Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Produksjon og bruk av Piggy-back Multibarrel Elektroder for doi: 10.3791/4358 Published: January 18, 2013

Summary

Iontophoresis av nevrale agonister og antagonister under ekstracellulære

Abstract

In vivo opptak fra enkle nevroner tillate en undersøker for å undersøke egenskapene til avfyring nevroner, for eksempel som svar på sensoriske stimuli. Nevroner får vanligvis flere eksitatoriske og hemmende afferente og / eller efferent innganger som integreres med hverandre, og de endelige målt respons egenskaper nervecellen er drevet av de nevrale integrasjoner av disse inngangene. Å studere informasjonsbehandling i neural systemer, er det nødvendig å forstå de forskjellige innganger til en nevron eller nevrale system, og de spesifikke egenskaper av disse innganger. En kraftig og teknisk relativt enkel metode for å vurdere den funksjonelle rolle visse innganger som en gitt nevron mottar er å dynamisk og reversibelt undertrykke eller eliminere disse innganger, og måle endringene i nevronets effekten forårsaket av denne manipulering. Dette kan gjøres ved farmakologisk endre nervecellen umiddelbare miljø med grisen tilbake multibarrel elektroder. Disse elektroder består av en enkelt tønne innspilling elektrode og en multibarrel medikament elektrode som kan bære opptil 4 forskjellige synaptiske agonister eller antagonister. De farmakologiske midler kan påføres iontophoretically på ønskede ganger under forsøket, noe som åpner for tidsstyrt produksjonstid og reversibel rekonfigurering av synaptiske innganger. Som sådan, farmakologisk manipulering av mikromiljøet representerer en kraftig og enestående metode for å teste bestemte hypoteser om nevrale krets funksjon.

Her beskriver vi hvordan grisen tilbake elektrodene er produsert, og hvordan de brukes under in vivo eksperimenter. Grisen-back system gjør en etterforsker til å kombinere en enkelt tønne opptak elektrode av vilkårlig eiendom (motstand, tip størrelse, form etc) med en multibarrel narkotika elektroden. Dette er en stor fordel i forhold til standard multi-elektroder, der alle fat har mer eller mindre lignende former og egenskaper. Multibarrel electrodes ble først introdusert over 40 år siden 1-3, og har gjennomgått en rekke forbedringer 2,3 til grisen tilbake typen ble introdusert i 1980 4,5. Her presenterer vi et sett av viktige forbedringer i laboratoriet produksjon av piggy-back elektroder som tillater dyp hjerne gjennomtrengning i intakt in vivo animalske preparater på grunn av en relativt tynn elektrode sjakt som forårsaker minimal skade. Dessuten disse elektrodene kjennetegnes av lave støy innspillinger, og har lav motstand bedøve fat for meget effektiv iontophoresis av de ønskede farmakologiske midler.

Protocol

  1. Trekk Glass elektroder

    Trekk glass elektroder
    1. Trekk enkelt fat elektroden. Omgi fat glass kapillær med filament og trekk spissen til en diameter på ca 1-2 mikrometer aksel lengde på 10-12 mm, og tilhørende elektrode motstand av ca 12 MOhm (område 5-20 MOhms) målt i 0,9% NaCl-løsning. Lavere elektrode motstand vil resultere i mer bakgrunnsinformasjon aktivitet og dermed mer problemer med å isolere enhetlig aktivitet fra enkelte nerveceller. For å trekke denne elektroden, bruk enten en horisontal eller vertikal avtrekker med enten oppvarming filamenter eller varmebatterier.
    2. Trekk multibarrel elektroden. Grunnet den mye større diameter multibarrel glass og behovet for jevn varmefordeling rundt hele multibarrel, er et kraftig avtrekker med større diameter varmespiral, ikke en oppvarming filament, nødvendig. En multibarrel pipette må inn i midten av varme-filament med no kontakt til varmebatteriet. Vær oppmerksom på at i tillegg til de 5-fat pipetter beskrevet her, 3-barrel eller 7-fat pipetter er kommersielt tilgjengelige alternativer. Trekk glasset en pipettespiss av ca 10 mikrometer total diameter, eller mindre. Spissen blir brutt til korrekt diameter i neste trinn, slik at nøyaktige dysestørrelse er mindre kritisk under trekke-prosessen enn den generelle formen av elektrodespissen, som bør være lang og relativt tynt. Referer til bildet i figur 1C etter ønsket elektrodespissen form. Korte og butte elektrode figurer (figur 1B) vil føre til en betydelig mengde av vevsskade ved avanserte til hjernen, mens svært lange og tynne elektrode figurer (figur 1A) bøyes og dermed gjøre det vanskelig å bryte elektrodespissen til riktig diameter (se trinn 2).
  2. Endre Elektrode Tips

    Endre elektrodetuppene. Før de to elektrodene kan være limt sammen, De må endres. Akselen til den enkelt elektrode må bøyes før det kan være festet til multibarrel å kontrollere at kombinerte akselen av det ferdige piggy-back elektroden er så tynn som mulig. Tillegg har spissen av multibarrel elektroden å bli brutt av for å sikre lav motstand for iontoforese.
    1. Bend aksel av en enkelt tønne elektrode ved ca 20 grader. Bruk den minste bunsenbrenner flamme mulig. Typiske "små" Bunsen brennere fra standard lab leverandørselskaper skape flamme størrelser som er altfor stor for denne applikasjonen. For å omgå dette problemet bruke den minste kommersielle gassbrenner og sikre en sprøytenål ​​(~ 18 gauge) til toppen av brenneren, og forsegle forbindelsen ved hjelp dental sement. Når operert, bør flammen være vanskelig å se, omtrent 5 mm eller mindre i diameter, og ca 8 mm høye. Enhver bevegelse i luften i rommet vil slukke flammen, så det er en god idé å bruke brenneren i enlukkede rom, eller å bruke vind skjold. Flytt enkelt fat elektroden gjennom flammen å bøye den ved ca 20 grader. Sikte på å ha brennerflammen smelte glasset ved overgangen området på ca 10 millimeter unna elektrodespissen. For å unngå smelting spissen av elektroden foreslår vi at elektroden holdes på ca 45 grader, spissen nedover, og flytte elektroden gjennom flammen relativt raskt.
    2. Bryt av spissen av multibarrel elektroden. Å sikre visuell kontroll mens bryte elektrodespissen, bruke et mikroskop med et minimum 10x objektiv og 10x okulars. En måleskala innsatt i okulære vil også være nødvendig for å måle dysestørrelser. Fest et stykke plexiglass til mikroskopet, slik at enden av plexiglass kan sees i omtrent en tredjedel til halvparten av synsfelt av mikroskopet. I vårt tilfelle er det plexiglass stykke om 25 x 70 mm og 5 mm tykke og festet via en skrue som kan festes inn i en tilpassetgjort tråd i mikroskopet scenen. Det er viktig å ha en utforming som gjør det mulig for plexiglass beveger seg uavhengig av lysbildet. Plasser multibarrel elektroden i en seng av modelleire på et glass lysbilde, og sett lysbildet som inneholder elektroden i mikroskopet scenen i lysbildeholderen. Ved hjelp av mikroskop scenen i xy manipulatorer, forsiktig flytte elektrodespissen mot plexiglass stykke, og observere brøt spissen gjennom mikroskop okulars. Forsøk å rent bryte multibarrel Tips til en kumulativ diameter på ca 25-35 mikrometer. Kast pipetter med spissen diameter som brøt seg for stor, eller tips med ujevne pauser. Vi kaster ca 30% av våre multibarrel elektroder grunn til uønskede tips figurer.
  3. Monter Piggy-back elektrode

    Monter grisen tilbake elektroden.
    1. Posisjon elektroder. Fjern plexiglass arb brukes i trinn 2,2 fra mikroskopet scenen. Sikre fullførtmultibarrel elektroden i modelleire på et glass lysbilde, tips peker svakt oppover. Peker oppover vil være viktig for trinn 3.2, liming av de to elektrodene. Tips som peker opp føre til at limet å løpe vekk fra spissen, unngå liming elektrodetuppene. Sett bøyd enkelt fat elektroden i elektrode innehaver av skreddersydde micromanipulator (figur 2). Ved hjelp av visuell veiledning først og deretter mikroskopisk veiledning, senke enkelt fat elektroden på multibarrel elektroden. Den enkelt elektrode bør senkes direkte ned i sporet som er dannet ved anordning av de 5 fat, med sin spiss som stikker spissen av multibarrel spissen ved ca 5-10 mikrometer. Ved senking av enkelt fat, nøye observere den vinkelen som er dannet mellom de to elektrodene. For best resultat unngå vinkler hvori spissene peker fra hverandre, men heller forsøke å senke enkelt elektrode på multi perfekt parallelle eller selv med tuppenberøre multibarrel først, danner en svært liten 'kile' arrangement. Siden én fat spissen er svært fleksibel, vil det bøye når enkelt elektrode senkes litt videre etter spissen har nådd den øvre overflate av multi fat elektroden, danner en ren kompositt spiss som har en liten mengde av en fjær innebygd som hjelper å holde tipsene sammen. Men hvis vinkelen mellom enkelt tønne og multibarrel elektroden er for bratt (for mye av en kile), vil fjæren handlingen være for høyt og bøy-arrangement nedover.
    2. Lim elektrode sjakter sammen. Lim sjakter til de to elektrodene sammen med cyanoakrylat (superlim). Plasser en liten dråpe lim på de små side av en flat tannpirker og touch elektrodeenheten med limet slipp. Starter på det mest distale av tipsene og sakte bevege tannpirker med lim slipp langs elektrode sjakter mot elektrodetuppene. Bruke for mye lim, eller bruke lim too nær elektrodetuppene vil resultere i liming elektroderingene åpninger, rendering elektroden i det minste delvis ikke-fungerende.
    3. Stabiliser felles med dental sement. Bland en liten mengde av dental sement og dental akryl i en liten engangs plast parabolen eller veie båt, ved hjelp av en flat tannpirker. Vent til sement blir formbar og bruke en liten mengde av skjøten mellom de to elektrodene for å stabilisere den felles (rosa materiale i figur 3). Tillate ca 15 minutter å tørke.
    4. Fjerne og lagre elektroden. Fjern forsiktig fullført grisen tilbake elektroden først fra micromanipulator holderen, og deretter trekke fra glass-slide, og oppbevar i en støvtett container.
  4. Forbered Elektrode Fyll Solutions

    Forbered elektroden fyll løsninger. Siden iontophoresis krever ladede molekyler, de fleste agenter må løses enten i et surt eller alkalisk miljø (vanligvis enTA pH på ca 3-4, eller en pH på ca 8-10, henholdsvis). En rekke kjemikalier som ofte brukes i iontoforese er oppført i Tabell 1. For midler som ikke er oppført i tabellen, bestemme fra pKa verdi, om det ville være enklere å bruke molekylet i en sur eller basisk miljø for å holde molekylet ladet, og oppløse tilsvarende. For best resultat, bland alle løsninger fersk daglig.
  5. Fyll og forberede Elektroder

