सेल डिवीजनों फ्लोरोसेंट टैग प्रोटीन और समय चूक माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर वास्तविक समय में कल्पना की जा सकती है। यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उपयोग करना, उपयोगकर्ताओं सेल विभाजन समय गतिशीलता, माइटोटिक धुरी विधानसभा, और गुणसूत्र कांग्रेस और अलगाव का विश्लेषण कर सकते हैं. आरएनए हस्तक्षेप (RNAi) के बाद इन घटनाओं में दोष -मध्यस्थ जीन knockdown मूल्यांकन और मात्रा निर्धारित किया जा सकता है.
ड्रोसोफिला S2 कोशिकाओं ऊतक संस्कृति में mitosis का अध्ययन करने में एक महत्वपूर्ण उपकरण हैं, एक तेजी से और उच्च throughput तरीके से इस मौलिक सेलुलर प्रक्रिया में आणविक अंतर्दृष्टि प्रदान. S2 कोशिकाओं दोनों स्थिर और लाइव सेल इमेजिंग अनुप्रयोगों के लिए अनुकूल साबित कर दिया है. विशेष रूप से, लाइव सेल इमेजिंग कैसे हानि या एक जीन के दस्तक कोशिका विभाजन के दौरान प्रमुख घटनाओं की गतिज और गतिशीलता को प्रभावित कर सकते हैं के बारे में बहुमूल्य जानकारी प्राप्त कर सकते हैं, mitotic धुरी विधानसभा सहित, गुणसूत्र कांग्रेस, और अलगाव, के रूप में अच्छी तरह के रूप में समग्र सेल चक्र समय. यहाँ हम S2 कोशिकाओं का उपयोग sably fluorcently टैग mCherry के साथ transfected: $-tubulin mitotic धुरी और GFP चिह्नित करने के लिए:CENP:CENP-A (Drosophilaमें ‘सीआईडी’ जीन के रूप में संदर्भित) के समय पर कुंजी माइटोटिक जीन के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए centromere चिह्नित करने के लिए सेल डिवीजनों, prophase से (विशेष रूप से परमाणु लिफाफा टूटने पर; NEBD) anaphase की शुरुआत करने के लिए. इस इमेजिंग प्रोटोकॉल भी mitosis भर में धुरी microtubule और गुणसूत्र गतिशीलता के दृश्य के लिए अनुमति देता है. इसमें, हम एक सरल अभी तक व्यापक प्रोटोकॉल है कि पाठकों को आसानी से लाइव इमेजिंग प्रयोगों के लिए S2 कोशिकाओं को अनुकूलित करने की अनुमति देगा प्रदान करना है. ऐसे प्रयोगों से प्राप्त परिणामों को कई एक साथ और गतिशील घटनाओं में अपनी भूमिका को परिभाषित करके कोशिका विभाजन में शामिल जीनों की हमारी समझ का विस्तार करना चाहिए। इस सेल संस्कृति प्रणाली में किए गए प्रेक्षणों को मान्य किया जा सकता है और आगे मक्खियों में आनुवंशिक दृष्टिकोण के प्रभावशाली टूलकिट का उपयोग करते हुए विवो में जांच की जा सकती है।
कोशिका प्रभाग एक प्रक्रिया है जो सभी बहुकोशिकीय जीवों के लिए महत्वपूर्ण है, दोनों के विकास और होमियोस्टेसिस1में। Drosophila लंबे समय सेल विभाजन के अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया गया है, विभिन्न ऊतक प्रकार और आनुवंशिक प्रक्रिया में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करने की स्थिति में प्रयोगों के साथ. जबकि इन अंतर्दृष्टि के कई निश्चित सेल शर्तों से आते हैं, सेल विभाजन कई चलती भागों के साथ एक गतिशील प्रक्रिया है, जीना कोशिकाओं के दृश्य बनाने के लिए RAi या आनुवंशिक नॉकआउट प्रभाव सेल विभाजन के कई भागों पर आकलन करने के लिए अभिन्न बनाने, सहित धुरी गठन, गुणसूत्र कांग्रेस और अलगाव, और साइटोकिनेसिस.
