表面等离子体共振 (SPR)

表面等离子体共振 (或 SPR) 是某些无标签生物传感器背后的基本现象, 用于评估生物分子的结合和吸附作用。需要标记的结合化验, 例如 ELISA, 可能是一个费时的过程, 并且也许改变分析物的功能。在 SPR 中, 生物分子之间的相互作用发生在一个特殊的传感器, 由薄薄的金属层在一个棱镜的表面。通过监测金属底部反射光的变化, SPR 仪器可以在不使用标签的情况下 real-time 这些相互作用的可视化。本视频将介绍 spr 的基本原理, spr 成像的一般程序, 以及在生物化学中的一些应用.

SPR 传感器通常由在棱镜表面上的一层贵金属组成。为了从传感器中读取读数, 光线从棱镜金属界面反射到光电探测器中。反射光除了在一定角度外, 还具有高强度, 与金属表面的电子特性有关, 称为 #34; 表面等离子体共振角和 #34;.

当分子与表面结合时, 金属的电子性质会发生变化, 进而调整角度。随着新的蛋白质附着, 形成复合物, 角度将进一步转移。通过测量 SPR 角度的相对变化, 可以在 real-time 中监视类似的相互作用.

另一种称为本地化或 #34 的技术; L 和 #34; SPR, 使用金属纳米粒子作为传感器表面。影响 SPR 角度的特性高度地定位于每个纳米粒子, 从而提高灵敏度和信号分辨率.

当研究与标准 SPR 的绑定交互时, 传感器通常安装在一个平台上, 该工作台将成为仪器中流动单元的地板。感兴趣的生物分子通过缓冲液通过流动细胞。传感器表面通常先涂上具有高亲和力的基体。这就确保了大量的配体, 反过来对感兴趣的分析物, 将固定在传感器上, 并减少了在过程中配体将离解的可能性.

一旦配体固定在传感器上, 分析物就会流过传感器的缓冲液中。当分析物与配体结合时, 通过监测 SPR 角度随着时间的变化, 可以计算出束缚率和其他动力学信息.

反射率数据也可用于 SPR 成像或 SPRi, 方法是将反射光定向到 CCD 探测器。这将产生整个传感器表面的高对比度图像。利用 SPR 和相关技术, 可以回答有关分子亲和性、动力学、特异度和浓度等问题.

现在, 您了解在 SPR 实验中测量的是什么, 让 & #39; 我们来看一个调查绑定利率的程序.

在开始该过程之前, 必须准备运行和示例缓冲区。运行缓冲区用于将配体沉积到传感器上, 并使用样本缓冲区来存放分析物。传感器芯片被仔细地清洗并且被装载入鞘。然后, 该设备被放置到仪器, 它成为流细胞的底部。为实验和后续分析建立了仪器软件。如有必要, 传感器表面上配有衬底以捕获配体。所述配体流经传感器表面, 在所述运行缓冲器上, 在传感器表面上由所述基板捕获.

然后, 样本缓冲区中的分析物通过流动单元运行, 在这里它有选择地绑定到固定的配体。对反射率的变化进行了绘制和比较对照, 以确定速率常数和其他反应动力学数据的调查反应.

现在您了解了 spr 实验是如何执行的, 请 #39; 我们来看看在生物化学中 spr 的其他一些应用.

在这里, SPR 成像被用来评估蛋白质与阵列的十一受体在传感器上. 根据每种蛋白质的反射率数据, 制备了3D 反射率与时间和受体浓度的关系图。这些和 #34;p rofiles 和 #34; 是每个蛋白质的特征, 因此可以随后用于蛋白质鉴定.

在本实验中, 使用 custom-made LSPR 传感器对细胞分泌物进行了研究。该传感器还兼容 SPRi 和荧光显微镜。在传感器上沉积细胞后, 可以用高空间分辨率测量细胞分泌物与纳米粒子阵列的相互作用.

在这里, 量子点的使用, 纳米半导体, 作为 SPR 信号增强剂混合与分析物进行了研究。这种增强和 #34; 纳米 SPRi 和 #34; 方法与标准 SPRi 和 ELISA 法进行了比较。纳米 SPRi 法大大提高了检测的灵敏度和限制, 同时也比 ELISA 方法的耗时少.

您和 #39; 我刚刚看了朱庇特和 #39 的表面等离子体共振的视频。这种现象被用来监测和图像生物分子的相互作用, 而不使用标签。该视频介绍了 spr 的原理、spr 实验的典型协议以及 spr 在生物化学中的一些应用.

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