ठीक सुई आकांक्षा एक तकनीक है, जिससे कोशिकाओं को एक पतली सुई का उपयोग कर एक घाव या अंग से प्राप्त कर रहे हैं. Aspirated सामग्री गंदा, दाग और निदान के लिए एक माइक्रोस्कोप के तहत जांच की है या आणविक जीव विज्ञान, साइटोमेट्री या इन विट्रो विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया। यह सस्ता है, सरल, जल्दी और कम से कम आघात का कारण बनता है.
ठीक सुई आकांक्षा (FNA) एक नियमित नैदानिक प्रक्रिया दोनों चिकित्सा और पशु चिकित्सा प्रथाओं के लिए आवश्यक है. यह कोशिकाओं और / या स्पष्ट जनता, अंगों या बहाव (एक शरीर गुहा में द्रव संचय) से कोशिकाओं और / या सूक्ष्मजीवों के percutaneous आकांक्षा के होते हैं एक पतली सुई शिरापरक पंचर के लिए इस्तेमाल किया नियमित सुई के समान का उपयोग कर. FNA द्वारा एकत्र सामग्री सामान्य अत्यधिक सेलुलर में है, और पुनः प्राप्त aspirate तो गंदा है, हवा सूखे, गीला तय, दाग और एक माइक्रोस्कोप के तहत मनाया. नैदानिक संदर्भ में, FNA एक महत्वपूर्ण नैदानिक उपकरण है कि उचित चिकित्सीय प्रबंधन के लिए एक गाइड के रूप में कार्य करता है. क्योंकि यह सरल है, तेज, न्यूनतम इनवेसिव और प्रयोगशाला और मानव संसाधनों में सीमित निवेश की आवश्यकता है, यह बड़े पैमाने पर पशु चिकित्सकों द्वारा प्रयोग किया जाता है, ज्यादातर घरेलू में, लेकिन यह भी खेत जानवरों में. पशु मॉडल का उपयोग कर अध्ययन में, FNA लाभ है कि यह एक ही जानवर में बार बार प्रदर्शन किया जा सकता है, ट्यूमर और अंगों से कोशिकाओं के संग्रह के माध्यम से अनुदैर्घ्य अध्ययन को सक्षम करने / नियमित माइक्रोस्कोपी के अलावा, पुनः प्राप्त सामग्री भी इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, जैव रासायनिक विश्लेषण, प्रवाह साइटोमेट्री, आणविक जीव विज्ञान या इन विट्रो परख के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। FNA संक्रमित चूहों के gonads में प्रोटोज़ोअन परजीवी Trypanosoma brucei की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, पशुओं में भविष्य के निदान के लिए संभावना खोलने.
ठीक सुई आकांक्षा (FNA) व्यापक रूप से कैंसर और गैर neoplastic रोगों के निदान में प्रयोग किया जाता है, दोनों मानव और घरेलू पशुओं में. इस तकनीक का मानकीकरण पिछले कुछ वर्षों में किया गया है और इसका वर्णन अनेक पाठ्यपुस्तकों1,2में किया गया है .
यह काफी हद तक एक खाली सिरिंज पर फिट एक पतली सुई के साथ स्पष्ट जनता, अंगों या बहाव के percutaneous आकांक्षा के होते हैं, बड़े पैमाने पर1,3से कोशिकाओं या तरल पदार्थ को वापस लेने के लिए नकारात्मक दबाव का उपयोग कर. सुई आम तौर पर कर रहे हैं 22 करने के लिए 25 जी (सूई आंतरिक व्यास के लिए इसी गेज), और एक बड़ा बोर सुई का उपयोग (बड़े व्यास, उदा., 21 जी) सेलुलरता को बढ़ाने के लिए उपयोगी है, हालांकि यह अत्यधिक रक्त संदूषण का उत्पादन कर सकते हैं. सुई लंबाई द्रव्यमान की गहराई पर निर्भर करेगा, लेकिन 1 या 11 डिग्री 2 इंच आमतौर पर सतही जनता के लिए प्रयोग किया जाता है. Syringes आम तौर पर कर रहे हैं 5 से 10 एमएल, बड़ा सिरिंज उच्च वैक्यूम प्राप्त करने के साथ, जो बारी में aspirate उपज बढ़ जाती है. गैर palpable गहरी बैठा जनता भी अब सुइयों के साथ और छवि मार्गदर्शन (अल्ट्रासोनोग्राफी) के तहत, aspirated किया जा सकता है। पुनः प्राप्त ऐस्पायर को स्मीयर किया जा सकता है, वायु शुष्क, गीला-फिक्स्ड, दाग और एक सूक्ष्मदर्शी के नीचे देखा जा सकता है ताकि निदान3 (चित्र1) प्राप्त किया जा सके।
यह एक सरल, सस्ती, दर्द रहित और न्यूनतम इनवेसिव तकनीक मुख्य रूप से स्पष्ट जनता पर और भी अंगों के लिए एक निदान प्राप्त करने के लिए preoperative सेटिंग में इस्तेमाल किया है, लिम्फ नोड्स की तरह, थायराइड, प्रोस्टेट या यहां तक कि बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं 1. नैदानिक उपकरण होने के अलावा, इस तकनीक का उपयोग कोशिकाओं के संग्रह के लिए अन्य प्रयोजनों के लिए भी किया जा सकता है, जैसे साइटोजेनेटिक्स, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (चित्र 1D), प्रवाह साइटोमेट्रिकलक्षण4,5 6,7, सेल संस्कृतियों की स्थापना8. नैदानिक अभ्यास में एक सामान्य उदाहरण इन विट्रो निषेचन 9 के लिए शुक्राणु पुनर्प्राप्तिहै.
