Denne protokollen skisserer regelmessig vedlikehold og omsorg for å opprettholde optimale forhold for sebrafisk reindrift. Videoen viser protokollen for systemvedlikehold, vanlig bolig, fôring, avl, og heving av sebrafisk larver.
Denne protokollen beskriver regelmessig stell og vedlikehold av en sebrafisk laboratorium. Sebrafisk er nå stadig mer populært i genetikk, farmakologiske og atferdsmessige forskning. Som et virveldyr blir sebrafisk aksje betydelig genetisk sekvenslikhet med mennesker og blir brukt som en dyremodell for forskjellige humane sykdomstilstander. Fordelene med sebrafisk i forhold til andre vanlige virveldyr modellene inkluderer høy fruktbarhet, lave vedlikeholdskostnader, gjennomsiktige embryoer, og rask utvikling. På grunn av sporen av interesse i sebrafisk forskning, behovet for å etablere og opprettholde en produktiv sebrafisk boliger anlegget er også økende. Selv litteraturen er tilgjengelig for vedlikehold av en sebrafisk laboratorium, er en kortfattet Videoprotokollen mangler. Denne videoen viser protokollen for vanlige boliger, fôring, avl og heving av sebrafisk larver. Denne prosessen vil hjelpe forskerne å forstå den naturlige atferd og optimale forhold for zebrafish dyrehold og dermed feilsøke eksperimentelle problemer som stammer fra fisk bruksforholdene. Denne protokollen vil være av enorm hjelp for forskere som planlegger å etablere en sebrafisk laboratorium, og også til hovedfagsstudenter som har tenkt å bruke sebrafisk som en dyremodell.
Sebrafisk stammer fra elven Ganges i Nord-India, og er blitt populært i forskning i både deres voksne og larvestadier 2, anmeldt av Spence et al. 3. Sebrafisk har flere fordeler fremfor andre dyremodeller som høy fruktbarhet, enkelt vedlikehold, optisk clearance av embryoer, rask embryoutvikling, og lave vedlikeholdskostnader. De er mottagelig for genetisk manipulasjon 6 og egnet for high-throughput narkotika screening 4,5. Deres befruktning er ekstern som er fordelaktig for deres bruk ved utviklingsmessige biologer. På grunn av disse gunstige egenskaper, er sebrafisk stadig mer populært i 7 genetikk, farmakologisk 8, og atferdsforskning 9,10. Det er en rekke utfordringer til å opprettholde en sebrafisk anlegget og sebrafisk dyrehold å få embryoene. Heri, beskriver vi våre erfaringer og anbefalinger for å møte disse utfordringene og outline en protokoll for systemvedlikehold, fôring, avl og heving av larvene.
Systemvedlikehold
For å opprettholde sebrafisk i en sunn tilstand, er det viktig å gi dem med et rent miljø i et fungerende akvarium system. En viktig del av dette er i endring systemet filtrerer regelmessig slik at alle tankene får riktig vannmengde og rent vann. Det er viktig å unngå svikt i sykling vannforsyningen til hver tank på grunn av blokkerte systemet rør. Rørene kan rengjøres med en høyere enn normalt trykk og vannmengde hvis blokkering oppstår. Ideelt, bør 10% av systemets vannet byttes daglig for å opprettholde god vannkvalitet. Alternativt kan vann erstattes mens endre Canister eller kullfilter. Dette sikrer at smuss avsatt i rørene som forbinder disse filtrene er fjernet. Kvaliteten på vannet bør kontrolleres med jevne mellomrom. Parametre som alkalitet, pH, Temperature, hardhet, ammoniakk, oppløst oksygen, salinitet og ledningsevne bør betraktes som viktige faktorer representerer kvaliteten på systemet vann (se tabell 2 for detaljer). I det minste nitrat, pH og temperatur overvåkes jevnlig for å sikre god vannkvalitet for boliger sebrafisk. Ideell nitrat (NO 3 -) nivåene er <50 mg / L 11, hvis høy disse nivåene kan reduseres ved å erstatte vannet i sirkulerende system med fersk systemvannet. Noen ganger trenger filtrene ikke passer godt og lekke så det anbefales å sjekke for eventuelle lekkasjer etter et filter endring. Hvis vannstrømmen fra de viktigste reservoaret er blokkert enten etter endring av vannpumpe eller endre et filter, kan vannstrømmen gjenopprettes ved enten å løsne eller fjerne filteret i noen sekunder for å slippe noen vakuum blir generert i rørene. Den nødvendige tid for å endre filtre kan variere avhengig av forskjellige faktorer som for eksempel total biologisk belastning on systemet, renslighet av andre filtre, og skitt avsatt i rørene. Derfor bør filtre umiddelbart endres hvis de dukker opp skitne, eller hvis alle tankene ikke får riktig vannforsyning. Det anbefales også at fisken netto rengjøres med 70% etanol, og skylles i vann for å rense det, og lov til å tørke før de blir gjenbrukt. Tørking sikrer fordampning av etanol som ellers er giftig for fisk.
