MALT1 타고 난 면역을 조절 하지만 병이 정의 남아 어떻게이 발생 합니다. 우리는 타고 난 신호 통행세 같이 또는 C 형 lectin 같이 수용 체의, MALT1 골수성 cytokines의 생산 조절 시연 다운스트림 다운스트림 MALT1의 기여를 푸는 선택적 MALT1 paracaspase 억제제 MLT-827 사용 C-타입 lectin 같이 수용 체의 선택적으로.
수많은 연구에 의해 해결 되었습니다, 림프 세포, 그것의 기능 외 paracaspase MALT1 또한 패턴 인식 수용 체의 타고 난 셀 하류에 중요 한 역할을 재생 합니다. 최고의 공부는 Dectin-1 및 Dectin-2 일원 이다 C 형 lectin 같이 수용 체 가족의 SYK-및 CARD9-종속 MALT1 종속 방식에서 NF-κB 활성화를 선도 하는 캐스케이드 신호를 유도 하는. 대비, 통행세 같이 수용 체 (TLR), TLR-4, 같은 의해 NF-κB 활성화 하지만 신호는 MYD88/IRAK 종속 캐스케이드를 통해 전파 합니다. 그럼에도 불구 하 고, MALT1 TLR 4 신호에 기여할 수 있습니다 여부 불분명 남아 있다. MLT-827, MALT1 paracaspase 활동의 강력 하 고 선택적 억제제와 최근 증거가 나타냅니다 TNF-생산 하류 TLR-4 인간의 골수성 세포에서의 Dectin-1, TNF-생산 하류 반대로 MALT1의 독립적인 MALT1은 종속. 여기, 우리는 더 이상 감지, 및 마우스 세포 준비, Dectin 1, MINCLE 또는 TLR 4 통로의 자극의 다양 한 사용 패턴 인식에 MALT1의 선택적 참여 해결. 우리는 또한 넘어 TNF-, cytokines를 탐험 하 고 SYK 억제제 (Cpd11)와 IKK 억제제 (AFN700) MLT-827를 비교 하 여 추가적인 통찰력을 제공 했습니다. C-타입 lectin 같이 수용 체의 MALT1 종속성에 대 한 제공 하는 데이터 추가, 증거를-반대로 TLR 신호를 신호.
MALT1의 paracaspase 활동 (점 막 관련 림프 조직 림프 종 전 좌 단백질 1) 20081,2에서 밝혀졌다. 그 이후, 연구의 여러 세포에 항 원 수용 체 응답의 중요 한 기여를 보고 있다. 유전자 모델 마우스 뿐만 아니라 T 세포, T 세포 의존 면역 및 B-세포 림프 종 설정3,4약리학 데이터는 중요 한 역할을 지원. MALT1 paracaspase 활성화는 CARD11-BCL10-MALT1 복잡 한5, 항 원 수용 체 근 위 신호에 의해 트리거되는 조립 시 발생 하는 림프 톨에 T 또는 B 세포 수용 체의 다운스트림. 또한 유사한 CARD9-BCL10-MALT1 복잡 한 예를 들어 C 형 lectin 같이 수용 체 (CLLR)의 하류 신호를 전파에 대 한 중요 하다는 충분 한 증거가 있다, Dectin-1, Dectin 2, MINCLE에 골수성 세포6,7. Dectin-1이이 통로 곰 팡이 감염8,9에 대 한 호스트 방어에 매우 중요 하기 때문에 특히 잘 공부 되었습니다 했다. 그러나, 수용 체 통행세 같이 (TLR) 경로에서 MALT1의 의미는 논란이10남아 있다. 인간의 골수성 세포에서 최근 증거 MALT1 paracaspase 활동 TNF-생산의 하류 TLR 411의 규정에 대 한 직접적인 역할을 배제.
현재 작업에서 다양 한 실험 설정 물질로 인간의 및 마우스 골수성 세포 타고 난 신호 경로, 특정 약리 도구 억제제 및 cytokine 생산의 측정 프로브를 사용 우리.
이 작품에서 우리 인간의 신호 통로 마우스 타고 난 세포를 연구 하 고 MALT1 분해 기능에 대 한 그들의 의존성을 심문 간단한 실험 설정 사용. 이전 작업11에 확대, 우리의 연구 MALT1 paracaspase 활동 C 형 lectin 같은 수용 체 유도 cytokine 생산, TNF-α를 포함 하 여 컨트롤을 보여주었다. 반면, TLR 4 유도 하는 TNF-α MALT1 두 종에서 독립 했다. 샨 다, 이러한 데이터는 MALT1/CBM signalosome 하류 C 형…
The authors have nothing to disclose.