आकांक्षा कई स्मीयर प्राप्त करने के लिए एक ही द्रव्यमान में कई बार दोहराया जा सकता है। विषम घाव, जैसे, एक ठोस क्षेत्र और सिस्टिक स्थान के मामले में, यह महत्वपूर्ण है कि कोशिकाओं को प्रत्येक क्षेत्र से प्रेरित किया जाता है। FNA द्वारा एकत्र सामग्री सामान्य अत्यधिक सेलुलर में है, जो ज्यादातर मामलों में एक ऊतक बायोप्सी के लिए आवश्यकता के बिना रोगों के निदान के लिए अनुमति देता है. विशेष दाग, इम्यूनोफ्लोरेसेंस। इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री (चित्र 1 डी) और आणविक तकनीक भी FNA के माध्यम से प्राप्त स्मीयर में प्रदर्शन किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, संक्रामक एजेंटों की पहचान के लिए जब केवल आकारिकी द्वारा पहचानने योग्य नहीं10. सामान्य अनुप्रयोगों और FNA के लिए आवश्यक उपकरणों और आपूर्ति का एक संक्षिप्त अवलोकन टेबल्स 1 और 2में क्रमशः संक्षेप कर रहे हैं.
नैदानिक प्रयोजनों के लिए सुई पंचर के उपयोग पर पहली रिपोर्ट अरब चिकित्सा के प्रारंभिक लेखन में वर्णित है, लेकिन यह जल्दी 20 वीं सदी में है कि आधुनिक सुई आकांक्षा तकनीक11लागू किया गया. विशेष रूप से, शायद पहली रिपोर्ट है कि संक्रामक रोगों के निदान के लिए FNA के उपयोग से पता चलता है 1904 में एक अध्ययन किया गया था, जहां ग्रिग और ग्रे नींद की बीमारी के साथ रोगियों से लिम्फ नोड्स की सुई आकांक्षाओं की सूचना दी गतिशील trypanosomes 12 पता चला . लेखकों दोनों जल्दी और उन्नत मामलों में trypanosomes की उपस्थिति की सूचना दी, और रक्त स्मीयर में देखा है कि, जहां इन अक्सर दुर्लभ घटनाओं12की तुलना में एक उच्च घनत्व पर.
पशुओं में ट्रिपैनोसोमासिस का वर्तमान निदान रक्त में परजीवी के प्रत्यक्ष अवलोकनपर निर्भर करता है , लसीका या प्रतिरक्षा निदान तकनीक 13,14,15. हम पहले से पता चला है कि माउस में प्रयोगात्मक Trypanosoma संक्रमण में, Trypanosoma brucei (टी brucei) वसा ऊतक के लिए एक उल्लेखनीय tropism है16 और भी बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं में से कुछ के लिए, अर्थात् एपिडिडिमिस17| परजीवी इन ऊतकों के स्ट्रोमा में बडी संख्या में16जमा होते हैं .
