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Biology

乳腺生検する方法

doi: 10.3791/58602 Published: December 23, 2018

Summary

この記事は、コアおよび針生検を使って乳腺生検を示します。収穫された組織は、細胞培養や乳腺生理学、遺伝子発現、蛋白質の表現、蛋白質の修正、免疫組織化学、代謝物濃度を含む代謝を評価するために使用できます。

Abstract

乳腺生検は、遺伝子発現、シグナル伝達経路とタンパク質翻訳の組織学的解析を含む細胞生物学を研究する組織サンプルを収集するために研究者を許可します。この記事では、乳腺 (MG) の生検のための 2 つの手法について説明します。3 健康なホルスタイン種乳牛が被験者。腎生検の前に牛は搾乳され牛シュートでその後拘束されました。鎮痛剤 (フルニキシン、2.2 へ 1.1 mg/kg 体重) を生検する静脈 [IV] 注射 15 〜 20 分前に頸静脈を介して投与。立っている鎮静、キシラジン塩酸の (0.01 0.05 mg/体重 kg) 尾骨血管を介して注入された手順の前に 5-10 分。十分に鎮静、一度生検された無菌調製し、皮下注射を介して 2% リドカイン塩酸 6 mL でローカル麻酔。無菌技術を使用すると、2 〜 3 cm の縦切開を行った数 10 メスを使用してコアと針生検のツールを使用しました。コア生検ツールはコードレス ドリルに接続され、時計回りのドリル アクションを使用して切開 MG 組織に挿入します。針生検ツールは、切開サイトに手動で挿入されました。術後すぐにアシスタントは滅菌タオルを使用して止血を達成する 20 に 25 分切開部位に圧力をかけ。ステンレス外科ステープルは、皮膚切開を反対する使用されました。ステープルはあった削除された 10 日後プロシージャです。コアと針生検の主な利点は、両方のアプローチは健康で安全に行うことが低侵襲であるということです。生検の後乳量は影響を受ける。これらの手順は、短い回復時間を必要とし、合併症のリスクが少ない結果します。特定の制限は、生検と生検の感染後の出血などがあります。これらの技術のアプリケーションには、臨床診断と一次電池文化などの研究目的のための組織のコレクションが含まれます。

Introduction

生検は、医療の課題や研究目的から組織のコア部を収穫するための手順です。治療に対する組織の応答の解析または興味の他の要因をように安楽死1の代替として組織を収集するために低侵襲と広く使われている技法です。ウシ乳腺 (MG) 組織のサンプルが酪農研究遺伝子および蛋白質の表現、組織学、細胞細胞器官、シグナル伝達経路および管理の変化に対応した代謝プロセスを組織するために必要または環境。さらに、診断および細菌感染2によるウシ乳房炎等の特定の感染症を研究する MG のティッシュが必要です。

牛の乳房は 4 つの独立した腺を含み、各腺には実質と総称される独立したミルクの分泌システムが含まれています。肺胞、ダクト、および結合組織は乳腺の実質であります。肺胞は (内腔) の内部の表面の上皮細胞から成る顕微鏡の球状中空構造であり、特殊な筋上皮細胞 (基底) の外部の表面に。肺胞は、ミルクの合成と分泌します。各グループは小3と呼ばれ、実質内に線維性の結合組織は、肺胞の他のグループから肺胞のグループを分離できます。いくつかの要因は、開発と MG 動物生理学、栄養、管理、遺伝学、環境4などの機能に影響を与えます。乳房炎はまた MG 関数と牛乳品質5に否定的影響を与える重要な要因です。乳房炎の病原体によってリリース毒素肺胞への損傷が発生し、MG 組織6の生化学的および組織学的変更を伴う壊死を誘導します。したがって、組織や各肺胞または MG の小葉の代謝過程が他人から大幅に異なる場合があります。そのため、全体の乳腺の代表的なサンプルは、生検が望ましいです。小さな生検だけ単一の標本または結果の科学的または診断情報の制限、個々 の肺胞をキャプチャ可能性があります。研究目的のため乳腺生検組織の特性の 'スナップショット' を提供しますが、生検出来合計乳腺の見積もりの不在で合計乳腺機能で十分に認識する必要がある大量。

