इस अनुच्छेद के के चूहा अन्त्रपेशी में angiogenesis उत्तेजक के लिए एक साधारण मॉडल का वर्णन है. मॉडल केशिका अंकुरण, संवहनी और एक ऊतक है कि चेहरा पूरी microvascular नेटवर्क की एकल कोशिका के स्तर के नीचे दृश्य एन की अनुमति देता है एक अपेक्षाकृत कम समय के पाठ्यक्रम पर संवहनी घनत्व क्षेत्र में नाटकीय वृद्धि का उत्पादन.
Microvacular नेटवर्क के विकास और remodeling घाव भरने, सूजन, मधुमेह रेटिनोपैथी, ट्यूमर के विकास और अन्य रोग 1 की स्थिति, 2 की महत्वपूर्ण पहलू हैं. नेटवर्क के विकास को सामान्यतः angiogenesis को, पहले से मौजूद जहाजों से नए जहाजों की विकास के रूप में परिभाषित करने के लिए जिम्मेदार ठहराया है. angiogenic प्रक्रिया भी सीधे arteriogenesis के लिए लिंक, एक perivascular सेल कोटिंग और पोत वृद्धि की केशिका अधिग्रहण के रूप में परिभाषित किया. यह कहना बेकार है, angiogenesis जटिल है और कई खिलाड़ियों के शामिल सेलुलर और आणविक स्तर पर 3. समझ कैसे एक microvascular नेटवर्क बढ़ता angiogenesis के समय के पाठ्यक्रम पर एक नेटवर्क के पदानुक्रम के साथ स्थानिक और लौकिक गतिशीलता की पहचान की आवश्यकता है. यह जानकारी वाहिका विकास से छेड़छाड़ करने के उद्देश्य से चिकित्सा के विकास के लिए महत्वपूर्ण है.
इस आलेख में वर्णित बाह्यीकरण मॉडल एक सरल, stimu के लिए, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल का प्रतिनिधित्व करता हैचूहा अन्त्रपेशी में angiogenesis lating. यह चूहा 4-7 अन्त्रपेशी में घाव चिकित्सा मॉडल से अनुकूलित किया गया था, और एक समर्थक angiogenic 8 एजेंटों, 9 आईपी इंजेक्शन के माध्यम से अन्त्रपेशी में angiogenesis को प्रोत्साहित करने का विकल्प है. बाह्यीकरण मॉडल आकर्षक है क्योंकि यह न्यूनतम शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप की आवश्यकता है और एक ऊतक कि पूरे microvascular नेटवर्क के दो आयामी दृश्य के लिए अनुमति देता में एक अपेक्षाकृत कम समय के पाठ्यक्रम पर केशिका अंकुरित, संवहनी क्षेत्र और संवहनी घनत्व में नाटकीय, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बढ़ जाती है उत्पादन एकल नीचे सेल स्तर. उत्तेजित विकास विदेशी वाहिकाजनक अणुओं के हस्तक्षेप के बिना एक मनोवैज्ञानिक वातावरण में प्राकृतिक angiogenic प्रतिक्रिया दर्शाता है. Immunohistochemical लेबलिंग विधियों का प्रयोग, इस मॉडल उपन्यास सेलुलर angiogenesis में शामिल घटनाओं की पहचान करने में किया गया है अत्यंत उपयोगी साबित हो. जांचकर्ता आसानी से remodeling के समय सपा के साथ समय के दौरान angiogenic मैट्रिक्स सहसंबंधी कर सकते हैंecific की गतिशीलता, सेलुलर प्ररूपी परिवर्तन या सेलुलर बातचीत 4, 5, 7, 10, 11 के रूप में.
बाह्यीकरण मॉडल 2006 की रिपोर्ट में किया गया था और पिछले यांत्रिक angiogenesis को 4-7 की चोट चूहा अन्त्रपेशी मॉडल से अनुकूलित है और अच्छी तरह से स्थापित आईपी इंजेक्शन मॉडल है कि 9 अन्त्रपेशी चूहे का लाभ ले करने के लिए इसी तरह के परिणाम का उत्पादन. 20 मिनट बाह्यीकरण समय प्रयोगात्मक एक मजबूत वाहिकाजनक प्रतिक्रिया का निर्माण करने के लिए निर्धारित किया गया था. जबकि इस समय अवधि अलग किया जा सकता है, यह angiogenic inhibitors के स्थानीय यंत्रवत अध्ययनों और सेल वंश पढ़ाई के लिए बहिर्जात कोशिकाओं के प्रत्यक्ष आवेदन के लिए 4 आवेदन के लिए अनुमति है. Mesenteric ऊतक remodeling के में सेल समावेश की व्यवहार्यता पूर्व लेबल अस्थि मज्जा की कोशिकाओं और mesenchymal स्टेम सेल (चित्रा 7) का उपयोग कर, हमारी प्रयोगशाला में प्रारंभिक अध्ययन और मानव वसा व्युत्पन्न stromal कोशिकाओं के इंजेक्शन 14 आईपी के भाग्य की जांच की सफलता के द्वारा समर्थित है . हमारी प्रयोगशाला में, हम इस मॉडल का इस्तेमाल किया है pericyte phen की पहचानangiogenic 10 प्रतिक्रिया के समय के पाठ्यक्रम पर और 12 उच्च रक्तचाप के रूप में रोग की स्थिति, के दौरान angiogenic क्षमता का आकलन otypic बदलता है. angiogenic प्रतिक्रिया और सेल phenotype के इस मॉडल के साथ जुड़े परिवर्तन भी अन्य चूहा mesenteric पुरानी hypoxia के 10 प्रदर्शन, 11 सहित angiogenic मॉडल में मनाया जा सकता है.
बाह्यीकरण मॉडल की एक सीमा है कि angiogenesis के सटीक ट्रिगर तंत्र अज्ञात है. अन्त्रपेशी की बाह्य अनुभूति मस्तूल सेल degranulation के और वृद्धि histamine के 6 स्तरों जोड़ा गया है, फिर भी आगे की जांच पड़ताल करने के लिए और अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए आवश्यक है. angiogenic प्रोत्साहन निस्संदेह बहु भाज्य है, एक microvascular नेटवर्क के पदानुक्रम भर में एक मजबूत remodeling प्रतिक्रिया उत्पादन. जबकि अज्ञात तंत्र इस मॉडल का एक प्रमुख आलोचना रहते हैं, अपने reproducibility और सादगी सेलुलर गतिशीलता पूर्णकालिक अध्ययन के दो साल जुड़ी हुई है की पहचान करने के लिए इसे आकर्षक बनानास्वाभाविक जटिल केशिका अंकुरण प्रक्रिया में वेद है. मॉडल के reproducibility में microvascular नेटवर्क कई चूहे उपभेदों के पार (पुरुष Wistar और Sprague Dawley महिला) हमारे 10 प्रयोगशाला, 12 से पहले से प्रकाशित अध्ययन में विकास के समय पाठ्यक्रम पर तुलनीय angiogenic के मैट्रिक्स द्वारा समर्थित है. के बाद से, वयस्क चूहे mesenteric ऊतकों के बहुमत vascularized, मॉडल भी कई पशु के प्रति जांच की जा ऊतकों के लिए अनुमति देता है. दुर्भाग्य से, इस मॉडल को स्पष्ट रूप से आनुवंशिक माउस मॉडल लागू करने के लिए के रूप में माउस mesenteric विंडोज़ कम देशी vascularization है और हमारे अनुभव में, सामान्यतः नमूदार शाखाओं में नेटवर्क की कमी नहीं है. भविष्य अनुप्रयोगों विशिष्ट समय बिंदुओं पर अंतर महत्वपूर्ण माइक्रोस्कोपी का उपयोग angiogenesis के दौरान पोत कार्यक्षमता की जांच और संबंधित सेलुलर lymphangiogenesis और neurogenesis में शामिल गतिशीलता की जांच शामिल हैं. हालांकि mesenteric खिड़की प्रति देशी vascularization की हद तक rou हो रहा हैghly उम्र के साथ आनुपातिक है, हम 4-5 सप्ताह की उम्र के रूप में युवा के रूप में पुरुष Wistar चूहों में microvascular नेटवर्क के शाखाओं में मनाया. इन टिप्पणियों का सुझाव कि बाह्यीकरण मॉडल भी उम्र भर angiogenic मतभेदों की तुलना करने के लिए लागू किया जा सकता है.
