This method outlines the use of Quantum Micro-Computed Tomography (MicroCT) to assess cardiac morphology, function, perfusion, metabolism and viability with iodinated contrast agent in mice with experimentally-induced myocardial ischemia. The technique can be applied for non-destructive high-throughput longitudinal in vivo imaging of various animal models of human heart disease.
The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that MicroCT provides quantitative high-resolution three-dimensional (3D) anatomical data non-destructively and longitudinally. Most importantly, with the development of a novel preclinical iodinated contrast agent called eXIA160, functional and metabolic assessment of the heart became possible. However, prior to the advent of commercial MicroCT scanners equipped with X-ray flat-panel detector technology and easy-to-use cardio-respiratory gating, preclinical studies of cardiovascular disease (CVD) in small animals required a MicroCT technologist with advanced skills, and thus were impractical for widespread implementation. The goal of this work is to provide a practical guide to the use of the high-speed Quantum FX MicroCT system for comprehensive determination of myocardial global and regional function along with assessment of myocardial perfusion, metabolism and viability in healthy mice and in a cardiac ischemia mouse model induced by permanent occlusion of the left anterior descending coronary artery (LAD).
Iskemisk hjertesykdom (IHD) fortsetter å være den største årsaken til sykelighet og dødelighet for menn og kvinner over hele verden 1. På grunn av kompleksiteten og innbyrdes forhold som eksisterer mellom de organer og systemer på organisme nivå, forblir bruken av hele dyret som en modell for IHD relevant ikke bare for vår bedre forståelse av sykdom patofysiologi, men også tillater evaluering av nye forebyggende og terapeutiske strategier . Musemodeller, i særdeleshet, har bidratt til vår kunnskap om hjerte utvikling, patogenesen av hjerteinfarkt, hjerteinfarkt hypertrofi, myokarditt, og aneurismiske lesjoner 2-7. Parametrene som bestemmer kardial ytelse og er nyttige når det gjelder prognose og valg av terapeutisk intervensjon er hjerte masse og geometri, global og regional funksjon, romlig fordeling av myokardial blodstrøm og myokardviabilitet.
Men de fleste av traditional prøvingsmetoder som brukes i musemodeller av hjertesykdom bære invasive målinger som krever timer for ferdigstillelse, og dermed dyret kan ikke brukes for gjentatte målinger, eller metoden vil kreve dyr ofre 8-12. For eksempel, for å måle regional myokardperfusjonen, radioaktivt eller fluorescensmerkede mikrosfærer brukes der radioaktiv telling eller fluorescerende signaler blir oppdaget på et fysisk dissekert hjerte eller in situ 13,14.
Tilsvarende vurdering av infarktstørrelsen i dyremodeller av myokardinfarkt er oftest utført med trifenyltetrazoliumklorid (TTC) flekker, og for å bestemme tidsforløpet av infarkt evolusjon og effekten av terapeutiske inngrep, krever denne teknikk at dyrene trenger bli ofret for hjerte histopatologisk undersøkelse ved forskjellige tidspunkter 15. Som sådan, ikke-destruktive og humane metoder som ville tillate quantitative og langsgående analyse av hjerte morfologi, funksjon, metabolisme og levedyktighet er av avgjørende betydning. I denne sammenheng er preklinisk avbildning av stor relevans. Blant de tilgjengelige bildediagnostikk magnetic resonance imaging (MRI) og ekkokardiografi er den mest brukte 16,17,18.
Imidlertid, og til tross for det faktum at MR regnes som den modalitet av referansen i både kliniske og prekliniske arbeidet, de høye kostnadene for å oppnå og opprettholde dedikerte små dyr MRI-systemer, så vel som kompleksiteten av denne teknologi for ikke-avanserte brukere å operere , gjør MRI uoverkommelig dyrt for rutinemessig bruk. Med hensyn til ekkokardiografi, der finnes betydelige ulemper for den måten hjertefunksjonen blir målt. De data som produseres av de fleste ekkokardiografiske undersøkelser er to-dimensjonal, og for å utlede volum, geometriske forutsetninger må gjøres 19. I tillegg dårlig intra- og inter-observatør reproducibility er en annen betydelig begrensning av denne teknikken. Radioisotop bildebehandling med SPECT (SPECT) og positronemisjonstomografi (PET) er hovedsakelig brukt for vurdering av myokardperfusjonen og metabolisme 17,20,21. Men gjør begrenset romlig oppløsning av disse bildediagnostikk hjerteavbildning i mus utfordrende.
