Detta protokoll beskriver ett nytt beteende test-den mänskliga metoden testet i svin hem penna-att upptäcka funktionella underskott i laboratorie svin efter subconcussive traumatisk hjärnskada.
Traumatisk hjärnskada (TBI) incidenser har ökat i både civila och militära populationer, och många forskare antar en svin modell för TBI. Till skillnad från gnagare modeller för TBI, det finns få beteendemässiga tester som har standardiserats. Ett större djur kräver mer invasiv hantering i testområden än gnagare, vilket potentiellt tillför stress och variation till djurens svar. Här beskrivs Human metoden test (hatt), som utvecklades för att utföras framför laboratorie svin hem penna. Det är noninvasiv, men tillräckligt flexibelt för att det möjliggör skillnader i bostads uppställningar.
Under hatten, tre beteendemässiga ethograms utvecklades och sedan en formel tillämpades för att skapa en approach index (AI). Resultaten indikerar att hatten och dess index, AI, är känsliga nog för att upptäcka milda och tillfälliga förändringar i svinens beteende efter en mild TBI (mTBI). Dessutom, även om specifika beteende utfall är boende beroende, minskar användningen av en AI variation och möjliggör konsekventa mätningar över laboratorier. Detta test är tillförlitligt och giltigt. HATT kan användas i många laboratorier och för olika typer av svin modeller av skada, sjukdom och ångest. Detta test har utvecklats för en optimerad manuell tidsstämpling metod så att observatören konsekvent tillbringar inte mer än 9 min på varje prov.
Mänskliga mtbi definieras ofta av funktionella underskott trots avsaknaden av globala strukturella förändringar eller betydande ödem i hjärnan1,2,3. Faktum är att i vissa mtbi patienter, är det karakteristiska kännetecknet för denna skada en förändring i deras psykologiska tillstånd i avsaknad av några neuroanatomiska förändringar4,5. Vi utnyttjade en porcin modell av mTBI6 eftersom gris hjärnor är både anatomiskt och fysiologiskt närmare människor än gnagare7, och motsvarande mätningar kan ge en relevant uppsättning gemensamma dataelement med människor.
Under de senaste åren har svin modellen fått intresset av neurotraumakirurg forskare och mTBI intressenter för prekliniska utredningar; men till skillnad från gnagare modeller av TBI, det finns bara några standardiserade beteendemässiga tester publiceras som gör det möjligt för bedömning av laboratoriet svinets Affektiva tillstånd (dvs. psykologiska tillstånd)7,8,9, 10. Ett långsiktigt mål för vårt laboratorium är att utveckla flera, kompletterande beteendemässiga Toolsets som är känsliga nog att mäta när svinen upplever subklinisk sjukdom eller när djuren är i ett prepatologiskt stressrelaterat tillstånd.
Upprepade beteendemässiga tester som mäter förändringen av Affektiva tillstånd i ett laboratorium gris kan vara bra kandidater för att särskilja ett djur med ett prepatologiskt tillstånd från friska djur. Till exempel, i-penna hattar användes för kommersiell grisproduktion för att hjälpa jordbrukare att välja friska svin med bra temperament eller ändra förvaltning och bostads strategier som orsakat ångest, skada, och sjukdom11,12. Dessa tester användes för att kvantifiera motivationen och det allmänna affektiva tillståndet hos en gris eller en grupp grisar13.
Vårt laboratorium och andra forskare mätt motivation hos svin genom att kvantifiera tre kategorier av beteenden: 1) explorativa stater som uttrycks genom nonnutritive muntliga beteenden (NNOB), där grisen använder munnen, nos, eller ansikte för att sniffa, slicka, tugga, och rot ett substrat, eller de Chomp utan substrat14,15; 2) de rumsliga förhållandena för svinen till ett objekt eller16. 3) nos riktning, som används i stället för ögonkontakt eftersom grisar har monokulära17, men närsynt vision, och de prioriterar sin luktsinne över vision18. Om en sund Pig bundsförvanter människor med belönande stimuli, uttrycker de en kickfrekvens av nnob, riktar deras näsa in mot människan och sökanden att få närmare närhet till människan11,16. Men efter sjukdom, skada, eller en påfrestande upplevelse, är motivation att söka även lustfyllt stimuli reduceras, och därmed dessa mätbara beteenden minskar sannolikt19. Svin beteende forskare noterade att anhedonia, bristen på motivation att uppleva lustfyllt stimuli, är igenkännbar och mätbara hos svin i deras hemmiljö20. Sålunda, upprepade hattar (före och efter behandling) kan fungera som en känslig åtgärd för att skilja laboratorie svin som behandlats med subconcussive mTBI från Sham-behandlade (anestesi-endast) försökspersoner. Anhedonia är en affektiv stat som TBI patienter kan uppleva21. Den hatt som används här har potential att hjälpa till att effektivisera översättningen av beteendemässiga fynd från en djurmodell till kliniskt arbete. Hattar kan administreras dagligen under loppet av ett experiment, som också kan bidra till att standardisera laboratorie svin vård för att optimera djurens välbefinnande och djurhållning22.
