Name: Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-22T17:30:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Öğrenin, farelerde kısmi karotid ligasyonu ile ateroskleroz gelişimini ve yüksek saflıkta endotel RNA izolasyonunu. Bu yöntem kardiyovasküler araştırmalar için hızlı ve güvenilir bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Bilim, Teknoloji ve G. Kore Eğitim Bakanlığı NIH hibe HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) ve Dünya Sınıfı Üniversitesi Projesi (HJ) fon tarafından desteklenmiştir.

1. Kısmi sol karotis arter ligasyonu <ol><li> Fare yaş ~ 8 hafta kullanılır. Farelerin ağırlığı en az 18 gram olması tavsiye edilir. </li><li> Boncuk enstrüman sterilizatör 30 saniyelik aletleri sterilize edin ve soğuması </li><li> Ketamin (80mg/kg) ve Xylazine (10mg/kg) intraperitoneal (ip) enjeksiyonu veya alternatif anestezi IACUC tarafından onaylanmış olarak anestezi neden. Ip enjeksiyon için, karın sol alt kadranda fare enjekte edilir. </li><li> Tamamen uyuşturuluyor kadar bir ısınma odası yerleştirin fare. Ayak tutam tepki ile anestezi derinliği olun. </li><li> Supin (karın tarafı yukarı) konumuna cerrahi bir sahnede Yeri fare. Teyp kadar ön patilerini avuç içi ve sahne aşağı arka pençeleri tek. </li><li> Mandibula ve sternum arasında boyun tüy dökücü ajan (örneğin Nair) liberal miktarda uygulayın. Yavaşça, masaj tüm saç çıkarılana kadar. </li><li> Tüy dökücü ajan temizleyin ve depilated bölgeye Betadine liberal miktarda uygulayın. </li><li> 6-0 ipek sütür ligasyonu için 1 inç uzun bölümler hazırlayın. Her fare iki adet dikiş gerekir. </li><li> , Keskin bir küçük makas kullanarak, boynun ortasında 4-6mm dikey bir kesi yapmak. Cilt ve altta yatan fasya kesilecek gerekir. </li><li> Orta hattan sola doğru hareket ettirin ve sol parotis bezi açık açık sadece sağ trakea diseksiyon başlar. Zonklayan sol karotis kolayca tespit etmek gerekir. </li><li> Kaudal karotis bifurkasyon buluncaya kadar izleyin. </li><li> Eksternal karotid arter, internal karotid arter, oksipital arter ve üstün tiroid arter, sol karotis arter kapalı aşağıdaki dört distal dallardan pervasızca açığa bifurkasyon teşrih. Bu gemiler, özellikle üstün tiroid, kırılgan olabilir. Diseksiyonu ile çok dikkatli olun. </li><li> 6-0 ipek sütür kullanarak üstün tiroid YUKARIDA eksternal karotid bağlayın. Bunu yapmak için, bir forseps arterin altından geçmek ve diğer forseps yardımı ile, önceden kesilmiş dikiş bir parça kapmak. Arterin altından geçmek için dikiş yavaşça çekin. Kravat sıkıca düğüm yakalanmış olmanın herhangi bir çevre doku kaçınarak. Etkili bir ölçüde farklı bir model tam bir ligasyonu gerçekleştirdik prosedürün sonuna kadar üstün tiroid arter altında kravat. </li><li> Internal karotid ve oksipital arterler aynı tekniği kullanarak bir düğümü ile bağlayın. </li><li> Sütür ve üstün tiroid arter açıklık konumu olun. </li><li> Doku Mend küçük bir miktar kullanarak yaklaşık cilt ve yakın cilt. </li><li> Kurtarma kadar bir ısınma odası yerleştirin fareler. Kurtarma genellikle 30 ila 