いくつかの生検のツールは、人間の使用のための最後の 30 年にわたって開発されています。現在、これらの商品の適応が動物で使用できます。乳牛、MG のティッシュのサンプルは、外科的切除 (鈍的切離)7生検針1,8、コア生検機器9,10などさまざまな技術を使用して取得されています。したがって、泌乳牛における MG 生検する方法 1992年7立って鎮静9、コア生検のコレクションで電気焼灼止血を使用して手術の郭清を伴うリカンベント鎮静を使用して手順から移行します。 1011,12。外科的生検は侵襲的高価になることができる血腫などの合併症の発症率が高いと、傷の問題、腫瘍転移13。現在、コア生検、針生検 (トゥルー カット生検とも呼ばれる) が広く採用されて外科的生検に代わるものとして。外科的生検と比較してコアと針生検の利点があります: 手順は、低侵襲です。主な合併症はまれです。全身麻酔は必要ありません。手順は relativley 急速です;回復時間が短いです。乳房の健康に負の影響を最小限とミルク収量および組成8,9,10にのみ短期的な影響があります。コストより少ない外科的生検13

1996 年に記述されている 1 つのコア生検の手順がなく全身麻酔9,10,11 ウシ MG から組織の代表的な量を削除するのに取り外し可能な引き込み式の刃を持つ滅菌、ステンレス製カニューレを使用 ,12。中には、楽器は低速、ツールが組織に高度な組織のコアをきれいにカットする回転を作成するコードレス ドリルに添付されました。利点はより大きい組織 (70 mm × 約 0.75 に 1 g、直径 4 mm) 9のサンプルします。最近研究10示した V. C. ファーによって記述された生検の手順9は、泌乳牛のパフォーマンスと乳房の健康に悪影響を及ぼすことがなく繰り返される MG 組織コレクションを実行する使用できます。研究14が乳牛 (31 cm 長く、外側直径 9.5 mm、内径 8 mm) より大きいトロカール内部ステンレス カニューレに適用される真空を用いた生検を収集する MG の繰り返し生検を評価するために行われた最も最近では、.このメソッドは、(キシラジン) の鎮静と局所麻酔 (2% リドカイン塩酸塩) を使用しました。

針生検は乳腺組織を収集する別の手法です。いくつかの研究は、この手法を採用しています。1 つの研究1の手順で (デトミジン) の鎮静と局所麻酔薬 (1% リドカイン) を使用しました。生検後は、牛は予防的抗生物質治療を受けた。乳腺は、搾乳の前後に手動でもんだ。牛乳に血も生検後 84 h まで認めた。量と、牛乳の組成は、時間の短い期間の影響を受けた。最近では、乳牛8繰り返される MG の生検を行うに生検針を用いた。(1% アセプロマジン、筋肉) の鎮静と局所麻酔 (2% リドカイン塩酸、皮下) を動物に投与します。プロシージャの前後に動物が乳房の薬や抗生物質の受信しませんでしたし、手術後の期間の間に生検部位の感染の兆候があった。この研究では、繰り返されるウシ MG 生検針を使用しては、乳牛の牛乳生産と乳房の健康にマイナーな負の影響を持っていた。一般的に、針生検はコア生検器械より低侵襲の方法であるようです。ただし、前述のとおり、生検手法 MG 組織の代表的なサンプルを収穫するために不可欠です。ウシ MG 組織量が少ないが (約 20 に 25 mg) を得られることは針生検の制限8,15

生検針や大きなコアを介してかどうか、ほぼ全ての研究は α 2 アゴニストの鎮静と局所麻酔薬8,9,10の組み合わせを使用しました。ウシ MG でほとんどの神経終末が皮膚に関連付けられます。実質組織への神経支配はスパース タイプの伸張受容器を介して主手術の激痛を検出する神経線維です。その結果、MG の手術操作による痛みの生理学的メカニズムは、皮膚や皮下組織3実質組織などない深い組織を介してです。したがって、生検の手順については、必要があるだけローカル麻酔皮膚と皮下組織を深部組織に局所麻酔薬の浸潤が手術の痛みを大幅に削減しないと生検領域の適切な準備の後動物の不快感は、主に、拘束に関連付けられています。

コアの大きなサンプルのコレクション血腫の形成を増加し、MG 実質内感染のリスクを高めます。したがって、周術期のプロトコルはしばしば普遍8ではありませんが注射用抗菌剤7の管理を含めます。止血も牛の罹患率を減らすための重要な要因です。前述の研究で生検サイトに適用された大規模なコア生検器14、手動圧力を使用してと牛ブラだった手順に従って少なくとも 2 時間の傷に氷を適用するために使用します。にもかかわらず、大量収穫された組織の飼料摂取量と乳量のわずかな減少が認められ, と手順は、乳牛の健康状態に悪影響を及ぼすことがなく 3 週間ごとを繰り返していた。