Här, med hjälp av hatten, beteende skillnader till följd av mTBI i mini-svin är probed. Minimera beteendemässig variation uppnåddes genom att använda noninvasiv åtgärder av hatten och gör det möjligt för svin att vänja sig vid sina hem pennor, rutinmässig hantering, och en daglig behandling. Traditionellt används en testarena för att mäta beteenden (t. ex. öppen fälttest). En in-Pen test kan vara till hjälp i laboratorier som har begränsat utrymme. Flytt och hantering av svin i en testarena kan orsaka en stressreaktion (ångest eller eustress) och potentiellt lägga till variationen av svaren på provet. En in-Pen-test tar bort den hanterings komponenten och minskar därför sannolikt variationen från hantering-stress17. Av dessa skäl som anges ovan, vi utvecklat en daglig, i-penna hatt för denna mTBI modell.
Standardiserade och kvantifierade åtgärder som på lämpligt sätt definierar det affektiva tillståndet hos djuret är viktiga aspekter när det gäller att utveckla ett nytt beteende test. Dessutom bör tester vara upprepbara över flera laboratorier. Här, för att utveckla detta protokoll, testades hatten i tre laboratoriers olika bostads system. Tre subethograms skapades för att tidsstämpel specifika beteenden från provet videor. Därefter skapades en viktad formel för att införliva de tre ethograms och möjliggöra användning av hattar över flera laboratorier. Även om detta test utvecklades och används specifikt för mini-svin som behandlats med subconcussive mTBI, de metoder och protokoll som utvecklats här kommer att ha ansökningar om att skilja skillnaden mellan en subkliniskt skadad/sjuk eller nödställda svin och en friska svin.
Beteende resultat kan påverkas av enskilda kontra gruppbostäder, fritt utrymme ersättning, vilken typ av golv som används, vilken typ av staket som används, placeringen av utfodring och vatten, defekation området, och miljön anrikning plats. Därför undersöktes tre typer av bostäder (figur 1): boendetyp A var vid Kansas State University (Manhattan, KS); bostäder typ B och C var vid Virginia Tech University (Arlington, VA). Den individuella institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC) på varje plats godkände användningen av anläggningar och förfaranden.
För att utveckla ethogram av bostäder typ a (figur 1a), Minnesota-Cross mini-svin (Boars = 7, förgylld = 1; Nationella svin forskningsresurs Center, Columbia, MO; ålder = 25,6 ± 3,66 [medelvärde ± standardavvikelse (SD)] veckor) inrymdes inomhus i enstaka pennor med djurvänligt golv (IACUC #3881). De svin som används för detta protokoll var i god hälsa hade inte behandlingar tillämpas. För att utveckla protokollet för bostäder typ B, Yucatan mini-grisar (ålder = 25,3 ± 2,80 veckor [medelvärde ± SD] var enkelinhysta (figur 1b) vid Virginia Tech anläggningar (IACUC #15-060). Djur behandlingar beskrivs på annat håll29 och inkluderade induktion av subconcussive mtbi med hjälp av Blast-Wave övertryck eller simulerad kontroller (anestesi endast). För att utveckla protokollet av bostäder typ C, fem kvinnliga Göttingen mini-grisar (ålder = 23,7 ± 1,18 veckor [medelvärde ± SD]) var par-inrymt i Virginia Tech i en stor penna (figur 1c; IACUC #15-060). De två första boende miljöerna är typiska laboratorie bostäder eller innehåller grisar med enkel inbyggnad. Boendetyp C är en atypisk bostadsmiljö som kan inhysa två eller fler grisar och kan anses vara mer av en berikad miljö än standard laboratorie bostäder. Detta protokoll kan användas över boendetyper om följande metoder följs.