    Fyll og forberede elektroder. Rett før du bruker elektroden, back-fyll hvert fat med sine respektive narkotika, bruk av karbonfiber 28-34 måle nåler knyttet til sprøyter med sprøyte filtre. Fyll 4 utvendige fat på 5-fat konfigurasjon med narkotika av valget, og sentrum fat med 3M NaCl som en balanserende fat. Fyll enkelt fat innspillingen elektrode med 3M NaCl samt. Legge et fargestoff til NaCl-løsning, for eksempel rask grønn eller fenolrødt vil gjøre det lettere å se elektrodespissenunder plassering av elektroden på hjernen overflaten. Sett elektroden i elektrodeholderen av opptaket oppsett og sette alle ledningene inn i de riktige glass fat. Bruk isolerte sølvtråd hvorfra ca 1 cm av isolasjon er fjernet på spissen. Det bør være 5 ledninger for multibarrel elektroden (4 bedøve fat og en balansering fat), pluss forsterkeren ledningen som må settes inn i opptaket singel fat elektroden.
  6. Slå på iontophoresis pumpemoduler

    Slå på iontophoresis pumpemoduler og teste alle fat. Elektroden testfunksjon av hver pumpe modulen vil hjelpe avgjøre om elektroden fat er funksjonell. For å forhindre lekkasje av legemidler fra fat når den ikke er i bruk, trenger en oppbevaring spenning i motsatt polaritet som molekylet kostnad skal påføres.

Representative Results

I dette eksperimentet, ble glycin reseptorantagonisten stryknin hydroklorid iontophoretically anvendt. Blokkering glycinergic hemming vanligvis øker avfyring i nevroner. Figur 4 viser eksempler på data fra en auditiv neuron som svar på sinusformet lyd stimuli av økende intensitet levert til dyrets ører ble registrert. Denne type av en eksperiment kalles nevronets utslipp rate vs intensitet funksjon. Høyere lyder resulterte i høyere pigg priser (svart kurve). Den innledende iontophoresis gjeldende brukt under dette forsøk var 15 nA. Etter gjeldende ble slått på og endringene i frekvensen intensitet funksjon hadde stabilisert seg på sitt nye nivå (mørk blå kurve), ble utstøting nåværende gradvis økt til 30, 45, og 60 nA (oransje, grønn og lys blå kurver, henholdsvis). I hvert tilfelle, ble responsene nervecellen over samme område av lyd intensiteter registreres etter endringene i discharge Vurder intensitet funksjoner som svar på den nye utstøting strømmen hadde stabilisert seg. Den mest hensiktsmessige utstøting strøm å bruke i dette eksempelet var 45 nA til 60 nA fordi disse nivåene av dagens ikke lenger endre annerledes nervecellen svar. Dette resultatet tyder på at ved 45 nA gjeldende, hadde alle glysin reseptorer som neuron allerede blitt blokkert av stryknin hydroklorid. Enhver ytterligere økning av utstøting gjeldende og slippe enda stryknin resulterte ikke i en ytterligere endring av nevronets utslipp rate-nivå funksjon. Etter gjennomføring av protokollen, ble utstøting gjeldende slått av. Gjenvinning av nevrale responser tilbake til baseline ble oppnådd etter ca 25 min (rød linje). Dette kan ta, avhengig av type og mengde av medikament utløst mellom flere sekunder og flere titalls minutter.

Medikament Konsentrasjon pH i en løsning Løsemiddel Selskapet Kat. # Typisk Retention Current Typiske utstøting Currents
GABA 500 mM 3,5 til 4,0 dH 2 O Sigma A-2129 -15 NA 5 nA til 100 nA
Glycine 100 mM 3,5 til 4,0 dH 2 O Sigma G-7126 -15 NA 5 nA til 100 nA
Bicuculline Methiodide 10 mM 3.0 0.165 M NaCl i dH 2 O Sigma B-6889 -15 NA 5 nA til 60 nA
Stryknin hydrochloride 10 mM 3.0 0.165 M NaCl i dH 2 O Sigma S-8753 -15 NA 5 nA til 80 nA
L-glutaminsyre 500 mM 8.0 dH 2 O Sigma G-1251 30 nA -10 NA til -150 nA
L-asparaginsyre 500 mM 8.0 dH 2 O Sigma A-8949 30 nA -10 NA til -150 nA
Kainic Acid 1 mM 9.0 dH 2 O Sigma K-0250 30 nA -10nA til -100 nA

Tabell 1. Vanlig brukte legemidler, med pH for oppløsning og konsentrasjon. Tabellen viser de mest brukte synaptiske agonister og antagonister brukes med iontophoresis. PH miljø oppført kontoer for behovet for å polarisere t hese agenter, og de foreslåtte konsentrasjon regnskap for variasjonen i effektivitet mellom ulike legemidler.

Figur 1
Figur 1. Tre multibarrel pipetter med ulike tips lengder A:. Spissen av denne 5-fat elektroden har blitt trukket for langt og tynt. Vær oppmerksom på at spissen er bøyd og veldig myk. Denne typen av spissen er svært vanskelig å bryte til den ønskete diameter. B: Spissen av denne elektroden er for kort og butte. Når rykket inn dypere hjerneområder, vil denne elektrode unødig hjerneskade skyldes at elektroden blir relativt tykt bare noen få millimeter etter spissen. C: Et eksempel på en elektrode med et fullstendig trukket tips. Mens være lang og tynn, er spissen fremdeles fast og kan være brutt lett til ønsket spissen diameter.

Gure 2 "src =" / files/ftp_upload/4358/4358fig2.jpg "/>
Figur 2. Tegning av elektroden manipulator montering. Manipulatoren montering brukes sammen med et mikroskop for å montere grisen tilbake elektroder. Felter merket med grått finnes kommersielt tilgjengelige produkter og er oppført i Tabell 2.. Elementer som er merket blått ble tilpasset maskinert på vår institusjon maskin butikk. De er 1) 1/4 tommers stålplate størrelse 43x26 cm med hull for Newport scenen 423 boret inn i den i henhold til hullbilde levert av Newport, 2) en vippe scene som gir mulighet for å vippe av forsamlingen på vilkårlige vinkler, 3) en kontakt som monterer elektrodeholderen til toppen translatorisk scenen.

Figur 3
Figur 3. Bilde av en prøve grisen tilbake elektroden. Et ferdig 5-fat elektroden monteres sammen med en enkelt-fat opptak electrode. Note lang sjakt på ca 7mm slik at for en dyp hjerne opptak.

Figur 4
Figur 4. Titrering av utstøting strøm. Grafen viser rente-intensitet funksjoner opp fra en enkelt auditivt Nevron mens dyrets ører ble stimulert med toner av ulike intensiteter. Høyere lyder tendens til å lokke fram høyere skyte priser. Før stoffet program, viste nervecellen rate intensitet funksjon de laveste pigg priser (svart kurve). Progressivt høyere utstøting strømmer blokkert stadig flere glysin reseptorer på nevroner, noe som resulterer i stadig høyere skyte priser. Den optimale utstøting strøm i denne neuron var 45-60 nA. Med disse utstøting strømninger, ble fullstendig blokkering av alle nevronets glysin reseptorer oppnådd. Etter fullførelse av den eksperimentelle protokollen ble iontophoresis terminert og neuron fikkgjenopprette. Fullstendig gjenoppretting ble oppnådd når utvinningsgraden intensitet funksjon matchet den første pre-stoff utvinning funksjon. Reproduseres, med tillatelse fra American Physiological Society, fra Klug et al, 1995.

