यहाँ, हम वर्णन कैसे सरल, गैर इनवेसिव संग्रह और योनि धब्बा नमूने की कोशिकाविज्ञान मूल्यांकन murine प्रजनन (proestrus, मद, metestrus, या diestrus) के चरण की पहचान करने के लिए. हम आगे का वर्णन कैसे योनि कोशिका विज्ञान murine प्रजनन चक्र के माध्यम से संक्रमण अंतर्निहित हार्मोनल स्तरों परिसंचारी दर्शाता है.
कृन्तकों में प्रजनन की स्थिति का आकलन करने के तेजी से मतलब प्रजनन में शिथिलता के अध्ययन में न केवल उपयोगी है, बल्कि ऊतक अध: पतन का हार्मोनल विनियमन (या उत्थान) में इस रोग के नए माउस मॉडल और जांच के रोग चुनौती के बाद उत्पादन के लिए आवश्यक है. proestrus, मद, metestrus, और diestrus: murine प्रजनन चक्र (या estrous) 4 चरणों में विभाजित है. डिम्बग्रंथि 17-β estradiol और प्रोजेस्टेरोन स्टेरॉयड के स्तर परिसंचारी में परिभाषित उतार चढ़ाव, luteinizing गोनैडोट्रॉपिंस और उत्तेजक हार्मोन कूप, और luteotropic इन चरणों के माध्यम से प्रजनन हार्मोन प्रोलैक्टिन संकेत संक्रमण. सेल typology में murine योनि नहर के भीतर परिवर्तन इन अंतर्निहित endocrine घटनाओं को दर्शाते हैं. Nucleated उपकला कोशिकाओं, श्रृंगित स्क्वैमस उपकला कोशिकाओं, और योनि स्मीयरों में वर्तमान leukocytes के रिश्तेदार अनुपात का दैनिक आकलन murine estrous पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता हैचरणों. invasiveness की डिग्री है, लेकिन, इन नमूनों को प्रजनन स्थिति को बदलने और एक भड़काऊ प्रतिक्रिया है कि स्मीयरों की कोशिकाविज्ञान आकलन उलझाना कर सकते हैं बटोर कर सकते हैं इकट्ठा करने में कार्यरत है. यहाँ, हम एक सरल, गैर इनवेसिव प्रोटोकॉल है कि उसकी प्रजनन चक्र बदलने के बिना एक महिला माउस के estrous चक्र के मंच का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है का वर्णन करता है. हम कैसे विस्तार और योनि स्मीयरों में प्रमुख सेल typology के संग्रह और विश्लेषण द्वारा estrous चक्र के चार चरण और हम बताते हैं कि कैसे इन परिवर्तनों endocrine स्थिति के लिए सम्मान के साथ व्याख्या की जा सकती है के बीच अंतर.
सेल typology में इन परिवर्तन अंतर्निहित endocrine घटनाओं की ओर संकेत कर रहे हैं. estrous चक्र के proestrus चरण मासिक धर्म चक्र के 5 मानव कूपिक चरण से मेल खाती है और 17 β-estradiol स्तर 6 परिसंचारी में एक पूर्व ovulatory वृद्धि के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 7 प्रोलैक्टिन में एक छोटे से वृद्धि (2 चित्रा द्वारा परिभाषित किया गया है, Proestrus, बाएं पैनल). 17 β-estradiol में वृद्धि परोक्ष रूप से उत्तेजित करता है gonadotropin हार्मोन hypothalamus और पट में न्यूरॉन्स (2 चित्रा कि, बारी में, पूर्वकाल पिट्यूटरी में उत्तरदायी कोशिकाओं को सक्रिय करने के लिए 8,9 संचलन में luteinizing हार्मोन और कूप – उत्तेजक हार्मोन जारी रिहा Proestrus, बाएं पैनल). योनि proestrus में जानवरों से लिया स्मीयरों, कोशिकाओं लगभग विशेष रूप से अंडाकार nucleated उपकला कोशिकाओं (चित्रा 1D, चित्रा 2, Proestrus, सही पैनल) कर रहे हैं. कूप उत्तेजक horm में शिखरएक के स्तर संकेतों और 10,11 कामोंमाद में ovulation प्रविष्टि. प्रेरणा के दौरान, 17 β-estradiol गिरावट और प्रोलैक्टिन स्तर 6,7 शिखर स्तर (2 चित्रा, मद, बाएं पैनल). योनि स्मीयरों अनियमित आकार श्रृंगित clumps में स्क्वैमस उपकला अक्सर कोशिकाओं (चित्रा 1E, चित्रा 2, मद, सही पैनल) के लगभग अनन्य का पता लगाने के द्वारा विशेषता है. में प्रवेश metestrus प्रोजेस्टेरोन हार्मोन 6 के स्तर में निरंतर वृद्धि के साथ मेल खाता है और मानव luteal चरण 12 (2 चित्रा, Metestrus, बाएं पैनल) की शुरुआत करने के लिए मेल खाती है. के रूप में प्रोजेस्टेरोन स्तर में बढ़ोतरी शुरू और कोष luteum 6,13,14 सक्रियण (2 चित्रा, Metestrus, बाएं पैनल) जवाब में 17 β-estradiol के स्तर में वृद्धि है. सेल इस चरण के दौरान योनि स्मीयरों में मौजूद प्रकार खंडित, श्रृंगित उपकला कोशिकाओं और छोटे गहरा दाग leukocytes (Figurई 1F, चित्रा 2, Metestrus, सही पैनल). अंत में, चूहों में diestrus में प्रवेश होता है और प्रोजेस्टेरोन स्तर शिखर 6, मानव देर luteal चरण 12 करने के लिए इसी परिसंचारी. पीत – पिण्ड के प्रतिगमन प्रोजेस्टेरोन 15,16 के स्तर में एक बाद में तेज गिरावट (2 चित्रा, Diestrus, बाएं पैनल) की ओर जाता है. Leukocytes diestrus दौरान स्मीयरों में प्रबल होना. श्रृंगित उपकला कोशिकाओं की आवृत्ति कम है और nucleated उपकला कोशिकाओं को बस से proestrus (चित्रा 1g, चित्रा 2, Diestrus, सही पैनल) संक्रमण के लिए पहले से पता लगाया जा शुरू.