乳牛の MG 生検を行う研究者は結果の生検の診断や分析の品質、技術、および牛罹患率の容易さを考慮する必要があります。正確かつ事前に計画された手技は、これらの目標を達成するために不可欠であります。日には、MG 生検研究自体、生検手法を記述するのではなく、生検の結果を記述するのに焦点を当てているし、不足のレプリケーションを許可するように十分な細部が泌乳牛の説明。したがって、この作業の目的は、針生検と牛の MG 生検の安全かつ人道的なレプリケーションを許可する十分な詳細に大きなコア生検する方法の両方を記述するためだった。

Protocol

記載されているすべてのメソッドは、バージニア技術機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) によって承認されました。

1. 人事

  1. 手術と牛取り扱いの経験を持つ、少なくとも 2 つのアシスタントを持っています。
  2. すべてのアシスタントを可能であれば生きている動物上でこのプロトコルに関連付けられている手順を実行する前に、死体の素材を使用して、少なくとも 3 回列車します。
    注: トレーニングされたインストラクターによって行われるべき以前訓練し、手法を実施します。
  3. 薬剤管理の手の大動物獣医師を持っているし、イベント緊急治療がプロシージャの間に必要となります。この手順中に発生する可能性のある緊急事態が含まれますに限定されない: 出血、α 2 アゴニストの過剰摂取と肺浮腫、逆流と食材、痛み、およびさらに鎮静を必要とする患者の抵抗の吸引。

2. 手術器具、消耗品、設備の準備

  1. インベントリし、すべての機器および消耗品 (材料の表を参照) を購入します。
  2. きれいなオートクレーブ手術用ドレープ、生検機器、メス ホルダー、手術用タオル、鉗子。
  3. 適切なサイズの圧搾シュートと頭の牛を抑制するゲートがあります。
  4. 圧搾シュートに近いテーブルで作業スペースを確立します。
  5. 作業領域がきれい、牛を通してトラフィックを制限していることを確認します。
  6. 簡単にアクセスできる作業スペースの設備・備品を整理します。
  7. 作業スペース内の適切な照明を持っています。

3. 動物の準備

  1. 1 日スケジュールされた生検前に洗うし、スクラブで動物、特に肥料と汚された材料を削除する乳房。
  2. 牛の安全かつ人道的な拘束の手順に従います。
  3. 生検前と生検の時にもう一度、健康、体調と動物の行動を評価します。
    注: 最小試験には提案された手術サイトまたは細菌感染の他の領域で皮膚炎の検査と同様、温度、パルスと呼吸速度が含まれます。各四半期からの牛乳のサンプルを収集し、乳房をチェックします。
  4. 健康な牛だけを使用します。
  5. 完全に牛をミルクします。
  6. 理想的には搾乳ミルク腺の存在を最小限に抑えるための 2 h 以内の圧搾シュートに動物を移動します。
  7. ゲートの頭の動物を抑制します。

4. 鎮痛と鎮静

  1. 後方を防ぎ動きを前方に牛の頭の上には、ロープのホールターを配置します。
  2. 1 つの側面に動物の頭を引き、場所で頭を保持するクイック リリースの結び目を使用して圧搾シュートにロープを結ぶ。
  3. 70% イソプロピル アルコール綿棒で注入部をきれいおよび生検に 15 〜 20 分事前の頸静脈を介して静脈内フルニキシン (1.1 に 2.2 mg/kg 体重) を管理します。
    注: 抗炎症薬が研究結果に影響しない場合は、非ステロイド性抗炎症薬を生検後管理、一部のプロトコル。
    1. 頚静脈を探します。
    2. 頸溝の底部の圧力の適用によって頸静脈を上げます。
    3. シリンジ内に気泡がないことを確認してください。
    4. 調達の頚静脈に針を挿入し、注射器に血の 0.5 mL を 2 回描画し、内容ミックスします。注射器で血を示さない、針の再配置します。針が静脈に居住の場合は、内容を挿入します。
    5. 針を慎重に取り外します。
    6. 出血を防ぐために注入部位にガーゼに穏やかな圧力を適用されます。
  4. キシラジン塩酸塩を静脈内投与管理 (0.01 〜 0.05 mg/kg 体重) 尾の容器で約 5-10 分前に鎮静の確立のための十分な時間を許可するために生検。
    注意: は、肺水腫の兆候のための動物を確認します。肺浮腫の臨床症状は、呼吸困難、呼吸困難、呼吸困難、咳、泡状痰、青舌に含まれます。肺水腫の兆候が認められた場合は、キシラジンの影響を逆にする tolazine (2、4 mg/kg 体重) を使用することをお勧めします。
    1. 尾を上げ、70% イソプロピル アルコール綿棒で注入の部分をきれいにします。
    2. シリンジ内に気泡がないことを確認してください。
    3. 尻尾の血管に針を挿入、注射器に血の 0.2 mL を描画して針が血管に居住を確保するための内容でミックスします。針が血管に居住場合、は、注射器の内容を挿入します。
    4. 針を慎重に取り外します。
    5. 注射部位にガーゼに穏やかな圧力を適用されます。

