alt1 调节先天免疫, 但这种情况是如何发生的仍未确定。我们使用选择性 malt1 副囊酶抑制剂 mlt-827 来解开 malt1 对 toll 样或 c 型凝集素受体下游的先天信号的贡献, 证明 malt1 调节骨髓细胞因子的产生, 并在下游c 型乳素样受体, 选择性的。
除了在淋巴细胞中的功能外, 还有许多研究都涉及到它的功能, 副胸酶 kalt1 在模式识别受体下游的先天细胞中也发挥着重要作用。最好的研究是 c 型乳素样受体家族的 dectin-1 和 dectin-2 成员, 它们以与 alt1 相关的方式诱导 syk 和 card9 依赖信号级联, 从而导致 nf-b 激活。相比之下, toll 样受体 (tlr), 如 tlr-4, 传播 nf-b 激活, 但通过 myd88/依赖 irak 级联发出信号。尽管如此, alt1 是否可能对 tlr-4 信号做出贡献仍不清楚。作为对 falt1 副酶活性的有效和选择性抑制剂, mlt-827 的最新证据表明, 人骨髓细胞中的 tnf-ptr-4 生产与 falt1 的下游无关, 而不是 ttint-1 下游的 tnf 生产, 而 ttint-1 是丙种细胞。依赖。在这里, 我们讨论了 alt1 在模式识别传感中的选择性参与, 进一步使用了各种人和小鼠的细胞制剂, 并刺激了十丁-1、mincle 或 tlr-4 途径。我们还通过探索 tnf 之外的细胞因子, 并将 mlt-827 与 syk 抑制剂 (cpd11) 和 ikk 抑制剂 (afn700) 进行比较, 提供了更多的见解。总体而言, 这些数据为 c 型乳素样受体的 alt1 依赖性提供了进一步的证据–与 tlr 信号相比, 信号传递。
2008年1,2 例发现了菌核相关淋巴组织淋巴瘤移位蛋白 1) 的副适应酶活性。自那时以来, 一些研究报告了它对淋巴细胞抗原受体反应的重要贡献。小鼠遗传模型以及药理数据支持 t 细胞、t 细胞依赖性自身免疫和 b 细胞淋巴瘤设置3,4的关键作用。在淋巴细胞中, 在标记11-bcl10-alt1 复合物5的组装时, 会发生 alt1 副酶激活, 这是由 t-或 b 细胞受体下游的抗原受体近端信号触发的。还有充分的证据表明, 类似的 card9-bcl10-大力图1复合物对于在骨髓细胞 6,7 中传播 c 型乳素样受体 (cllr) 下游的信号非常重要, 例如, 十丁-1、十丁-2 和 mincle。十分蛋白-1 已得到特别好的研究, 因为这种途径是关键的主机防御真菌感染 8,9。然而, 在 toll 样受体 (tlr) 通路中, alt1 的含义仍有争议10。最近在人类骨髓细胞中的证据排除了 alt1 副酶活性在 tlr-411 下游tnf-生产监管中的直接作用。
在本工作中, 我们利用人类和小鼠骨髓细胞的各种实验设置和刺激条件, 利用特定的药理工具抑制剂和细胞因子产生的测量, 探索先天信号通路。
在这项工作中, 我们使用简单的实验设置来研究人和小鼠先天细胞的信号通路, 并询问他们对 alt1 蛋白溶解功能的依赖。在先前工作11的基础上, 我们的研究表明, alt1 副酶活性控制 c 型肌肽样受体诱导的细胞因子的产生, 包括 tnf-α。相反, tlr-4 诱导的 tnf-α在这两个物种中都与 alt1 无关。这些数据总体上证实了 c 型乳素样受体下游的 m异位谱的关键和选择性贡献, 早期的研究<sup class="…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢 elsevier 授权 (许可证编号 4334770630127) 在这里复制来自 unterreiner等人的图 2a 。(2017年)。
100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
6 well plates | Costar | 3516 | |
96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
GM-CSF | Novartis | – | |
Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
IFN-γ | R&D | L4516 | |
IL-4 | Novartis | – | |
Isoflurane | Abbott | Forene | |
Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
Magnet | Stemcell | 18001 | |
Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |