This method outlines the use of Quantum Micro-Computed Tomography (MicroCT) to assess cardiac morphology, function, perfusion, metabolism and viability with iodinated contrast agent in mice with experimentally-induced myocardial ischemia. The technique can be applied for non-destructive high-throughput longitudinal in vivo imaging of various animal models of human heart disease.
The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that MicroCT provides quantitative high-resolution three-dimensional (3D) anatomical data non-destructively and longitudinally. Most importantly, with the development of a novel preclinical iodinated contrast agent called eXIA160, functional and metabolic assessment of the heart became possible. However, prior to the advent of commercial MicroCT scanners equipped with X-ray flat-panel detector technology and easy-to-use cardio-respiratory gating, preclinical studies of cardiovascular disease (CVD) in small animals required a MicroCT technologist with advanced skills, and thus were impractical for widespread implementation. The goal of this work is to provide a practical guide to the use of the high-speed Quantum FX MicroCT system for comprehensive determination of myocardial global and regional function along with assessment of myocardial perfusion, metabolism and viability in healthy mice and in a cardiac ischemia mouse model induced by permanent occlusion of the left anterior descending coronary artery (LAD).
Iskæmisk hjertesygdom (IHD) er fortsat den største enkeltårsag årsag til sygelighed og dødelighed for mænd og kvinder over hele verden 1. På grund af kompleksiteten og indbyrdes, der eksisterer mellem de organer og systemer på organismal niveau, brug af hele dyret som en model for IHS fortsat er relevant ikke kun for vores bedre forståelse af sygdommens patofysiologi, men også tillader evaluering af nye forebyggende og terapeutiske strategier . Musemodeller, især har bidraget til vores viden om hjerte-udvikling, patogenesen af myokardieinfarkt, myokardie hypertrofi, myocarditis, og aneurismale læsioner 2-7. De parametre, der bestemmer hjertets funktion og er nyttige med hensyn til prognose og valg af terapeutisk indgriben er hjertemasse og geometri, global og regional funktion, rumlige fordeling af myocardial blodgennemstrømning og myokardie levedygtighed.
Men de fleste af traditional testpræparater, der anvendes i musemodeller for hjertesygdomme involverer invasive målinger, der kræver timer for færdiggørelse, således at dyret ikke kan anvendes til gentagne målinger, eller fremgangsmåden vil kræve dyr ofre 8-12. For eksempel for at måle regional myocardial perfusion, radioaktivt eller fluorescens-mærkede mikrosfærer anvendes, hvor radioaktive tælling eller fluorescerende signaler detekteres på en fysisk dissekeret hjerte eller in situ 13,14.
Tilsvarende er evaluering af infarktstørrelse i dyremodeller af myokardieinfarkt mest almindeligt udførte af triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) -farvning, og for at bestemme tidsforløbet af infarkt evolution og effekten af terapeutiske interventioner, denne teknik kræver, at dyr skal ofres for hjerte histopatologisk undersøgelse på forskellige tidspunkter 15. Som sådan, ikke-destruktive og humane teknikker, der ville tillade quantitative og langsgående analyse af hjertefunktion morfologi, funktion, stofskifte og levedygtighed er af afgørende betydning. I denne sammenhæng præklinisk billeddannelse er af stor betydning. Blandt de for tiden tilgængelige billeddannende modaliteter magnetisk resonans (MRI) og ekkokardiografi er den mest almindeligt anvendte 16,17,18.
Men, og trods det faktum, at MRI betragtes som modalitet af henvisningen i både klinisk og præklinisk arbejde, de høje omkostninger til at erhverve og vedligeholde dedikerede små dyr MRI-systemer, samt kompleksiteten af denne teknologi til ikke-avancerede brugere at betjene , gør MR uoverkommeligt dyre til rutinemæssig brug. Med hensyn til ekkokardiografi, der findes betydelige ulemper for den måde hjertefunktionen måles. De data, der produceres af de fleste ekkokardiografiske undersøgelser er to-dimensionelle, og for at udlede mængder, der skal foretages 19 geometriske antagelser. Hertil kommer, dårlig intra- og inter-observatør Reproducibility er en anden væsentlig begrænsning ved denne teknik. Radioisotop billeddannelse med enkelt foton emissions computeriseret tomografi (SPECT) og positronemissionstomografi (PET) overvejende anvendes til vurdering af myokardie perfusion og metabolisme 17,20,21. Men begrænset rumlig opløsning af disse billeddiagnostiske metoder gør cardiac imaging i mus udfordrende.
