细针吸入是一种技术,通过这种技术,细胞从病变或器官使用薄针获得。吸气材料在显微镜下进行涂片、染色和检查,用于诊断或用于分子生物学、细胞学或体外分析。它便宜,简单,快速,造成最小的创伤。
细针吸入(FNA)是一种常规诊断程序,对医疗和兽医实践都至关重要。它包括细胞和/或微生物从可察觉的质量,器官或液化(液体积累在体腔)使用类似于用于静脉穿刺的常规针的皮面吸入。FNA收集的材料一般是高细胞的,检索到的吸气液然后被涂片、风干、湿固定、染色并在显微镜下观察。在临床环境中,FNA 是一种重要的诊断工具,可作为适当治疗管理的指南。因为它简单、快速、微创,需要在实验室和人力资源方面进行有限的投资,因此兽医工作者广泛使用,主要在国内,但也用于农场动物。在使用动物模型的研究中,FNA的优点是可以在同一动物中重复进行,从而通过在疾病过程中从肿瘤和器官/组织中收集细胞进行纵向研究。除了常规显微镜外,检索到的材料还可用于免疫细胞化学、电子显微镜、生化分析、流式细胞测定、分子生物学或体外检测。FNA已用于识别受感染小鼠的鼠群中的原生动物寄生虫锥虫,为今后在牛身上进行诊断提供了可能性。
细针吸入(FNA)被广泛用于诊断癌症和非肿瘤疾病,包括人类和家畜。这项技术已经标准化多年,并在许多教科书1,2中描述。
它主要由可察觉的质量、器官或输液体在空注射器上安装的薄针的皮面渴望组成,使用负压从质量1、3中排出细胞或液体。针通常为 22 至 25 G(与针内径对应的量表),使用较大的孔针(例如 21 G)有助于增加细胞性,尽管这会产生过多的血液污染。针的长度取决于质量的深度,但 1 或 11⁄2 英寸通常用于表面质量。注射器通常为 5 到 10 mL,较大的注射器实现更高的真空,进而增加吸气率。非可察觉的深层质量也可以吸气,用更长的针头和图像指导(超声检查)。检索到的吸气物随后可以涂抹、风干、湿固定、染色并在显微镜下观察,以达到诊断 3(图1)。
这是一种简单、廉价、无痛和微创的技术,主要用于术前设置,用于在可察觉的肿地和器官(如淋巴结、甲状腺、前列腺甚至外部男性生殖结构)上实现诊断1.除了作为诊断工具,该技术还可用于收集细胞用于其他目的,即细胞遗传学,电子显微镜(图1D),流细胞表征4,5 ,6,7, 建立细胞培养8。临床实践中的一个常见例子是体外受精的精子检索9。
渴望可以在同一质量中重复几次,以获得多个涂片。在异质病变的情况下,例如,固体区域和囊肿空间,重要的是细胞从每个区域吸气。FNA收集的材料一般是高细胞的,在大多数情况下,这允许诊断疾病,而无需组织活检。特殊污渍,免疫荧光。免疫细胞化学(图1D)和分子技术也可在通过FNA获得的涂片中进行,例如,在无法仅通过形态学识别时识别传染性病原体。表1和表2分别概述了FNA所需的一般应用以及所需的设备和用品的简要概述。
关于针穿刺用于诊断目的的第一份报告在阿拉伯医学的早期著作中进行了描述,但早在20世纪初,现代针吸气技术就被应用了11个。值得注意的是,也许第一份报告,建议使用FNA诊断传染病是在1904年的一项研究,其中格里格和格雷报告从睡眠病患者淋巴结的针头愿望显示移动性锥体12.作者报告说,在早期和晚期病例中,锥体存在,密度高于血涂片中,这些往往是罕见的事件12。
目前对牛锥虫病的诊断依赖于对血液、淋巴或免疫诊断技术13、14、15中寄生虫的直接观察。我们之前已经表明,在实验锥虫瘤感染在小鼠,锥虫瘤布鲁比(T.布鲁西)有一个显着的对流肌组织16和一些外部男性生殖结构,即表皮米斯17。寄生虫大量积累在这些组织的频闪中16。
下文所述的议定书描述了活体小鼠FNA的详细分步技术程序,旨在达到存在于外部雄性生殖结构(睾度、表皮和表皮脂肪)中的锥体,然后常规细胞学和免疫染色特定寄生虫蛋白(VSG)16,17。在感染后6天进行吸入,应用的安全程序是通常为常规处理实验动物而建立的。对于免疫缺陷的动物(穿着蒸汽消毒袍、面罩、发帽、无菌手套,并确保随时采用无菌技术),需要采取其他措施,以减轻偶然性病原体的意外接触。
细针吸入(FNA)是一种广泛用于诊断人类和家畜疾病的方法。这项技术已经标准化多年1,2,它利用小孔针吸出细胞或液体从明显的质量或器官1,3。吸气通常涂抹在玻璃幻灯片上,并染色进行显微观察,以求得到诊断,但该技术也可用于检索细胞用于其他目的4、5、6、7,8,9.
