و<em> في الجسم الحي</em> تشريح الكبار<em> ذبابة الفاكهة</emويتجلى> الحبل البطني العصب (VNC). هذا الأسلوب تشريح خاص يسبب ضررا قليلا إلى VNC يسمح بوضع العلامات اللاحقة من الخلايا العصبية العملاقة الألياف مع صبغة الفلورسنت لتصوير عالية الدقة.
Abstract
لتحليل مورفولوجيا محواري وشجيري الخلايا العصبية ، فمن الضروري الحصول على العلامات الدقيقة الهياكل العصبية. تحضير عينات المسمى جيدا مع قليل من دون تلف الأنسجة تمكننا من تحليل الخلايا والتشكل لمقارنة العينات الفردية لبعضهم البعض ، مما يسمح بالتالي تحديد الحالات الشاذة متحولة.
في أسلوب أظهر تشريح الجهاز العصبي لا يزال معظمهم داخل يطير الكبار. من خلال شق ظهري ، يتم فتح البطن والصدر ويتم إزالة معظم الأعضاء الداخلية. ويتعرض فقط الجانب الظهري للحبل العصب البطنية (VNC) وسرطان عنق الرحم الضامة (سي) التي تحتوي على محاور عصبية كبيرة من الألياف العملاقة (GFS) 1 ، في حين أن المخ يحتوي على خلايا الجسم والتشعبات GF يبقى 2 في الرأس سليما . وينبغي في هذا التحضير لا تزال تعلق معظم أعصاب VNC لعضلاتهم.
بعد التشريح ، ويتجلى ملء الخلايا من الألياف العملاقة (GF) مع صبغة الفلورسنت. في سي تقع المحاوير GF على السطح الظهري ، وبالتالي يمكن تصور بسهولة تحت المجهر مع النقيض تدخل الفرق (DIC) البصريات. هذا يسمح للحقن المحاوير GF مع صبغة في هذا الموقع لتسمية GF بأكملها بما في ذلك المحاور والمحطات الخاصة في فنك. هذا الأسلوب يؤدي إلى تلطيخ موثوقة وقوية من GFS السماح تصوير الخلايا العصبية على الفور بعد ملء مع epifluorescent المجهر. بدلا من ذلك ، يمكن تعزيز إشارة الفلورسنت القياسية المناعية باستخدام الإجراءات المناسبة للفحص المجهري 3 ارتفاع القرار مبائر.
Protocol
1. تشريح الأعصاب من الحبل البطني يمكن إجراء تشريح وصبغ لملء GF في درجة حرارة الغرفة. تشريح لجميع الخطوات الباردة (4 درجات مئوية) وينبغي استخدام المياه المالحة لإبطاء عملية التمثيل الغذائي والحفاظ على الخلايا العصبية على قيد الحياة ل…
Discussion
يمكن تشريح الجهاز العصبي دون استخراج من الجسم يطير. هذا وقد اثنين من المزايا : أولا ، يسبب ضررا قليلا تشريح الجهاز العصبي ، والثانية ، ومعظم الأعصاب البقاء تعلق على العضلات والحواس. أداء التشريح ، كما هو موضح ، ويعد نموذج لوضع العلامات على التوالي إلى الأمام من صبغ GFS. ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد المشروع وصفها من حيث عدد المنح R01HD050725 من المعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية إلى العلامة المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية أو المعاهد الوطنية للصحة. نشكر أعضاء المختبر Godenschwege فضلا Schreader باربرا لمساهمتها في مخطوطة والفيديو.
Boerner, J., Godenschwege, T. A. Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection. J. Vis. Exp. (52), e3080, doi:10.3791/3080 (2011).