एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने के लिए एक उपन्यास तकनीक<em> Vivo में</emमाउस में ग्रीवा रीढ़ की हड्डी पंगु बनाना चोट के> मॉडल वर्णित है. इस तकनीक ± 0.01 मिमी की शुद्धता के साथ एक oscillating ब्लेड का उपयोग कर रीढ़ की हड्डी के गर्भाशय ग्रीवा के पहलुओं और पंगु बनाना का निर्धारण द्वारा रीढ़ स्थिरीकरण पर आधारित है.
आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों का इस्तेमाल इस तरह के एक रीढ़ की हड्डी की चोट (एससीआई) के रूप में कई न्यूरोलॉजिकल विकारों अंतर्निहित आणविक तंत्र की हमारी समझ को बढ़ाता है. एससीआई के एक पंगु बनाना मॉडल का उत्पादन किया जाता मुक्तहस्त मैनुअल नियंत्रण अक्सर एक क्रश या नील घटक और, इसलिए, एक उपन्यास तकनीक विकसित किया गया था के साथ जुड़े असंगत चोटों पैदा करता है. ग्रीवा पंगु बनाना एससीआई के हमारे मॉडल) कशेरुकी पहलू निर्धारण, 2 द्वारा) बढ़ाया रीढ़ की हड्डी जोखिम ग्रीवा कशेरुका स्थिरीकरण 1 शामिल द्वारा मुक्तहस्त विधि के साथ निहित समस्याओं का समाधान हो गया है, और 3) रीढ़ की हड्डी की एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पंगु बनाना का निर्माण एक oscillating ब्लेड के साथ प्रयोग जुड़े नील बिना गहराई में ± 0.01 मिमी की शुद्धता. इस तरह के एक स्केलपेल या कैंची का मुक्तहस्त प्रयोग के रूप में एक एससीआई पंगु बनाना बनाने के मानक तरीकों की तुलना में हमारे विधि एक सुसंगत घाव का उत्पादन किया गया. इस विधि corticosp की axonal उत्थान पर अध्ययन के लिए उपयोगी हैinal, rubrospinal, और पृष्ठीय आरोही हिस्से.
आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों की उपलब्धता एससीआई के तंत्र में एक भूमिका निभाते हैं कि विशेष जीन के प्रभाव की पहचान करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. पंगु बनाना एससीआई इस चोट 8 निम्नलिखित प्रभावी उपचार प्रदान कर सकता है कि चिकित्सीय एजेंट या अणुओं की जांच करने के लिए इस्तेमाल एक महत्वपूर्ण मॉडल है. चूहों में पंगु बनाना चोट के निर्माण के दौरान spinous प्रक्रियाओं का निर्धारण होने के कारण रीढ़ की हड्डी निर्धारण 5,11 को बनाए रखने के साथ शामिल पतली और नाजुक spinous प्रक्रियाओं लोभी करने में कठिनाई imprecise है. केवल 0.2 मिमी (माउस रीढ़ की हड्डी के व्यास का 10%) की पंगु बनाना की गहराई में परिवर्तनशीलता डेटा के भ्रामक व्याख्या का कारण बनता है. रीढ़ की हड्डी पंगु बनाना घाव की प्रकृति और सीमा ठीक 10 परिभाषित किया जाना चाहिए. इस चुनौती से निपटने के लिए, हम कशेरुकी स्थिरीकरण से मिलकर एक उपन्यास तकनीक विकसित और Louisville चोट सिस्टम उपकरण से जुड़ी गढ़े ब्लेड का इस्तेमाल किया है (लिसा) एक पंगु बनाना एससीआई 7,14 निर्माण करने के लिए. इस चोट के कारण पंगु बनाना प्रक्रिया के दौरान ऊतक विरूपण बचा है कि एक तेज दोलन ब्लेड का उपयोग करके बनाया गया था. पंगु बनाना की गहराई पंगु बनाना गहराई नियंत्रण जो सूक्ष्म ड्राइवरों का उपयोग करके 0.01 मिमी की एक सटीकता के लिए सटीक था. काटना ब्लेड वांछित पंगु बनाना समोच्च 9 बनाने के लिए विशिष्ट आकार और चौड़ाई के लिए कस्टम बना रहे हैं. हम 1) ग्रीवा रीढ़ प्रदर्शन, 2 की विधि) एक द्विपक्षीय पहलू निर्धारण डिवाइस का उपयोग कशेरुकी स्थिरीकरण की तकनीक, और एक हिल ब्लेड का उपयोग कर एक ग्रीवा पंगु बनाना चोट के 3) सृजन का प्रदर्शन.
रीढ़ की हड्डी को पंगु बनाना चोटों से पहले कशेरुकी स्थिरीकरण spinous प्रक्रियाओं का निर्धारण द्वारा प्राप्त किया गया है. माउस में T1 के माध्यम से सी 3 से नाज़ुक कम ग्रीवा spinous प्रक्रियाओं को clamps के ग्रीवा रीढ़ lordotic वक्र और लगाव दोनों प्रभावी रीढ़ स्थिरीकरण रोका जा सके. इसके अलावा, मैनुअल नियंत्रण घाव 6 की गहराई में परिवर्तनशीलता बनाता है कि महत्वपूर्ण ऊतक विकृति का कारण बनता है के तहत उपयोग एक रेजर ब्लेड या microscissors का उपयोग करें. इस विशेष रास्ते की axonal उत्थान का अध्ययन किया जाता है, विशेष रूप से जब डेटा के अशुद्ध अर्थ हो सकता है. पृष्ठीय corticospinal पथ पूरी तरह से lesioning के समय transected नहीं किया गया था अगर उदाहरण के लिए, बख्शा पृष्ठीय corticospinal एक्सोन पुनर्जीवित एक्सोन के रूप में गलत व्याख्या की जा सकती है. इन चुनौतियों का एक ही स्तर और रीढ़ की हड्डी की सटीक lesioning में पहलुओं के निर्धारण के साथ एक रीढ़ स्थिरीकरण डिवाइस का उपयोग करके दूर किया जा सकता है. इसके अतिरिक्त, आह का उपयोग करigh आवृत्ति दोलन ब्लेड आसन्न रीढ़ की हड्डी कुचल या contusing बिना एक तेज पंगु बनाना पैदा करता है. इस विधि चूहों 6 में वक्ष रीढ़ की हड्डी lacerations का निर्माण करने के बाद संशोधनों के साथ चूहों 9,12,14 में रीढ़ की हड्डी पंगु बनाना चोटों के उत्पादन के लिए इस्तेमाल किया गया है. वर्तमान संचार में, हम माउस में विश्वसनीय ग्रीवा पंगु बनाना घावों बनाने की विधि का वर्णन है.