På den annen side, med bruk av flatskjerm detektorteknologi som gir bedre røntgen følsomhet og raskere avlesning ganger, nåværende state of the art MicroCT systemer kan nå tilby cardio-luft gated tredimensjonal (3D) og fire-dimensjonale ( 4D) bilder av MR-grade kvalitet. De er praktisk talt vedlikeholdskostnader gratis og lett å betjene med ikke-avanserte brukere. Dermed kan slike MicroCT instrumenter være godt egnet for rutinemessig undersøkelse av små dyr som modeller av menneskelig sykdom. Viktigst, med utvikling av en ny preklinisk jodholdige kontrastmidler, simultaneous funksjonell og metabolsk vurdering av hjertet ble mulig 22-24.
Dette kontrastmiddel inneholder en høy konsentrasjon av jod (160 mg / ml), som produserer sterk blod-pool kontrast etter dens intravenøs administrering muliggjør in vivo avbildning av blodkar og hjertekamrene. Innen en time etter administrering, kan en kontinuerlig økning i myokardial motsetning forbundet med dets metabolske opptak observeres, og dermed den samme kontrastmiddel kan benyttes for evaluering av myokardial slående og levedyktighet.
Målet med teknikken beskrevet i dette manuskriptet er å muliggjøre forskere til å bruke høyhastighets MicroCT system med egen kardio-respiratorisk gating, sammen med blod-pool joderte kontrastmiddel for å bestemme hjerteinfarkt global og regional funksjon sammen med myokardperfusjonen og levedyktighet hos friske mus og i en hjertestans iskemi musemodell indusert av permanent okklusjonav den venstre fremre nedstigende koronararterie (LAD). Ved å bruke denne dyremodell og avbildningsteknikk, kan rask evaluering av de viktigste hjerteparametere utføres gjentatte ganger med en enkelt avbildning modalitet og uten behov for invasive prosedyrer eller behovet for å ofre dyrene. Teknikken kan utføres for å vurdere nye forebyggende og terapeutiske strategier.
I løpet av de siste årene MicroCT har blitt den modalitet mange forskere ansett for karakterisering av hjerte struktur og funksjon i små dyr 26-29,30. Imidlertid instrumenteringen anvendt i de tidligere arbeidet var enten tilpasset bygget eller ikke lenger er kommersielt tilgjengelige. Som sådan, ble denne studien forsøkte å gi en enkel og omfattende protokoll for bruk av high-speed MicroCT system med egen kardio-respiratorisk gating å bestemme hjerte global og regional funksjon sammen med myokardperfusjonen og levedyktighet i små dyr som modeller for menneskelige hjerte sykdom.
Ett av de viktigste krav for å studere hjerte struktur og funksjon er skannerens evne til å ta hensyn til fysiologiske hjerte bevegelser. For dette formål, EKG-baserte prospektive og retrospektive port teknikker kan anvendes. Men avhengig prospektiv (trinn og skyte) gating på en pre-spesifisert intervall av hjertesyklusen, for eksamenple under diastole, når hjertet bevegelse er minst. Med denne fremgangsmåten bare ett bilde pr hjertesyklus oppnås og bare en fase av hjertesyklusen kan rekonstrueres. Som sådan, i tillegg til å være tidkrevende å generere, prospektivt gated rekonstruksjoner produsere bare ett datasett, som er fratatt funksjonell informasjon. Retrospektiv gating, på den annen side, tillater rekonstruksjon av flere datasett ved hvert parti av hjertesyklusen, og dermed gir global og regional venstre ventrikulær funksjonell analyse.
Den nåværende arbeid ansatt Cardiorespiratory rekonstruksjoner med iboende retrospektiv gating. Intrinsic retrospektiv gating benytter proprietære image-basert programvare for å rekonstruere end-diastolisk og slutt-systolisk hjerte faser uten behov for dedikerte luftveiene og hjerteovervåkingsutstyr 29,31,32. En utmerket avtale av indre retrospektiv og ytre EKG-avhengige retrospektiv gating for studying hjertefunksjonen hos mus og rotter ble demonstrert ved Dinkel et al., 29. I løpet av denne nåværende arbeid, egenverdi retrospektiv gating ikke bare betydelig minimert den tiden som trengs for å sette opp søket, men også eliminert avhengighet overvåking maskinvare, for eksempel EKG-avledninger og luft pneumatisk sensor, samt ytterligere operatør ferdigheter du skal sette det opp.
