가정 케이지 환경에서 마우스의 장기간 포괄적 인 모니터링은 뇌 질환의 쥐 모델에서 벗어난 행동의 깊은 이해를 제공한다. 이 논문은 현대 행동 분석의 핵심 구성 요소로 통합 행동 역 (INBEST)에 대해 설명합니다.
때문에 유전 공학의 급속한 발전으로, 작은 설치류는 생물 의학 연구의 다양한 분야에서 선호하는 대상이되었다. 만성 CNS 장애의 연구에서, 높은 수준의 행동과 유효 뮤린 모델에 대한 요구가 증가하고있다. 그러나, 여러 병원성 메커니즘과 복잡한 기능 적자는 종종 안정적으로 측정하고 만성적으로 아픈 쥐의 행동을 해석하는 과제를 부과. 따라서, 시험 전지를 사용하여 여러 시점에서 주변 병리학과 행동 프로파일의 평가가 요구된다. 비디오 추적, 행동 분광법, 생리 학적 측정의 원격 인수는 홈베이스 같은 설정에서 종합적이고 정확하며 공정한 행동 분석을 허용 기술이 대두되고 있습니다. 이 보고서는 바의 장기 측정에 초점을 맞춘 맞춤형 모니터링 장치 (통합 행동 역, INBEST)를 포함하는 정제 된 표현형 프로토콜을 설명합니다이러한 상대적으로 스트레스없는 환경에서 자발적인 활동, 식품 / 물 섭취와 동기를 행동으로 원문 기능 출력. INBEST 설계 기술과 개념적인 개선은 더욱 행동 연구의 재현성 및 표준화를 촉진 할 수있다.
지난 몇 년 동안 유전 공학의 급속한 발전은 인간 질병의 동물 모델의 전례없는 확산으로 이어졌다. 마우스는 여러 가지 이유로 생명 과학 분야의 주요 실험 대상자의 상태를 얻고있다. 실용적인 관점에서, 그들은 높은 재생 속도가 상대적으로 저렴하고, 집 쉽다. 보기의 개념 시점에서, 그들은 인간 유 전적으로 가까운 유전자 상대적으로 쉽게 수정 될 수 있으며, 내분비, 면역, 신경계를 고도로 개발했다. 유전 및 세포 수준에서의 병변뿐만 아니라, 뇌 질환의 현대 연구는 하이라이트 얼굴, 구성 복제 기능 적자, 또는 새로운 마우스 모델 1의 예측 타당성의 데모가 필요합니다.
homoeothermic 포유 동물에서 급성 감염은 종종 함께 질병 행동, 중 하나를 구성하는 발열 반응, 결과주요 생존 메커니즘 2. 심하게 아픈 동물 식품 / 물 섭취와 정서적 반응성, 탐색 행동, 학습 / 메모리 용량의 반사 작업 성능에 상당한 변화를 표시합니다. 이러한 변화는 크게 손상 사회 / 성적 활동과 방어 면역 반응에 대한 에너지의 보존을 차지한다. 급성 조건 (많은 면역, 내분비 및 신경 질환에서와 같이) 만성 전원을 켤 때 그러나, 행동 성능은 더욱 인해 뇌 (3) 등 다양한 기관의 구조적 손상을 악화 할 수 있습니다.
인간과 동물의 퇴행성 신경 질환은 종종 신경 및 행동 적자의 별자리와 함께 제공됩니다. 따라서 만성적으로 아픈 동물의 행동 연구의 주요 목적은 주변 징후에 의해 유도 된 적자에서 중앙 효과를 구별하는 것입니다. 그러나, 표준 행동 작업 비교적 짧은 지속 기간을 제한 콜렉트이러한 후각, 휴식, 수면, 음식 / 물 섭취, 또는 간질 에피소드와 같은 기본 기능 조치를에 관한 정보의 이온. 이러한 조치의 포함은 행동 프로파일을 향상시키고 활동 까다로운 작업 성능의 더 나은 해석을 허용합니다.
병에 걸린 쥐의 행동 표현형에서 상세 검색
아픈 쥐의 행동 프로파일을 평가하는데 부적절는 빠른 처리의 PC에 의해 단독으로-보관 마우스의 지속적인 모니터링을 필요로했다. 다양한 행동 배터리 아래, 4, 5를 설계 할 수 있지만 성공적 신경 정신 루푸스 (6)의 동물 모델을 확립하는데 사용 된 절차이다. 이 전지는 반복적 예컨대 경도인지 장애 및 알츠하이머 병 (7) (도 1)의 양측 부 만성 및 만성 모델에 적용된다. 신경 학적 시험 8-10의 AC 시리즈 이어농축 홈 케이지 같은 환경에서 여러 행동 출력 지속적인 모니터링을 이용함으로써 상기 요구를 충족하도록 설계 ustom 제작 장치는, 사용될 수있다. 자연 탐구 활동과 동기 행동의 평가에 이러한 ethologically 기반의 접근 방식은 학습과 기억의 반사 것과 다른 패러다임, 성능 적자의보다 포괄적 인 이해를 제공한다.
우리의 실험실에서 종 행동 표현형의 그림 1. 도식 표현. 행동 배터리가 이러한 질병의 진행으로지지 요인의 영향을 평가하기 위해 서로 다른 시점에서 반복 자세히 – 스트레스 작업으로 성이 떨어지는에서 진화하도록 설계되어, 약물 치료 또는 면역 학적 반응. INBEST 및 개별 테스트는 어두운 P 동안 수행하세, 종종 이상 (10)와 2 시간, 각각 요약 :. R – 반사; BW – 테스트 워킹 빔; RR – 로타로드 (rotarod); OT – 후각 테스트; SP – 자당 기본 설정 테스트; SD – 테스트 스텝 다운; NO – 소설 개체 테스트; 의 – 오픈 필드 테스트; SAB – 자발적 교대 행동; FS – 강제 수영 테스트; MWM – 모리스 물 미로. * – 테스트의 측면 (예를 들어, 위치, 상황, 색상, 모양)가 필요합니다 실험의 과정을 통해 이후의 시험에서 변경 될 수 있습니다.
홈 케이지 같은 환경에서 지속적인 비디오 녹화 및 동작의 분석은 처음 2007 11에보고되었다.자가 면역 마우스와 연구에 사용 행동 검사를 통합하여 더 복잡한 자동화 장치는 일년 후에 모임 '측정 행동'에서 발표 (12). 행동 통합 역 (INBEST,도 2a) 모듈러 시스템, C 인쉼터, 컴퓨터 제어 빛 자극의 omprises, 두 개의 광전지 제어 lickometers (물 한 관심의 솔루션에 대한 하나), 자동화 된 식품 디스펜서, 컴퓨터 실행 휠, 그리고 디지털화 된 등반 메쉬. 대기 시간, 주파수, 구체적인 행동의 지속 시간은 사용자 정의 소프트웨어를 사용하여 검사합니다. 운동력과 탐구 활동 (예를 들어, 새로운 객체 나 익숙하지 않은 conspecific의) 자 및 자해 행동과 발작으로 덜 자주 행동 패턴, 동안, 비디오 추적 소프트웨어 (재료 / 장비 목록)로 할 수 있습니다 평가 될 수있다 비디오 추적 소프트웨어 또는 전용 이벤트 기록 패키지를 수동으로 채점. 여덟 완료 INBEST / 비디오 설정 따라서 4 실험 및 4 대조군 (그림 2B)의 동시 모니터링을 가능하게 사용된다.
<img alt="그림 2" src="/files/ftp_upload/51524/51524fig2.jpg" />
그림 2. 통합 된 행동 역. (A) INBEST 상자 (= 39 X W = 53 x 높이 = 50cm L)를 설계에 사용되는 도식 하드웨어의 표현 및 소프트웨어. (B) 여덟 완전한 INBEST 상자 네 개의 실험과 4 개의 제어 마우스의 동시 홈 케이지 모니터링을위한 기회를 제공합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
종속 변수는 입맛 자극, 자연 외래 활동, 등산, 자발적 실행에 음식 / 물 섭취, 응답의 측정, 불안 관련 행동 (예를 들어, 새로운 객체의 탐사), 정리, 압류 및 수면을 포함한다. 또한, 시각적 자극은 에어컨 및 학습 패러다임을 제시 할 수있다. 표준 행동 테스트를 통해 INBEST의 장점은 교란 효과 induc의 제거를 포함교통 스트레스뿐만 아니라 야간 활동, 탐사, 불안 관련 및 우울증 같은 행동의 반사 조치를 지속적으로 자동화 된 수집에 의해 에드. 비디오 추적 패키지 민감한 하드웨어 구성 요소의 통합은 다양한 동물 모델에서 만성 질환의 진행과 관련하여 행동의 개선 된 평가를 허용하는 내용의 재산을 산출한다. INBEST 다른 만성 CNS 장애 (예를 들어, 자폐증, 우울증, 정신 분열증)뿐만 아니라 종의 연구에서 신경 발달에 초점을 맞추고, 종양 / 전신 질환의 행동 효과, 장기간의 약물을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.
동물에서의 작용 효과의 검출은 대체로 행동 연구에 고유 변동을 제한하는 연구자의 능력에 달려있다. 따라서, 제어를 치밀하고 행동 데이터의 신뢰성 및 재현성을 감소시킬 수있는 잠재적 혼동을 최소화하는 것이 중요하다. 동시에, 더 테스트가 행동의 단일 도메인을 반영 없다는 것을 인식하는 것이 중요하다, 신경 기능의 지식은 필수이며, 그 동작은 외부 스트레스에 매우 민감하다. 상술 여긴다는 이해할 경우, 하나는 광범위한 동작 분석 측정 응답의 시간 경과를 포함해야 결론뿐만 아니라, 기본적인 기능 특성과 특정 행동 양태 꼭지 패러다임을 포함 할 수있다. 이러한 기준의 대부분은 풍부한 가정 케이지 환경에서의 움직임과 행동 행위의 컴퓨터 평가를 사용하여 성취 할 수있다.
지금까지, 그것은 emphasi있다인간의 질병을 보증 추가 고려 사항의 쥐 모델의 행동 표현형 데이빗. 이 개념은 항상성 작용 성 질환이 발병하는 동안 내부 및 외부 스트레스에 의해 도전되는 것을 전제로한다. 모든 잠재적 인 혼동이 자동화, 홈 케이지 표현형의 도입에 의해 제거되지 않을 수 있지만, 일치하지 않는 환경 설정, 교통 스트레스, 반복 처리에 관한 문제는 최소화된다. 이로 인해 연구에서 일관성과 정확성을 향상; 변동성의 아주 작은 감소는 초기 질병에 의해 유발 효과의 검출을 향상시킬 수 있습니다. 실제로, INBEST이 발병, 역학 및 행동 변화의 심각성을보다 정확하게 평가뿐만 아니라 다양한 질병을 유발 행동 적자 중 중요한 관계를 허용 풍부한 정보를 제공한다. 신뢰할 수있는 비디오 추적은 두 개의 조명 조건에 따라 달라집니다. 첫째, 확산 광을 방지하기 위해 시험장에 필요근처에 반영 객체 유물. 둘째, 높은 색 대비 최대한 피사체 색상과 다르게 적절한 바닥 색깔을 선택함으로써 달성 될 수있다. 우리가 실험실에서,이 흰둥이 쥐를 모니터링 할 때 INBEST 상자와 검은 바닥 트레이 아래에 위치 홍수 조명을 사용하여 달성된다 (착색 된 균주를 테스트 흰색 또는 회색 배경은 적절한 것입니다). INBEST 이벤트의 기록 형태에 대하여, 현재의 하드웨어를 설정 (4 입력 1 피콜로 비디오 카드)가 동시에 PC 당 사용되는 4 박스를 제한한다. 보다 적절한 셋업이 각각 2 또는 4, 따라서 PC를 8 또는 16 케이지를 필요로하며, 이는 동시에 것, 상자 오히려 작은 수이다. 바람직하게는, INBEST 홈 케이지로 24 시간 동안 지속적으로 사용할 수 있습니다. 이 동물은 환경에 완전히 길들과 편견 방식으로 분석 할 수 있습니다 안정, 주기성 행동 패턴을 확립 할 수있다. 정전 연속 전력 SU 컴퓨터에 의한 데이터 손실을 방지하려면pply (또는 적어도 무정전 전원 공급 장치)를 확보해야합니다. 마지막으로, 일일 음식물 섭취량의 적절한 평가를 보장하기 위해서는, 음식 펠릿의 크기가 음식 디스펜서 (단일 음식 펠렛의 권장 크기가 20 mg이었다)의 구멍의 크기를 초과하지 않도록주의해야한다.
이 분석은 또한 다양한 INBEST 조치가 서로 상호 작용하는 방법을 포함한다, 그러나, 간과해서는 아니된다. 예를 들어, 주행 차륜에 더 많은 시간을 생쥐는 열량이 증가 요구에 부응하기 위해 음식과 물을 섭취 수량을 높게 할 가능성이있다. 이와 유사하게, 더 크로스 솔루션을 섭취 한 쥐의 음식 섭취를 감소시킬 수있다. 이러한 결과의 해석은 더 특히 행동과 실행 휠 활동을 ingestive에 관해서, 시간이 지남에 따라 성능의 일반적인 개선에 의해 복잡하게 할 수있다. 자신의 인센티브 특성을 감안할 때, 실험자는 또한 자당 용액 t에 대한 액세스를 제한 고려할 수있다그 각각 포스트 ingestive 효과와 과도한 체중 감소의 가능성을 상쇄하도록 휠을 실행. 쥐의 다른 변종이 서로 다른 행동 프로파일을 가지고 있기 때문에, 이러한 문제는 다른 사람보다 몇 가지 균주에 더 관련이있을 수 있습니다. 상술 한 여러 문제에 대한 기준 및 실험 평가 모두 제어를 수행하지만, 실험자는 이러한 변수 INBEST 데이터를 해석 할 때 고려 될 필요가 있다는 것을 인식해야한다. 동시에, 동작의 일부 측면 따라서 주체의 행동 프로필을 작성하는 표준 테스트와의 조합을 필요 홈 케이지 환경에서 연구 될 수 없다.
표준화 된 내 전산 모니터링,하지만 유연한 환경은 현대 행동 분석의 논리적 인 다음 단계가 될 것으로 보인다. 이러한 비 침습적, ethologically 기반 접근법 연구자들은 장기간에 걸쳐 행동 반응의 전체 레퍼토리를 관찰 할 수 있도록한다.oretically이 밀접하게 자연 서식지와 유사한 "가상", 풍부한 환경에서 동작을 연구함으로써 달성 될 수있다. 여러 연구 그룹은 댓구 26, 27, 자신의 홈 케이지 22 ~ 25 생쥐의 행동 표현형을 지원 비전 기반 추적 도구를 설명, 또는 큰 사회 집단 (28)의 맥락에있다. 높은 정밀도와 공간 해상도는 마우스 (28)의 그룹에서 행동 데이터의 동시 수집을 위해 동기화 및 마이크로 칩 기술을 비디오 추적을 통합함으로써 달성 될 수있다. 서명 할 수있는 열을 검출 체열 카메라는 각 마우스 (예를 들면, 체온, 심장 / 호흡률)의 상대적인 위치 및 기본적인 생리 학적 기능을 제공하는 이식 가능한 마이크로 칩 또는 트랜스 폰더와 결합 될 수있다. 또한, 고급 3D 추적 시스템은 행동 작용을보다 정확하게 인식 및 정량을 생성한다. 위해 반복적으로 버지니아를 실행합니다테스트 ETY는, 이러한 시스템은 원격으로 제어하고, 모듈화, 자동화되어야한다. 예를 들어, 공간 기억은 LCD 벽에 말초 단서의 모양을, 프로그래밍 또는 / 제시 이동 층의 입에 음식을 디스펜서를 숨김으로써 더 큰 환경에서 공부하실 수 있습니다. 유사한 방식으로, 신규 한 오브젝트는 연구 전반에 걸쳐 특정 시간에 숨겨져 / 표시 될 수있다. 이러한 컴퓨터 표현형 행동, 병원성 기전 질병 모델 및 새로운 치료 전략의 개발의 유전 적 결정 요인을 밝히는데 도움이 될 수 있습니다. 합의가 시험 조건, 시험의 순서에 대하여뿐만 아니라 사용되는 하드웨어와 소프트웨어에 도달하면, 하나는 그 대망의 표준화 행동 연구의 재현성을 개선하고 새로운 수준의 실험 심리 측정 상승 할 것으로 예상 할 수있다.
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by an Ontario Mental Health Foundation grant to B.S, and an Ontario Graduate Scholarship to M.K.
Power control interface operating package | Med Associates Inc. | MED-SYST-8 | Interface box and PCI card that manage all A/D data inputs and outputs |
Stimulus light | Med Associates Inc. | ENV-221M | 28 V DC, 100 mA, 2.5 cm diameter light (for presentation of a conditioned stimulus) |
Head entry detector | Med Associates Inc. | ENV-254-CB | Permits head entry detection into the pellet receptacle |
Photobeam lickometer | Med Associates Inc. | ENV-351W | Infrared sensor system for detecting beam interception by snout |
Food pellets | Bio-Serv | F0163 | Dustless precisions food pellets (20 mg rodent grain-based diet) |
Food dispenser | Med Associates Inc. | ENV-203-20 | Automated food dispensing system consisting of elevated plastic container and dispensing tube |
Food receptacle | Med Associates Inc. | ENV-303R2W | Infrared sensitive base to signal when food pellet is dispensed or collected |
Climbing mesh | Med Associates Inc. | CT-Climbing mesh | Durable metal rungs, dimensions |
Med PC IV software | Med Associates Inc. | SOF-735 | Integrates data acquisition from all electronic devices |
MPC2XL v1.4 | Med Associates Inc. | SOF-731 | Raw data transfer utility |
Soft CR Pro v1.05 | Med Associates Inc. | SOF-722 | Remote online monitoring software |
Running wheel | Med Associates Inc. | CT-MSUB-ENV-3042-X1 | Activity wheel for mice |
Digital counter | Med Associates Inc. | ESUB-ENV-3000 | LCD counter (4 counts = 1 revolution = 54.6 cm length) |
Picolo Diligent frame grabber | Euresys | High-resolution PCI video capture card | |
Ethovision XT 8.5 | Noldus Information Technology | Video-tracking software | |
Camera | Panasonic | WV-BP334 | Digital, low-lux video camera suspended from a custom-made metal stand |
Video Splitter | American Dynamics | ADQUAD87 | Integrates and digitizes inputs from 4 video cameras |