Lindriga skador på hjärnan som inte resulterar i öppen anatomiska och strukturella förändringar detekterbara med State-of-the-art Imaging kan vara svårt att identifiera och behandla28. Patienter med mTBI är dock särskilt utsatta för ytterligare förolämpning som kan orsaka betydande skador på hjärnan, och därför är det viktigt att denna population identifieras. Beteendemässiga tester som utvecklats i en mini-gris modell av mtbi är särskilt relevanta för mänskliga mtbi patienter eftersom grisar har en liknande fysiologi som människor och uttrycker liknande affektiva stater, såsom likgiltighet8,9,10 ,20. Här har vi utvecklat en noninvasiv, in-Pen beteende test (hatten), och har visat att det är tillräckligt känsligt för att skilja mTBI grisar från bluff grisar. Dessutom utvecklades ett viktat index (AI) för beteenden observerade under hatten som är allestädes närvarande i olika typer av bostäder och svin.
Ändringar och felsökning:
Metoderna för hatten fastställdes baserat på etologi riktlinjer25 och flera Trial-and-error strategier för att förbättra tillförlitligheten, repeterbarhet, och giltigheten av test6. Tillförlitlighets åtgärder bidrog till att identifiera testets styrkor och begränsningar. Tillförlitlighet definierar i vilken utsträckning mätningen är repeterbar och konsekvent och fri från slumpmässiga fel28,29. Vi har tidigare rapporterat om den intra-och interobserver tillförlitlighet hatt, och med de ytterligare strukturella ethograms, reliabiliteter är lika hög (Pearson ‘ s R2 > 0,90) för varaktighet6. Frekvens-och latens åtgärder kräver utbildade observatörer, medan varaktighets åtgärderna är mindre observatörs beroende och därför mer tillförlitliga i laboratorier30.
Tillförlitlighet inom ett laboratorium och repeterbarhet mellan laboratorier är beroende av metoder. I vårt laboratorium, videosystemet inspelade kontinuerligt, var filerna ursprungligen lagras som 5-minuters filer, och några HAT sessioner inträffade över två filer. Färre misstag gjordes när den exakta tiden från databladet användes för att klippa och kombinera videorna. Innan utveckla ethogram, observatörer tilläts pausa, stoppa och spola tillbaka videofilmer till tidsstämpel alla beteenden i hela ethogram. Denna metod orsakade inte bara variation i tidsstämplar varje prov, allt från 3 min till 20 min, men mellan-och inom-observatör tillförlitlighet var också dålig för de flesta beteenden. Därför ställer vi in uppspelningshastigheten och hade observatörer tidsstämpel varje kategori i taget. Därför, när tillförlitligheten var låg i bara en kategori, observatörer självständigt retimestämplas bara kategorin snarare än hela ethogram, efter att de hört definitionerna och Footage tillsammans. De ange uppspelnings-och kategori metoder som tillåts för en konsekvent förutsägelse av hur mycket tid som behövdes för att tidsstämpel varje exempel. För projekt som sträcker sig över längre än en månad, är rutinmässig granskning av kodade videor och inom-Observer tillförlitlighet viktigt att mäta.
En annan faktor som minskar tillförlitligheten och repeterbarheten är video uppsättningen. Inledningsvis användes en handhållen kamera och ett stativ, som flyttades från penna till penna. När denna metod användes, svin behövde införas till stativ och kamera innan hatten; annars verkade svinen reagera på stativ och förflyttning mer än till test-människa. I tillägg kameravinklar som begränsas observatörens beskådar under tidsstämplar, och djup föreställningen av utrymme ökade within-och mellan-observatören variation i det rumsliga uppförandet mäter; Därför utvecklade vi protokollet med fasta kameror. När denna metod används, extra försiktighet behövs för att se till att kameran är placerad korrekt före varje test, och mer tid behövs för att ställa upp mellan varje svin session. Men vi lärde oss att den kontinuerliga video overhead system som behövs för att starta sin första inspelningen vid midnatt minst 24 h före den första hatten. Tidsstämpelvisningen för många videosystem är inte korrekt och synkroniserad ner till ramen; Därför förlitar vi oss inte längre på visnings tiderna. Midnatt börjar tillåtas för exakt Bildinsamling och videoredigering och tidsstämpel-visningen användes inte.