De fleste av de sebrafisk systemer bruker de-klorerte vann, men noen systemer bruker deionisert vann. Det er viktig å holde ledningsevnen av systemet vann mellom 300 og ~ 1500 mS som dette reduserer energien fisken trenger for å opprettholde kroppens salter. Derfor kan sebrafisk ikke holdes i avionisert vann med mindre salter tilsettes for å opprettholde de optimale ledningsevne nivåer. Det er en risiko for mulige høye kobberkonsentrasjoner i systemet vann hvis vann er brukt fordi kullfilteret ikke fjerner kobber. Derfor, uSers bør se etter kobberkonsentrasjoner og unngå kobberrør der det er mulig.
Fôring
Sebrafisk skal aldri overfed, da dette kan øke nitrat i vannet, muligens påvirker deres avl 11, eller levedyktighet, som noen fisk kan dø på grunn av overspising. Vi anbefaler å gi noe mer mat i løpet av et fôring enn en tank av fisk kan fullføre innen 10 min. Det er svært viktig å fjerne salt fra artemia før du mater dem til sebrafisk som overflødig salt konsentrasjon forårsaker død. Hvis flere sebrafisk egg er nødvendig, kan fisken fôres tre ganger om dagen. Rengjøring av oppdretter akvarier daglig forbedrer også nivåer av eggproduksjon.
Når fôring på akvatiske habitater systemene vi vanligvis slå av vannpumpen og luftpumpe slik at fisken til å spise maten i 10 min. Dette reduserer mengden av mat som er vasket i filtrene. Men må brukerne være forsiktig med å remEmber å slå på disse pumpene igjen etterpå.
Avl
Sebrafisk er vanligvis på optimal avl tilstand mellom ~ 3 og 18 måneders alder. Parvise avl bør ikke utføres i to påfølgende dager 11, men kan i-tank avl utføres daglig som en tank kan holde mange fisk som reduserer sjansen for samme par fisk blir avlet for to dager på rad. Avl bør foretas med jevne mellomrom, selv om eggene ikke kreves. Denne prosessen vil sikre avl syklus av fisken opprettholdes. Det anbefales at det er flere kvinner enn menn i en avl oppsett. Mann sebrafisk endre sine kvinnelige partnere på en daglig basis 12 som ytterligere støtter denne anbefalingen. Dessuten kan du innenfor vårt laboratorium i utgangspunktet opplevde vi problemer med avl, men ved hjelp av flere kvinner enn menn i avl set-up bidro til å løse problemet. Dessuten, fôring med høy protein content kosthold og artemia 2-3 ganger om dagen, blanding fisk fra forskjellige tanker (fra forskjellige foreldre), opprettholde temperaturen i avl oppsett mellom 27 og 28 ° C, og klemme magen til hunner med blokkerte ovarieceller rør bruker mild massasje ytterligere forbedret eggproduksjon. Vi anbefaler å holde en oversikt over fisk linjer / opprinnelse å unngå i-avl mellom søsken. Dette ytterligere forbedrer embryo produksjon. Holde en oversikt over antall embryoer lagt av fisk fra hver tank er også anbefalt. Dette hjelper med å holde orden på de beste avl akvarier og tar tiltak for å bedre avl i fisken ikke legge egg.
Heving av larver
Fôring av larver bør starte fra 5 DPF (dager etter befruktning). Young larver kan mates med tørr mat av ~ 100 mikron i størrelse (f.eks ZM100) eller levende mat som paramecium og rotatorier (som stimulerer vekst). Maten størrelse kan sakte økestil 200 mikrometer (f.eks ZM200) eller 300/400 mikron (f.eks ZM300). En populasjon av voksen fisk bør være rundt 6-7 fisk per liter vann. Denne praksisen er anbefalt for bedre vedlikehold av BOD (biologisk oksygenforbruk) til tankene.
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne ønsker å takke Tammy Esmaili for hennes assistanse i forvaltningen av laboratoriet forbruksvarer. AA er mottaker av en PhD stipend fra Centre of Excellence for Alzheimers Disease Research og omsorgsdepartementet, School of Medical Sciences, Edith Cowan University. MC får PhD finansiering støtte fra Rotary Club, Perth. AM, er GV, KT, og RNM finansiert av McCusker Alzheimers Research Foundation.
Name of reagent/equipment | Company | Catalogue number | |
Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
Microscope | Olympus | SZX12 | |
Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. |