5. 生検サイトの準備

  1. プロシージャの尾を結ぶ助手を持っています。
  2. (通常は上部領域結合組織のコレクションを最小限に抑えるため、腺の貯水タンクは、図 1に侵入を防ぐ)、乳房に生検を選択し、選択した生検から汚された材料や肥料を削除します。

Figure 1
図 1.牛の乳房生検を示すイメージこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 

  1. 観察し、生検中にこれらの船を避けるために任意の大きな皮下血管を識別するために特別な注意を払って皮膚を触診します。
  2. 15 cm × 15 cm の周辺生検から髪をクリップします。
  3. ポビドン ヨード (0.75% の利用可能なヨウ素) やクロルヘキシジン ・ グルコン酸・ スクラブで生検領域を準備します。すべての可視・不可視の残骸を削除する、少なくとも 3 回を 70% イソプロピル アルコールを代替します。無菌スクラブソリューションとインサイド アウト アプローチを使用して円動きでイソプロピル アルコールを適用します。消毒剤スクラブの解決は少なくとも 5 分間皮膚に接触に残ることを確認します。
  4. 行のブロックを作成するのにには、切開サイトで 2% リドカイン塩酸 6 mL を皮下に入金するのに蝶注入 18 G の針を設定を使用します。深部組織に浸透しません。
    注: リドカイン投与 3 と 8 mL 間で異なります。
  5. 拡散 3 に 5 分スクラブソリューションと切開する前にアルコールの別の繰り返しを実行するために局所麻酔薬を許可します。待っている間、生検器具を準備します。

6. 生検の手順

  1. 生検ツールを処理するときや切開は、無菌テクニックを使用します。
  2. すべての目に見える汚染を除去し、無菌の手術用手袋に手を洗います。
  3. 使用の順序で無菌領域に手術器具を配置します。数 10 メス、滅菌ガーゼ、組織生検装置、滅菌タオル止血用があります。
    メモ: は、コア生検を実施する手順 1 または手順 2 針生検を実施するに従ってください。

Figure 2
図 2.アセンブリおよび v. c. ファー、らによって記述されたコア生検ツールのセットアップの略図9スケール バーは 1 cm.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