60 dakika sürer. </li><li> Buprenorfin (0.1mg/kg) tek doz kullanılan anestezi, hayvanın ilk 24 saat içinde sıkıntı içinde ise, uzun süreli ağrı kesici (örn. inhalasyon izofluran) ya da eğer cerrahi sonrası hemen uygulanmalıdır. Deneyimlerimize göre, anestezi için uygulanan cerrahi, deneyimli bir cerrah tarafından yapılır ve daha fazla analjezi tabi Ketamin doz yeterli analjezi sağlar. </li></ol> 2. Karotis ultrason sınavı <ol><li> Kısmi ligasyonu akışı rahatsız kaynaklı olmadığını doğrulamak için, karotis akışı, bir gün sonrası ligasyonu muayene edilmelidir </li><li> Izofluran ile anestezi neden gerekirse anestezi indüksiyonu kutusu olabilir </li><li> Kadar görüntüleme aşamasında, göbek yan anestezi fareler yerleştirin. </li><li> Görüntüleme sahnede EKG sensör Teyp kollar ve bacaklar </li><li> Nair liberal uygulama (zaten ligasyonu işlemi yapmadı eğer bu adımı sadece ihtiyaç vardır) boyun yapraksızlaştırmayı </li><li> Rektal termometre sıcaklığı kayıt takın </li><li> Boyun bölgesine uygulayın jel Echo </li><li> B-mod başlayın. </li><li> Görüntüleme düzlemine 90 derece olmalıdır (prob üzerindeki düğme fare burun doğru işaret etmelidir) </li><li> Görüntü elde edilir kadar fare boyun prob indirin. </li><li> Aşamada sol ve sağ trakea kadar (orta hat yapısı) tanımlanır işleyin </li><li> Sol karotis arter belirleyin </li><li> Tilt görüntüleme aşamasında bir açı ve karotid görüntüleme düzlemi arasında oluşturulur. Bu açının büyük, güçlü bir Doppler sinyali olacaktır. </li><li> Place nabız dalga Doppler sol karotis ortasında. </li><li> Açı düzeltme gerektiği şekilde kullanın. </li><li> Sağ karotis ölçümler tekrarlayın. </li><li> Başarılı kısmi karotis ligasyonu diyastolde aort girişine doğru akışının ters, sağ tarafı ile karşılaştırıldığında sol karotis akış genel bir azalma (~% 80-90) neden olacaktır. </li><li> Tatmin edici görüntüler elde edildikten sonra, anestezi kapatmak, fare ve ücretsiz fare off bant res jel yankı silintraints. Fareler ısındı kurtarma odasına yerleştirin. </li></ol> 3. Karotis gelen intimal RNA izolasyonu <ol><li> Kurumsal IACUC protokole göre, CO 2 inhalasyon fareler Kurban </li><li> Bir kağıt havlu Teyp pençeleri. </li><li> Karın, göğüs kafesinin üst farenin deri kesin. </li><li> Göğüs kafesinin altında keskin bir makas çifti ile karın duvarı açın. </li><li> Diyafram forseps ile sternum kaldırın ve kesmek, daha sonra göğüs kafesi kalp maruz kesip. </li><li> Vena kava makasla kesin. </li><li> Akciğer ve karaciğer soluk hale gelene kadar sol ventrikül içinde 10 adet / mL heparin içeren serum fizyolojik ile 2 ila 3 dakika süreyle basınç serpmek (120 mmHg). </li><li> Boyun deri kesin ve karotid arterlerin maruz kadar tüm yağ, kaslar ve bağ dokuları kaldırmak. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında fare yerleştirin. </li><li> Ponksiyon, ikinci perfüzyon için sol karotis ligasyonu siteleri hemen altında bir delik. </li><li> ~ Sol ventrikül ile sol karotis inceledi emin olun, 10 adet / mL heparin içeren serum fizyolojik ile 1 dakika için tekrar Basınç serpmek. </li><li> Ince uçlu forseps ve küçük yaylı makas kullanılarak, karotis çevresindeki peri-adventisyal dokular dikkatle çıkarın. Bu temizleme adımı sırasında karotis sıkmak veya germek için dikkatli olun. </li><li> Kes, arkus aorta ve karotis bifurkasyon üzerinde ligasyonu noktaları arasındaki sol karotis arter. </li><li> Sağ karotis arter, sağ subklavian arter dallanma noktası ve karotid bifurkasyon arasında kesin. </li><li> Buz HBSS içeren, 35 mm kültür çanak karotis aktarın. Gerekirse, kalan peri-adventisyal doku dikkatlice çıkarın. </li><li> Her karotis başına 150 ul QIAsol lizis tamponu (Qiagen) ile doldurarak 29g bir iğne ile insülin şırınga (3 / 10 ml şırınga) hazırlayın. </li><li> Karotis bir ucunda iğne ucu dikkatlice yerleştirin. </li><li> Karotis ve iğne ucu bir forseps ile tutarken, hızlı (~ 1 sn) (intima eluat) 1.5ml bir tüpe QIAsol lizis tamponu (150 ul) temizler. </li><li> Karotis artık (medya + adventisya) bir kez HBSS, 1.5 ml tüp koymak ve sıvı nitrojen içinde ek-freeze durulayın. </li><li> İntima eluat ve donmuş artık üreticinin talimatlarına göre miRNeasy mini kiti (QIAGEN) intimal kullanarak ya da medya + adventisya RNA izolasyonu için kullanılır. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: Biz kısmen fare karotid arterler ve ultrason muayenesi prosedürü izleyerek bir gün gerçekleştirildi sol bağlandı. Şekil 1'de gösterildiği gibi, başarılı kısmi ligasyonu kan akım hızını azaltır ve sol karotis arter diyastol sırasında akış (akış rahatsız) tersine çevirir. Yüksek yağlı diyet ile birlikte ApoE nakavt (KO) farelerde Kısmi ligasyonu, sol karotis arter (LCA) sağlam ateroskleroz neden olur, ancak sağ kontralateral karotis, iki hafta (Şekil 2). Karotis intima toplanan RNA gibi PECAM-1 gibi endotel işaretleyici genleri içeren bir-SMA (Şekil 3) medial düz kas hücre işaretleyici genlerin. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: Şematik, karotis anatomisi ve ligasyonu : Üç şube sol karotis arter (LCA) [eksternal karotid arter (ECA), internal karotis arter (ICA) ve oksipital arter (OA)] üstün tiroid arter (STA) açık bırakarak, bağlandı. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: ultrason görüntüleri akış hızı profilleri ve kısmi ligasyonu diyastolde LCA akış tersine (oklarla gösterilen) uyardığı ortaya. RCA Akış bağlanmasından sonra değişmeden kalır. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3: Kısmi ligasyonu ve yüksek yağlı diyet hızla LCA ApoE KO farelerde ateroskleroz neden olur ApoE KO farelerin kısmen bağlandı ve 1 ila 3 hafta boyunca yüksek yağlı diyetle beslendi. LCA dondurulmuş bölümleri Petrol-Kırmızı-O ile boyandı. <img src="/files/ftp_upload/1861/1861fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 intimal RNA hazırlama yöntemi. Intimal RNA ve medial + adventisyal (m +) RNA sahte çalışan RCA ve LCA C57BL / 6 fareler elde edildi. RNA'lar PECAM-1 ve α-SMA 18s kullanarak bir iç kontrol sistemi olarak yarı-kantitatif RT-PCR (A) ve qPCR (B, C) ​​ile analiz edildi. Çubuk grafikler, ortalama ± SEM, n = 3.

