这里描述的甲状腺未分化癌的原位小鼠模型生成。这种技术采用的人甲状腺未分化癌的细胞免疫缺陷小鼠进入甲状腺手术放置,从而创造了更多的临床相关的设置,研究疾病的进展,以及屏幕创新的治疗干预。
已经建立了人甲状腺癌的动物模型中有几种类型的,包括皮下移植和原位移植到免疫缺陷小鼠的癌细胞。皮下移植瘤模型一直宝贵的临床前筛选和评估新的治疗方法。有很多的优点,使用皮下模型; 1)快速,2)重现性好,和3)肿瘤的建立,生长,治疗剂,可通过目测进行监测。然而,大量证据揭示缺憾皮下移植瘤模型1-3。例如,皮下移植瘤模型中证明疗效的药物治疗往往没有显着影响,对人类疾病。微移植或注射xenographic在于该网站在此相异的心脏。
原位移植瘤模型提供了更多的生物学家gically相关的上下文中来研究这种疾病。到他们的的解剖起源相当于内宿主动物植入病变的细胞或组织的优势,包括肿瘤 – 宿主相互作用的一个合适的地点,与疾病相关的转移的发展和能力的考查特定网站的影响力调查治疗的补救措施。因此,原位移植瘤模型怀有更多的临床价值,因为它们密切重现人类疾病。由于这些原因,一些团体已经采取原位甲状腺癌模型的优势,作为一种研究工具4-7。
在这里,我们描述了一种方法,,建立原位模型的研究甲状腺未分化癌(ATC),它具有很强的侵袭,抗拒治疗,几乎是致命的,在所有确诊患者。养空管细胞制备,作为含有基底膜基质的溶液中解离的细胞悬浮液。小体积慢慢注入连结到正确的甲状腺影响。整体外观和健康的小鼠进行监控,以确保最小的手术后并发症,以了解癌症的病理渗透率。在第4周,处死小鼠,收集和组织进行组织学分析。动物可能会在稍后的时间点,研究更先进的病情发展。生产这种原位小鼠模型建立了一个平台,实现两个目标:1)进一步了解的ATC病理,和2)屏幕当前和未来的治疗药物疗效ATC打击。
在我们的模型中,动物表现出甲状腺肿瘤的转移和疾病相关的恶病质和呼吸窘迫,注射后4周。与大多数其他原位模型,利用注射交付的细胞悬浮液,注射到周围组织和后喷射漏超越的目标扩大是可能的。有了这样说,一个辨认潜在的未知此过程中产生的脱靶暴露于非疾病相关的转移或并发症的效果。这是一个普遍关注与大多数xenographic移植,而不管被调查的疾病。然而,无意转移的后果可能会显着地最小化,确保整个斜面针尖已经渗透膜紧贴地覆盖在甲状腺细胞悬浮液慢慢排出。如果观察到泄漏注射过程中或之后,也可以省略这些动物在研究之外。
<p c小姑娘=“jove_content”>,至关重要的是,动物灌注收获甲状腺/气管和其他组织的前。组织形态和完整性有两方面的好处,1)红血细胞被清除,并不会弄乱组织学标本和2)将被保留。此外,切除甲状腺/气管具有一个附加的肿瘤质量或掩埋于解剖标志可以被识别之前,被嵌入的组织学制备的方式应切成。这将极大地减少样品制备时间。在这份报告中,我们描述了当地的晚期甲状腺肿瘤的生长和侵袭后ATC细胞原位注射。 ATC转移可以调查分析其他组织使用标准的组织污渍,如苏木精伊红的组织准备工作,或通过免疫组化利用细胞或病理相关标记。该系统能够进一步发展,由g荧光记者甲状腺癌细胞enetically修改,以便实时成像可被用来监测转移和治疗性治疗的功效。
The authors have nothing to disclose.
笔者想感谢博士。 :李文军和丹尼尔KREISEL的(在圣路易斯华盛顿大学医学院)他们协助手术培训。 RYL由美国国立卫生格兰特R01 DK068057和总统的美国圣路易斯大学研究基金支持。
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
RPMI 1640 cell culture media | Mediatech | 10-041-CV | Media and additives used depend on cell line |
TC10 Automated Cell Counter | Bio-Rad | 145-0001 | |
Matrigel | Becton, Dickinson and Company | 354234 | |
Graefe Forceps, Serrated; Slight Curve, 4″ | Roboz | RS-5135 | |
Disposable scalpel, No. 15 | Feather | 2975#15 | |
Olsen Hegar Needle Holder – 4 ½” delicate serrated | gSource | gS 21.5400 | |
6-0 nylon black monofilament suture | Surgical Specialties Corporation | 1279B | |
Heating Pad, reusable, 8″ x 12″ | |||
Cloth tape, 1″ X 10 yds | Medline | MIINON260101 | For restraining anesthetized mouse |
Peanut Clipper/Trimmer | Wahl | 8655 | For removing hair from surgical site |
ChlorHex-Q SCRUB 2% | Penn Veterinary Supply | VED1222 | |
Betadine | Henry Schein Company | 6906727 | |
Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | 17033-211-38 | |
2 x 2 gauze, 12-ply | Butler Animal Health Supply | 6936 | |
Sterile Field, Barrier, 18″ x 26″ | Busse | 696 | |
Drapes (CSR Wrap) | Cardinal Health | AT 21 412 | |
27G ½” needle | Becton, Dickinson and Company | 309623 | |
31G 5/16″ needle | Becton, Dickinson and Company | 328438 | |
Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) solution | |||
Triple antibiotic ointment |