التحقيق في الالتهابات المعوية الناجمة عن مفاجآت صيف دبي موديل IBD
Summary
وقد سمحت نماذج تجريبية لمرض التهاب الامعاء لنا لدراسة معقدة الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية المرتبطة المرضية. باستخدام سجل النسيجية ، وتحديد حجم السيتوكينات الموالية للالتهابات ونشاط الميلوبيروكسيديز ، يمكن للمرء أن يبدأ في تقييم هذه الاستجابات ينظر في مرض التهاب الامعاء.
Abstract
مرض التهاب الأمعاء ويشمل مجموعة من الأمراض المعوية ، وأكثرها شيوعا من التهاب القولون التقرحي التي هي (جامعة كاليفورنيا) ومرض كرون (CD). كل من جامعة كاليفورنيا ونزع السلاح ، عندما تكون موجودة في القولون ، وتولد لمحة أعراض مماثلة التي يمكن أن تشمل الإسهال ونزيف المستقيم ، وآلام في البطن ، وفقدان الوزن. 1 على الرغم من أن التسبب في التهاب الامعاء ما زال مجهولا ، وصفت بأنها المرض متعدد العوامل التي تنطوي على حد سواء المكونات الوراثية والبيئية. 2
هناك العديد من النماذج الحيوانية ومتغيرة من التهاب القولون التي تشبه العديد من الميزات من مرض التهاب الأمعاء. نماذج حيوانية لمجموعة القولون من تلك التي تنشأ بشكل عفوي في سلالات عرضة لأنواع معينة لتلك الادارة التي تتطلب تركيزات معينة من التهاب القولون الذي يحفز المواد الكيميائية ، مثل كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS). الكيميائية الناجمة عن نماذج من التهاب القناة الهضمية هي النماذج الأكثر شيوعا وأفضل وصف لمرض التهاب الأمعاء. Administration لمفاجآت صيف دبي في مياه الشرب تنتج التهاب القولون الحاد أو المزمن بالاعتماد على بروتوكول الإدارة. الحيوانات التي اعطيت 3 مفاجآت صيف دبي وفقدان الوزن ويحمل علامات البراز فضفاضة أو الاسهال ، وأحيانا مع أدلة على نزيف المستقيم. 4،5 وهنا ، نحن تصف الطرق التي ويمكن وصف التهاب القولون التنمية والاستجابة الالتهابية الناجمة الادارة التالية من مفاجآت صيف دبي. وتشمل هذه الطرق التحليل النسيجي للالهيماتوكسيلين / يوزين المقاطع القولون الملون ، وقياس السيتوكينات الموالية للالتهابات ، وتحديد الميلوبيروكسيديز (MPO) النشاط ، والتي يمكن استخدامها كمؤشر بديل من الالتهابات. 6
ويمكن تقييم مدى استجابة التهابية في حالة المرض عن طريق وجود أعراض سريرية أو تغيير في الأنسجة المخاطية في الأنسجة. ويتم تقييم الأضرار النسيجية القولون باستخدام نظام التهديف التي تعتبر خسارة سرداب العمارة ، التهابات تسلل خلية ، ر العضلاتhickening ، القدح نضوب الخلية ، وسرداب خراج 7 من الناحية الكمية ، يمكن تحديد مستويات السيتوكينات الموالية للالتهابات مع خصائص الالتهابية الحادة ، مثل انترلوكين (IL) ، 1β ، IL – 6 وعامل نخر الورم (TNF) – α ، وذلك باستخدام الطرق التقليدية ELISA. بالإضافة ، يمكن قياس النشاط MPO باستخدام مقايسة اللونية واستخدامها وذلك في مؤشر الالتهاب. 8
في التهاب القولون التجريبية ، ويرتبط في كثير من الأحيان شدة المرض مع زيادة في النشاط MPO ومستويات أعلى من السيتوكينات الموالية للالتهابات. ويمكن تقييم شدة التهاب القولون والتهاب المرتبطة الضرر عن طريق فحص البراز الاتساق والنزيف ، بالإضافة إلى تقييم حالة الأنسجة من الأمعاء باستخدام الهيماتوكسيلين / يوزين ملطخة المقاطع انسجة القولون. ويمكن استخدام أجزاء أنسجة القولون لتحديد النشاط والانتاج MPO خلوى. أخذت معا ، ويمكن استخدام هذه التدابير لتقييم الاستجابة الالتهابية في الأمعاءنماذج حيوانية لالتهاب القولون التجريبية.
Protocol
Discussion
مفاجآت صيف دبي التهاب القولون هو نموذج يستخدم على نطاق واسع بفعل كيميائيا من التهاب في الامعاء. في هذا النموذج ، يتم إعطاء الفئران مياه الشرب تستكمل مع مفاجآت صيف دبي ، والتي يعتقد أن تكون سامة للأمعاء وتعطيل الخلايا الظهارية على سلامة الحاجز المخاطية. 10 إدارة ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم هذا العمل عن طريق المنح المقدمة من المعاهد الكندية لأبحاث الصحة (CIHR) وكرون والتهاب القولون مؤسسة كندا (CCFC).
Materials
| Name of reagent/equipment: | Company | Catalogue number | Comments |
| Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) | eppendorf | 0030 120.094 | |
| Biotek EL808 Absorbance plate reader | Biotek | EL808 | |
| Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) | MP Biomedicals | 160110 | |
| Gen5 (software) | Biotek | Version 1.10.8 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) | Sigma-Aldrich | H5882-100G | |
| Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water | Sigma-Aldrich | 216763 | Store at 2-8°C |
| Microtest plate 96-well flat bottom | Sarstedt | 82.1581 | For single use only |
| o-Dianisidine | Sigma-Aldrich | D-3252 | Light sensitive. Store at 2-8°C |
| Potassium phosphate, dibasic | Caledon | 6620-1 | |
| Potassium phosphate, monobasic | EMD Chemicals | PX1565-1 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P8340 | Store at -20°C |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II | QUIAGEN | 69997 |
References
- Sands, B. E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation. Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).
- Danese, S., Fiocchi, C. Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).
- Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).
- Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice. Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).
- Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency. Digestion. 62, 240-248 (2000).
- Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models. Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).
- Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis. Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).
- Smith, J. W., Castro, G. A. Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation. Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).
- Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model. Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).
- Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).
- Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview. Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).
- Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).
- Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).
- Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice. Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).
- Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis. Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).
- Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance. J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).
- Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice. Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).