<ol><li>Korshunov, V. A., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-induced+vascular+remodeling+in+the+mouse%3A+a+model+for+carotid+intima-media+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).</li>
<li>Sullivan, C. J., Hoying, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-dependent+remodeling+in+the+carotid+artery+of+fibroblast+growth+factor-2+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).</li>
<li>Nam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Partial+carotid+ligation+is+a+model+of+acutely+induced+disturbed+flow%2C+leading+to+rapid+endothelial+dysfunction+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Heart+Circ+Physiol%22%5BJournal%5D)">Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).</li>
</ol>

Bu yöntemde, eksternal karotid, internal karotid, oksipital arter ve üstün tiroid arter da dahil olmak üzere karotis tüm şube uygun bir şekilde tanımlanması çok önemlidir. Gösterildiği gibi ultrason kullanarak akış modeli doğrulamak için de önemlidir. Deneyimli ellerde, 500&#39;den fazla farelerin ultrason çalışmaları dayalı kısmi ligasyonu ameliyatlarında başarı oranı% 90 daha iyidir. Karotis intimal RNA hazırlıkları için, ilk perfüzyon adımdan sonra, karotis görünümünü dikkat etmek önemlidir. Bu noktada sol karotis ak...

<table><tbody><tr><td>Normal Salin (%0.9 sodyum klorür)</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>2B1323</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin şırıngası (3/10 ml 29g şırınga)</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881600145</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Cellgro</td><td>21-023</td><td></td></tr><tr><td>miRNeasy mini kit (QIAzol dahil)</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td></td></tr><tr><td>Vevo 770 Yüksek Çözünürlüklü Mikro Görüntüleme Sistemi</td><td>VisualSonics, inc.</td><td>a.Visualsonics 770 sistemi b.Görüntüleme tablası c.Vevo entegre ray sistemi d.Fareler için RMV tarama başlığı</td><td>veya benzeri sistem</td></tr><tr><td>6-0 İpek Sütür, steril</td><td>Covidien</td><td>s-1172 c2</td><td></td></tr><tr><td>Küçük makas</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5675</td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td>Diseksiyon Penseti</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5005</td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td>Tissue Mend II</td><td>Webster Veterinary</td><td>07-856-7946</td><td></td></tr></tbody></table>

kısmi ligasyon fare karotis arter disturbed akış kaynaklı ateroskleroz ve karotis endotel rna İzolasyonu basit bir yöntem bir model

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Bilinen yakın ilişki olmasına rağmen, rahatsız akış aterogenez bağlayan doğrudan kanıt eksikliği olmuştur. Biz son zamanlarda, karotis kısmi ligasyonu yöntemleri değiştirilmiş bir versiyonu kullanılmıştır [1,2], akut fare karotis arterde düşük ve salınımlı akış koşulları, rahatsız akışının iki önemli özellikleri, uyardığı göstermek için. Bu modeli kullanarak, bozulmuş akışı gerçekten Apolipoprotein E nakavt fare [3] hızlı ve sağlam ateroskleroz gelişimine yol açtığı doğrudan kanıt sağladı. Ayrıca fare karotis intima [3], yüksek saflıkta endotel RNA hazırlık bir yöntem geliştirdi. Bu fare modeli ve yöntemi kullanarak, bu kısmi ligasyonu intraplak neovaskülarizasyon gibi kompleks lezyon oluşumu özellikleri ile dört hafta boyunca bir hiperlipidemik fare modeli iki hafta içinde sağlam ve hızlı bir aterom oluşumu takip, bir hafta içinde endotelyal disfonksiyon neden bulundu. Bu hızlı<em&gt; In vivo</em&gt; Model ve endotel RNA hazırlama yöntemi akış bağımlı düzenleme vasküler biyoloji ve hastalıkların altında yatan moleküler mekanizmaları belirlemek için kullanılır. Ayrıca, çalışma süresi önemli ölçüde azalır, endotelyal disfonksiyon ve ateroskleroz hedefleyen çeşitli terapötik girişimlerin test etmek için kullanılabilir.

Bu fare karotis arter intraplak neo-vaskülarizasyon (dört hafta) ile rahatsız akış koşulları ve sonraki ateroskleroz gelişimi (iki hafta) neden olan bir kısmi karotis ligasyonu cerrahi, açıklamaktadır. Ayrıca, yüksek saflıkta endotel RNA, RNA izolasyonu, karotis intima yeni bir yöntem açıklanmaktadır.