नीचे चित्रित प्रोटोकॉल लाइव चूहों में FNA के लिए एक विस्तृत कदम दर कदम तकनीकी प्रक्रिया का वर्णन करता है, बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं में मौजूद trypanosomes की आकांक्षा के उद्देश्य से (परीक्षण, epididymis, और epididymal वसा), उसके बाद विशिष्ट परजीवी प्रोटीन (वीएसजी)16,17के लिए पारंपरिक कोशिका विज्ञान और इम्यूनोस्टेनिंग . आकांक्षा संक्रमण और सुरक्षा प्रक्रियाओं है कि लागू करने के बाद 6 दिन प्रदर्शन किया गया था उन आमतौर पर प्रयोगात्मक जानवरों की नियमित हैंडलिंग के लिए स्थापित कर रहे हैं. अवसरवादी रोगजनकों के आकस्मिक जोखिम को कम करने के लिए अतिरिक्त उपायों की आवश्यकता है कि प्रतिरक्षा की कमी है (एक भाप बाँझ गाउन, मुखौटा, बाल बोनट, बाँझ दस्ताने, और हर समय aseptic तकनीक सुनिश्चित करने के पहने हुए).
ठीक सुई आकांक्षा (FNA) एक विधि व्यापक रूप से मानव और घरेलू पशुओं में रोग का निदान करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस तकनीक का मानकीकरण कई वर्षों में1,2किया गया है , जो एक स्पष्ट द्रव्यमान या अंग1,3से कोशिकाओं या तरल पदार्थ के लिए एक छोटी बोर सुई का उपयोग करता है . aspirate तो आम तौर पर एक गिलास स्लाइड पर smeared है और सूक्ष्म अवलोकन के लिए दाग एक निदान प्राप्त करने के लिए, लेकिन तकनीक भी अन्य प्रयोजनों के लिए कोशिकाओं को पुनः प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता4,5,6, 7 , 8 , 9.
प्रक्रिया त्वरित है (lt;5 मिनट प्रति माउस, एक अनुभवी शोधकर्ता के लिए) और जटिलताओं का खतरा कम है, जब सरल शिरापरक पंचर के दौर से गुजर जोखिम के समान. इस कारण से, स्पष्ट जनता के FNA के लिए, संज्ञाहरण केवल संवेदनशील परमाणु स्थानों के लिए आवश्यक है या जब जानवर का एक अच्छा immobilization और अंग या बड़े पैमाने पर aspirated किया जा करने के लिए स्थिरीकरण इष्टतम परिणामों के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है. यह छोटे प्रयोगशाला जानवरों के लिए अक्सर है, एक हाथ से एक छोटे कृंतक के सुरक्षित और प्रभावी संयम के रूप में, जबकि दूसरे हाथ से आकांक्षा के लिए क्षेत्र के लिए सबसे अच्छा उपयोग सुनिश्चित करने, संज्ञाहरण के बिना प्राप्त करने के लिए मुश्किल है. अल्पकालिक संज्ञाहरण ज्यादातर मामलों में पर्याप्त है, फिर भी आवश्यक, माउस में एक अच्छा FNA के लिए. एक अच्छा स्थिरीकरण घाव के सेलुलर घटकों का प्रतिनिधि है और नकारात्मक दबाव लागू किया जाता है, जबकि सुई की नोक externalizing की संभावना को कम करता है कि एक aspirate प्राप्त करने की संभावना को अधिकतम करता है।
हालांकि प्रक्रिया ही बहुत सरल है, समन्वित आवेदन और निर्वात की रिहाई सबसे महत्वपूर्ण कदम हैं. सुई की प्रविष्टि के बाद, सिरिंज का प्लंजर एक नियंत्रित वैक्यूम (सक्शन) को प्राप्त करने के लिए वापस ले लिया जाता है, और सुई को केवल प्लंजर के जाने देकर नकारात्मक दबाव को छोड़ने के बाद द्रव्यमान से हटाया जा सकता है (चित्र 2; अन्यथा aspirate सिरिंज की बैरल में चूसा है और फिर ठीक करने के लिए बहुत मुश्किल है. एक