우리에 대 한 그들의 허가 (면허 번호 4334770630127) Unterreiner 그 외 여러분 에서 여기 그림 2A 를 재현 하는 Elsevier 감사 (2017)입니다.
100 µm nylon cell strainer | Sigma | CLS431752 | |
14 ml Falcon tube | BD Falcon | 352057 | |
15 mL Falcon tube | Falcon | 352090 | |
50 mL Falcon tube | Falcon | 352070 | |
6 well plates | Costar | 3516 | |
96 well flat-bottom plate, with low evaporation lid | Costar | 3595 | |
96 well V-bottom plate | Costar | 734-1798 | |
Ammonium Chloride – NH4Cl | Sigma | A9434 | |
Assay diluent RD1-W ELISA | R&D | 895038 | Assay diluent |
Cell culture microplate, 384 well, black | Greiner | 781986 | |
Depleted Zymosan | Invivogen | tlrl-dzn | now: tlrl-zyd |
Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2650 | DMSO |
EDTA-Na2 | Sigma | E5134 | Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt dihydrate |
ELISA muTNF-α | R&D | SMTA00 | |
Ficoll-Paque Plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | |
gentleMACS C tubes | MACS Miltenyi Biotec | 130-096-334 | |
gentleMACS dissociator | MACS Miltenyi Biotec | 130-093-235 | |
GM-CSF | Novartis | – | |
Heat-inactivated Fetal bovine serum | Gibco | 10082 | FBS |
HTRF hu IL-23 | CisBio | 62HIL23PEG | |
HTRF hu TNF-α | CisBio | 62TNFPEC | |
HTRF reconstitution buffer | CisBio | 62RB3RDE | 50mM Phosphate buffer, pH 7.0, 0.8M KF, 0.2% BSA |
IFN-γ | R&D | L4516 | |
IL-4 | Novartis | – | |
Isoflurane | Abbott | Forene | |
Lipopolysaccharides (LPS) | Sigma | L4391 | LPS used in human samples |
Lipopolysaccharides | Sigma | L4516 | LPS used in murine samples |
Lysis buffer | Self-made | – | 155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 1 mM EDTA, pH 7.4 |
Magnet | Stemcell | 18001 | |
Microplate, 384 well white | Greiner | 784075 | |
Monocytes enrichment kit | Stemcell | 19059 | |
Nalgene Mr. Frosty Cryo 1 °C Freezing Container | Nalgene | 5100-0001 | cooling device (containing Propanol-2) |
PBS 1x pH 7.4 [-] CaCl2 [-] MgCl2 | Gibco | 10010 | Phosphate-buffered saline |
Penicillin/Streptomycin | Gibco | 15140 | Pen/Strep |
Potassium bicarbonate – KHCO3 | Sigma | P9144 | |
PrestoBlue | Invitrogen | A13262 | Resazurin solution for viability assessment |
Propanol-2 | Merck | 1.09634 | |
Read buffer | MesoScale Discovery | R92TC-3 | Tris-based buffer containing tripropylamine |
Recovery cell culture freezing medium | Gibco | 12648-010 | freezing medium |
Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) with Glutamax | Gibco | 61870 | + 10% FBS for iMoDCs + 10% FBS + 1 mM Sodium Pyruvate + 100 U/mL Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for human PBMCs and monocytes + 10% FBS + Pen/Strep + 5 µM β-mercaptoethanol for murine splenocytes |
Separation buffer | Self-made | – | PBS pH 7.4 + 2% FBS + 1 mM EDTA pH 8.0 |
Sodium Pyruvate | Gibco | 11360 | |
Trehalose-6,6-dibehenate | Invivogen | tlrl-tdb | TDB |
Tween 20 | Sigma | P7949 | Polysorbate 20 |
UltraPure 0.5 M EDTA pH 8.0 | Invitrogen | 15675 | Ethylenediaminetetraacetic acid |
Viewseal sealer | Greiner BioOne | 676070 | |
V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Human Kit | MesoScale Discovery | K15049D | electrochemiluminescent multiplex assay (IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8) |
β-Mercaptoethanol | Gibco | 31350 |