Discussion

Vi beskriver en teknikk som gjør det mulig for manipulering av en enkelt nevronets mikrokretsen in vivo, mens på samme tid slik at for innspillingen av neuron signaler mens den eksperimentelle manipulasjon. Neural kretser er manipulert via iontophoretical anvendelse av synaptiske agonister og antagonister. Den største fordelen med iontoforese overtrykk utstøting er at iontoforese krever ikke fysisk bevegelse av væske fra elektroden i nervevev, og dermed er det ingen bekymring for å forårsake vevsskade gjennom det påførte trykk eller væskevolum. Den store begrensning av denne teknikken er mangel på informasjon om den absolutte medikamentkonsentrasjonen i vevet, og volumet av vev påvirket. Men siden mengder farmakologiske midler slynges med iontoforese er mye mindre og mye mer presist kontrollerbar enn med press utstøting er utvinning fra stoffet programmet vanligvis mye raskere end mye mer komplett. Microiontophoresis har med hell vært brukt i en rekke nervesystemer, sensoriske og andre, og er tilordnet mest vellykket i hjernen områder med liten eller ingen iboende prosessering. Årsaken er at noen av de mates farmakologiske middel kan diffundere fra påføringsstedet til en nærliggende nevron og også manipulere responsen egenskapene nabostaten neuron.

Den separate produksjon av single og multi fat elektroder muliggjør en kombinasjon av elektroder med vilkårlige og urelaterte egenskaper. Trekke elektroder fat sammen og ved hjelp av noen for opptak og noen for iontophoresis formål ville produsere elektrodetuppene med svært lignende egenskaper, slik at elektrodetuppene enten ville bli for stor for enkelt celle opptak, eller for liten for narkotika søknad. Også har den eneste fat spissen går utover multibarrel elektrodetuppene med om lag 20 mikrometer reduserer støy i opptakene, end eliminerer mulige konfunderende aktuelle effekter fra oppbevaring eller utstøting strømmer på nevronets avfyring 3.

Piggy-back multibarrel elektroder først har blitt beskrevet for over 30 år siden 4-6 og har blitt brukt med stor suksess å dissekere nevrale kretser 7-18 19-29. Dermed er metoden per se ikke romanen eller unike. Imidlertid har de spesielle detaljer av elektroden preparering og bruk blitt modifisert gjennom årene, og settet med instruksjoner som er beskrevet her har vist seg å være spesielt lett og vellykket, og har ikke blitt publisert i detalj andre steder i litteraturen. Spesielt, tillater bøying av singelen fat elektrodespissen endelig spissen av grisen tilbake elektrode å være relativt slank (figur 3) og således, tillater opptak fra dyp atomkjerner med minimal skade på hjernen, den utstikkende av singelen fat elektrode over multi-fat elektrode fjerner nesten all vat effekter, som ofte ble nevnt som en ulempe av teknikken tre. Nye detaljer som presenteres her som å ha elektrodespissen peker oppover i løpet av liming prosessen og hvile enkelt fat i sporet på multibarrel elektroden vil sikre en høy suksessrate ved produksjon grisen tilbake elektroder. Teknikken er relativt enkelt og kan typisk være mastret av en nybegynner innen noen få dager.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Arbeidet ble støttet av R01 DC 011582 (AK) og RO1 DC011555 (DJT).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bunsen burner 17928-027 Available from: VWR
Two-component dental cement: "Cold cure" dental material Co-oral-ite Dental Mfg. Co 525000 Available from: A-M Systems, Inc
Two-component dental cement: Denture material crosslinking Liquid Compound Co-oral-ite Dental Mfg. Co 525000 Available from: A-M Systems, Inc
Liquid glue Henkel 01-06849 Available from: Loctite Super Glue
Micro-Iontophoresis Unit: Neurophore BH-2 Harvard Apparatus 65-0200 & 65-0203 Available from: Harvard Apparatus
Insulated silver wire AM-Systems 785500 Available from: AM-Systems
Horizontal puller Zeitz DMZ-Universal Puller NA Available from: AutoMate Scientific
Micro-manipulator pieces: electrode holder WPI M3301EH Available from: WPI
Micro-manipulator pieces: linear stage Newport 423 Series 423 Available from: Newport
Micro-manipulator pieces: rotation stage Newport RSP-2 RSP-2 Available from: Newport
Micro-manipulator pieces: z translation Newport 433 Series 433 Available from: Newport
Micro-manipulator pieces: angle bracket 90 ° to assemble z and xy axis Newport 360-90 360-90 Available from: Newport
Micro-manipulator pieces: x translation / linear stage Newport 423 Series 423 Available from: Newport
Micro-manipulator pieces: y translation / linear stage Newport 423 423 Available from: Series Newport
Microscope Leitz Laborlux 11
Microscope: objective Leitz Wetzlar 10x, NA 0.25 519760
Microscope: eypieces Leitz Wetzlar, Periplan 10x/18 519748
Microscope: stage Leitz Wetzlar 513544
Multibarrel capillary N/A 612000 Available from: A-M systems, Inc
Sinlge barrel capillary (GC 150F-10) Harvard Apparatus 30-0057 Available from: Harvard Apparatus
Vertical puller Narishige model PE-2
Custom made elements of the Micro-manipulator (marked light blue in Figure 1)
steel plate
tilting base
attachment for electrode holder

Table 2. Manufacturers and item numbers of all equipment and supplies used in the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Curtis, D. R. A method for assembly of "parallel" micro-pipettes. Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 24, 587-589 (1968).
  2. Carette, B. A new method of manufacturing multi-barrelled micropipettes with projecting recording barrel. Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 44, 248-250 (1978).
  3. Crossman, A. R., Walker, R. J., Woodruff, G. N. Problems associated with iontophoretic studies in the caudate nucleus and substantia nigra. Neuropharmacology. 13, 547-552 (1974).
  4. Havey, D. C., Caspary, D. M. A simple technique for constructing "piggy-back" multibarrel microelectrodes. Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 48, 249-251 (1980).
  5. Verberne, A. J., Owens, N. C., Jackman, G. P. A simple and reliable method for construction of parallel multibarrel microelectrodes. Brain Res. Bull. 36, 107-108 (1995).
  6. Oliver, A. P. Technical contribution. A simple rapid method for preparing parallel micropipette electrodes. Electroencephalogr. Clin. Neurophysiol. 31, 284-286 (1971).
  7. Oswald, J. P., Klug, A., Park, T. J. Interaural intensity difference processing in auditory midbrain neurons: effects of a transient early inhibitory input. J. Neurosci. 19, 1149-1163 (1999).
  8. Park, T. J., Pollak, G. D. GABA shapes a topographic organization of response latency in the mustache bat's inferior colliculus. J. Neurosci. 13, 5172-5187 (1993).
  9. Park, T. J., Pollak, G. D. GABA shapes sensitivity to interaural intensity disparities in the mustache bat's inferior colliculus: implications for encoding sound location. J. Neurosci. 13, 2050-2067 (1993).
  10. Peterson, D. C., Nataraj, K., Wenstrup, J. Glycinergic inhibition creates a form of auditory spectral integration in nuclei of the lateral lemniscus. J. Neurophysiol. 102, 1004-1016 (2009).
  11. Ramsey, L. C. B., Sinha, S. R., Hurley, L. M. 5-HT1A and 5-HT1B receptors differentially modulate rate and timing of auditory responses in the mouse inferior colliculus. Eur. J. Neurosci. 32, 368-379 (2010).
  12. Wenstrup, J. J., Leroy, S. Spectral Integration in the Inferior Colliculus: Role of Glycinergic Inhibition in Response Facilitation. J. Neurosci. 21, RC124 (2001).
  13. Yang, L., Pollak, G. D. Features of ipsilaterally evoked inhibition in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus. Hear. Res. 122, 125-141 (1998).
  14. Yang, L., Pollak, G. D. GABA and glycine have different effects on monaural response properties in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus of the mustache bat. J. Neurophysiol. 71, 2014-2024 (1994).
  15. Yang, L., Pollak, G. D. The roles of GABAergic and glycinergic inhibition on binaural processing in the dorsal nucleus of the lateral lemniscus of the mustache bat. J. Neurophysiol. 71, 1999-2013 (1994).
  16. Yang, L., Pollak, G. D., Resler, C. GABAergic circuits sharpen tuning curves and modify response properties in the mustache bat inferior colliculus. J. Neurophysiol. 68, 1760-1774 (1992).