  1. コア生検機器 (ファーら9)
    1. 滅菌手袋 (図 2) を使用してコア生検機器を組み立てます。
      1. 滅菌ドレープ (図 2 a) に 7 の生殖不能の作品を配置します。
      2. 作品 2 (図 2 b ) にドッキング システムに刃 (1 枚) を挿入します。
        注意: ブレード ラインに直接指を置かないでください。
      3. 作品 3 作品 2 (図 2) の上にドッキング ステーションが配置されますを確保するを挿入します。
        注: は、作品 4 (図 2 D) の内壁のドッキング システムを確認します。
      4. 作品 4 (図 2 D) のドッキング システムに刃 (1 枚) の最終的な端に従事します。
      5. 作品 4 を推進し、作品 4 作品 3 (図 2 e) の横にあるかどうかを確認します。
      6. 5 デバイス (ブレード + 2 個) で (図 2 f) を挿入します。
      7. ドッキング ステーションが整列されていることを確認 (図 2)。
      8. 2 の部分の上部に 6 を挿入 (刃の側) の反対側 (図 2 H)
      9. ドッキング ステーションが整列されていることを確認 (図 2 H)。
      10. ドッキング ステーション (図 2 i) 固定ネジ (7 個入り) に挿入します。
      11. ピース ロックするネジをカバーする 3 (ブラック) を推進します。
        注意: ブレード終了時に指を置かないでください。
      12. 作品 4 を推進ツールをアクティブ化、ツールの外側の刃を観察します。
      13. (使用の準備ができて) ツールに刃を収納する部分 4 を後方へ引きます。
        注: ツールが生検組織内の必要な距離を浸透している場合にのみ、ブレードをアクティブ必要があります。
    2. 牛が十分に鎮静、生検は十分に麻酔を確認します。反応がないように皮膚をつまみます。
    3. 皮膚と数 10 メスによる末梢から皮下組織を 2 ~ 3 cm の縦切開を確認します。
    4. 生検機器を滅菌法を用いたコードレス ドリルに取り付けます。
    5. 生検ツールに対してドリルを置き、ツールはドリルにしっかりと接続されているかどうかを確認します。
    6. すべてのプロシージャの間に尾を昇格させる個人を持っていることによって適切な拘束を確認します。
    7. 時計回りの回転と低速を使用してドリルを入れます。
      注: ドリルは生殖不能ではなく、ドリルを使用する場合、演算子は滅菌残らない。
    8. ドリル回転フリー ダイヤル中全体生検ツール (約 7.5 cm) を切開して乳房に進出します。
    9. ドリルの電源を切り、手動で拡張ツールの 4 作品。
    10. 時計回りの回転と低速を使用してドリルを入れます。
    11. 乳房から組織のコアを含む機器を削除します。
    12. 少なくとも 20 分滅菌タオルを使用して傷に強い圧力をすぐに適用されます。
      注: は、確実に十分な圧力を適用する自分の拳を使用してこれを実行助手を持っています。
    13. ピンセットを用いた生検ツールから組織を削除します。
    14. 1 x リン酸緩衝生理食塩水のサンプルをしてくださいし、組織の量を評価します。
    15. 少なくとも 30 分のための生検後牛のバイタル サインごと 10 分を取る。
    16. 生検の圧力の 20 分後の出血を確認します。血の滴りがある場合は引き続き追加の 5-10 分のための圧力を適用します。
    17. 結局のところ出血が止まり 5 mm 間隔でステンレス製のステープルを使用して切開を閉じる。5 と 8 のステープルの間を使用します。
    18. 生検領域にエアロゾル包帯を適用されます。
    19. プロシージャの後 50 分間動物を観察します。
  2. 針生検機器
    1. デバイスの製造元の指示に従ってください。
    2. 生殖不能の技術を使用してパッケージから生検針を削除します。
    3. いかなる損害が発生した場合は、針を破棄します。
    4. 針をデバイスに接続します。
    5. カバーを閉じ、デバイスをコックします。
    6. 牛が十分に鎮静、生検は十分に麻酔を確認します。反応がないように皮膚をつまみます。
    7. 皮膚と数 10 メスによる末梢から皮下組織を 1 〜 2 cm の縦切開を確認します。
      注: 生検針機器のための切開コア生検機器よりも小さい (1-2 cm) ことができます。
    8. 切開部位 (皮膚から 10 に 13 cm 前後) に生検針を挿入します。
    9. 組織を収集するために生検針デバイスをアクティブにします。
    10. 乳房から針を抜きます。
    11. 少なくとも 20 分滅菌タオルを使用して傷に即時、強力な圧力を適用されます。
    12. 組織を生検針をピンセットを使用してから削除します。
    13. 1 x リン酸緩衝生理食塩水のサンプルをしてくださいし、組織の量を評価します。
    14. 少なくとも 30 分のための生検後バイタル サインごと 10 分を取る。
    15. 生検の圧力の 20 分後の出血を確認します。
    16. 結局のところ出血が止まりステンレス ステープルを使用して切開を閉じる。
    17. 生検領域にエアロゾル包帯を適用されます。
    18. プロシージャの後 50 分間動物を観察します。