और बहुत ही महत्वपूर्ण कदम उच्च गुणवत्ता वाले स्मीयर की तैयारी है। एक धब्बा बनाने के लिए विभिन्न तरीके हैं, लेकिन विधि की परवाह किए बिना, सामग्री को कांच पर रखा गया है के तुरंत बाद स्मीयर तैयार किया जाना चाहिए। कोशिका-क्रश कलाकृतियों से बचने के लिए जैविक सामग्री को धीरे से फैलाया जाना चाहिए। स्प्रेडर के रूप में एक कवरस्लिप का उपयोग इन कलाकृतियों को रोकने में मदद कर सकता है। हालांकि, स्मीयर बनाते समय बहुत अधिक बल का उपयोग कवरस्लिप को तोड़ देगा। एक अच्छी गुणवत्ता स्मीयर आम तौर पर सेल आबादी के सबसे मोनोलेयर के रूप में वितरित किया है ताकि वे आसानी से प्रकाश संचारित कर सकते हैं. सेलुलर सामग्री को रक्त के थक्के में जरूरत से ज्यादा नहीं फंसना चाहिए।
एक FNA का लक्ष्य एक बड़े पैमाने पर, ऊतक या अंग से कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए है. बड़ा बोर सुइयों का उपयोग सेलुलरता बढ़ाने के लिए उपयोगी है, लेकिन अत्यधिक रक्त संदूषण के साथ जुड़ा हो सकता है, जबकि छोटी सुइयों के साथ नमूना उच्च गुणवत्ता पैदावार, हालांकि कम प्रचुर मात्रा में सामग्री. हमारे मामले में, चूहों में बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं की percutaneous आकांक्षा टी bruceiसे संक्रमित प्रयोगात्मक, 22 गेज सुइयों के साथ एक 5 एमएल सिरिंज के साथ किया गया था. चूहे एनेस्थेटाइज किए गए थे, वृषण एक हाथ और पंचर और आकांक्षा निर्देशित और दूसरे हाथ से प्रदर्शन के साथ स्थिर हो गया था। हमने रोगाणु कोशिकाओं, शुक्राणुओं, उपकला कोशिकाओं और स्ट्रोमल कोशिकाओं के साथ एडिकेंड किए गए कई ट्रिपेनोसोम प्राप्त किए, जिन्हें परजीवी की सतह प्रोटीन (वीएसजी) (चित्र4) के लिए स्मीयर और प्रतिरक्षा युक्त किया गया था।
वहाँ हमेशा aspirates नकारात्मक परिणाम उपज में संभावित नमूना त्रुटि है क्योंकि हालांकि एक दिया घाव के कई क्षेत्रों में कई बार नमूना किया जा सकता है, यह एक अंधा आकांक्षा है जहां हम सुई टिप और लक्ष्य अंग या बड़े पैमाने पर कल्पना नहीं है. यह एक नैदानिक सेटिंग में अत्यंत प्रासंगिक है, जहां एक संदिग्ध घाव के एक नकारात्मक FNA आगे की जांच को दूर नहीं करता है, लेकिन यह रोग के पशु मॉडल में इतना प्रासंगिक नहीं है। इस प्रकार, सामान्य सीमाओं में मुख्य रूप से गलत नकारात्मक परिणाम शामिल हैं, और कम बार झूठी सकारात्मक परिणाम (जैसे, रक्त संदूषण से), लेकिन पशु प्रयोग की स्थापना में सबसे महत्वपूर्ण सीमा ऊतक पर जानकारी की कमी है वास्तुकला17,जैसे हम हिस्टोपैथोलॉजी के साथ है, जैसे परजीवी के वितरण पैटर्न, प्रतिरक्षा कोशिकाओं की, और सेल सेल बातचीत सुविधाओं. फिर भी, लाभ कर रहे हैं कि FNA एक गैर-टर्मिनल समय पर एक ही जानवर में दोहराया नमूने के लिए अनुमति देने की प्रक्रिया है और हमेशा बेहतर संरक्षित सेलुलर आकारिकी के लिए अनुमति देता है (चित्र 5). मेजबान कोशिकाओं की कटाई के लिए FNA के लिए विकल्प, एक माउस से प्रतिरक्षा कोशिकाओं या सूक्ष्मजीवों हमेशा बड़े पैमाने पर या ब्याज के अंगों को इकट्ठा करने के लिए माउस euthanizing पर भरोसा करते हैं.