  17. Faingold, C. L., Gehlbach, G., Caspary, D. M. On the role of GABA as an inhibitory neurotransmitter in inferior colliculus neurons: iontophoretic studies. Brain Res. 500, 302-312 (1989).
  18. Faingold, C. L., Hoffmann, W. E., Caspary, D. M. Effects of excitant amino acids on acoustic responses of inferior colliculus neurons. Hear. Res. 40, 127-136 (1989).
  19. Hurley, L., Pollak, G. D. Serotonin shifts first-spike latencies of inferior colliculus neurons. J. Neurosci. 25, 7876-7886 (2005).
  20. Hurley, L., Pollak, G. D. Serotonin effects on frequency tuning of inferior colliculus neurons. J. Neurophysiol. 85, 828-842 (2001).
  21. Hurley, L. M., Pollak, G. D. Serotonin differentially modulates responses to tones and frequency-modulated sweeps in the inferior colliculus. J. Neurosci. 19, 8071-8082 (1999).
  22. Klug, A., Bauer, E. E., Pollak, G. D. Multiple components of ipsilaterally evoked inhibition in the inferior colliculus. J. Neurophysiol. 82, 593-610 (1999).
  23. Klug, A., Park, T. J., Pollak, G. D. Glycine and GABA influence binaural processing in the inferior colliculus of the mustache bat. J. Neurophysiol. 74, 1701-1713 (1995).
  24. Moore, M. J., Caspary, D. M. Strychnine blocks binaural inhibition in lateral superior olivary neurons. J. Neurosci. 3, 237-242 (1983).
  25. Nataraj, K., Wenstrup, J. J. Roles of inhibition in creating complex auditory responses in the inferior colliculus: facilitated combination-sensitive neurons. J. Neurophysiol. 93, 3294-3312 (2005).
  26. Fukui, I., Burger, R. M., Ohmori, H., Rubel, E. W. GABAergic inhibition sharpens the frequency tuning and enhances phase locking in chicken nucleus magnocellularis neurons. J. Neurosci. 30, 12075-12083 (2010).
  27. Burger, R., Pollak, G. D. Reversible inactivation of the dorsal nucleus of the lateral lemniscus reveals its role in the processing of multiple sound sources in the inferior colliculus of bats. J. Neurosci. 21, 4830-4843 (2001).
  28. Burger, R. M., Pollak, G. D. Analysis of the role of inhibition in shaping responses to sinusoidally amplitude-modulated signals in the inferior colliculus. J. Neurophysiol. 80, 1686-1701 (1998).
  29. Coleman, W. L., Fischl, M. J., Weimann, S. R., Burger, R. M. GABAergic and glycinergic inhibition modulate monaural auditory response properties in the avian superior olivary nucleus. J. Neurophysiol. 105, 2405-2420 (2011).
Produksjon og bruk av Piggy-back Multibarrel Elektroder for<em&gt; In vivo</em&gt; Farmakologiske manipulasjoner av nevrale responser
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dondzillo, A., Thornton, J. L., Tollin, D. J., Klug, A. Manufacturing and Using Piggy-back Multibarrel Electrodes for In vivo Pharmacological Manipulations of Neural Responses. J. Vis. Exp. (71), e4358, doi:10.3791/4358 (2013).More

Dondzillo, A., Thornton, J. L., Tollin, D. J., Klug, A. Manufacturing and Using Piggy-back Multibarrel Electrodes for In vivo Pharmacological Manipulations of Neural Responses. J. Vis. Exp. (71), e4358, doi:10.3791/4358 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter