Name: Organotipik Kültürleri nöronal Çığ Çok elektrot Dizi Kayıtlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 1 s
Description: Öğrenin, çok elektrot diziler üzerinde korteks ve ortabeyin ko-kültürleri kullanarak nöronal çığların kendiliğinden organizasyonunu incelemeyi. Bu yöntem, kritik durum dinamiklerini ve ağ düzeyinde yanıtları kontrollü koşullarda çalışmanıza olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Ruh Sağlığı Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı Bölümü (DIRP) tarafından finanse edildi.

1. Uzun vadeli Kayıtlar için MEA ile Steril, Mühürlenebilir Cam Odası <ol><li> Güvenli ve sıkı bir kültür odası kapatılması için gerekli olan Teflon-plastik kap (as Cam), dişli Cam silindir alt parçacığı (Şekil 1A, B) (Aceglass) yaklaşık 2 mm kesilir. Su (3x) ve 200 kanıtı etil alkol içinde 5 dakika boyunca kaynar ile durulama Temizlik cam yüzük, kurumasını bekleyin. </li><li> Kısım silikon çözümü MEA yüzey cam yüzük takmak için gereklidir. 15 ml parçaları karıştırın Sylgard 184 Silikon Elastomer Kit A &amp; B iyice -20 ° C'de 1 ml alikotları mağazası, hava kabarcıklarını çıkarmak için 15 dakika bekletin </li><li> MEA Tutkal cam halka (8x8 ızgara w / iç zemin elektrot, sıçan / fare için 30 mikron elektrot çapı 200/100 mikron elektrot arası mesafe) (Şekil 1A, B). 1 ml (23 ° C) silikon küçük iğne şırınga alın. ~ 60 ° C sıcak plaka üzerinde cilasız kesme cam yüzük, merkezi cam yüzük, MEA üzerinde güçlü bir mühür yüzük dışında etrafında ek bir silikon bir tabaka halinde yüzeye silikon uygulayın, 1 - 2 saat tedavi sağlar. </li><li> 3x% 70 alkol ile takip deiyonize su ile durulayın bir laminer akış kaputu MEA odası ve kamara kapaklarını sterilize edin (3 x; son alkol içinde 10 dakika bekletin durulayın) UV ışığı odanın 10 dakika maruz kalma ve kapak iç takip . Otoklav MEA odası (120 ° C; ıslak, 45 dakika) ve kurumaya bırakın. </li><li> Poli-D-lizin Coat MEA ile yüzey kültür odası içinde. Oldukça lipofilik yeni ÇÇA, elektrot ızgara çözüm tekrarlanan damlacık aspirasyon ile kaplamak. Kullanılan ÇÇA için çözümü ile odasının alt kapağı, aşırı sıvı aspire, laminer kaput içinde steril koşullar altında buharlaştırmak için izin verir. MEA kamara mühür depolama ve ileride kullanmak için kapağı takın. </li></ol> 2. Organotipik Kültürler Hazırlanması ve Büyüme İçin Gerekli Malzemeler <ol><li> Steril petri (Falcon, 100 x15 ~ 5 mm seviyesinde) içine dökün,% 0.9 NaCl içinde steril agar eritin, soğumaya bırakın ve depolama için Parafilm ile steril sargı. Katı agar kullanmak için 20 x 10 x 5 mm blokları kesin. </li><li> Paketleme ile saklayın süper yapıştırıcı, örneğin Devcon Super Glue II, sterilite korumak için laminer akış kaputu içinde, önce% 70 EtOH sildi. </li><li> % 50 D-Glukoz (SIGMA ultra, G7528), 40 gr glikoz 40 ml deiyonize kültür su (Sigma) ekleyerek hazırlayın. -20 ° C'de 2 ml alikotları saklayın </li><li> 4 ml% 50 D-glukoz 500 ml Gey Dengeli Tuz çözüm ekleyin ve kullanmadan önce dondurucuda slush (sıvı / buz kristallerinin karışımı) soğuk. </li><li> Yavaşça 10 dakika, girdap ve steril bir Petri kabı içine açık içerik decantate - 5 ml de-iyonize kültür su (kabarcıklarının oluşumunu önlemek, nazik sallamak) sulandırın tavuk