ikke bruge kraven (nakken). Brug i stedet huden på den dorsale gump eller flanken. Hvis dyr skal modtage flere SC-injektioner, alternative steder for injektion. Tag fat i huden og træk det forsigtigt opad, hvilket gør en "telt". Hvis du udfører injektionen solo, indfør kanylen og forsigtigt tent huden opad med nålen for at bekræfte, at nålen befinder sig i det subkutane rum. Ved hjælp af en passende størrelse kanyle og nål, nålen indsættes i en vinkel på 30-45 ° i telt huden, og injicere materialet. Injicere parallelt med og bort fra de fingre, der hudens opad. Hvis injektionen er en succes, vil en lille hævelse under huden ses. Efter injektion, tryk forsigtigt for at forhindre tilbagestrømning af materialet. Intradermal (ID) Til intradermale injektioner, er dyr ofte barberede så huden kan ses. Fastholdelse af dyret for multiple intradermale injektioner kan være vanskelig. I så fald kan kemisk sedation være nødvendig. De steder for ID injektioner er den samme som for SC. Indsætter en passende størrelse kanyle ind i huden i en 15-30 ° vinkel. Nålen vil ikke blive indsat meget langt og injektionen bør mødes med remodstand. En alternativ metode er at Klem forsigtigt huden støder op til injektionsstedet og indfør nålen i en meget flad vinkel. Dette er nyttigt i mus, idet det forhindrer dem i at bevæge sig under injektionsprocessen. Hvis injektionen er en succes, vil en lille blære ses. Det vil være lysere end den omgivende hud. Efter injektion, tryk forsigtigt for at forhindre tilbagestrømning af materialet. Intravaskulær (IV) De venstre og højre laterale halevenerne er den mest almindelige vaskulære adgangsvej, der anvendes i mus og rotter. Andre vaskulære adgangsveje er mulige hos mus og rotter, men kræver i almindelighed sedation og efter injektion smertelindring. For en haleveneinjektion, begrænse dyret i en Decapicone eller plast gnaver harpiksstopperen. Placer dyrets hale under en lampe, eller en beskyttet opvarmningsindretningen. Dette vil fremme vasodilatation, hvilket letter injektion. Du må ikke overophede dyret. For store hanrotter, kan rensning af huden skalaer af halen muliggøre bedre visualisering af venen. Rengøring skal være blid så huden ikke bliver slidt. Hold dyrets hale af spidsen med den ikke dominerende hånd. Dette vil rette halen. Drej hale ¼ drej at placere halevenerne dorsalt for lettere injektion. Dyret har to laterale halevener og en ventral halearterien (figur 3). Kør til hale med nålen i en 15-20 ° vinkel. Starter ved den distale del af halen. Venerne er lavvandet og nålen bør ikke indsættes meget ud over den skrå. Hvis injektionen påbegyndes så distalt som muligt, er der mere ubeskadiget vene at forsøge injektionen, bør den første prøve mislykkes. Injicer materialet. En vellykket injektion vil resultere i materialet ind i venen udenmodstand og blegning af halevenen under hele injektionen. Aspirér ikke før injektion, da dette vil kollapse venen. Et let tryk på venepunkturstedet efter injektion vil forhindre blødning. I et mislykket injektion, vil materialet ikke flyde let. I stedet vil halen huden blancher eller materialet kan ikke injiceres overhovedet. Intragastrisk administration (oral gavage) Kun udføre gavage på behersket, vågne dyr. Anæstesi eller sedation øger risikoen for aspiration (materiale uforvarende kommer i lungerne). Vælg en passende dimensioneret oral indgift kanyle til brug. Disse nåle har bolden tips i slutningen for at forhindre deres passage ind i luftrøret. Ønskede længde kan bestemmes ved at holde den stramme dyr og måling af mundvigen. Kuglen spids fodringsnål går igennem dyrets ribben (<strong> Figur 4). Nåletykkelse bestemmes af vægten af dyret. Fiksér dyrets således at dens hoved og krop er i en lige, lodret linie. Dette retter spiserøret, hvilket letter passage af fodringsnål. Sæt kuglen spidsen af nålen i dyrets mund, over tungen. Når nålen