A-label-free optische biosensor voor de snelle detectie van bacteriën wordt geïntroduceerd. De biosensor is gebaseerd op een nanogestructureerde poreuze Si, die is ontworpen om direct vastleggen van de doelbacteriën cellen op het oppervlak. Wij gebruiken monoklonale antilichamen geïmmobiliseerd op de poreuze transducer als capture probes. Onze studies tonen de toepasselijkheid van deze biosensoren voor de detectie van lage bacteriële concentraties binnen enkele minuten zonder voorafgaande monster verwerking (zoals mobiele lysis).
A-label-free optische biosensor gebaseerd op een nanogestructureerde poreuze Si is ontworpen voor een snelle capture en detectie van Escherichia coli K12 bacteriën, als model micro-organisme. De biosensor gebaseerd op directe binding van de doelbacteriën cellen op het oppervlak, terwijl er geen voorbehandeling (bijvoorbeeld door cellysis) van de onderzochte steekproef is vereist. Een mesoporeuze Si dunne film wordt gebruikt als de optische omzetter onderdeel van de biosensor. Onder wit licht verlichting, de poreuze laag geeft goed opgelost Fabry-Perot franje patronen in de reflectiviteit spectrum. Toepassing van een snelle Fourier transformatie (FFT) om reflectievermogengegevens resulteert in een enkele piek. Veranderingen in de intensiteit van de FFT piek bewaakt. Aldus doelbacteriën vangen op de biosensor oppervlak, door middel van antilichaam-antigen interacties induceert meetbare veranderingen in de intensiteit van de FFT pieken, waardoor een 'real time' observatie bacteriën bevestiging.
nt '> De mesoporeuze Si film, vervaardigd door een elektrochemische anodisatie proces wordt geconjugeerd met monoklonale antilichamen specifiek voor de doelbacteriën. de immobilisatie, immunoactiviteit en specificiteit van de antilichamen worden bevestigd door fluorescentie labeling experimenten. Nadat de biosensor is blootgesteld aan de doelbacteriën, worden de cellen direct gevangen op het antilichaam gemodificeerde poreuze Si oppervlak. Deze specifieke vastleggen van gebeurtenissen resulteren in intensiteit veranderingen in de dunne-film optische interferentie spectrum van de biosensor. We tonen aan dat deze biosensoren relatief lage concentraties kan detecteren bacteriën (detectie maximaal aantal 10 4 cellen / ml) in minder dan een uur.Vroege en nauwkeurige identificatie van pathogene bacteriën is van groot belang voor de veiligheid van voedsel en water, milieu-monitoring, en point-of-care diagnostiek 1. Als traditionele microbiologie technieken zijn tijdrovend, arbeidsintensief, en niet de mogelijkheid om micro-organismen te detecteren in "real-time" of buiten het laboratorium omgeving worden biosensoren evolueren om deze uitdagingen 2-5 te voldoen.
In de afgelopen jaren, poreus Si (PSI) is ontstaan als een veelbelovend platform voor het ontwerpen van sensoren en biosensoren 6-20. De afgelopen tien jaar tal van studies met betrekking tot overheidsinformatie gebaseerde optische sensoren en biosensoren werden gepubliceerd 21,22. De nanogestructureerde pSi laag wordt meestal vervaardigd door elektrochemische anodische ets van een monokristallijn Si wafer. De resulterende PSI nanomaterialen vertonen vele voordelige kenmerken, zoals grote oppervlak en vrij volume, poriegrootten die worden gecontroleerd en afstembare optimaalcal eigenschappen 10,16. De optische eigenschappen van de PSI-laag, zoals fotoluminescentie 8,11 en wit licht-reflectie gebaseerde interferometrie 7,19, worden sterk beïnvloed door omgevingsfactoren. Vangst van gasmoleculen / doelanalyten binnen de poreuze laag resulteert in een verandering van de gemiddelde brekingsindex van de film, waargenomen als een modulatie in het fotoluminescentiespectrum of golflengteverschuiving in de reflectie spectrum 10.
Hoewel de overgrote innovatie in pSi optische biosensor technologie, zijn er slechts enkele meldingen op overheidsinformatie gebaseerde platforms voor bacteriën detectie 6,8,20,23-29. Bovendien zijn de meeste van deze proof-of-concept studies hebben "indirecte" bacteriën die aangetoond. Aldus wordt meestal vooraf lysis van de cellen nodig is om de beoogde eiwit / DNA-fragmenten, kenmerkend voor de bestudeerde bacteriën 29 extraheren. Onze aanpak is om de doelbacteriën direct vast te leggencellen op de PSI-biosensor. Daarom zijn monoklonale antilichamen die specifiek voor bacteriën richten zijn geïmmobiliseerd op het poreuze oppervlak. Binding van bacteriecellen via antilichaam-antigen interacties op het oppervlak van de biosensor veranderingen in de amplitude (intensiteit) van de reflectiviteit spectrum 24-26 induceren.
In dit werk, doen we verslag van de bouw van een optische overheidsinformatie gebaseerde biosensor en demonstreren de toepassing ervan als een label-vrije biosensoren platform voor de detectie van Escherichia coli (E. coli) K12 bacteriën (als model micro-organisme). De bewaakte optisch signaal is het licht dat weerkaatst wordt door de PSI-nanostructuur gevolg van Fabry-Perot dunne film interferentie (Figuur 1A). Veranderingen in het licht amplitude / intensiteit gecorreleerd aan specifieke immobilisatie van het doel bacteriecellen op de biosensor oppervlak, waardoor een snelle detectie en kwantificering van de bacteriën.
Een label-vrije optische immunosensor, gebaseerd op een PSiO 2 nanostructuur (a Fabry-Perot dunne film) wordt vervaardigd, en de mogelijke toepasbaarheid als biosensor bacteriën detectie bevestigd.
Wijzigingen en probleemoplossing
Een van de grootste problemen bij het ontwerpen van een immunosensor is de gevoeligheid van antilichamen tegen ongewenste conformatie veranderingen ondergaan tijdens de depositie en patroonvorming op het vaste substraat, …
The authors have nothing to disclose.
Dit werk werd ondersteund door de Israel Science Foundation (subsidie nr. 1118-1108 en subsidie nr. 1146/12) en de Minna Kroll Fonds Memorial Research. ES zeer erkentelijk voor de financiële steun van de Russell Berrie Nanotechnologie Instituut.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
Si wafer | Siltronix Corp. | Highly-B-doped, p-type, 0.0008 Ω-cm resistivity, <100> oriented | |
Aqueous HF (48%) | Merck | 101513 | |
Ethanol absolute | Merck | 818760 | |
PBS buffer solution (pH 7.4) | prepared by dissolving 50 mM Na2HPO4, 17 mM NaH2PO4, and 68 mM NaCl in Milli-Q water (18.2 MΩ) | ||
Saline 0.85% w/v | prepared by dissolving 0.85 g NaCl in 100 ml Milli-Q water (18.2 MΩ) | ||
95% (3-Mercaptopropyl)trimethoxysilane (MPTS) | Sigma Aldrich Chemicals | 175617 | |
PEO-iodoacetyl biotin | Sigma Aldrich Chemicals | B2059 | |
Streptavidin (SA) | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 016-000-114 | |
Fluorescein (DTAF)-streptavidin | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 016-010-084 | |
Biotinylated-rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 011-060-003 | |
Fluorescently tagged anti-rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 111-095-003 | |
Fluorescently tagged anti-mouse IgG | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 115-095-003 | |
Biotinylated E. coli antibody | Jackson ImmunoResearch Labs Inc. | 1007 | |
E. coli (K-12) | was generously supplied by Prof. Sima Yaron, Technion |