कई प्रोटोकॉल विकसित किया गया है और विवो में Drosophila सेल डिवीजनों कल्पना करने के लिए वर्षों में उपयोग किया गया है। विभिन्न समूहों ने लार्वा कल्पना डिस्क और लार्वा दिमाग2,3,4,5,6,7,8 दोनों में विभाजनों को छवि बनाने के लिए तकनीकों की खेती की है . इन तकनीकों, जबकि विशिष्ट ऊतकों में इमेजिंग के लिए उपयोगी, प्रवाह में सीमित कर रहे हैं और अक्सर पीढ़ी और आनुवंशिक शेयरों के रखरखाव की आवश्यकता के लिए फ्लोरोसेंट घटकों उत्पन्न और ब्याज के जीन की अभिव्यक्ति में परिवर्तन. Drosophila से सुसंस्कृत S2 कोशिकाओं को तेजी से कोशिका विभाजन में विभिन्न जीन ों के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए एक उच्च थ्रूपुट विकल्प प्रदान करते हैं। इसके अलावा, विभिन्न फ्लोरोसेंट प्रोटीन transfect करने की क्षमता के साथ, S2 कोशिकाओं को जल्दी से सेल विभाजन के कई घटकों पर RNAi knockdown के प्रभाव का निर्धारण करने के लिए संशोधित किया जा सकता है. ब्याज की फ्लोरीसेंटी टैग किए गए जीनों को कोशिका विभाजन में भी देखा जा सकता है, जिससे उनके कार्य की गतिशील विशेषता9की अनुमति दी जा सकती है।
यहाँ हम Mitotic S2 कोशिकाओं के लाइव इमेजिंग के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान तरीकों हम हाल ही में वर्णित का उपयोग कर10. हमारी विधि microtubules और centromeres जिनकी अभिव्यक्ति एक तांबे के लिए प्रेरक promotor (metallothionein; पीएमटी) के नियंत्रण में हैं के लिए फ्लोरोसेंट मार्करों के साथ stably transfected कोशिकाओं का इस्तेमाल करता है. इस पद्धति बुनियादी इमेजिंग सॉफ्टवेयर के साथ एक अपेक्षाकृत सरल फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग mitosis के सभी चरणों में धुरी और गुणसूत्र गतिशीलता छवि के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यह आगे व्यक्तिगत अनुसंधान की जरूरत फिट करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, क्षणिक transfection और RNAi mitosis में उम्मीदवार जीन की भूमिका का निर्धारण करने के लिए विस्तारित संभावनाओं की पेशकश के साथ. प्रोटोकॉल के रिश्तेदार सादगी की वजह से, यह छोटे पैमाने पर नुकसान के समारोह स्क्रीन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता जीन की पहचान करने के लिए जिसके लिए vivo में आगे अध्ययन फायदेमंद होगा, और अधिक ध्यान केंद्रित प्रयासों और बाद में आनुवंशिक के साथ दक्षता के लिए अनुमति देता है मक्खियों में हेरफेर।
एक उपयुक्त सेल की पहचान
इमेजिंग विभाजन S2 कोशिकाओं के लिए कुंजी पहले उचित सेल का पता लगाने है. समय इमेजिंग कोशिकाओं है कि गलती से विभाजित करने के लिए तैयार होने के लिए सोचा है, लेकिन एक उचित समय सीमा में ऐसा करने में विफल बर्बाद किया जा सकता है. कोशिकाओं की पहचान की जानी चाहिए जिनके पास दो अलग और दृश्यमान सेन्ट्रोसोम और एक बरकरार केंद्रक हो। Centrosomes microtubule फाइबर उन से बाहर निकालना होगा, उन्हें एक “स्टार की तरह” उपस्थिति दे रही है. फोकस का समायोजन करते समय एक बरकरार नाभिक प्रकाश को अपवर्तित करता है, और सेल के