Etter rekonstruksjonen ble bildekvaliteten på begge ende-diastolisk og end-systolisk datasett funnet tilfredsstillende for hjerte analyse. Under undersøkelse av bildene, ble det lagt særlig vekt på bevegelsesartefakter som kan oppstå under et utilstrekkelig nivå av anestesi, streaking gjenstander som kan skje som et resultat av manglende anslagene i dyr med høy pustefrekvens, lav-demping gjenstander som ofte forårsakes av benete strukturer og kan etterligne perfusjon defekter, og ringartifakter som kan oppstå fra mis-kalibrering eller svikt i en eller flere detektor elementer.
Evnen til å produsere MicroCT hjerte strukturell og funksjonell informasjon er også avhengig av tilgjengeligheten av passende intravaskulære kontrastmiddel. Mest for tiden kommersielt tilgjengelige MicroCT kontraster kan generelt deles inn i partikkelformede ikke-metaboliserbare makrofag-spesifikk og polydispers metaboliserbare jodbaserte kontrast 23,33-36. Selv om partikkelformede midler gir større røntgenstråle-opasifisering på grunn av deres høyere atomnummer (barium, Z = 56, og gull, Z = 79), kan de ikke anvendes for metabolske vurdering. Dessuten er disse midler betraktes som skadelig for organismen og fjernet av leveren makrofager (Kupffer-celler), spyle celler i det retikuloendoteliale system (RES). På grunn av deres ikke-metaboliserbar natur, disse midler induserer endringer i leveren mikrosirkulasjonen samtidig med leverskade 37.
Metaboliserbar jodbaserte kontrast, på den annen side, er ikke TARGEted for RES-spesifikke fjerning, og dermed bør tilby bedre sikkerhetsprofil og unngå levertoksisitet. I tillegg til deres bedre sikkerhetsprofil, er disse kontraster tas opp av metabolsk aktive vev, kan således anvendes for levedyktighet vurderings 22,23. For dette formål ble joderte kontrastmiddel valgt for denne studien. Kontrasten ble administrert i en dose på 5 eller 10 pl pr gram kroppsvekt av dyret som en enkel intravenøs bolusinjeksjon. Selv om begge doser produsert tilfredsstillende forbedringsresultatene, ble det observert en doseavhengig økning i venstre ventrikkel og myokardisk kontrastnivåer når 10 ul / g av kontrast ble injisert. Av interesse, sammen med den større dose, varigheten av blodblandingen ble forlenget og toppen av hjerteinfarkt opptak kontrast ble forsinket. Ett dyr (mus 1) ble fulgt opp i 10 uker etter operasjonen, og i løpet av denne perioden ble det fotografert hver andre uke. Av erfaring, ingen bivirkninger relatert til kontrasten (totalt 5 iskrivninger) eller relatert til X-ray eksponering (totalt 10 MicroCT skanninger) ble observert i denne musen i løpet av overvåking. En av de mest vanlige rapporterte bivirkningene effektene av langvarig eksponering jod er skjoldbruskkjertelen forstyrrelse som ikke ble observert makroskopisk på post-mortem undersøkelser. Mannheim et al. Studert tyroksin etter 3 påfølgende administrasjoner kontrast og fant ingen forskjell når nivåene ble sammenlignet med kontroller 37. Med bruk av de samme MicroCT datasettene, ble ingen tegn til strålings-induserte lungefibrose detektert i dette dyr (data ikke vist), i samsvar sikkerheten av prosedyren.