Dessutom var acklimatisering av svinen och inrättande av en rutin viktigt vid felsökning av detta test. I bilder av grisar som inte var väl ackliated till sina miljöer, var pacing observerades under hatten. Detta är en indikator på att svinet kan vara i ett agierat tillstånd31 i stället för i en undersökande stat32. Acklimatisering perioder av tre eller flera veckor kan minska antalet svin som takten i ett experiment. Men om pacing kvarstår under alla provtagningsperioder, kan detta ethogram behöva justeras för att inkludera promenader och stående fortfarande.
Giltighet är i vilken utsträckning en mätning utgör den avsedda omfattningen av den fråga som ställs25. När vi först utveckla hatten, använde vi bara en rumslig ethogram. Definitioner av rumsligt ethogram uppförande beskriver exakt och specifikt närheten till människan betvingar, och de berättar observatören direkt hur mycket utrymme grisen lämnar mellan honom och en människa. Men när dessa metoder behövs för att tillämpas på en ny laboratorie-set-up, vi insåg att rumsliga ethograms är laboratoriespecifika. Penn dimensioner och placeringen av andra objekt påverkar resultatet av spatial ethogram; Därför måste ett diagram med mått och detaljer i pennan publiceras om pennuppsättningen inte har rapporterats tidigare. Förutom rapportering om pen miljön, de strukturella beteenden lades till ethogram. Till skillnad från rumsliga beteenden kan strukturella beteenden utvärderas lättare mellan laboratorier. dessa beteenden har giltighet eftersom de specifikt beskriver svinens nivå av aktivt tillstånd. När en gris vilar, är det sannolikt inte motiverad att närma sig och är oförmögen att ändra positioner att närma sig så snabbt som en stående gris. På samma sätt är en gris som visar NNOB i ett undersökande tillstånd, men en gris med huvudet fortfarande stående är mer sannolikt i en katatonisk stat. Näsan orientering hjälper till med giltighet eftersom näsan, öron, och sedan ögonen är vad grisen använder för att samla in information om den mänskliga.
Begränsningar av tekniken:
En potentiell oro med denna teknik är variationen i svinens svar på test-människa. Dessutom kommer grisar titta på test-människans händer, som kan orsaka oavsiktlig cueing av den personen. Därför var dessa begränsningar uttrycks genom experimentellt testning av 1) svinens svar på en bekant mänskliga och okända människor, och 2) standardisera att efter pelleten tappas, test-mänskliga står still och placerar sina händer ur svin syn. Data visade att det inte fanns någon behandling eller behandling x tidsskillnader under hatten (tabell 2), vilket tyder på att hatten kunde administreras av antingen bekant eller obekanta människor. Andra forskare tyder på att svin tenderar att generalisera om människor baserat på tidigare interaktioner11,12,13; Därför måste en gris tidigare erfarenheter med människor vara positiva. Denna utmaning kan också åtgärdas med en vaksam experimentell design; för varje block behövs ett tillräckligt antal experimentella enheter representerade för varje behandling av intresse.
I denna studie, även om det bara fanns två erfarna observatörer tidsstämplar alla videor för alla tre bostäder typer, det fanns skillnader mellan bostäder typer för specifika beteende resultat (tabell 1). Till exempel, svin i hustyp B in i närmaste område oftare än de i boendetyper A och C. Detta beror sannolikt på en skillnad i Penn materialet; i hustyp B var framsidan av pennan en kedjekopplad grind med horisontella stänger som tillät grisen att klättra upp för grinden under hatten. Boendetyperna A och C hade å andra sidan vertikala streck och färre horisontella ytor för svinen att klättra på. Denna variation kan avhjälpas genom att lägga till varaktighets utgifterna i de nära och närmaste områdena innan de jämförs mellan olika boendetyper (tabell 1; P > 0,10). Svin i boendetyp C tillbringade dock mer tid i fjärran området än de i boendetyperna A och B (tabell 1. P < 0,05), vilket troligen berodde på placeringen av waterers på baksidan av pennan i stället för på pennans framsida. Detta är en begränsning som kan avhjälpas om laboratorier väljer att standardisera placeringen av waterers, skålar och leksaker och se till att de är fasta så att grisen inte flyttar objektet till ett annat område.