अनुमानित केंद्र को उपस्थिति में गहरा भी बनाता है। नाभिक भी GFP शामिल होंगे: CID “डॉट्स”, अपनी पहचान में मदद करने के लिए एक और विशिष्ट सुविधा. साथ कोशिकाओं के साथ gt;2 सेन्ट्रोसोम, ट्यूबुलिन फाइबर के बिना उन से बाहर निकालती है, या केवल एक सेंट्रोसोम के साथ कोशिकाओं से बचा जाना चाहिए। इसके अतिरिक्त, यदि दो सेन्ट्रोसोम दिखाई देते हैं, लेकिन एक नाभिक नहीं है, NEBD पहले ही उत्पन्न हो चुका है और यदि पूर्ण एम-चरण विश्लेषण वांछित है तो कोशिका अपने विभाजन में बहुत अधिक उन्नत है। एक बार एक उपयुक्त सेल पाया जाता है, इमेजिंग शुरू करने में गति महत्वपूर्ण है के रूप में NEBD जल्दी होता है (आमतौर पर 3-5 मिनट के भीतर) और इमेजिंग की शुरुआत में देरी चूक अवसरों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इमेजिंग सॉफ्टवेयर में सेल को जल्दी से इस तरह केंद्रित करें कि दोनों सेन्ट्रोसोम दिखाई दे रहे हैं, या यदि सेन्ट्रोसोम एक दूसरे के साथ विमान से बाहर हैं, तो दोनों के बीच फोकस बिंदु सेट करें, ताकि प्रत्येक को तब कैप्चर किया जा सके जब निर्धारित केंद्र के ऊपर और नीचे ढेर एकत्र किए जाते हैं बिंदु. एक बार ध्यान केंद्रित, तुरंत मंच और लाइव सेल कक्ष सतह अवरक्त फोकस की जांच का उपयोग कर के बीच ऑफसेट सेट (यदि उपलब्ध हो) और इमेजिंग कार्यक्रम शुरू करते हैं. हालांकि यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल विशेष रूप से NEBD-से-anaphase गतिशीलता का आकलन प्रयोगों के लिए सिलवाया है, सरल संशोधनों वैकल्पिक mitotic घटनाओं का अध्ययन पाठकों के अनुरूप सकता है. NEBD-to-metaphase और anaphase-to-telaphase इमेजिंग के लिए, हम सुझाव है कि 10 s छवि पर कब्जा अंतराल के रूप में इन प्रक्रियाओं अत्यधिक गतिशील हैं और S2 कोशिकाओं में जल्दी से हो (5-10 मिनट). मेटाफेज-टू-एनाफेज संक्रमण (हमारे विशिष्ट प्रयोगात्मक फोकस) S2 कक्षों में एक लंबी प्रक्रिया (20-30 मिनट) है, और हम 30 s अंतराल पर छवियों को इकट्ठा करते हैं। अंत में, telophase के माध्यम से cytokinesis S2 कोशिकाओं में काफी धीरे धीरे होता है, और हम सुझाव है कि 60 s अंतराल इस अनुमानित घंटे लंबी प्रक्रिया के लिए पर्याप्त संकल्प प्रदान.
इमेजिंग प्रोग्राम के दौरान फोकस बनाए रखना
यदि एक अवरक्त ध्यान जांच डिवाइस उपलब्ध नहीं है, माइक्रोस्कोप या तालिका यह पर बैठता bumping से बचने के लिए सुनिश्चित हो, के रूप में इस सेल इमेजिंग कार्यक्रम के दौरान ध्यान से बाहर चलती में परिणाम कर सकते हैं, अस्पष्ट, संयुक्त राष्ट्र व्याख्या परिणाम के लिए अग्रणी. पाली-एल-lysine के साथ लाइव सेल चैम्बर कुओं पूर्व-कोटिंग सेल पालन में मदद कर सकते हैं, जो सेल आंदोलन से बचने में मदद कर सकते हैं और अवरक्त ध्यान चेक के बिना setups के लिए विशेष रूप से उपयोगी है. इसके अतिरिक्त, सदमे को अवशोषित प्लेटफार्मों या हवा तालिकाओं सहित setups आगे ध्यान से बाहर जाने कोशिकाओं से बचने में मदद कर सकते हैं. अंत में, कुछ सॉफ्टवेयर प्रोग्राम उपयोगकर्ता refocus और प्रोग्राम को फिर से शुरू करने की अनुमति कार्य ों थामने है.