The authors have nothing to disclose.
और Tulane उच्च रक्तचाप और गुर्दे उत्कृष्टता के केंद्र NIH अनुदान द्वारा वित्त पोषित P20RR017659 08 (पीआई: यह काम राज्य लुइसियाना (2009-12) LEQSF आरडी A-19 (WL Murfee PI) के प्रतिनिधियों की बोर्ड द्वारा समर्थित किया गया एल Navar गेब्रियल).
Name | Company | Catalogue Number | Additional Comments |
Drape | Cardinal Health | 4012 | 12″x12″ Bio-Shield Regular Sterilization Wraps |
Noyes Micro Scissor | Roboz Surgical Instrument | RS-5677 | Noyes Micro Dissecting Spring Scissors; Straight, Sharp-Blunt Points; 13mm Cutting Edge;0.25mm Tip Width, 4 1/2″ Overall Length |
Graefe Forcep | Roboz Surgical Instrument | RS-5135 | Micro Dissecting Forceps; Serrated; Slight Curve; 0.8mm Tip Width; 4″ Length |
Graefe Forcep | Roboz Surgical Instrument | RS-5130 | Micro Dissecting Forceps; Serrated, Straight; 0.8mm Tip Width; 4″ Length |
4-0 suture | ETHICON | 699G | (1.5 metric) ETHILON Nylon Suture Black Monofilament |
5-0 suture | ETHICON | 8556 | (1.0 metric) PROLENE Polyprolene Suture Blue Monofilament |
7-0 suture | ETHICON | 1647G | (0.5 metric) ETHILON Nylon Suture Black Monofilament |
Castroviejo Micro Needle Holder | Fine Science Tools | 12060-02 | Tip Width:0.6mm Clamping Length:5mm Length:9cm Straight tip |
Castroviejo Needle Holder | Fine Science Tools | 12565-14 | Tip Shape:Straight Tip Width:1.5mm Clamping Length:10mm Scissors:No Lock:Yes Length:14cm Serrated:Yes |
Scalpel Handle | Roboz Surgical Instrument | RS-9843 | Scalpel Handle, #3; Solid; 4″ Length |
Sterile Surgical Blade | Cincinnati Surgical | 0110 | Stainless Steel; Size 10 |
Petri Dish | Fisher Scientific | 08-757-13 | Beveled Ridge, Slippable |
Table of Specific Surgical Materials and Tools.
Name | Company | Catalogue Number | Additional Comments |
Beuthanasia | Schering-Plough Animal Health Corp. Union (Ordered from MWI Veterinary Supply) | MWI #: 011168 | Active Ingredient: Per 100mL, 390 mg pentobarbital sodium, 50mg phenytoin sodium |
Ketamine | Fort Dodge Animal Health (Ordered from MWI Veterinary Supply) | MWI #: 000680 | Kateset 100 mg/ml |
Xylazine | LLOYD. Inc. (Ordered from MWI Veterinary Supply) |
MWI #: 009307 | Anased 100 mg/ml |
Saline | Hospira Inc. | 94-217-JT | |
PBS | SIGMA | 011M8207 | |
Saponin | Sigma | BCBB4080 | |
PECAM (CD31) | BD Pharmingen | 553371 | |
Streptavidin-CY3 | Jackson ImmunoResearch | 016-160-084 | |
BSA | Jackson ImmunoResearch | 096555 | |
VECTASTAIN Elite ABC | Vector Laboratories | PK-6100 | |
Vector Nova Red | Vector Laboratories | SK-4800 | |
VectaMount | Vector Laboratories | H-500 |
Table of Specific Reagents