该过程快速(对于有经验的研究人员而言,每只小鼠只需 5 分钟),并发症的风险最小,类似于接受简单的静脉穿刺时发生的风险。因此,对于可察觉的FNA,麻醉只适用于敏感的解剖位置,或者当动物的良好固定和器官或质量的稳定被吸入对最佳结果至关重要时。对于小型实验室动物来说,这种情况经常发生,因为一方面用安全和有效的限制小啮齿动物,另一方面确保最佳进入该地区进行吸入,如果没有麻醉,就很难实现。短期麻醉在大多数情况下是足够的,尽管如此,在鼠标良好的FNA是必要的。良好的固定性可最大化获得代表病变细胞成分的吸气的机会,并在施加负压时将针头外化的机会降至最低。
虽然程序本身非常简单,但协调应用和释放真空是最关键的步骤。插入针头后,注射器的柱塞被缩回,以达到受控的真空(吸力),并且针头只有在释放负压后才能通过释放柱塞从质量中取出(图2);否则吸气被吸入注射器的桶中,然后很难恢复。另一个非常重要的步骤是准备高质量的涂片。涂片的方法有多种,但无论采用何种方法,在将材料放在玻璃上后应立即准备涂片。生物材料应轻轻展开,以避免细胞粉碎伪影。使用盖玻片作为扩展器有助于防止这些伪影。然而,在进行涂片时用力过大会破坏盖玻片。高质量的涂片通常将大多数细胞群作为单层分布,以便它们能够轻松传输光。细胞材料不应过度滞留在血块中。
FNA的目标是从质量、组织或器官中收集细胞。使用较大的孔针有助于增加细胞性,但可能与过度的血液污染有关,而使用较小的针头取样会产生更高的质量,尽管材料不太丰富。在我们的例子中,在实验性感染T.Brucei的小鼠中,外部雄性生殖结构的皮皮渴望,用22口径的针头与5mL注射器耦合进行。小鼠被麻醉,睾号稳定与一只手和穿刺和吸入引导和进行另一只手。我们检索到许多与生殖细胞、精子动物、上皮细胞和基质细胞混合的锥体体,这些细胞被涂片和免疫染色,用于寄生虫的表面蛋白(VSG)(图4)。
吸气中总是有潜在的采样误差,从而产生阴性结果,因为尽管给定病变的多个区域可以多次采样,但这是我们不形象化针头和目标器官或质量的盲目愿望。这在临床环境中是极其相关的,在临床环境中,对可疑病变的阴性 FNA 并不排除进一步调查,但它在动物疾病模型中不是那么相关。因此,一般限制主要包括假阴性结果,以及较少见的假阳性结果(例如,血液污染),但在动物实验设置方面最重要的限制是缺乏组织信息架构17,就像我们与组织病理学,例如寄生虫的分布模式,免疫细胞,和细胞-细胞相互作用特征。然而,好处是FNA是一个非终端程序,允许在同一动物的多次采样,并始终允许更好的保存细胞形态(图5)。FNA的替代品用于从小鼠身上采集宿主细胞、免疫细胞或微生物,总是依靠对小鼠实施安乐死来收集感兴趣的质量或器官。
据我们所知,关于FNA在小型实验室动物中使用的报告只有几个,一个从1949年对应于骨髓的愿望与22G针研究造体细胞18,所有其他结合流细胞测定量化肿瘤相关炎症细胞或内皮细胞7,19,20。研究表明,该技术可以推广到传染病模型的诊断和研究,并能将细胞学与免疫细胞化学或电子显微镜技术相结合。实验动物方法的两个主要优点是:(1)本程序不终端,即可在活小鼠中进行;和 (2) 由于其轻度严重性,它允许在同一动物的序列渴望。因此,每次研究需要的小鼠较少,临床疾病的进展与疾病和/或微生物的细胞和分子特征的进化之间的相关性很容易进行,从而进行纵向研究。
也许关于使用FNA诊断传染病的第一份报告是格里格和格雷在1904年的一项研究,该研究报告昏睡病患者对淋巴结的针头渴望,其中揭示了莫平锥体12。如果我们在实验鼠身上的发现被翻译成牛,也就是说,如果FNA可以很容易地从外部雄性生殖结构中取样,人们可以预期,这项技术对兽医诊断动物将非常有用农场内锥虫病,牲畜。