Detta test har stor tillgänglighet för laboratorier av alla slag, men, som tidigare nämnts, den manuellt stämplade rumsliga ethogram och mätningar kommer att variera mer mellan laboratorier. Icke desto mindre, kroppen-och huvud-strukturella ethograms är allestädets närvarande. Laboratorier som har tillgång till validerade, automatiserad spårning för svin kan dra nytta genom att ha spatial ethogram spåras automatiskt snarare än manuellt eftersom avståndet flyttas och hastigheten av rörelse kan vara ytterligare utfall av beteendeåtgärder från HATTEN. Begränsningarna från in-Pen-uppsättningen och traditionell teknik snarare än testområden och automatisk spårningsteknik kan avhjälpas genom att AI-formeln anpassas. AI ger standardiserade mätningar och terminologi för hur enskilda grisar använder sin penna utrymme och uttrycka intresse för en människa. Denna beräkning, som härrör från gemensamma beteendeåtgärder, är känslig för svin modeller av subconcussive mTBI och, möjligen, andra stater av subklinisk skada eller sjukdom. Dessutom minskar AI slumpmässiga variationer under experimenterande och kan lättare jämföras mellan experiment och laboratorier än metoder som förlitar sig på mer experimentetspecifika mätningar. De strukturella beteenden som grunden för denna formel, eftersom dessa beteenden är standard mätningar över behandlingar, medan de rumsliga beteenden är beroende av pennan set-up, antalet svin i en penna, och spårningssystem. Till exempel konstaterade vi att när två friska svin testas i en penna, kommer de att utföra liknande rumsliga beteenden genom att närma sig tillsammans, men grisen som följer den första kan orientera näsan mer mot sin penna Mate än mot den mänskliga och uttrycka mer NNOB , eftersom grisen som leder fungerar som Sentinel. Icke desto mindre, AI stöd för att minska denna variation även från Parade beteenden.
Även om AI är en utmärkt uppsättning verktyg för att standardisera testet över laboratorier, forskare kan fortfarande vill undersöka test-specifika beteende resultat inom ett laboratorium eller experiment, särskilt om de har tillräckligt med ström (dvs., experimentella enheter och upprepade tester) i ett enda experiment. Därför ingick tabell 1, som innehåller alla beteende resultat, variansen, distributionen och ett beräknat test för antalet djur för varje specifikt beteende. Till exempel, om forskarna har penna miljöer som tillåter grisar att konsekvent klättra under hatten och de vet att deras behandling orsakar över en 75% skillnad i klättring beteenden, då de kan motivera djur nummer baserat på variansen mätt. Om nya beteenden läggs till ethogram, kommer forskarna att behöva motivera vilka beteenden som tyder på tillvägagångssätt eller återkallande innan de införlivas i indexet. Till exempel, om de flesta av djuren i ett experiment takt längs väggarna i pennan (dvs., thigmotaxis)32, varaktigheten av detta beteende kan införlivas i kroppen-strukturell ethogram kategori. Beteendet kan representeras i det detaljerade staplade stapeldiagrammet (d.v.s. figur 5) eller i tabellform, och sedan kan det sammanfattas med Stand-still innan indexberäkningen tillämpas. AI, därför kan representera beteenden som är allmänt förekommande mellan laboratorier, men ytterligare unika beteenden kan fortfarande representeras separat.
Betydelse med avseende på befintliga metoder:
De befintliga metoderna för hatten fastställdes för svin på kommersiella gårdar för att bedöma djurens välbefinnande. Här har ett protokoll för laboratorie svin upprättats, vilket kan hjälpa forskarna att bedöma djurens välbefinnande och särskilja mTBI-grisar från simulerad svin. Ett alternativt traditionellt test kan vara att använda ett öppet fält test. Detta test användes tidigare för att bedöma svinemotionalitet och välfärd33. Öppen fälttester utformades ursprungligen för att testa de affektiva staterna av gnagare genom att mäta deras naturliga riskaversion att öppna rymden och ljus. Däremot kan friska svin se samma stimuli som aptitretande10, och efter en sjukdom, skada, eller stress behandling, de sannolikt uttrycker rädsla. Detta test kräver mer laboratorie utrymme och kommer att kräva grisar att vänja sig vid att hanteras och placeras i en öppen fält Arena. Om laboratorier har utrymme och protokoll för hantering av svinen är på plats, kan upprepade MÖSSESSIONER, förutom ett öppet fält test, bidra till att ytterligare särskilja behandlade djur från simulerad djur.