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Bilinen yakın ilişkiye rağmen, bozulmuş akış ile aterojenez arasında bağlantı kuran doğrudan kanıtlar eksikti. Yakın zamanda modifiye edilmiş bir ... kullandık.

Bu video, bozulmuş akış koşullarını ve ardından hızlı ateroskleroz gelişimini tetiklemek amacıyla, anestezi altındaki bir farede eksternal karotid arterin, internal karotid arterin ve oksipital arterin ligasyonunun yapıldığı kısmi karotid ligasyon cerrahisini göstermektedir. Cerrahinin başarısı ultrason ile doğrulanır; ardından ötanize edilen fareden ligat edilmiş ve kontrol karotidleri alınarak yüksek saflıkta endotel RNA'sı elde edilir. Merhaba, ben Georgia Tech ve Emory Üniversitesi Biyomedikal Mühendisliği ve Kardiyoloji Bölümü'ndeki Hon Jo laboratuvarından Doug Na.Merhaba, benim adım Amir Revan. Ben de JO Lab'denim. Ligasyonun ultrasonla doğrulamasını göstereceğim ve ben de JO Lab'den CHI.Bugün internal RNA hazırlamasını göstereceğim. Sizlere kısmi karotid ligasyonu, ultrason, ligasyon doğrulaması ve intima RNA izolasyonu için bir prosedür sunacağız. Laboratuvarımızda, kayma stresinin ateroskleroz üzerindeki etkilerini incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Bu prosedüre başlamadan önce, ketamin ve ksilazin ile indüklenen anestezinin derinliğini doğrulayın. Sekiz haftalık bir farede bunu ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle yapın, fareyi cerrahi platforma sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve dört patisini, avuç içleri yukarı bakacak şekilde platforma bantlayın.Ardından arka patileri, tabanları aşağıya bakacak şekilde bantlayın. Farening boynu için yastık olarak bir gazlı bez kullanın. Sonra, hayvanın boynuna, mandibula ile sternum arasına bol miktarda epilasyon ajanı uygulayın.Tüm kıllar temizlenene kadar bölgeye nazikçe masaj yapın. Bir pamuklu aplikatör kullanarak depilatuvar ajanı temizleyin. Ardından, küçük ve keskin bir makas yardımıyla bol miktarda Betadine uygulayın.Hayvanın boynunun ortasına, hem deriyi hem de altındaki fasyayı kesecek şekilde dört ila altı milimetrelik dikey bir insizyon yapın. Diseksiyon penseti kullanarak sol karotis bezini orta hattan hayvanın soluna doğru nazikçe kaydırın. Diseksiyon penseti kullanarak dokuyu künt diseksiyonla ayırın.Atımlı ortak karotidi ortaya çıkarmak için. Ortak karotidi dikkatle takip edin. Bifurkasyonu bulmak için.Aşağıdakileri açığa çıkarmak için bifurkasyonu dikkatlice diseke edin. Sol ortak karotis arterin dört distal dalı olan eksterna karotis arter, interna karotis arter, oksipital arter ve süperiyor tiroid arter. Bu damarlar, özellikle de süperiyor tiroid arter, oldukça hassas olabilir.Bir pens setini, superior tiroid arterinin üzerindeki eksternal karotid arterin altından geçirin ve başka bir pensle tutulan bir inç uzunluğundaki altı sıfır ipek süturu yakalayın. Süturu, arterin altından geçecek şekilde nazikçe çekin. Çevredeki dokulara dikkat ederek eksternal karotid