एकाधिक कक्षों को इमेजिंग करना
डेटा के संचय के लिए उपयोगी यह है कि अक्सर कई कोशिकाओं को विभाजित करने के लिए तैयार इमेजिंग के लिए देखने के एक ही क्षेत्र के भीतर रखा जा सकता है. यह उन प्रयोगों के लिए विशेष रूप से उपयोगी हो सकता है जिनमें कोशिकाओं में लंबे समय तक एम-चरण अवधि या लंबे समय तक गिरफ्तारी होती है (उदाहरण के लिए, स्थितियां जो एसएसी के सक्रियण को प्रेरित करती हैं)। इन कोशिकाओं के लिए, हम आम तौर पर छवि जब तक कोशिकाओं photobleached हैं (लगभग 2-3 एच), लेकिन गिरफ्तार कोशिकाओं का पूरा समय शोधकर्ता के विवेक पर होना चाहिए. कभी-कभी एकाधिक पूर्व-विभाजित कोशिकाएं विभिन्न फोकल विमानों में हो सकती हैं, इस स्थिति में सभी कोशिकाओं को समायोजित करने के लिए z-स्टैक जोड़ना उपयोगी हो सकता है। अधिक z स्टैक जोड़ना भी रिज़ॉल्यूशन को बेहतर बनाने में मदद कर सकता है। सावधानी ऐसा करने में लिया जाना चाहिए, तथापि, के रूप में यह अधिक विकिरण के लिए कोशिकाओं को बेनकाब और जल्दी photobleaching के लिए नेतृत्व, साथ ही हार्ड डिस्क भंडारण उपकरणों पर बड़ी फ़ाइल आकार के लिए नेतृत्व करेंगे.
फोटोब्लीचिंग और फोटोटॉक्सिसिटी से बचना
हमारी विधि जोखिम समय के लिए विशिष्ट सेटिंग्स का वर्णन, इमेजिंग अंतराल, z ढेर, और हमारे एलईडी प्रकाश स्रोत है कि आम तौर पर हमारे प्रयोगात्मक सेटअप और वांछित परिणामों के लिए काम के लिए प्रतिशत संचारण. के रूप में माइक्रोस्कोप और प्रयोगात्मक लक्ष्यों को भिन्न हो सकते हैं, क्या हमारी प्रणाली के लिए अच्छी तरह से काम कर सकते हैं समय से पहले photobleaching या दूसरों में phototoxicity के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. फोटोडैमेज में धुरी आंदोलन, माइक्रोट्युबल विखंडन, दोषपूर्ण माइक्रोट्युबल गतिशीलता, और लंबे समय तक धुरी जांच चौकी सक्रियण की कमी हो सकती है। इस तरह के नुकसान से बचने के लिए एक संभावित तरीका जोखिम समय को सीमित करने के लिए है। अधिकांश आधुनिक कैमरों अब व्यापक गतिशील पर्वतमाला के अधिकारी, और histograms भी बहुत कम जोखिम पर संरचनाओं कल्पना करने के लिए समायोजित किया जा सकता है. एक अन्य तकनीक इमेजिंग अंतराल को बढ़ाने के लिए है (जैसे, छवियों के बीच कई मिनट के लिए) इस तरह है कि बार एक सेल की संख्या एक कुल संग्रह अंतराल पर प्रकाश के संपर्क में है कम है. यह विशेष रूप से समय की लंबी अवधि के लिए इमेजिंग में फायदेमंद है (कई घंटे), और इसके अलावा इस तरह के प्रयोगों के फ़ाइल आकार को कम करने में मदद कर सकते हैं. लिया z ढेर की संख्या सीमित भी प्रकाश जोखिम को कम करने में मदद कर सकते हैं, का उपयोग कर 2 या यहां तक कि सिर्फ 1 के बजाय 3. इसके अलावा, प्रकाश का प्रतिशत संचरण समायोजन (एलईडी प्रकाश स्रोतों के लिए), या तटस्थ घनत्व का उपयोग (एनडी) फिल्टर (दोनों Halogen दीपक और एलईडी प्रकाश स्रोतों के लिए) प्रकाश की तीव्रता में कमी होगी और अब जोखिम समय के साथ युग्मित दृश्यता बनाए रख सकते हैं . पहले से ही अलग centrosomes के साथ कोशिकाओं को चुनने के द्वारा, समग्र जोखिम में सीमित किया जा सकता है कि इन कोशिकाओं को आम तौर पर mitosis जल्दी में प्रवेश (एक या दो मिनट के भीतर) इमेजिंग शुरुआत के बाद. एक भी समय है कि कोशिकाओं को NEBD से पहले छवि की अनुमति दी जाती है सीमित कर सकते हैं. हमारी प्रयोगशाला आम तौर पर 10 मिनट पर इस समय सेट, लेकिन एक अधिक रूढ़िवादी सीमा आसानी से उपयोगकर्ता द्वारा लगाया जा सकता है. इसके अतिरिक्त, एक और अधिक ‘आक्रामक’ उपाय हम अनुशंसा करते हैं dsRNA SAC के एक घटक के खिलाफ लक्षित के साथ उपचार है (जैसे रॉड या Mad2). यदि एक गिरफ्तारी phenotype गैर विशिष्ट सेल क्षति (जैसे, दोषपूर्ण microtubule गतिशीलता) के कारण है, इस तरह के एक इलाज कम मूल प्रयोग में ब्याज की जीन के एक सदाशयी प्रभाव की तुलना में गिरफ्तारी को दबाने की संभावना है.