er på plads, bringe kanyle og sprøjte op, trykke forsigtigt mod ganen, så dyrets næse er mod loftet. Hos rotter kan nålen skal omdirigeres smule, når den passerer bagsiden af halsen. Enhver spænding på nålen viser behov for at justere position Ikke afbrydes nålen, indtil den forudbestemte afstand er nået. Nålen skal gå let, og dyret bør ikke gisp eller choker. Indgive stoffet. Det skal strømme ind i maven. Hvis der er modstand eller dyret gisper, drosselspoler, eller bliver blå, skal du straks stoppe og fjerne behovetle. Dyr, der er aspireret kan kræve eutanasi, afhængigt af forbindelsen, der indgives. 4. Repræsentative resultater Når dyrene håndteres korrekt, er der et minimum af stress for både dyr og handler. Handlers ikke bliver bidt eller ridset, og dyrene behandles humant og kompetent. Forbindelser administreres via den rigtige vej med minimal skade på væv og så lidt ubehag for dyret som muligt. Hvis efterforskere er ny håndterer dyr, der arbejder med en lille udstoppet dyr kan være en hjælp. Der er også dyr simulatorer rådighed for nogle teknikker, såsom Koken rotte. For mange efterforskere, er der ringe chance for at vinde fortrolighed med kanyler og sprøjter, før du arbejder med dyr. Repræsentative dele af en kanyle og sprøjte er vist i Figur 1A og 1B. Før injektion af dyr for første gang, detkan det være nyttigt at øve indsprøjtning før du arbejder med dyr. Meget fine nåle, såsom 28 og 30 g, er nemme at skade. Hvis fratagelse stoffer fra multi-use hætteglas, skal du bruge en større nål til formålet, og derefter erstatte det med den mindre kanyle til injektion. En snurrede nål ses i Figur 1C. Grundlæggende sikkerhedsforanstaltninger skal tages, når der arbejdes med nåle, såsom ikke slidbanepålægning brugte kanyler i hånden. Figur 1D viser en nål recapper i brug. Dette kan være værdifuldt at undersøgere har behov for at fjerne nåle til for eksempel express blod fra en injektionssprøjte uden hemolyse ses, når blod skubbes gennem en nål. Figur 2 og 3 illustrerer pejlemærker for intraabdominale injektion og den typiske struktur af halen, der illustrerer målene for injektion. Figur 4 viser eksempler på korrekt dimensionering af gavage nåle. Sonde nåle skal nå fra mundingen af enNimal til højre under den sidste ribben. Figur 1. A) Needle og B) sprøjtedele, mærkes. C) Burr på p. forårsaget af gentagen placering af nålen ind i en multi-use hætteglas. D) Needle recapper i brug. Figur 2. Kvadranter fra den ventrale abdomen. Kun injicerer i de nederste to kvadranter, fortrinsvis højre nedre kvadrant. Figur 3. Skematisk af halen i tværsnit, der illustrerer forholdet mellem arterier og vener til benet og tendenous strukturer. Figur 4. Sondeernæring nål dimensionering i rotter. A) gavage nålen for long.. B) passende størrelse gavage nål. C) sonde nål måling for kort, D) palpating det sidste ribben til at bestemme passende tvangsfodring nål størrelse. Mus Rotte Rute Anbefalet volumen Anbefalet gauge og længde af nålen Anbefalet volumen Anbefalet gauge og længde af nålen Intranasal 1 5-25 pi N / A 5-25 pi N / A Intramuskulær 1,2 0,00005 ml / g <23 g, 0,5 til 0,75 i 0,1 ml / kg <21 g, 0,5 til 0,75 i Intraperitoneal 1,2 0,02 ml / g <21 g, 0,75 til 1 10 ml / kg <21 g, 0,75 til 1 Subkutan 1,2 0,01 ml / g <22 g, 0,5 til 1 5 ml / kg <22 g, 0,5 til 1 Intradermal 1 0,05-0,1 ml <26 g, 0,5 i 0,05-0,1 ml <26 g, 0,5 i Intravenøs 1,2 0,005 ml / g -0,025 ml / g * <25 g, 0,75 til 1 i 5 ml/kg-20 ml / kg * <23 g, 0,75 til 1 i Oral sondeernæring 1,2 0,01 ml / g 20-22 g fodringsnål 5-10 ml / kg 16-20 g fodringsnål * Det første nummer er den mængde, der afgives som en intravenøs bolus i løbet af cirka 1 minut. Det andet volumen er volumenet, der kan gives som en langsom infusion i løbet af 5-10 minutter. <sTrong> Tabel 1. Anbefalede doser og pindenr for forskellige former for sammensatte administration hos mus og rotter.