arteri sıkıca bağlayın.Aynı tekniği kullanarak, internal karotid ve oksipital arterleri tek bir düğümle bağlayın. Sütürlerin konumunu ve superior tiroid arterin açıklığını görsel muayene ile doğruladıktan sonra, parotis bezini geri çekin, cildi yaklaştırın ve cildi kapatmak için doku pensleri kullanın. Cerrahi prosedürün ardından, fareyı iyileşene kadar bir ısıtma odasına yerleştirin.Genellikle 30 ila 60 dakika sürer. Fareler daha sonra düzenli barınma alanlarına taşınabilir. Fareler ilk gün boyunca yemeğe ulaşmak için yukarı uzanırken rahatsızlık hissedebileceği için kafesin tabanına bir miktar yem yerleştirin.Ağrının giderilmesi için ertesi gün tek doz buprenorfin uygulanmalıdır. Ligasyondan bir gün sonra. İzofluran ile anestezi uygulanmış hayvanı, karnı yukarı bakacak şekilde görüntüleme platformuna yerleştirerek ultrasona hazırlayın.Kolları ve bacakları EKG sensörüne bantlayın. Hayvanın boynuna eko jeli uygulayın. İşlem boyunca hayvanın vücut sıcaklığı izlenmelidir.Bilgisayarı ve görüntüleme yazılımını açın. Uygun kullanıcıyı ve eko probunu seçin. Ultrasonu B moduna ayarlayın.Ardından, probun düğmesi farenin burnuna bakacak şekilde, görüntü elde edilene kadar probu farenin boynuna doğru indirin. Trake tanımlanabilene kadar prob tablasını sağa ve sola hareket ettirin. Daha sonra sol ortak karotis arterini bulun ve görüntüleme düzlemi ile karotis arasında bir açı oluşacak şekilde görüntüleme tablasını eğin.Probu sol ortak karotid arterin ortasında tutarak, ultrasonu B modundan pulse wave doppler moduna geçirin. Açı düzeltme çizgisi ortak karotid artere paralel olacak şekilde, açı düzeltme düğmesini kullanarak açıyı ayarlayın. Frame store düğmesine basarak görüntü alın.Common carotid arterdeki kanın hız profili kaydedilecektir. Diyastol sırasında hız profilinde bir tersine dönme beklenir. Karşılaştırma yapmak için sonraki adımları sağ common carotid arterde tekrarlayın.Sağ ortak karotid arterinde hız daha yüksek olacak ve ters akış görülmeyecektir. Yeterli görüntüler elde edildikten sonra anesteziyi kapatın ve ekokardiyografi jelini fareden silin. Fareyi bant sabitleyicilerinden kurtarın.Hayvanı ısıtılmış bir iyileşme odasına yerleştirin. İnhalasyon yoluyla uygulanan isofloran sonrası ayılma genellikle beş dakikadan kısa sürede gerçekleşir.Fare derisini abdomenden toraksın üst kısmına kadar kesin. Ardından, pens kullanarak, göğüs kafesinin altındaki abdominal duvarı keskin bir makasla açın. Sternumu kaldırın ve diyaframı kesin.Kalbi açığa çıkarmak için göğüs kafesini kesin. Ardından CVA venini kesin; bir butterfly perfüzyon kiti kullanarak, akciğerler ve karaciğer soluklaşana kadar sol ventrikül üzerinden mililitre başına 10 ünite heparin içeren normal salin ile iki ila üç dakika boyunca basınçlı perfüzyon uygulayın. Salin perfüzyonunun ardından, boyun derisini kesin ve karotis arterleri açığa çıkana kadar tüm yağlı kasları ve bağ dokuları temizleyin.