Kritiska steg inom protokollet:
De tre första stegen i protokollet är de mest kritiska för lyckade HAT-åtgärder. Sessionerna per gris tar bara 3 min; emellertid, adekvat förberedelse kommer att bidra till att göra detta test tillförlitlig. Som nämnts ovan är kamerans placering och inspelnings uppsättning avgörande för klarhet och replikering. Felaktig kameravinklar kan begränsa observatörens vision, vilket kommer att lägga till fel i mätningarna. En annan ofta förbisedd steg är fastställande av objekt i pennan. Grisen kommer att flytta ofixerade föremål, och detta kan påverka dess motivation att närma sig människan. Set-up och hantera systemet är viktiga eftersom grisar måste acklieras till sina miljöer innan de kan utföra testet konsekvent. Svin som inte är väl acklierade till sina hem pennor eller rutin eller upplever stress kommer att defecera i andra områden snarare än på baksidan av pennan34. Defekation området kan påverka deras motivation att närma sig. Från kameravyn bör observatören kunna identifiera enskilda svin. Det är dock viktigt att märkningssystemet inte har tillhandahållit information om djurets behandling, eftersom observatören25kommer att vara partisk.
Identifiera svin är mycket viktigt för att få rätt beteendedata för rätt gris, även när de är enkel-inrymt. Grisar är ofta flyttas för sina behandlingar, och en markering återförsäkrar betraktaren att de tittar på samma gris efter det har tagits bort och placeras tillbaka i sin penna. Grisar kan inhysas i par, som i hustyp C, och därför blir det mycket viktigt att identifiera svinen. Djurmärkning färger och markörer kräver daglig applicering; Därför kräver detta protokoll användning av en medicinsk kvalitet tejp och ett utstryk av tag cement. Tejpen sticker bäst till grisar med längre hår. Svin med kort hår och torr hud kommer att Slough bort tejpen oftare än grisar med längre hår.
Framtida tillämpningar:
Sammanfattnings, den noninvasiv in-Pen hatt test som beskrivs här är känslig nog för att upptäcka milda och temporala beroende förändringar hos svin efter mTBI. Dessutom har vi utvecklat ett viktat index som kallas AI för att utvärdera förändringar i svin som är inhysta i olika Penn typer, samt i olika typer av svin. Även om hatten har använts för att upptäcka förändringar hos svin som utsätts för mTBI, kan detta beteende test vara användbart för att upptäcka mätbara beteendemässiga förändringar hos djur som upplever stress eller prepatologiska tillstånd.
The authors have nothing to disclose.
Författarna skulle vilja erkänna finansiering från byrån för marin forskning (Grant #12166253). Dessutom författarna vänligt tacka djuromsorg personal, veterinärer och studenter vid Kansas State University och Virginia Tech för deras stöd under djur arbetet. Författarna vill också tacka Nadège Krebs för hennes tekniska stöd, och studenter Shelby Stair, Sarah Greenway och Mikayla Goering för deras tekniska stöd och ytterligare djuromsorg.
Dome 3.0 Megapixel Cameras with 2.8-12mm lens set between 2.8-3.2 mm | Points North Surveillance, Auburn, ME | CDL7233S | Lower mm lenses are needed for low-profile pens |
Manfrotto 244 friction arm kit | B&H Photo | B&H # MA244; MFR # 244 | To mount and secure cameras at a 90 degree angle |
Video Recording System | Points North Surveillance, Auburn, ME | NVR-RACK64 | NVR is customized |
Colored and patterned duct tape attached to a double-sided medical grade tape | MBK Tape Solutions, Chatsworth, CA | 3M 1522H | Sustainable marking of pigs |
Approach Index Formula generator | Dinasym, Manhattan, KS | Approach Formula | Company will customize macros for specific lab needs |
Geovision Software | Points North Surveillance, Auburn, ME | Geovision | Software to edit video time into 180 second clips |
Clicker | Petco | Good2Go Dog Training Clicker | |
Reward treat (feed pellet, carob chip, raisin, marshmallow) | Variable | N/A | Depending on previous exposure, adult pigs are very neophobic when new food is introduced. Limit-fed pigs can be fed a few pellets of feed. |
Statistical Analysis System (SAS) | SAS Institute, Cary, North Carolina | SAS 9.0 | Our laboratories preference for analyzing mixed models and repeated measures |
Observer 11.5 software | Noldus Information Technology, Leesburg, VA | Observer 11.5 | Software to manually timestamp video clips |