हमारे ज्ञान के लिए, वहाँ केवल छोटे प्रयोगशाला जानवरों में FNA के उपयोग पर कुछ रिपोर्ट कर रहे हैं, 1949 से एक हेमेटोपोइसिस का अध्ययन करने के लिए 22 जी सुई के साथ अस्थि मज्जा की आकांक्षा के लिए इसी18, और प्रवाह साइटोमेट्री के साथ संयोजन में अन्य सभी के लिए या तो ट्यूमर से जुड़े भड़काऊ कोशिकाओं या endothelial कोशिकाओं7,19,20मात्रा में . हमारे काम से पता चलता है कि इस तकनीक के निदान और संक्रामक रोग मॉडल के अध्ययन के लिए बढ़ाया जा सकता है और इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री या इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी जैसी तकनीकों के साथ साइटोलॉजी गठबंधन कर सकते हैं. प्रयोगात्मक पशुओं में विधि के प्रमुख लाभों में से दो हैं: (1) यह प्रक्रिया टर्मिनल नहीं है, यानी, लाइव चूहों में किया जा सकता है; और (2) अपनी हल्के गंभीरता के कारण यह एक ही जानवर में धारावाहिक आकांक्षाओं के लिए अनुमति देता है. इसलिए कम चूहों प्रत्येक अध्ययन के लिए आवश्यक हैं, और नैदानिक रोग की प्रगति और सेलुलर और एक रोग के आणविक सुविधाओं के विकास के बीच संबंध और /
शायद एक संक्रामक रोगों के निदान के लिए FNA के उपयोग पर पहली रिपोर्ट Grieg और ग्रे द्वारा 1904 में एक अध्ययन है कि नींद की बीमारी के साथ रोगियों से लिम्फ नोड्स की सुई आकांक्षाओं की रिपोर्ट है, जो गतिशील trypanosomes12से पता चला . यदि प्रयोगशाला चूहों में हमारे निष्कर्ष पशुओं के लिए अनुवाद मिल जाए, यानी, कि अगर Trypanosoma आसानी से बाहरी पुरुष प्रजनन संरचनाओं से FNA द्वारा नमूना किया जा सकता है, एक उम्मीद कर सकते हैं कि इस तकनीक पशु के निदान के लिए पशु चिकित्सकों के लिए उपयोगी हो जाएगा ट्राइपैनोसोमासिस इन-फार्म, पशुधन में।
The authors have nothing to disclose.
इस परियोजना के Fundos के माध्यम से Funda$o पैरा एक Cicncia ई एक Tecnologia (FCT) / Ministerrio दा Ci$ncia, Tecnologia ई Ensino सुपीरियर (MCTES) Fundos के माध्यम से वित्त पोषित किया गया था Oramento de Estado (ref.: ID/BIM/50005/2019). LMF Funda$o पैरा के एक अन्वेषक है एक Ci$ncia ई Tecnologia (IF/01050/2014) और प्रयोगशाला ईआरसी द्वारा वित्त पोषित है (FatTryp, ref.771714). इस कार्य का प्रकाशन भी UID/BIM/50005/2019 परियोजना Funda$o पैरा एक Ci$ncia ई एक Tecnologia (FCT) / Minist-rio दा Ci$ncia, Tecnologia ई Ensino सुपीरियर (MCTES) के माध्यम से Fundos do Oramento de Estado द्वारा वित्त पोषित परियोजना वित्त पोषित किया गया था. हम संक्रमित चूहों से ऊतकों को साझा करने के लिए विशेषज्ञ इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सहायता के लिए आई एमएम की ऊतक विज्ञान और तुलनात्मक पैथोलॉजी प्रयोगशाला से आंद्रेई पिंटो को धन्यवाद देते हैं, और सैंड्रा ट्रिंडेड, तियागो रेमिलो और हेनरिक मैकाडो (आईएमएम)।
Atipamezole (ANTISEDAN 10 mL) | Bio 2 | 7418046 | Anesthesia reversal |
Cover slips (24 x 60 No.1) | VWR | 631-0664 | Smear making |
DAB | Dako | K3468 | Immunocytochemistry |
Entellan (500 mL) | VWR | 1.07961.0500 | Mounting media |
Envision Flex antibody diluent | Dako | 8006 | Immunocytochemistry |
EnVision Flex conjugated w/ HRP (anti-rabbit) | Dako | K4010 | Immunocytochemistry |
Envision Flex Wash Buffer | Dako | K8007 | Immunocytochemistry |
Giemsa stain | Atom Scientific Ltd | RRSPSS-A | Smear staining |
Glass slides (Superfrost Plus) | VWR | 631-9483 | Smear making |
Harris Haematoxylin | Bio-optica | 05-06004E | Immunocytochemistry |
Hydrogen Peroxidase solution | Sigma | H1009-500ML | Immunocytochemistry |
Hypodermic needles Microlance 3 (23G) | Henry Schein | 902-8001 | Aspiration technique |
Ketamin (IMALGENE 1000 – 10 mL) | Bio 2 | 7410928 | Anesthesia |
Medetomidine (DOMITOR 10 mL) | Bio 2 | 7418335 | Anesthesia |
Methanol | Merck | 1.06009.2511 | Smear fixative |
Pap pen | Merck | Z377821-1EA | Immunocytochemistry |
Protein Block Serum free | Dako | X0909 | Immunocytochemistry |
Syringes (5 mL, 10 mL) | Henry Schein | 900-3311, 900-3304 | Aspiration technique |