Vurdering av global og regional ventrikkel hjertefunksjon regnes som den sterkeste determinant av hjertefunksjon og viktig i forhold til prognose og valg av terapeutisk intervensjon 38,39. De globale venstre ventrikkel funksjonelle indeksene inkluderer venstre ventrikkel ende-diastolisk volum (LVEDV), venstre ventrikkel ende-systolisk volum (LVESV), venstre ventrikkel slagvolum (LVSV), venstre ventrikkel ejeksjonsfraksjon (LVEF), og minuttvolum (CO). Tidligere MicroCT studier bekreftet at kvantitativ evaluering av global hjertefunksjonen er gjennomførbart i murine kardiovaskulære sykdomsmodeller og at markant nedgang i global hjertefunksjon finner sted kort tid etter LAD arterie okklusjon. Disse funnene er i overensstemmelse med tidligere rapporter i det markert reduksjon i LVSV, LVEF, og CO skjedde allerede på dag 1 etter okklusjon 29,40-43. Det er bemerkelsesverdig å nevne at hjerte funksjonell ytelse er avhengig av type og grad av anestesi, og dermed for nøyaktige målinger av hjertefrekvens under bildet oppkjøpet bør holdes som fysiologisk mulig 44.
Kvantitativ vurdering av venstre ventrikkel hjerteinfarkt masse (LVMM) er viktig for evaluering av venstre ventrikkel hypertrofi og ble først og fremst gjennomført ved hjelp av MRJeg 11,43,45,46. LVMM er ofte korrigert for kroppsvekt og presenteres som venstre ventrikkel hjerteinfarkt mass index (LVMMI) for å tillate normalisering av hjertevekt hos mus med ulik alder og habitus. Nøyaktig beregning av disse parametrene er viktig, da musene med hjerteinfarkt utvikle betydelige LV hypertrofi 47. Vurdering av LVMM, LVMMI, og LV geometri er også viktig for diagnostikk av hjerte-hypertrofi og dysplasi 11. Som sådan, vil bestemmelsen av disse parametrene i tillegg være fordelaktig å differensiere tilstander som konsentrisk hypertrofi, eksentrisk hypertrofi eller konsentrisk ombygging. I dette arbeidet ble både LVMM og LVMMI verdier bestemmes i mus utsatt for gutten arterie ligation og i sham-opererte dyr. Deretter ble størrelsen av hjerteinfarkt identifisert og anvendt for å beregne prosentandelen av infarktstørrelse. Selv under operasjonen ligaturen til LAD koronar var ApplIED på samme nivå, at okklusjon generert infarkter med en viss variasjon: 13,3%, 15,8% og 22,4% (tabell 1). En mulig forklaring på denne variasjonen kan utgå fra forskjeller i koronaranatomi og deres territoriale blodtilførsel mellom dyrene, og etter avtale med tidligere rapporter 48. Den vanligste måten for infarktstørrelse vurdering i en musemodell av hjerteinfarkt er ved ex vivo-trifenyl-tetrazoliumklorid (TTC) farging, den teknikk som ikke ville tillate langsgående overvåking av sykdom i det samme dyr. I forbindelse med tidligere arbeider ved al., Ashton-et 22 og fra dette til stede, er det bemerkelsesverdig at MicroCT i forbindelse med jodholdige kontrastmidler kan gi en alternativ og ikke-destruktiv fremgangsmåte for å bestemme infarktstørrelsen i lengderetningen.
En ytterligere fordel av den MicroCT teknikk ligger i den meget nøyaktig bestemmelse av regional ischemi. Like hos mennesker venstre koronararterie av muse deler seg i en nedadgående arterie (LAD) og en septal gren (LCX). Imidlertid, i mus, er forskjellig anatomi av side greiner av LAD og LCX betydelig fra dyr 48. Store greiner av LCX noen ganger tett parallelt LAD og siden koronararteriene hos mus er intra-myokardial og derfor ikke er synlig, sidebukseseler av LCX er til tider ved et uhell, men uunngåelig inngår i koronar okklusjon i løpet av mus-infarkt prosedyre. Som sådan kan den circumferentional polare kartet oppnådd etter MicroCT anvendes for å bestemme nøyaktig hvilken kransarteriene ble okkludert, ettersom perfusjon og kontrast opptak i sektorene 2, 3, 8 og 9 påvirkes av LCX mens sektorene 7, 10, 11, 12 , 13, 15, 16 og 17 blir levert av LAD. Følgelig er den polare kartet til stor nytte for nøyaktig bestemmelse av de okkluderte arterier og følgelig hjelpemidler viktigere i riktig tolkning av virkningene av myocardial infarkt i hjertefunksjon og sykdomsutvikling.