भविष्य की दिशा
यहाँ वर्णित विधि तेजी से छवि लाइव सेल डिवीजनों के लिए एक अपेक्षाकृत सरल epifluorescent माइक्रोस्कोप पर उपयोग किया जा सकता है और आसानी से एक शोधकर्ता के विशेष प्रयोगात्मक डिजाइन और लक्ष्यों के अनुरूप अनुकूलित किया जा सकता है. culturing के लिए कई उत्कृष्ट तरीकों, RNAi दस्तक दृष्टिकोण, क्षणिक transfection, और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी S2 और अन्य Drosophila कोशिकाओं9,14,15के लिए प्रकाशित किया गया है, 16 , 17.हमारा प्रोटोकॉल कुछ फायदे प्रदान करता है. (1) एक डबल स्थिर सेल लाइन का उपयोग (GFP:CID, मची:जेड-Tubulin) एक साथ दो प्रमुख mitotic संरचनाओं के निशान, परेशानी और क्षणिक परिवर्तन की संभावित जटिलताओं से बचा जाता है, और यह सुनिश्चित करता है कि लगभग सभी कोशिकाओं के रूप में फ्लोरोसेंट मार्करों व्यक्त करेंगे इमेजिंग के लिए संभावित उम्मीदवार. (2) माइटोसिस के लिए अनुकूलन गतिशील, गैर-विभाजित कोशिकाओं में साइटोस्केलेटल गतिशीलता की जांच प्रकाशित प्रोटोकॉल के लिए कहते हैं और वास्तविक समय में माइटोटिक घटनाओं की जांच करने के लिए फैली हुई है। जबकि हमें विश्वास है कि हमारा एक शक्तिशाली तकनीक है कि दूसरों के प्रदर्शनों की सूची में कहते हैं, वहाँ हमेशा सुधार किया जा सकता है. कोशिका विभाजन का एक विशेष क्षेत्र जिसे हमने छवि के लिए कठिन पाया है, वह है सेन्ट्रोसोम विभाजन। यह NEBD से पहले होता है और यह निर्धारित करने के लिए जब एक एकल सेंट्रोसोम दो में अलग करने के लिए तैयार है मुश्किल है। फ्लोरोसेंट सेल चक्र मार्करों का उपयोग करना (Cyclin A और Cyclin B) इस समस्या को हल करने में मदद कर सकता है, लेकिन सेल विभाजन घटकों कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि चैनलों की कीमत पर आता है. सेंट्रोसोम विभाजन कल्पना करने के लिए प्रयास करने के लिए हमारी सबसे अच्छी रणनीति इमेजिंग प्रोग्राम (XY विमान में विभिन्न बिंदुओं को परिभाषित करने की छवि) के लिए multipoint अधिग्रहण जोड़ने के लिए है, लेकिन यह बड़ी फ़ाइलों में परिणाम कर सकते हैं, और यह भी (अंकों की संख्या पर निर्भर करता है) की आवश्यकता कर सकते हैं छवि संग्रह के बीच अंतराल में वृद्धि, जिसके परिणामस्वरूप फिल्म के समय संकल्प को कम. एक अन्य समाधान दवाओं है कि बाद में washout इमेजिंग से पहले के बाद washout द्वारा पीछा किया दवाओं का उपयोग कर एक वांछित सेल चक्र चरण में कोशिकाओं के तुल्यकालन हो सकता है, हालांकि इन तरीकों S2 कोशिकाओं में विशेष रूप से विश्वसनीय नहीं हो सकता है.