Şimdi fareyi bir diseksiyon mikroskobu altına yerleştirin ve ikinci perfüzyon için sol karotisin ligasyon bölgelerinin hemen altına 29 gauge bir iğne ile küçük bir delik açın. Sol karotisin ikinci perfüzyon sonrası iyice perfüze olduğundan emin olarak, sol ventrikül üzerinden yaklaşık bir dakika daha basınçlı perfüzyon uygulayın. Karotidleri çevreleyen peri advent dokularını dikkatlice temizlemek için ince uçlu penset ve küçük yaylı makas kullanın.Aortik ark ile karotis bifurkasyonunun üzerindeki ligasyon noktaları arasındaki bu temizleme adımı sırasında karotisleri sıkmamaya veya germemeye dikkat edin. Sol karotis arterini sağ subklavyen arter dallanma noktası ile karotis bifurkasyonu arasından kesin. Sağ karotis arterini kesin.Karotidleri, buz soğukluğunda HBSS içeren 35 milimetrelik bir kültür kabına aktarın. Kalan tüm periadventisial dokuları dikkatlice temizleyin. 29 gauge iğneli bir insülin şırıngasını bir karotidin ucuna yerleştirin ve karotidi ve iğnenin ucunu forsepsle kavrayın.Hızlı ve dikkatli bir şekilde. Her bir karotidi 150 µL cazo lizis tamponu ile yıkayarak tamponu "intima eit" olarak etiketlenmiş 1,5 mL'lik bir tüpte toplayın. Son olarak, her bir karotidi bir kez HBSS ile durulayın.Ardından örneği, üzerinde "medya artı adventisya" yazılı 1,5 milliliter mikro santrifüj tüpüne yerleştirin ve kapağını kapatın. Sıvı azot içerisinde dondurun. Daha sonra, dondurulmuş örneklerden gin'ler kullanılarak RNA ekstre edilebilir.Micro RZ mini kit. Bir farenin ultrasonografi incelemesi, bu şekilde gösterildiği gibi sol karotis arterinin parsiyel ligasyonundan bir gün sonra gerçekleştirilmiştir; başarılı parsiyel ligasyon, diyastol sırasında sol ortak karotis arterinde kan akış hızını düşürür ve akışı tersine çevirir. Yüksek yağlı diyetle beslenen APOE nakavt farelerde parsiyel ligasyon, iki hafta içinde kontralateral sağ karotiste değil, sol ortak karotis arterinde güçlü bir ateroskleroz oluşturur. Ateroskleroz, lipidler için Oil Red O boyaması ve çekirdekler için hematoksilin karşıt boyaması kullanılarak gösterilmiştir.Karotis intima'dan toplanan RNA, pcam one gibi endotelyal belirteç genleri ve bir medial düz kas hücresi belirteci içerir. Alfa SMA gibi genler, arterin media artı adventisya için m plus A olarak işaretlenen geri kalan kısmından toplanan RNA'da bulunmazken, düz kas belirteci mevcut, endotelyal belirteç ise yoktur. Size kısmi karotis ligasyonunun nasıl yapılacağını göstermiş olduk.Ligasyonu doğrulamak için ultrason kullanın ve ayrıca intimal RNA izolasyonu için bir yöntem uygulayın. Bu prosedürü gerçekleştirirken, ortak karotis arterin dallarını doğru bir şekilde tanımlamak ve diğer dallar sıkıca ligatlanırken superior tiroid arterin kalmasını sağlamak esastır. Basit bir hazırlık sırasında, ligasyon sonucunu ultrason kullanarak doğrulamak önemlidir; yıkama işleminin, lümen dışındaki arterin başka hiçbir kısmıyla temas etmemesine dikkat edin. Bununla birlikte, izlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.

a-model-disturbed-flow-induced-atherosclerosis-mouse-carotid-artery

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu yazıda daraltıcı manşet fare karotis arter ateroskleroz ikna etmek için tasarlanmıştır. Implante manşet farklı inflamatuvar fenotip aterosklerotik lezyon gelişimi tetikleyen yüksek, düşük ve salınımlı shear stresin iyi tanımlanmış bölgeler oluşturur, kendi iç lümen konik şekli nedeniyle.

Fare Shear stres İndüklenmiş Ateroskleroz Tetikleme Karotis Kol İmplantasyonu

Fare karotis arter stent implantasyonu bir modeli açıklanmıştır. Diğer benzer yöntemlerle karşılaştırıldığında, bu işlem için uygun bir yol farklı ilaç salınımlı stent ve restenoz moleküler mekanizmaları için damar duvarı tepki olarak çalışma imkanı sunan, çok hızlı, basit ve erişilebilir.

Restenoz Çalışmaları Karotis Arter Stent İmplantasyonu bir murin Modeli

Restenozun inhibisyonu için terapötik bileşiklerin perivasküler verilmesi için bir model test sistemi olarak hizmet etmek üzere neointimal hiperplaziyi indüklemek için farelerin femoral arterinde tel yaralanması oluşturan bir cerrahi tekniği tanımlıyoruz.

Bir Perivasküler Drug Delivery Patch İmplantasyonunda ile Femoral Arter Tel Yaralanma sıçan Modeli

Bu çalışmada farelerde hızlandırılmış ateroskleroz indüksiyonu için invaziv bir prosedür açıklanmaktadır. Elektrik veya kriyo kaynaklı yaralanma yöntemi ile karşılaştırıldığında, mekanik kaynaklı yaralanma revaskülarizasyon tedavileri sonrası restenoz insan durumunu taklit eder ve ilgili moleküler mekanizmaların çalışması için idealdir.

Farelerde Hızlandırılmış Ateroskleroz Indüksiyonu: "Tel-Yaralanma" Modeli

arteriyel denüdasyon yaralanmasının ardından yeniden endotelizas- hücresel ve moleküler mekanizmaların anlaşılması trombozu ve arterlerin restenoz önlemede büyük önem taşımaktadır. Burada İnfrarenal abdominal aorta tekrarlanabilir arter denüdasyon yaralanması için bir protokol açıklar. prosedür fare modelleri kullanılarak endotel rejenerasyon düzenleyen altında yatan mekanizmaları araştırmak için geliştirilmiştir.

Bir Fare Modelinde İnfrarenal Abdominal Aort Bağlama Ekipmanları tarafından tekrarlanabilir Arter denüdasyon Yaralanma

Tek hücreli omik deneyler yapmak için stabil veya rahatsız edici akış koşullarına maruz kalan fare karotis arterlerinin lümeninden endotel hücrelerini ve çekirdeklerini izole etmek için bir yöntem sunuyoruz.

Tek Hücreli Multi-Omik Deneyler için Fare Karotis Arterlerinin Lümeninden Endotel Hücrelerinin İzolasyonu

Mevcut protokol, basınç aşırı kardiyak hipertrofisini indüklemek için farelerde yeni bir aort bantlama tekniğini tanımlamaktadır. Bantlama için, sabit bir iç çapa sahip bir lastik halka kullanılır. Bu yeni teknik, gelecekteki deneyler için daha az varyans ve daha fazla tekrarlanabilir veri vaat ediyor.

O-Ring Aort Bantlamasına Karşı Geleneksel Transvers Aort Daralması Basınç Aşırı Yüküne Bağlı Kardiyak Hipertrofinin Modellenmesi İçin

Burada, fare karotis arterlerinin tek hücreli bir süspansiyonunu hazırlamak için iki aşamalı bir hücre sindirim protokolünü açıklıyoruz.

Tek Hücreli Dizileme için Fare Karotis Arterlerinden Tek Hücreli Süspansiyonun Hazırlanması

Bu protokol, tek bir cerrahi operasyonla bir murin modelinde karotis anevrizmalarının indüklenmesi için standart bir cerrahi yöntemi tanımlamaktadır.

Karotis Anevrizması Oluşumunun Bir Murin Modeli

Bu çalışma, fare arterlerinde hemostaz sağlamak için etkili bir yöntem geliştirmeyi amaçlamaktadır.

Fare arterlerinde hemostaz için basit ve etkili prosedür

Öğrenin, farelerde kısmi karotid ligasyonu ile ateroskleroz gelişimini ve yüksek saflıkta endotel RNA izolasyonunu. Bu yöntem kardiyovasküler araştırmalar için hızlı ve güvenilir bir model sunar.

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model (Video) | JoVE Journal

Kısmi ligasyon Fare Karotis Arter Disturbed Akış Kaynaklı Ateroskleroz ve Karotis Endotel RNA İzolasyonu Basit Bir Yöntem Bir Model

Daha fazla video keşfet