Enquêter inflammation intestinale induite par DSS modèle des MICI

Summary

Des modèles expérimentaux de maladies inflammatoires de l'intestin nous ont permis d'examiner le complexe innée et adaptative des réponses immunitaires associées à la pathogenèse. Utiliser score histologique, la quantification des cytokines pro-inflammatoires et de l'activité myéloperoxydase, on peut commencer à évaluer ces réponses observée dans la maladie intestinale inflammatoire.

Abstract

Les maladies intestinales inflammatoires (MII) englobe un éventail de pathologies intestinales, la plus commune qui sont la colite ulcéreuse (CU) et maladie de Crohn (CD). Les deux communications unifiées et de CD, lorsqu'elles sont présentes dans le côlon, de générer un profil de symptômes similaires qui peuvent inclure la diarrhée, des saignements rectaux, des douleurs abdominales et la perte de poids. ¹ Bien que la pathogénie des MICI reste inconnue, elle est décrite comme une maladie multifactorielle qui implique à la fois composantes génétiques et environnementales. ²

Il ya de nombreux modèles animaux et les variables de l'inflammation du côlon qui ressemblent à plusieurs caractéristiques des MICI. Les modèles animaux de la plage de la colite de ceux qui naît spontanément dans les souches sensibles de certaines espèces à ceux nécessitant l'administration de concentrations spécifiques de colite induisant des produits chimiques, tels que le dextran sulfate de sodium (DSS). Chimique induite par les modèles d'inflammation intestinale sont les modèles les plus couramment utilisés et mieux décrit des MICI. Adminidémonstration de DSS dans l'eau potable produit une colite aiguë ou chronique, selon le protocole d'administration. ³ animaux ayant reçu du SSD présentent une perte de poids et les signes de selles molles ou diarrhée, parfois avec des preuves de saignement rectal ^4,5. Ici, nous décrivons les méthodes par lesquelles développement de la colite et la réponse inflammatoire résultant peut être caractérisée après l'administration de DSS. Ces méthodes comprennent l'analyse histologique de l'hématoxyline / éosine sections du côlon tachés, la mesure des cytokines pro-inflammatoires, et la détermination de la myéloperoxydase (MPO), qui peut être utilisé comme un marqueur de l'inflammation. ⁶

L'ampleur de la réponse inflammatoire dans la maladie de l'Etat peut être évaluée par la présence de symptômes cliniques ou par l'altération de l'histologie dans le tissu muqueux. Côlon dommages histologiques est évaluée en utilisant un système de notation qui prend en compte la perte de l'architecture crypte, l'infiltration de cellules inflammatoires, des muscles tAbcès hickening, la déplétion des cellules caliciformes, et la crypte. ⁷ Quantitativement, les niveaux de cytokines pro-inflammatoires aiguës avec des propriétés inflammatoires, telles que l'interleukine (IL)-1β, IL-6 et le facteur de nécrose tumorale (TNF)-α, peut être déterminée à l'aide les méthodes classiques ELISA. En outre, l'activité MPO peut être mesurée en utilisant un dosage colorimétrique et utilisé comme un indice d'inflammation. ⁸

Dans la colite expérimentale, sévérité de la maladie est souvent corrélée avec une augmentation de l'activité MPO et des niveaux élevés de cytokines pro-inflammatoires. Gravité de la colite et l'inflammation associées aux dommages peuvent être évalués en examinant la consistance des selles et des saignements, en plus d'évaluer l'état histopathologique de l'intestin à l'aide d'hématoxyline / éosine sections colorées des tissus du côlon. Fragments de tissus du côlon peut être utilisé pour déterminer l'activité de MPO et de la production de cytokines. Pris ensemble, ces mesures peuvent être utilisées pour évaluer la réponse inflammatoire dans l'intestindes modèles animaux de colite expérimentale.

Protocol

1. Modèle murin de colite induite par le DSS-aiguë Ajouter dextran sulfate de sodium (DSS) à l'eau potable autoclave à la concentration finale désirée (1-5%) (p / v) (c'est à dire faire une solution SSD de 5%, ajouter 25 mg de poudre de DSS à 500 mL d'eau à l'autoclave) . Solution mère peut être laissé à température ambiante pendant jusqu'à une semaine ou à 4 ° C jusqu'à utilisation. Dans une hotte de biosécurité, verser la solution SSD stock dans des tube…

Discussion

DSS colite est un modèle largement utilisé chimiquement induite de l'inflammation intestinale. Dans ce modèle, les souris sont donnés en eau potable complétée par le MAS, qui est pensé pour être toxiques pour les cellules épithéliales intestinales et perturber l'intégrité de la barrière muqueuse. Administration du ¹⁰ DSS induit une colite aiguë qui se caractérise par des selles molles, des saignements fécale, et l'infiltration avec des granulocytes. ¹⁰ Pendant DSS admini…

Materials

Name of reagent/equipment:	Company	Catalogue number	Comments
Eppendorf Safe-Lock Microcentrifuge Tube (2mL)	eppendorf	0030 120.094
Biotek EL808 Absorbance plate reader	Biotek	EL808
Dextran sulphate sodium salt reagent grade (molecular weight 36,000-50,000 Da)	MP Biomedicals	160110
Gen5 (software)	Biotek	Version 1.10.8
Hexadecyltrimethylammonium bromide (HTAB)	Sigma-Aldrich	H5882-100G
Hydrogen peroxide, 30 wt.% solution in water	Sigma-Aldrich	216763	Store at 2-8°C
Microtest plate 96-well flat bottom	Sarstedt	82.1581	For single use only
o-Dianisidine	Sigma-Aldrich	D-3252	Light sensitive. Store at 2-8°C
Potassium phosphate, dibasic	Caledon	6620-1
Potassium phosphate, monobasic	EMD Chemicals	PX1565-1
Protease inhibitor cocktail	Sigma-Aldrich	P8340	Store at -20°C
Triton X-100	Sigma-Aldrich	T8787
Tungsten Carbide beads for Tissue Lyser II	QUIAGEN	69997