På den anden side, med fremkomsten af fladskærm detektor teknologi, der tillader bedre røntgenbillede følsomhed og hurtigere udlæsning gange, nuværende stade MicroCT systemer kan nu give cardiorespiratorisk gated tredimensionale (3D) og fire-dimensional ( 4D) billeder af MRI-grade kvalitet. De er stort set vedligeholdelsesomkostninger gratis og nem at betjene fra ikke-avancerede brugere. Således kan sådanne MicroCT instrumenter være velegnet til rutinemæssig undersøgelse af små dyr som modeller for sygdom hos mennesker. Vigtigst, med udviklingen af en ny præklinisk ioderet kontrastmiddel, sblev imultaneous funktionelle og metaboliske vurdering af hjertet muligt 22-24.
Denne kontrastmiddel indeholder en høj koncentration af iod (160 mg / ml), der producerer stærke blod-pool kontrast efter dets intravenøs administration muliggør in vivo-billeddannelse af vaskulaturen og hjertekamrene. Inden for en time efter administration, kan der observeres en fortsat stigning i myocardiær kontrast forbundet med dets metaboliske optagelse, således den samme kontrastmiddel kan anvendes til evaluering af myokardielammelse og levedygtighed.
Målet med den teknik, der er skitseret i dette manuskript er at gøre det muligt for forskerne at bruge high-speed MicroCT-system med indbygget cardio-respiratorisk gating, sammenholdt med blod-pool ioderet kontrastmiddel, til bestemmelse af myokardie globale og regionale funktion sammen med myokardie perfusion og levedygtighed hos raske mus og i en hjerteiskæmi musemodel induceret af permanent okklusionaf den venstre forreste nedadgående koronararterie (LAD). Ved at bruge denne dyremodel og billeddannelse teknik, kan udføres hurtig evaluering af de vigtigste hjerteparametre repetitivt med en enkelt afbildningsmodalitet og uden behov for invasive procedurer eller behovet for at ofre dyrene. Teknikken kan udføres for at vurdere nye forebyggende og terapeutiske strategier.
I løbet af de sidste mange år MicroCT er blevet den modalitet mange undersøgelser der anses for karakterisering af hjertefunktion struktur og funktion i små dyr 26-29,30. Men den instrumentering, der anvendes i den kendte arbejde blev enten specialbygget eller ikke længere er kommercielt tilgængelig. Som sådan blev denne undersøgelse til formål at give en enkel og omfattende protokol for brug af high-speed MicroCT-system med indbygget cardio-respiratorisk gating at bestemme cardiac global og regional funktion sammen med myokardie perfusion og levedygtighed i små dyr som modeller for menneskelige hjerte sygdom.
Et af de vigtigste krav til at studere hjerte struktur og funktion er scannerens evne til at redegøre for fysiologiske hjerte bevægelser. Til dette formål ECG-baserede prospektive og retrospektive gating teknikker kan anvendes. Men potentielle (trin og skyde) gating er afhængig af en på forhånd fastsat interval på hjertets cyklus, for eksamenple under diastole, når hjertet bevægelse er mindst. Med denne fremgangsmåde opnås kun ét billede pr hjertecyklus og kun én fase i hjertecyklussen kan rekonstrueres. Som sådan ud over at være tidskrævende at generere, prospektivt gated rekonstruktioner producerer kun et datasæt, som er berøvet funktionel information. Retrospektiv gating, på den anden side, giver mulighed for rekonstruktion af flere datasæt på hver del af hjertecyklussen, således tillader global og regional venstre ventrikel funktionel analyse.
Den nuværende arbejde ansat kardiorespiratoriske rekonstruktioner med iboende retrospektiv gating. Intrinsic retrospektiv gating benytter proprietære billede-baseret software til at rekonstruere ultimo diastoliske og slut-systolisk hjerte-faser uden behov for dedikeret respiratoriske og hjerte-overvågningsudstyr 29,31,32. En fremragende aftale af iboende retrospektiv og ydre EKG-afhængige retrospektiv gating for studying hjertefunktion hos mus og rotter blev påvist ved Dinkel et al. 29. I løbet af denne nuværende arbejde, iboende retrospektiv gating ikke kun væsentligt minimeret den tid det tager at etablere scanningen, men også elimineret afhængighed af overvågning hardware, såsom EKG kundeemner og respiratorisk pneumatisk sensor, samt yderligere operatør færdigheder til korrekt sat den op.
Efter genopbygningen blev billedkvaliteten af både ultimo diastoliske og end-systoliske datasæt fundet tilfredsstillende for hjerte-analyse. Under gennemgangen af billederne, blev der lagt særlig vægt på bevægelse artefakter, der kan opstå under et utilstrækkeligt anæstesi, striber artefakter, der kan ske som følge af manglende fremskrivninger i dyr med høj respirationsfrekvens, lav dæmpning artefakter, der er almindeligt forårsaget af knoklede strukturer og kan efterligne perfusionsdefekter, og ring artefakter, der kan opstå fra mis-kalibrering eller svigt i en eller flere detektor elementer.
Evne MicroCT at producere hjerte- strukturel og funktionel information er også afhængig af tilgængeligheden af egnede intravaskulær kontrastmiddel. De fleste i øjeblikket kommercielt tilgængelige MicroCT kontraster kan generelt opdeles i partikler ikke-metaboliserbare makrofag specifikke og polydisperse metaboliserbare jod-baserede kontraster 23,33-36. Selvom partikelformige midler giver større røntgen opacifikation grund af deres højere atomnummer (barium, Z = 56, og guld, Z = 79), kan de ikke anvendes til metabolisk vurdering. Desuden er disse midler betragtes som skadelige for organismen og fjernet af leveren makrofager (Kupffer celler), den oxygenbindende celler i det retikuloendoteliale system (RES). På grund af deres ikke-metaboliserbar natur, disse midler inducerer ændringer i leveren mikrocirkulationen samtidig med leverskader 37.
Metaboliserbare jodbaserede kontraster, på den anden side, kan ikke udsigt til rentenedsættelserted for RES-specifikke fjernelse, derfor bør tilbyde bedre sikkerhedsprofil og undgå levertoksicitet. Ud over deres bedre sikkerhedsprofil, er disse kontraster optages af metabolisk aktive væv, kan således anvendes til vurdering levedygtighed 22,23. Til dette formål blev ioderet kontrastmiddel udvalgt til denne undersøgelse. Kontrasten blev indgivet i en dosis på 5 eller 10 pi per gram legemsvægt af dyret som en enkelt intravenøs bolusinjektion. Selv om begge doser givet tilfredsstillende enhancement resultater blev en dosisafhængig stigning i venstre ventrikel og myocardiale niveauer af kontrast observeret, når 10 pl / g kontrasten blev injiceret. Af interesse, med den større dosis, varigheden af blod puljen var langvarig og toppen af myocardial kontrast optagelse blev forsinket. Et dyr (mus 1) blev fulgt op i 10 uger efter operationen, og i denne periode blev afbildet hver anden uge. Af erfaring, ingen bivirkninger forbundet med kontrast (i alt 5 ifremskrivninger) eller relateret til X-ray eksponering (i alt 10 MicroCT scanninger) blev observeret i denne mus i løbet af overvågning. En af de mest almindeligt rapporterede bivirkninger af langvarig jod eksponering er skjoldbruskkirtlen forstyrrelse, som ikke blev observeret makroskopisk på obduktioner. Mannheim et al. Studeret thyroxin niveauer efter 3 på hinanden følgende kontrast forvaltninger og fandt ingen forskel, når niveauerne blev sammenlignet med kontrollerne 37. Med brugen af de samme MicroCT datasæt, påvistes ingen tegn på strålingsinduceret lungefibrose i dette dyr (data ikke vist), som er i overensstemmelse sikkerheden af proceduren.
Vurdering af global og regional ventrikulær hjerte funktion betragtes som den stærkeste faktor for hjertefunktionen og betydning for prognosen og valg af terapeutisk intervention 38,39. De globale venstre ventrikulære funktionelle indeks omfatter venstre ventrikel ende-diastolisk volumen (LVEDV), venstre ventrikel ende-systolisk volumen (LVESV), venstre ventrikel slagvolumen (LVSV), venstre ventrikels uddrivningsfraktion (LVEF), og minutvolumen (CO). Tidligere MicroCT undersøgelser bekræftede, at kvantitativ evaluering af den globale hjertefunktion er muligt i murine kardiovaskulære sygdomsmodeller og at udtalt fald i den globale hjertefunktion sker kort efter LAD arterie okklusion. Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere rapporter i den markant reduktion i LVSV, LVEF, og CO forekom allerede på dag 1 efter okklusion 29,40-43. Det er bemærkelsesværdigt at nævne, at hjerte- funktionel ydelse afhænger af typen og graden af anæstesi, således for nøjagtige målinger af hjertefrekvens under billedoptagelsen bør holdes så fysiologisk som muligt 44.
Kvantitativ vurdering af venstre ventrikels myokardiemasse (LVMM) er vigtigt for evaluering af hypertrofi i venstre ventrikel og er primært udført under anvendelse MRI 11,43,45,46. LVMM er ofte korrigeret for kropsvægt og præsenteres som venstre ventrikel myokardie mass index (LVMMI) at give mulighed for en normalisering af hjerte-vægt blandt mus af forskellig alder og habitus. Præcis estimering af disse parametre er vigtig, da mus med myokardieinfarkt udvikle betydelig LV hypertrofi 47. Vurdering af LVMM, LVMMI, og LV geometri er også vigtigt for diagnostik af hjertehypertrofi og dysplasi 11. Som sådan vil bestemmelsen af disse parametre være yderligere fordelagtigt at differentiere tilstande såsom koncentrisk hypertrofi, excentrisk hypertrofi, eller koncentriske remodeling. I det foreliggende arbejde, blev begge LVMM og LVMMI værdier bestemt i mus udsat for LAD arterie ligation og på sham-opererede dyr. Efterfølgende blev størrelsen af myocardieinfarkt identificeret og anvendt til at beregne procentdelen af infarktstørrelse. Selv under operationen ligaturen til LAD koronararterie var applIED på samme niveau, vil okklusionssymbolet genereret infarkter med nogle variabilitet: 13,3%, 15,8%, og 22,4% (tabel 1). En mulig forklaring på denne variation kan udspringe af forskelle i kranspulsåren anatomi og deres territoriale blodforsyning mellem dyrene, og efter aftale med tidligere rapporter 48. Den mest almindelige måde at infarktstørrelse vurdering i en musemodel for myokardieinfarkt er ved ex vivo triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) -farvning, den teknik, der ikke ville tillade langsgående overvågning af sygdommen hos det samme dyr. I forbindelse med tidligere arbejde af Ashton et al. 22 og af denne foreliggende, er det bemærkelsesværdigt, at MicroCT sammenholdt med ioderet kontrastmiddel kan tilvejebringe en alternativ og ikke-destruktiv fremgangsmåde til bestemmelse infarktstørrelse i længderetningen.
En yderligere fordel ved MicroCT teknik ligger i meget nøjagtig bestemmelse af regional iskæmi. Like hos mennesker venstre koronararterie af musen deler sig i en nedadgående arterie (LAD) og en septal gren (LCX). Men i mus, anatomi af side grene af LAD og LCX varierer betydeligt mellem dyr 48. Store grene af LCX sommetider tæt parallelt LAD og da kranspulsårerne af mus er intra-myokardie og derfor ikke er synlige, side seler af LCX er til tider et uheld, men uundgåeligt indgår i koronar okklusion under musen-infarkt procedure. Som sådan kan den circumferentional polar kortet opnået efter MicroCT anvendes til at bestemme præcis hvilke kranspulsårerne blev okkluderet, da perfusion og kontrast optagelse i sektorer 2, 3, 8 og 9 er påvirket af LCX mens sektorer 7, 10, 11, 12 , 13, 15, 16 og 17 leveres af LAD. Derfor den polære kortet er til stor gavn for nøjagtig bestemmelse af de okkluderede arterier og hjælper derfor vigtigt i den korrekte fortolkning af virkningerne af myocaGOpk infarkt af hjertefunktionen og sygdomsprogression.
Den myocardieinfarkt musemodel anvendes stærkt efterligner den humane kliniske situation, hvor koronarkar bliver pludselig okkluderet som følge af en akut plakbrud og er som sådan en stor fordel at studere sygdommen udvikling af infarktområdet hjerte 49. Mens der i de udviklede vestlige lande behandling af patienter med myokardieinfarkt henvender sig hurtigt genoprette recirkulation af koronarkar, ved mange lejligheder, især i mindre økonomisk udviklede lande, hvor forekomsten af myokardieinfarkt er hastigt stigende, kan okklusionen ikke annuleret i tid 1,50. Dette inducerer i store ventrikulære infarkter, der oftest vil føre til kronisk hjertesvigt og er en enorm byrde på folkesundheden. Følgelig langsgående ikke-invasive diagnostiske metoder under anvendelse af et myocardieinfarkt model med en permanent koronararterie occlusion og en stor ventrikulær infarkt, af stor betydning at udvikle nye behandlingsstrategier mod denne sygdom.
Myocardial CT perfusion imaging er en hastig udvikling teknik, der giver mulighed for kvantitativ vurdering af regionale koronare blodgennemstrømning abnormiteter og deres relevans for hjerte funktion og levedygtighed. Nyere små dyreforsøg reduceret kløften mellem MicroCT og SPECT, modalitet valg for perfusion og levedygtighed vurdering 22. Med det mål at evaluere graden af regional blodgennemstrømning forringelse af fordele LAD koronararterieokklusion blev MicroCT data også evalueret for myocardial perfusion information. Den ligerede LAD arterie er kendt at tilvejebringe blodforsyning til den frie væg, en del af skillevæggen, og den apikale region af den venstre ventrikel. Myocardial perfusion defekter (hypoenhanced arealer) af mus 1 er vist i et polært koordinatsystem og indlysende i midten anterior, mid-inferolateral, mid-anterolaterale, apikalanterior, og apikale laterale segmenter, resultaterne er i overensstemmelse med den samme koronar fordeling (figur 3). Ingen forskel mellem perfusionsdefekter afledt ultimo diastoliske og ende-systoliske billeder blev fundet i homosegments. De slutdiastolisk og slut-systoliske myocardial perfusion polære kort fremvisninger for sham-opererede dyr er vist i figur 4. Mindre forskelle ved myocardial blodgennemstrømning mellem segmenter af kontrol dyr er ubetydelige på begge slutdiastolisk og slutsystolisk repræsentationer . Interessant, kan områderne hypoenhancement visuelt ses på korte-aksialt tværsnit billeder (figur 1) og som let kan kvantificeres som vist i figur 3. Dette var ikke muligt i undersøgelsen fra Befeda et al., Og kunne forklares ved større støj af MicroCT instrument, der anvendes 22. For at blive visuelt skelnes, skal signalforskelle være mindst tre til fem gange størreend støjen (standardafvigelse) i billedet 51. Lav støj i MicroCT anvendes i denne undersøgelse tilladt påvisning af et lille signal forskel mellem svækket og normalt perfunderet myocardium (127HU ± 23HU vs. 217HU ± 29HU), hvilket muliggør vellykket vurdering af myocardial perfusion mønster defekter.
En af de store fordele ved at bruge ioderet kontrastmiddel er evnen til at vurdere myocardial levedygtighed og stofskifte på grund af kontrasten relateret myocardial enhancement. Så vidt vi ved, blev kontrasten evne til at forbedre myocardium først beskrevet af Detombe et al. 23 og dens første anvendelse til myokardieinfarkt billeddannelse blev rapporteret af Ashton et al. 22. Selvom gruppen viste, at perfunderet myocardium i mus med myokardieinfarkt viste forbedring svarende til kontrollerne, og at infarktområdet myocardium viste ingen forbedring, kvantitativ vurdering af den enkelte segmenter myokardie eorbedring blev ikke rapporteret. For yderligere at undersøge, om myocardial enhancement kan vurderes kvantitativt blev alle musene reimaged anvendelse af samme imaging protokol 3 – 4 timer efter administration af kontrastmidlet, når myocardial enhancement forhold til hulrummet var maksimal.
Myocardiale kontrast uptake defekter blev observeret visuelt på korte aksiale ende-diastolisk og slutsystolisk tværsnit billeder af en mus hjerte med myokardieinfarkt (figur 5), men ikke i sham-opererede dyr (figur 6). Myokardie optagelse blev kvantitativt vurderet i hvert myokardie segment fra både ultimo diastoliske og end-systoliske rekonstruktioner og præsenteres i en polær koordinatsystem (figur 7 og 8). De endelige-diastoliske og end-systoliske homosegmental værdier opnået fra det samme dyr var ikke anderledes. Men viste segment-specifikke abnormiteter, de perifere polære plots (Figure 7) med lignende mønstre som dem vist på myokardiets perfusion kort (figur 2). Ingen kontrast uptake defekter blev set på de perifere polære afbildninger af sham-opererede mus (figur 8). De myocardiale uptake data var af tilstrækkelig kvalitet til at udføre global funktionel analyse og kvantitativ vurdering af LV myokardiemasse og infarktstørrelse (ikke vist). Selvom det ikke er relevant for den aktuelt anvendte model med permanent LAD koronar okklusion, mener vi, at kontrasten myocardial udvinding kan relateres til ikke blot at ændringer i den regionale myokardie blodgennemstrømning, men også til status af cardiomyocytter (f.eks arret, bedøvet og dvaletilstand myocardium) . For at teste denne hypotese, vil fremtidige arbejde ansætte modellen med midlertidig myocardial iskæmi og reperfusion.
Aktiv sammentrækning af myocardium resulterer i myocardial væg bevægelse og fortykkelse, som er en vigtig markører for systolisk fSalvelse og myokardie levedygtighed. Vurdering af den regionale væg bevægelse, fortykkelse, og uddrivningsfraktion hjælper med at skelne passiv systoliske væg bevægelse fra aktiv myokardie sammentrækning. For at muliggøre standardiseret kvantificering af omfanget og alvoren af læsionen, væg bevægelse, fortykkelse, og regionale ejektionsfraktioner almindeligvis konverteres til polære kort. Abnormiteter af regional ventrikulære væg bevægelse er vigtige markører for myokardieiskæmi, der er mest almindeligt vurderes af MRI 52. De LV væg bevægelse, fortykningsmidler og regional Uddrivningsfraktionen scorer for hvert segment af en mus med og uden myokardieinfarkt er vist i figur 9 og figur 10. Som forventet, LAD kranspulsåreombinding resulterede i markant fald af LV regionale funktionelle indekser ( Figur 9), hvorimod der ikke blev observeret nogen effekt ved den sham-opererede mus (figur 10). Disse resultater er i konkordans medtidligere rapporterede data.
Sammenfattende har dette arbejde demonstreret den første vellykkede anvendelse af en højhastigheds-MicroCT for omfattende bestemmelse af myocardial globale og regionale funktionelle parametre sammen med vurdering af myocardial perfusion og levedygtighed i sunde og i en musemodel af myocardial infarkt. Dette arbejde kan udvides yderligere mod karakterisering af andre modeller af hjertekarsygdomme, der giver mulighed for nøjagtig og ikke-destruktiv vurdering af hjerte-funktionelle og patofysiologiske forandringer, og til evaluering af nye forebyggende og terapeutiske strategier.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af Stichting Lijf en Leven, projekt dilatere versus stenoserende kredsløbsforstyrrelser.
Quantum FX MicroCT Imaging System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Micro Computed Tomography System | |
XGI-8 Anesthesia System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Cat. No. 118918 | Gas Anesthesia System |
Analyze 12.0 Software | Analyze Direct, Overland Park, KS, USA | Visualization and Analysis Software for Imaging | |
eXIA160 MicroCT Contrast | Binitio Biomedical, Ottawa, ON, CANADA | Cat. No. eXIA160-01; eXIA160-02; eXIA160-03; eXIA160-04; eXIA160-05 | Iodine based Radiocontrast for MicroCT Imaging |
Isoflurane | Pharmachemie BV, Haarlem, Netherlands |
Cat. No. 45.112.110 | inhalation anesthesia |
1/2CC U-100 28G1/2 Insulin Syringe | Becton Dickinson and Company, USA |
Cat. No. 329461 | Insulin syringes with sterile interior |
Leica microscope type M80 | Leica Microsystems BV, Eindhoven, Netherlands | Stereo zoom microscope |