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल के रूप में अच्छी तरह से लाइव सेल इमेजिंग में भविष्य के अनुप्रयोगों के लिए एक नींव प्रदान करता है. बेहतर इमेजिंग और सॉफ्टवेयर प्रौद्योगिकी के साथ, उच्च क्षमता का उपयोग करइस प्रोटोकॉल के सही मायने में उच्च थ्रूपुट अनुकूलन, बहु-चेंबर प्लेटें संभव हो सकती हैं। इस तरह के नवाचारों बड़े पैमाने पर RNAi स्क्रीन, इस तरह के उन पहले से ही तय तैयारी में प्राप्त के रूप में 12 ,18,एक जीवित सेल प्रारूप में अधिक पथ्य बनाना होगा. छोटे अणु दवा स्क्रीन भी सेल विभाजन प्रक्रियाओं को लक्षित उपन्यास यौगिकों की पहचान करने के एक साधन के रूप में कल्पना की जा सकती है. फ्लोरोफोर्स और ऑप्टिकल फिल्टर में सुधार भी कई माइटोटिक घटकों की इमेजिंग के लिए नेतृत्व कर सकता है (न सिर्फ दो हम वर्णन), विशिष्ट माइटोटिक नियामकों की इमेजिंग और डीएनए और / उदाहरण के लिए, फ्लोरोसेंट पत्रकारों के साथ कोशिकाओं का उत्पादन है कि डीएनए क्षति के बाद या apoptosis के दौरान व्यक्त इन प्रक्रियाओं में शामिल उपन्यास जीन की पहचान करने के लिए उपयोगी उपकरण होगा. इसी तरह के दृष्टिकोण फ्लोरोसेंट टैग cyclins19की अभिव्यक्ति का उपयोग कर सेल चक्र गतिशीलता की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
The authors have nothing to disclose.
इस काम के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों (R01 GM108756) द्वारा वित्त पोषित किया गया. हम उदारता से हमें एक GFP के साथ उपलब्ध कराने के लिए गैरी Karpen (कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, बर्कले) के आभारी हैं: सीआईडी S2 सेल लाइन स्टॉक जिसमें से हमारे GFP:CID/mCherry: $Tubulin लाइन उत्पन्न किया गया था10.
Bright-Line Hemacytometer | Sigma-Aldrich | Z359629-1EA | for cell counting |
cellSens imaging software | Olympus | ||
CELLSTAR Cell Culture Flask, 50ML, 25 CM2, PS, Red Filter Screw Cap, Clear, Sterile, 10PCS/BAG | Greiner Bio-One | 690175 | |
CELLSTAR Cell Culture Multiwell Plate, 6 well, PS, Clear, TC, Lid with condensation rings, sterile, single packed | Greiner Bio-One | 657160 | |
Centrifuge 5804 R | eppendorf | Cat. 022623508 | |
Copper(II) sulfate pentahydrate, minimum 98% | Sigma-Aldrich | C3036-250G | |
Corning Fetal Bovine Serum | Fisher Scientific | MT35015CV | |
Effectene Transfection Reagent 1 mL | Qiagen | 301425 | for transient transfection |
IX-83 Inverted Epifluorescent Microscope | Olympus | ||
LabTek Chambered Slide Insert | Applied Scientific Instruments | I-3016 | |
MEGAscript T7 Transcription Kit | Thermo Fisher Scientific | AM1334 | For dsRNA production |
MOXI Z Mini Automated Cell Counter Kit | ORFLO | MXZ001 | for cell counting |
MS-2000 XY Flat-Top Automated Stage and Controller | Applied Scientific Instruments | ||
Nunc Lab-Tek II Chambered Coverglass (no 1.5 borosilicate glass) 8-well | Thermo Fisher Scientific | 155409 | |
Orca-Flash 4.0 LT Camera | Hammamatsu Photonics K.K. | C11440-42U | |
pMT/V5-His A Drosophila Expression Vector | Thermo Fisher Scientific | V412020 | |
Poly-L-Lysine | Cultrex | 3438-100-01 | |
Purifier Logic+ Class II, Type A2 Biosafety Cabinets | Labconco | 302310000 | |
Schneider's insect medium | Sigma-Aldrich | S0146-100ML | |
Spectra Tub Centrifuge Tubes | VWR | 470224-998 | |
Uner Counter BOD Incubator | Sheldon manufacturing (VWR) | 89409-346 | |
X-CITE 120 LED | ExcelitasTechnologies | Led light source | |
Z -Drift Compensator (ZDC) | Olympus | infrared focus check |