Ved hjelp av rask-scan syklisk voltammetry å måle elektrisk fremkalt presynaptiske dopamin dynamikk i striatale banene hjernen skiver.
Omfattende forskning har fokusert på signalstoffet dopamin grunn av dens betydning i virkningsmekanismen til narkotika av misbruk (f.eks kokain og amfetamin), hvilken rolle den spiller i psykiatriske sykdommer (for eksempel schizofreni og Attention Deficit Hyperactivity Disorder), og sitt engasjement i degenerative lidelser som Parkinsons og Huntingtons sykdom. Under normale fysiologiske forhold, er dopamin kjent for å regulere locomotor aktivitet, kognisjon, læring, følelsesmessig påvirke, og nevroendokrin hormon. En av de største tetthetene av dopamin nevroner er innenfor striatum, som kan deles i to atskilte nevroanatomi områder kalt nucleus accumbens og caudatus-putamen. Målet er å illustrere en generell protokoll for skive hurtig-scan syklisk voltammetry (FSCV) innenfor musen striatum. FSCV er en veldefinert elektrokjemiske teknikken gir mulighet til å måle dopamin frigjøring og opptak i sanntid i discrete hjernen regioner. Carbon fiber microelectrodes (diameter på ~ 7 mikrometer) brukes i FSCV å oppdage dopamin oksidasjon. Den analytiske Fordelen med å bruke FSCV å oppdage dopamin er dens forbedret temporal oppløsning på 100 millisekunder og romlig oppløsning på mindre enn ti mikrometer, gir komplementær informasjon til in vivo microdialysis.
Protokollen som presenteres her demonstrerer hvordan å forberede og bruke musen koronale hjernen skiver for FSCV eksperimenter. Selv om denne metoden er spesifikk for innhenting og måling dopamin dynamikk, andre nevrotransmittere som adenosin, har hydrogen peroxide, noradrenalin og serotonin vært overvåket in vivo eller in vitro med 3 FSCV, 8-11. FSCV kan brukes til å overvåke noen av disse andre nevrokjemiske med enkle modifikasjoner av bølgeform brukes til å arbeide elektrode …
The authors have nothing to disclose.
Finansiering levert av National Institute on Alcohol Abuse og alkoholisme (Niaa; AA-016967 og AA016967-01S1, TAM), Wayne State University starte opp midler, og Wayne State University Research Grant Program. Innholdet er utelukkende ansvaret til forfattere og representerer ikke offisielle utsikt over Niaa eller National Institutes of Health.
Name | Company | CAS number |
Reagent |
||
Potassium Chloride |
Fisher | 7447407 |
Sodium chloride |
EMD Chemicals | 7647145 |
Magnesium chloride |
Fisher |
7791186 |
Calcium chloride |
Fisher |
10035048 |
Sodium bicarbonate |
EMD Chemicals |
144558 |
Sodium phosphate,Dibasic |
EMD Chemicals |
7558794 |
D-glucose |
Fisher |
50997 |
Ascorbic acid |
Fisher |
50817 |
Sucrose |
Fisher |
57501 |
|
|
|
Materials |
Vendor |
Catalogue number |
Carbon fiber |
Goodfellow Oakdale, PA | |
Glass capillary |
A-M Systems Carlsborg WA. | 602000 |
Silver wire |
A-M Systems Carlsborg WA. | 787000 |
Tungsten stimulating electrode |
Plastics One, Roanoke, VA | |
Platinum wire |
||
Lead wire |
Squires Electronics, Cornelius, OR | |
Loctite 404 instant adhesive |
Hankal Corp. Rocky Hill CT. |
|
Razor blade |
World precision Instruments Inc. FL. | |
BD Spinal needle |
BD Medical systems, Franlin Lake, NJ |
REF 405234 |
Surgical Blade |
Feather Safety razor Co. LTD. Japan | |
|
||
Software |
Vendor |
Catalogue number |
TH software |
ESA Inc.,Chelmsford, MA | |
Instrument |
Vendor |
Catalogue number |
Submersion recording chamber |
Custom Scientific, Denver, CO | |
Neorolog stimulus isolator |
Digitmeter, Hertfordshire, England | |
Automatic temperature controller |
Warner Instrument Corporation | |
Microscope (SZX7) |
Olympus | |
Microscope |
Fisher | |
Vibratome 3000 sectioning system |
St. Louis , MO. | |
Perfusion pump |
Watson Marlow Limited, Falmouth Cornwall – England | H110708 |
Micropipette puller |
Narishige, Tokyo, Japan | |
ChemClamp potentiostat |
Dagan Corporations, Minneapolis, MN. |