İBH DSS-kaynaklı Modeli Bağırsak Enflamasyon incelenmesi
Summary
Deneysel modeller inflamatuvar barsak hastalığı patogenezi ile ilişkili karmaşık doğal ve adaptif immün yanıtları incelemek için izin verdiler. Histolojik skorlama, pro-inflamatuar sitokinler ve miyeloperoksidaz aktivitesi ölçümü kullanarak, inflamatuvar barsak hastalığı görülen bu yanıtlar değerlendirmeye başlayabilirsiniz.
Abstract
Inflamatuvar barsak hastalığı (İBH), bağırsak patolojileri, bir dizi olan en yaygın ülseratif kolit (ÜK) ve Crohn Hastalığı (CD) kapsar. UC ve CD, her iki kolonda bulunan, ishal, rektal kanama, karın ağrısı, kilo kaybı, benzer bir semptom profili oluşturmak 1. İBH patogenezinde bilinmemektedir rağmen, hem de içerir multifaktöryel bir hastalık olarak tanımlanmaktadır genetik ve çevresel bileşenleri 2
Kolonik inflamasyon IBH çeşitli özellikleri benzer çok sayıda ve değişken hayvan modelleri vardır. Kolit aralığı gerektiren kolit-tetikleyen kimyasallar, dekstran sülfat sodyum (DSS) gibi belirli konsantrasyonlarda bu yönetim için belirli türlerin duyarlı suşlar kendiliğinden ortaya çıkan bu hayvan modelleri. Kimyasal bağlı gut inflamasyon modelleri IBH en sık kullanılan ve en iyi tarif modelleri. Adminiiçme suyu DSS edilebilmektedir yönetim protokolüne bağlı olarak akut ya da kronik kolit üretir. DSS sergi kilo kaybı ve gevşek dışkı veya ishal belirtileri verilen 3 Hayvanlar, bazen rektal kanama bulgusu olan 4,5 İşte, biz yöntemleri açıklanmaktadır hangi kolit gelişimi ve ortaya çıkan inflamatuvar yanıt DSS takiben karakterize edilebilir. Bu yöntemler, iltihabın bir belirteç olarak kullanılabilir histolojik hematoksilen / eosin lekeli kolon bölümlerinin analizi, pro-inflamatuar sitokinlerin ölçümü ve belirlenmesi miyeloperoksidaz (MPO) aktivitesi, 6
Hastalık durumu inflamatuvar yanıt ölçüde klinik semptomların varlığı veya mukozal doku histolojisi değişiklik tarafından tespit edilebilir. Kolon histolojik zarar crypt mimarisi, inflamatuar hücre infiltrasyonu, kas t kaybı gözeten bir skorlama sistemi kullanılarak değerlendirildi.hickening, goblet hücre tükenmesi ve kript absesi kantitatif 7, interlökin (IL)-1β, IL-6 ve tümör nekroz faktörü (TNF)-α gibi akut inflamatuar özellikleri, pro-inflamatuar sitokinlerin düzeyleri kullanılarak tespit edilebilir geleneksel ELISA yöntemleri. Buna ek olarak, MPO aktivitesi kolorimetrik tahlil kullanarak ölçülebilir ve inflamasyonun bir göstergesi olarak kullanılan 8
Deneysel kolit, hastalık şiddeti genellikle, MPO aktivitesi artışı ve yüksek düzeyde pro-inflamatuar sitokinler ile ilişkilidir. Kolit şiddeti ve inflamasyon ile ilişkili hasar hematoksilen / eosin lekeli kolon doku kesitlerinde kullanarak bağırsak histopatolojik durumu değerlendirmek için ek olarak, dışkı kıvamı ve kanama inceleyerek tespit edilebilir. Kolon doku parçaları, MPO aktivitesi ve sitokin üretimi belirlemek için kullanılabilir. Birlikte ele alındığında, bu önlemler bağırsak inflamatuvar yanıtı değerlendirmek için kullanılır.deneysel kolit hayvan modelleri.
Protocol
Discussion
DSS kolit bağırsak inflamasyonu yaygın olarak kullanılan bir kimyasal indüklenen model. Bu modelde, fare, epitel hücreleri gut ve mukozal bariyer bütünlüğünü bozmaya zehirli olduğu düşünülmektedir DSS ile takviye içme suyu verilmiştir. DSS 10 İdaresi gevşek dışkı, dışkı kanama ile karakterize akut bir kolit neden olur , ve granülositler ile infiltrasyon 10 DSS yönetimi sırasında, kolit genellikle dışkı gaitada gizli kan testi ile tespit edilebilir önemli kilo kayb…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri (CIHR) hibe ve Crohn ve Kanada Kolit Vakfı (CCFC) tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name of reagent/equipment: | Company | Catalogue number | Comments |
| Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL) | eppendorf | 0030 120.094 | |
| Biotek EL808 Absorbance plate reader | Biotek | EL808 | |
| Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da) | MP Biomedicals | 160110 | |
| Gen5 (software) | Biotek | Version 1.10.8 | |
| Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB) | Sigma-Aldrich | H5882-100G | |
| Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water | Sigma-Aldrich | 216763 | Store at 2-8°C |
| Microtest plate 96-well flat bottom | Sarstedt | 82.1581 | For single use only |
| o-Dianisidine | Sigma-Aldrich | D-3252 | Light sensitive. Store at 2-8°C |
| Potassium phosphate, dibasic | Caledon | 6620-1 | |
| Potassium phosphate, monobasic | EMD Chemicals | PX1565-1 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P8340 | Store at -20°C |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | |
| Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II | QUIAGEN | 69997 |
References
- Sands, B. E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation. Gastroenterology. 126, 1518-1532 (2004).
- Danese, S., Fiocchi, C. Etiopathogenesis of inflammatory bowel diseases. World J. Gastroenterol. 12, 4807-4812 (2006).
- Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat. Protoc. 2, 541-546 (2007).
- Axelsson, L. G., Landstrom, E., Goldschmidt, T. J., Gronberg, A., Bylund-Fellenius, A. C. Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: effects in CD4(+)-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice. Inflamm. Res. 45, 181-191 (1996).
- Egger, B., Bajaj-Elliott, M., MacDonald, T. T., Inglin, R., Eysselein, V. E., Büchler, M. W. Characterisation of acute murine dextran sodium sulphate colitis: cytokine profile and dose dependency. Digestion. 62, 240-248 (2000).
- Krawisz, J. E., Sharon, P., Stenson, W. F. Quantitative assay for acute intestinal inflammation based on myeloperoxidase activity. Assessment of inflammation in rat and hamster models. Gastroenterology. 87, 1344-1350 (1984).
- Cooper, H. S., Murthy, S. N., Shah, R. S., Sedergran, D. J. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis. Lab. Invest. 69, 238-249 (1993).
- Smith, J. W., Castro, G. A. Relation of peroxidase activity in gut mucosa to inflammation. Am. J. Physiol. 234, R72-R79 (1978).
- Ghia, J. E., Blennerhassett, P., Kumar-Ondiveeran, H., Verdu, E. F., Collins, S. M. The vagus nerve: a tonic inhibitory influence associated with inflammatory bowel disease in a murine model. Gastroenterology. 131, 1122-1130 (2006).
- Okayasu, I., Hatakeyama, S., Yamada, M., Ohkusa, T., Inagaki, Y., Nakaya, R. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice. Gastroenterology. 98, 694-702 (1990).
- Solomon, L., Mansor, S., Mallon, P., Donnelly, E., Hoper, M., Loughrey, M., Kirk, S., Gardiner, K. The dextran sulphate sodium (DSS) model of colitis: an overview. Comparative Clinical Pathology. 19, 235-239 (2010).
- Mähler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis. Am. J. Physiol. 274, G544-G551 (1998).
- Hans, W., Scholmerich, J., Gross, V., Falk, W. The role of the resident intestinal flora in acute and chronic dextran sulfate sodium-induced colitis in mice. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 12, 267-273 (2000).
- Rath, H. C., Schultz, M., Freitag, R., Dieleman, L. A., Li, F., Linde, H., Schölmerich, J., Sartor, R. B. Different subsets of enteric bacteria induce and perpetuate experimental colitis in rats and mice. Infect. Immun. 69, 2277-2285 (2001).
- Ghia, J. E., Li, N., Wang, H., Collins, M., Deng, Y., El-Sharkawy, R. T., Côté, F., Mallet, J., Khan, W. I. Serotonin has a key role in pathogenesis of experimental colitis. Gastroenterology. 137, 1649-1660 (2009).
- Elson, C. O., Beagley, K. W., Sharmanov, A. T., Fujihashi, K., Kiyono, H., Tennyson, G. S., Cong, Y., Black, C. A., Ridwan, B. W., McGhee, J. R. Hapten-induced model of murine inflammatory bowel disease: mucosa immune responses and protection by tolerance. J. Immunol. 157, 2174-2185 (1996).
- Dieleman, L. A., Ridwan, B. U., Tennyson, G. S., Beagley, K. W., Bucy, R. P., Elson, C. O. Dextran sulfate sodium-induced colitis occurs in severe combined immunodeficient mice. Gastroenterology. 107, 1643-1652 (1994).