Den myokardialt infarkt musemodell som brukes høyt etterligner den humane kliniske situasjon hvor koronarkar blir plutselig okkludert som et resultat av en akutt plaque ruptur og er som sådan av stor nytte for å studere utviklingen av sykdommen infarkthjerte 49. Mens i den utviklede vestlige land behandling av pasienter som lider av hjerteinfarkt er rettet mot å raskt gjenopprette resirkulering av koronar fartøy, i mange tilfeller, spesielt i mindre økonomisk utviklede land der forekomsten av hjerteinfarkt er raskt økende, kan okklusjonen ikke annulated i tid 1,50. Dette induserer i store ventrikkel infarkt som oftest vil føre til kronisk hjertesvikt og er en enorm belastning for folkehelsen. Derfor langsgående ikke-invasive diagnostiske metoder ved hjelp av et hjerteinfarkt modell med en permanent koronar OCClusion og et stort ventrikkel infarkt er av stor betydning for å utvikle nye behandlingsstrategier mot denne sykdommen.
Hjerteinfarkt CT perfusjonsbilleddannelse er en raskt utviklende teknikk som gjør at kvantitativ vurdering av regionale koronar blodstrøm abnormiteter og deres relevans for hjertefunksjon og levedyktighet. Nyere små dyrestudier redusert gapet mellom MicroCT og SPECT, den modalitet av valget for perfusjon og levedyktighet vurdering 22. Med mål om å vurdere graden av regional blodstrøm svekkelse forårsaket av LAD koronar okklusjon ble MicroCT data også evaluert for myokardperfusjonen informasjon. Den ligert LAD arterien er kjent for å tilveiebringe blodtilførsel til den frie vegg, en del av skilleveggen, og den apikale området av venstre ventrikkel. Myokardperfusjonen defekter (hypoenhanced områder) av mus 1 er vist i en polar koordinatsystem og opplagt i midten anterior, mid-Inferolaterale, mid-anterolaterale, apikalanterior, og apikale sidesegmentene, funnene er i samsvar med de samme koronar fordeling (figur 3). Ingen forskjell mellom perfusjon defekter som stammer fra slutt-diastolisk og end-systolisk bildene ble funnet i homosegments. De ende-diastolisk og slutt-systoliske myokardial perfusjon polare kartfremvisninger av den narreopererte dyr er vist i figur 4. Små forskjeller i myokardial blodstrøm mellom segmentene i kontrolldyret er ubetydelig på begge ende-diastolisk og slutt-systoliske representasjoner . Interessant, kan de områdene av hypoenhancement visuelt ses på korte aksiale tverrsnittsbilder (figur 1), og kan lett kvantifiseres som vist i figur 3. Dette var ikke mulig i studien ved Befeda et al., Og kan forklares ved større støyen fra MicroCT instrument som brukes 22. For å bli visuelt skjelnes, må signalforskjellene være i det minste tre til fem ganger størreenn den støy (standardavvik) i bildet 51. Lav støy av MicroCT brukt i denne studien tillates deteksjon av et lite signal forskjell mellom nedsatt og normalt perfusert hjertemuskelen (127HU ± 23HU vs. 217HU ± 29HU), slik at vellykket vurdering av myokardial perfusjon mønster defekter.
En av de store fordelene ved å bruke joderte kontrastmiddel er evnen til å vurdere myokardviabilitet metabolismen på grunn av den kontrast relaterte myokardial forbedring. Så vidt vi vet, ble kontrasten evne til å forbedre myokard først beskrevet av Detombe et al. 23 og første gangs bruk for hjerteinfarkt avbildning ble rapportert av Ashton et al. 22. Selv om gruppen indikert at perfusert hjertemuskelen i musene med hjerteinfarkt viste forbedring i likhet med kontrollene, og det infarkt myokardium viste ingen forbedring, kvantitativ vurdering av den segment myokardialt enhancement ble ikke rapportert. For ytterligere å undersøke om hjerteinfarkt ekstrautstyr kan kvantitativt vurdert, ble alle musene reimaged bruker samme bilde protokoll 3 – 4 timer etter administrering av kontrastmiddel, når hjerteinfarkt forbedring i forhold til hulrom var maksimal.