संक्षेप में, यह सरल, सामान्य प्रोटोकॉल करने के लिए दैनिक हार्मोनल उतार चढ़ाव का अनुमान है और प्रजनन स्थिति फेरबदल यदि निम्न सावधानियां बरती हैं बिना प्रयोगात्मक चूहों में estrous मंच स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. नमूना एक बार दैनिक गैर इनवेसिव प्रोटोकॉल desc का उपयोग कर से अधिक नहीं किया जाना चाहिएयहाँ ribed योनि नहर, आकांक्षा, और आंदोलन के बार – बार प्रवेश करने के लिए तुलना में. एक भड़काऊ प्रतिक्रिया leukocytes और अन्य प्रकार की कोशिकाओं में जिसके परिणामस्वरूप 17 स्मीयरों कि कोशिकाविज्ञान मूल्यांकन उलझाना सकता में उपस्थित होने में जिसके परिणामस्वरूप इस योनि जलन पैदा कर सकते हैं. इसके अलावा, कॉलोनी रखे महिलाओं में भी, यह सामान्य है 18 anestrous के अच्छी तरह से शामिल है और इस पहचान प्रजनन, लिंग में हार्मोनल प्रभाव की व्याख्या करने में उपयोगी है, और रोग के अध्ययन के रूप में अलग चूहों में विस्तारित diestrus और कामोंमाद चरणों को देखने के लिए. चक्र लंबाई में परिवर्तनशीलता भी उम्र के साथ और कालोनियों के भीतर आवास 7,19-21 महिलाओं के मतभेद (व्यक्ति या समूह आवास) द्वारा शुरू की है. केवल महिला कालोनियों में रखे महिलाओं साइकिल चालन के संघर्ष और हालांकि साइकिल चालन पुरुष 24,25 साइकिल चालन के प्रकाश में लाना मूत्र साथ pretreated पिंजरों से संपर्क किया जा सकता है द्वारा फिर से instated लंबे समय तक diestrus 18,22,23 के एक राज्य में प्रवेश कर सकते हैं. इस प्रकार, individua स्थापित करने के लिएमैं एक भी माउस के लिए चक्र लंबाई, यह सिफारिश की है कि गैर इनवेसिव आकलन यहाँ वर्णित दैनिक प्रदर्शन किया जा, देखभाल के साथ, जब तक दो पूरा चक्र मनाया जाता है.
The authors have nothing to disclose.
We would like to thank Marc Leonard from Carleton Immersive Media Studio for expert technical assistance in video production and editing and Dr. Martin Bertrand from Carleton Immersive Media Studio / Neural Regeneration Laboratory for visual model assistance. The authors gratefully acknowledge the expert advice of Dr. Marilyn Keaney and all of her dedicated staff at the University of Ottawa Animal Care and Veterinary Services. This work was funded by the Canadian Institute of Health Research (CIHR, MOP 62826) to SALB, the CIHR Institute of Aging and Strategic Training Initiative in Health Research/CIHR Training Program in Neurodegenerative Lipidomics (TGF 96121) to SALB and SF, Canadian Foundation for Innovation to SF, Ontario Innovation Trust to SF, and Autodesk Research to SF. ACM receives a CIHR Banting and Best doctoral award. NV receives a post-professional fellowship from Institute of Aging and CIHR Training Program in Neurodegenerative Lipidomics.
Name | Company | Catalogue # |
Sterile 200 μl pipette tips | Diamed | E340901 |
Latex bulb (1 ml) | Fisher | 03-488-21 |
Glass microscope slides | Fisher | 12-550-15 |
Crystal Violet stain (25 g) | Fisher | C581-25 |
Light-duty Tissue Wipers | VWR | 82003-820 |
Glycerol | Fisher | BP229-1 |
Microscope Cover Glass (22×30) | Fisher | 12-544A |