7. 後生検動物のケア

  1. 動物に投与された全ての薬物を文書化します。
    注: ミルクはプロシージャの後 36 h の期間中に破棄されます。肉回収された牛乳や肉の 4 d. 離脱期間が国または管轄権や使用される薬によって異なる場合があります。ローカル ルールと規制を確認してください。
  2. 生検後 7 〜 10 d 用ミルクの血液の存在を確認します。
  3. その後回の搾乳で生検の四半期からストリップ血栓を手し、完全な牛乳を確保する削除が発生します。
    注: 次の手順 1-3 回の搾乳の生検の四半期から血栓の存在が期待されます。牛乳に血を 1 に 6 d のため生検後なることがあります。
  4. 牛乳は、収率を観察し、可能であれば、個々 の毎日の食事の摂取量を手術ホッチキスを削除するまで。
  5. 外科ステープルを削除するまで 1 日 2 回、体温、呼吸、心拍数および態度の動物を監視します。
  6. 外科ステープルを削除するまでは、生検のサイトを毎日二度の腫れ、圧痛と排水の兆候を確認します。これらが認められた場合、獣医に相談します。
    注: は、生検を清潔に保つ、エアロゾル包帯 1 ~ 3 日おき必要に応じて再適用します。
  7. 治癒率に応じて、生検後、切開サイト 10 に 14 d からホッチキスを削除します。
  8. ローカルまたは全身感染症の兆候が認められた場合、獣医に相談します。

Representative Results

針生検生検につき 10 〜 30 mg のサンプルを生成されるこの議定書は、コア生検技法 200-600 mg の組織サンプル生産。動物は、手順の後 10 d のため 1 日 2 回を認められました。プロシージャの間にまたは正常範囲の内に残る牛の重要なパラメーターで、術後の合併症は認めなかった (平均呼吸率 31.4 ± 7.04 (SD) を = 平均心拍数、分あたり呼吸 = 1 分、平均 75.9 ± 8.9 ビート体温 38.2 ± 0.68 ° C、図 3を =)。

止血 (約 25 分) を達成するために生検地への手動圧力は、次の開いた傷は最小限の出血 (図 4) を示した。牛は、アドリブ、同じ食事を与えられた、動物は術後の期間中に同一の住宅施設で保たれました。動物は生検のサイトで感染の兆候を示さなかった。痛み、出血、腫れ、排水、または高温 (図 5) はありませんでした。生検 (図 5) の 8 と 10 d 内に傷が癒されます。

1 つの動物は、術後後 8 日目をこすり傷による軽度の皮膚刺激を開発しました。この牛は、ポビドン ヨード溶液および 70% イソプロピル アルコールを使用して生検をクリーニングによって扱われました。ステンレス製ステープル排水を許可する除去し、ポビドン ヨード軟膏 (1%) は 2 に 3 d のため生検で 1 日 2 回を適用しました。皮膚の炎症はポビドン ヨード軟膏の適用後 2 d を消失し、さらに合併症と傷治癒します。

血の塊は、ストリッピング マシン搾乳前に生検の四半期からミルクの手によって削除されました。この議定書は、生検後 3 回の搾乳 (約 36 時間) のミルクで血栓の存在が観察されました。血液汚染ミルクの生検後 48 h に観察されました。牛乳の中の血液の量を基準にしてコアと針生検の間観察視覚的な違いはありませんでした。動物 (図 6) の手順の後は、乳量の大幅な減少を示さなかった。平均乳成分は 4.37% の脂肪、3.34% 蛋白質、乳糖 4.64% だった平均乳体細胞数 (SCC) は、1 mL あたり未満 200,000 セルでした。

得られる MG 組織は、一次電池文化 (図 7) などのさまざまな研究目的に使用できます。

Figure 3
図 3.動物の健康指標の評価ウシ乳腺生検後この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。 

Figure 4
図 4.後生検サイト外観手動圧力は止血を達成するために生検領域に適用されます.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 5
図 5.生検サイト写真。(A) 生検.のプロシージャの後の 3 d のサイト(B) 生検術後. 6 d のサイトします。(C) 生検の傷が治癒された適切に示す手順の後 10 d サイトします。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 6
図 6.毎日の牛乳生産を前に、乳腺生検後 (n = 3 の牛).線形モデルの推定、生検前に 10 日間動物 23.35 kg 一日のミルクの生産します。乳量が大幅に変化しなかった (P > 0.05) から生検後 10 日前に 10 日間のわずかな増加が乳量が観測された (生検前に、10 日から毎日牛乳の 0.0005 kg/d の増加)。3 つの動物は、このプロトコルで使用されていた1 つの動物の生検 2 回 (動物 1: コア生検乳房の左側と右側乳房の生検針) と 2 つの動物はかつて生検 (動物 2 と 3: コアまたは針のプロシージャを使用して乳房の右側だけ)。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 7
図 7.主なウシ乳腺上皮細胞文化の代表的なイメージです。スケール バーは 100 μ m.この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Discussion

コア針生検の方法はこのプロトコル9,16で記述されていた。動物の健康と乳房炎14生検前に発病の詳細な評価は、両方の手順に必要です。研究のために、炎症や感染症の明らかな兆候を持つ動物のテクニックを実行することは避けてください。これは生検後合併症のリスクを軽減します。すべての生検機器および装置、消毒、清潔で生検の汚染を避けるために殺菌をする必要があります。施術前に手術部位感染 (SSI) を最小限に抑えるために必要です。一般に、SSI は動物の罹患率、低下した性能と乳牛の高い生産コストに関連付けられます。以前に報告した汚染9,14を削除する生検領域を洗浄して防腐剤 (70% アルコール、ヨウ素手術切開部位周囲の髪の毛をクリッピングを含む生検により SSI を防止する方法9, 2% クロルヘキシジン酢酸ソリューション14, 10% ポビドン ヨード8スクラブ) 皮膚の準備のため。7中または直後に生検9; いくつかの研究では、抗生物質の投与が採択されましたただし、予防的抗生物質投与は現在の仕事では使用されませんでした、生検の感染は認められなかった。生検の傷の汚染を防ぐためには、尾はエアロゾル包帯が適用されるまで、生検との接触を防ぐために保護されなければなりません。このプロトコルではステープルが生検後約 14 に 10 d を削除されます。

コア生検前にツールを設定、ドリル; を付けることが重要です。低速回転速度を選択、前方回転を選択し、ドリルのリバース モードを使用しないでください。中には、皮膚や結合組織に連絡せずツール エントリを許可するように十分な長さの切開をして皮膚の端を離れて保つために切開部の両側にデジタル圧力を使用することが重要です。この手順を行わないと、コア生検機器の回転中の切開端をドラッグ可能性があります発生し、感染症のリスクが増加し、創傷治癒を遅らせる可能性があります追加の皮膚組織の外傷を引き起こします。このプロトコルで記述されている現在の穿刺は、大型動物専門医によって行われました。手順が正常に実行された (図 5)。両方の方法が比較的容易であり、外科的切除のプロシージャと比較して実行する高速です。

乳牛8,9,10,14MG 生検後、生検部位から出血が共通しています。この議定書は、観察された出血は最小限 (図 4)、処理の直後に傷口に十分な (強い) 圧力の適用のためであります。少なくとも 20 分強い圧力が必要といくつかのケースで 30 分以上必要なことがあります。生検への圧力の適用後中等度から重度の出血が見られる場合は、圧力を継続し、すぐに獣医師に連絡することをお勧めします。

止血は、牛の罹患率を減らすための重要な要因は、1 つの研究は9の出血のコントロールに生検に止血パッドを詰め込んだ。ただし、このような方法で止血パッドの使用では、酪農環境の微生物汚染の潜在的なリスクが高いがあります。別の研究14生検生検と皮膚閉鎖後と繰り返し生検間に手動圧力を適用し、生検の後、少なくとも 2 時間サイトに氷を適用します。この議定書は、20 に 25 分の生検に適用される強力な圧力だった出血を制御する適切です。

成功生検法は、手順の後の時間の短い期間に続く牛乳で最小の血になります。ミルクの降下および乳房炎の感染症の中にミルクの分泌の中断を避けるためには、生検の四半期10,14からストリッピング手で乳房の血液凝固を削除必要があります。この議定書は、血は生検後 48 h までミルクで観察されました。ただし、動物の大きい数を使用する研究では、牛乳に血は、牛の大半で 6 日未満の観察されました。ほとんどの動物は、6 日間8後、牛乳に血を示しませんでした。このため、牛乳外観の毎日の観察は、手順の後 6 d 必要です。大きな組織サンプルは14を得られたとき、動物は乳房炎の感染の兆候を表わさなかった。しかし、針を使用して同じ動物に繰り返し生検を行う前の研究は、その乳房の感染症発生率は約 12% 次の手順8を発見しました。この議定書は、どちらも動物は術後後乳房感染の視覚的な徴候を持っていた。わずかな、また生検後、切開部位が感染のチャンスします。

鎮静の効果を逆に薬トラゾリン塩酸キシラジンから過剰摂取の場合利用できます。キシラジンの過剰な投与は肺浮腫を引き起こす可能性があります。肺浮腫の臨床症状は、呼吸困難、呼吸困難、呼吸困難、咳、泡状痰に含まれます。肺水腫の兆候が認められた場合は、キシラジンの影響を逆にする tolazine (2、4 mg/kg 体重) を使用することをお勧めします。

この議定書では、針生検と生検の両方を実行するための技術について説明します。一般に、コア生検針生検に比べての利点は乳房の健康にマイナスの影響を最小と大きい組織サンプル (0.75 に 1 g)9です。針生検は、コア生検器械より低侵襲の方法です。ただし、複数の生検組織を用いた針生検の手順は手順としてミルクの血栓後主要な出血のリスクを高める可能性がありますの量を大きくを取得しようとします。両者は最小限牛罹患率を引き起こされ、術者の最小限のトレーニングであることがわかった。毎日乳 (8 ~ 10% 減少) とコンポジション9飼料摂取量削減14の短期的な変化は、それぞれコアと針生検後期待されます。針生検の手順の制限は、組織を針で除去の少量です。計測器は、針生検組織で、複数の試みは多くの場合術後後ミルクと乳房の血液のリスクが増加、組織の十分な量を取得する必要がときにのみアクティブにする必要があります。コア生検の制限を含める場合大量ティッシュの術後後出血のリスクが高い (> 200 mg) が得られます。また、生検ツールより組み立ては難しい使用する前に適切な訓練を必要とします。

Disclosures

著者が明らかに何もありません。

Acknowledgments

この研究は、国立動物栄養プログラムとバージニア工科大学によって支持されました。さんタラ Pilonero、博士ジュリー Settlage、博士 Izabelle ・ テイシェイラのテクニカル サポートは感謝し。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
70% Isopropyl alcohol  Walmart  565106257 1 L
Aerosol spray to kill and repel flies MWI 14339 1 bottle (if necessary)
Biopsy needles, 12 G × 16 cm C. R. Bard MN1216 2
Butterfly infusion set (18 G needle) Fisher 22-258087 1
Cell culture dishes Fisher 08-772E 4
Cordless drill (low speed) Hitachi   DS10DFL  1
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996) 2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.
Cows cattle healthy
Flunixin meglumine MWI/VetOne 501018 1.1 to 2.2 mg/kg of body weight
Folding table   Amazon 1
Forceps Fisher 09-753-50 1
Gloves non-sterile  Fisher 17-200-845 9, size dependent
Hard brush  Sullivan Supply 18270 1, to wash the cows
Head gate  1, customized for dairy cows
Lidocaine hydrochloride 2% injectable  MWI/VetOne 510212 6 mL was used,  from 3 to 8 mL
Livestock body wash eZall Technologies 39384 1, to wash the cows
Needle 18 G  (1 to 1/5“) Fisher 14-821-15A 6
Needle 20 G (1 to 1/5“) Fisher 14-815-526 6
Phosphate buffered saline (0.9%) Fisher 20-012-043 1 L
Povidone Iodine ointment Jeffers #VED1A 500 g (if necessary)
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine) MWI/VetOne 510094 1 L
Reusable biopsy instrument  C. R. Bard MG1522 1
Rope halter Nasco farm and ranch C10852 2, cow size
Scalpel blades (#10) MWI 033870 2
Scalpel holders (#3) MWI 602008 1
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in. Fisher 19-130-0038 1 case of 800
Sterile cotton gauze sponges Fisher 22-037-986 4
Sterile gauze pads Fisher 19-090-735 4
Sterile surgical gloves  Surgical gloves 19-166-679 3,  size dependent
Sterile surgical towels Fisher 50-118-0339 6
Stethoscope Littmann Master Classic II 1392 1
Surgical clipper Oster A5 078005-010-003 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical clipper blades (#40 ) Oster  78919-016 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical staple remover MWI 541 1
Surgical stapler pre-loaded MWI 17713 5
Syringes of 10 mL Fisher 14-823-224 3
Syringes of 2 mL Fisher 22-028854 3
Syringes of 20 mL Fisher 22-034507 3
Syringes of 5 mL Fisher 22-028855 3
Thermometer Agri-Pro Enterprises Inc 72000 1
Tolazine hydrochloride Akorn Animal Health 61311-486-10 2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)
Tweezer  Fisher 14-955-025 1, for handle the tissue sample
Water hose Miracle-Gro, Walmart 554990501 1, to wash the cows
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg) MWI 010728 1 bottle 
Xylazine hydrochloride MWI/VetOne 510650 0.01 to 0.05 mg/kg of body weight

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References

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乳腺生検する方法
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Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).More

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