The authors have nothing to disclose.
该项目由”国家电信基金会”/”国家基金会”(Tinnologia)/国家基金会(Tnologia e Ensino 高级基金会)通过”埃斯塔多基金会”(参考:ID/BIM/50005/2019)资助。LMF是国际实验室(IF/01050/2014)的调查员,实验室由ERC资助(FatTryp,参考文献771714)。这项工作的出版还资助了UID/BIM/50005/2019项目,该项目由”技术基金会”/”技术基金会”(FCT)/国家电信基金会(MCTES)通过”奥萨门托·德埃斯塔多基金会”资助。我们感谢iMM组织学和比较病理学实验室的安德烈娅·平托为专家提供电子显微镜帮助,感谢桑德拉·特林达德、蒂亚戈·雷贝罗和恩里克·马查多(iMM)分享受感染小鼠的组织。
Atipamezole (ANTISEDAN 10 mL) | Bio 2 | 7418046 | Anesthesia reversal |
Cover slips (24 x 60 No.1) | VWR | 631-0664 | Smear making |
DAB | Dako | K3468 | Immunocytochemistry |
Entellan (500 mL) | VWR | 1.07961.0500 | Mounting media |
Envision Flex antibody diluent | Dako | 8006 | Immunocytochemistry |
EnVision Flex conjugated w/ HRP (anti-rabbit) | Dako | K4010 | Immunocytochemistry |
Envision Flex Wash Buffer | Dako | K8007 | Immunocytochemistry |
Giemsa stain | Atom Scientific Ltd | RRSPSS-A | Smear staining |
Glass slides (Superfrost Plus) | VWR | 631-9483 | Smear making |
Harris Haematoxylin | Bio-optica | 05-06004E | Immunocytochemistry |
Hydrogen Peroxidase solution | Sigma | H1009-500ML | Immunocytochemistry |
Hypodermic needles Microlance 3 (23G) | Henry Schein | 902-8001 | Aspiration technique |
Ketamin (IMALGENE 1000 – 10 mL) | Bio 2 | 7410928 | Anesthesia |
Medetomidine (DOMITOR 10 mL) | Bio 2 | 7418335 | Anesthesia |
Methanol | Merck | 1.06009.2511 | Smear fixative |
Pap pen | Merck | Z377821-1EA | Immunocytochemistry |
Protein Block Serum free | Dako | X0909 | Immunocytochemistry |
Syringes (5 mL, 10 mL) | Henry Schein | 900-3311, 900-3304 | Aspiration technique |