रीढ़ की हड्डी की अग्रपश्च व्यास माउस में <2 मिमी है insofar के रूप में, पंगु बनाना घाव का सटीक गहराई एक विश्वसनीय प्रयोगात्मक मॉडल बनाने में महत्वपूर्ण हैं. घाव गहराई में कम से कम परिवर्तनशीलता काफी अक्षतंतु उत्थान के साथ ही बड़ा और व्यवहार के अध्ययन का आकलन करने के प्रयोगों के परिणामों को बदल देगा. हम काटने ब्लेड की स्थिति को नियंत्रित करने के लिए उच्च परिशुद्धता माइक्रो चालकों का इस्तेमाल किया है क्योंकि इस पद्धति का उपयोग घाव गहराई की सटीकता ± 0.01 मिमी है. इस विधि में विसंगति कम हो गया हैएक पंगु बनाना एससीआई बनाने के अन्य मॉडलों में Herent. इस विधि ऐसे corticospinal पथ, rubrospinal पथ, और पृष्ठीय आरोही पथ के रूप में रीढ़ की हड्डी के पृष्ठीय छमाही में स्थित लंबे रीढ़ की हड्डी रास्ते की axonal उत्थान के अध्ययन में विशेष रूप से उपयोगी है. इस विधि के साथ, इन फाइबर इलाकों को पूरी तरह से हो सकता है और मज़बूती से transected कर सकते हैं. इस संबंध में, डेटा की व्याख्या की त्रुटियों जिससे एससीआई पर प्रायोगिक अध्ययन की रिपोर्टिंग की विश्वसनीयता में सुधार, कम कर रहे हैं.
संक्षेप में, हम माउस में ग्रीवा रीढ़ की हड्डी पंगु बनाना चोट के vivo मॉडल में एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य बनाने के लिए एक उपन्यास तकनीक का वर्णन किया है. इस तकनीक को एक oscillating ब्लेड का उपयोग कर रीढ़ की हड्डी की ग्रीवा पहलुओं और पंगु बनाना का निर्धारण द्वारा रीढ़ स्थिरीकरण पर आधारित है. चूहों 6 में एक पृष्ठीय वक्ष रीढ़ की हड्डी पंगु बनाना मॉडल में इस पद्धति का उपयोग करके, हम पंगु बनाना गहराई, ऊतक विज्ञान, और के बीच एक तंग सहसंबंध का प्रदर्शनव्यवहार वसूली. इस तरह की तकनीक भी कई अन्य प्रयोगशालाओं 2,12 से विश्वसनीय होना पाया गया है.
The authors have nothing to disclose.
इस उपकरण का विकास लिसा कं, केंटकी द्वारा समर्थित किया गया था. हम भी नॉर्टन हेल्थकेयर, लुइसविल, सीबीएस के लिए केंटकी, और एनआईएच NS050243, NS052290, और Xmx को NS059622 के चल रहे समर्थन को स्वीकार करते हैं.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
Mice vertebral stabilizer | Louisville Impactor System | Stabilize and expose the cervical vertebra | |
LISA vibraknife | Louisville Impactor System | Produce the laceration injury of the cervical spinal cord | |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15013-12 | Skin and trapezius muscle incision |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15023-10 | Separate muscles from the laminae |
Spring Scissors | Fine Science Tools (USA) | 15002-08 | Incision of dura |
Graefe forceps | Fine Science Tools (USA) | 11154-10 | Retract skin |
Dumont #7 forceps | Fine Science Tools (USA) | 11274-20 | Muscle retraction (tip modified)(Fig. A) |
Dumont SS forceps | Fine Science Tools (USA) | 11203-25 | Fixation of vertebra (tip modified )(Fig.B) |
30G needle | Becton Dickenson | 305106 | Create a dural opening |
6-0 suture | Ethicon | 8806H | Close muscle and fascial layers |
wound clip | Fine Science Tools (USA) | 12031-07 | Skin closure |
Tribromoethanol (Avertin) | Sigma-Aldrich | 90710-10G | Anesthetic agent |
Louisville Impactor System, Inc, 210 E. Gray St., Suite 1102, Louisville, KY 40202, (502) 629-5510, E-mail: cbshields1@gmail.com Fine Science Tools (USA), Inc, 373-G Vintage Park Drive, Foster City, CA 94404-1139, (800) 521-2109, E-mail: info@finescience.com Becton Dickenson, 1 Becton Drive, Franklin Lakes, NJ USA 07417, (201) 847-6800 Ethicon, Route 22 West, Somerville, NJ 08876 1-877-ETHICON Sigma-Aldrich Corp. St. Louis, MO, USA, 63178 (314) 771-5765, E-mail: cssorders@sial.com |
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Figure A is the modified Dumont #7 forceps; B is the modified Dumont SS forceps. |