Myokardiale kontrast opptaks defekter ble observert visuelt på kort aksial ende-diastolisk og slutt-systoliske tverrsnittsbilder av et mus hjerte med hjerteinfarkt (figur 5), men ikke i den narreopererte dyr (figur 6). Hjerteinfarkt opptaket ble kvantitativt vurderes i hvert hjerteinfarkt segmentet fra både slutt-diastolisk og end-systolisk rekonstruksjoner og presentert i en polar koordinatsystem (figur 7 og 8). Ende-diastolisk og end-systolisk homosegmental verdier hentet fra det samme dyret var ikke annerledes. Men de omkretspolarplottene viste segment-spesifikke abnormaliteter (figure 7) med lignende mønstre som de som er vist på myokardperfusjonen kart (figur 2). Det er ingen kontrastopptaks defekter ble observert på omkrets polare plott av sham-opererte mus (figur 8). Den myokardiale opptaksdata var av tilstrekkelig kvalitet til å utføre global funksjonell analyse og kvantitativ vurdering av myokardial LV masse og infarktstørrelse (ikke vist). Selv om det ikke relevant for tiden brukes modell med permanent LAD koronar okklusjon, tror vi at kontrasten hjerteinfarkt utvinning kan relateres ikke bare til endringer i regional hjerteinfarkt blodstrøm, men også til status for cardiomyocytes (f.eks arrete, lamslått og dvalemodus myokard) . For å teste denne hypotesen, vil det videre arbeidet ansette modellen med midlertidig myokardiskemi og reperfusjon.
Aktiv sammentrekning av myokard resulterer i hjerteinfarkt veggen bevegelse og fortykkelse som fungerer som viktige markører for systolisk fsalvelse og myokardviabilitet. Vurdering av regional veggen bevegelse, jevning, og ejeksjonsfraksjon bidrar til å skjelne passiv systolisk veggen bevegelse fra aktiv hjerteinfarkt sammentrekning. For å muliggjøre standardisert kvantifisering av omfanget og graden av lesjon, vegg bevegelse, fortykkede, og regionale utstøtnings fraksjonene blir vanligvis kartlagt i polare kart. Unormalt av regional ventrikkel veggen bevegelse er viktige markører for myokardiskemi som oftest vurderes av MR 52. LV veggbevegelse, jevning og regional ejeksjonsfraksjonen score for hvert segment av en mus med og uten hjerteinfarkt er presentert i Figur 9 og Figur 10. Som forventet, LAD koronar ligation resulterte i markert nedgang på LV regionale funksjonelle indekser ( figur 9), mens ingen virkning ble observert i sham-opererte mus (figur 10). Disse resultatene er i samsvar medtidligere rapportert data.
I konklusjonen, har dette arbeidet vist den første vellykkede bruken av en høyhastighets MicroCT system for omfattende bestemmelse av hjerteinfarkt globale og regionale funksjonelle parametre sammen med vurdering av myokardperfusjonen og levedyktighet hos friske og i en musemodell for hjerteinfarkt. Dette arbeidet kan bli ytterligere utvidet mot karakterisering av andre modeller av hjerte- og karsykdommer, noe som åpner for nøyaktig og ikke-destruktiv vurdering av hjerte funksjonelle og patofysiologiske endringer, og for evaluering av nye forebyggende og terapeutiske strategier.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av Stichting Lijf en Leven, prosjekt strekke versus stenosing arteriell sykdom.
Quantum FX MicroCT Imaging System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Micro Computed Tomography System | |
XGI-8 Anesthesia System | PerkinElmer, Hopkinton, MA, USA | Cat. No. 118918 | Gas Anesthesia System |
Analyze 12.0 Software | Analyze Direct, Overland Park, KS, USA | Visualization and Analysis Software for Imaging | |
eXIA160 MicroCT Contrast | Binitio Biomedical, Ottawa, ON, CANADA | Cat. No. eXIA160-01; eXIA160-02; eXIA160-03; eXIA160-04; eXIA160-05 | Iodine based Radiocontrast for MicroCT Imaging |
Isoflurane | Pharmachemie BV, Haarlem, Netherlands |
Cat. No. 45.112.110 | inhalation anesthesia |
1/2CC U-100 28G1/2 Insulin Syringe | Becton Dickinson and Company, USA |
Cat. No. 329461 | Insulin syringes with sterile interior |
Leica microscope type M80 | Leica Microsystems BV, Eindhoven, Netherlands | Stereo zoom microscope |