plazma, çözüm 5 razı sağlar. Steril filtre (0.22 mikron gözenek filtresi; protein) -20 ° C'de plazma çözüm cryotubes içine kısım 350 ul (NuncTM), mağaza </li><li> (NuncTM) kısım 40 ul cryotubes içine, (0.22 mikron gözenek filtre) buna göre, steril filtre sığır plazma sulandırın trombin, -20 ° C'de saklayın Çalışan bir çözüm için, Gey dengeli tuz solüsyonu w / D-Glikoz 375 ul trombin solüsyonunun 40 ul sulandırmak. </li><li> At serumu, 200 ml Bazal Orta Kartal, 4 ml% 50 glikoz ve 200 mM L-glutamin 2 ml eklenir 100 ml Hank Tamponlanmış Tuzlu Çözüm 100 ml karıştırılarak 400 ml kültür ortamı hazırlayın. 8 hafta, 100 ml'lik PYREX şişeler içinde 4 ° C - 4 saklanabilir </li><li> Mitoz inhibitörü 0.3 mM üridin, 0.3 mM ARA-C sitozin-β-D-arabinofuranoside ve 0.3 mM 5-floro-2'-dezoksiuridin, steril filtre, kısım 200 ul ve -20 ° C'de 6 mağaza karışımı hazırlayın - 12 ay. </li></ol> 3. Korteks ve ventral tegmental alan (VTA) Doku Diseksiyon (süre: &lt;1hr) <ol><li> Prosedür verim korteks ve VTA ~ 12 sıçanlar ve fareler co-kültürler ve steril koşullar altında bir laminer akış kaputu içinde hazırlanan doku kesitlerinde. Doku toplanması için toplam süresi 1 saat daha edilmelidir. </li><li> 1 - 2 postnatal gün (PND), sağlıklı, iyi beslenen yavrular (abdominal 'süt nokta' varlığı çöp boyutu ~ 10) alın. Burnu ile hafifçe bir yavru tutun, özgürce asmak için izin ve hızlı bir şekilde, keskin bir makas ile boyun üssünde başını kesmek. </li><li> Beyin çıkarılması için, (iki yan makas keser) cilt kaldırmak ince göz makas (1 sagital orta hat kesme, 1 koronal korteks kes / serebellum kavşağı) ile açık kafatası kesmek. 4 kafatası flep geri çevirin. Bilenmiş bir spatula yardımı ile beyin, kaudal altında, koku ampul aracılığıyla cepheden önceden spatula kesmek. Kafatası beyin yavaşça kaldırın ve hızlı soğutma ve geçici depolama için steril, soğutulmuş, Gey çözümü slayt sağlar. 2 beyinleri için daha fazla 3.2 - 3.3 adımları tekrarlayın (toplam süresi: &lt;20 dk). </li><li> VTA almak içindoku, beyinlerinin küçük bir spatula kullanarak, kuru steril bir Petri kabı üzerine aktarın. Ayrıca yaklaşık 1 cm yanlara doğru hafifçe kaydırarak her bir beyin tarafından aşırı sıvı çıkarın. Beyin sapı, beyincik düzeyinde bir jilet kullanarak koronal, dikey kesim tarafından çıkarın. </li><li> Dilimleme işlemi sırasında beyin mekanik stabilizasyon için disk montaj Tutkal agar bloğu. Superglue ince bir çizgi yerleştirin disk üzerinde agar bloğu önünde birkaç milimetre (agar tutkal dokunmaktan kaçının). </li><li> Küçük bir spatula kullanarak, aşağı, frontal kutup aktarmak ve her beyin monte. Frontal kutuplu montaj disk yapıştırılmış olduğunu ve ventral taraf sırasında kesilmiş dilimleri kesme ve kolay asansör-off uygun mekanik stabilizasyon elde etmek için herhangi bir tutkal kalıntı bırakmadan agar temas ettiğinden emin olun </li><li> Daldırın ve güvenli montaj diski bir vibratome tepsiye beyin montaj (örneğin Leica VT1000) dikkatlice steril, soğuk Gey çözümü ile dolu. Dikkatli bir şekilde temizlenmiş bir tıraş bıçağı ile (% 90 EtOH), en yüksek titreşim frekansı Ortabeyin koronal dilim kesilmiş ve nispeten düşük 400 500 mikron kalınlığında ileri hız. Emme ampul ters bir Pasteur pipeti kullanarak, transfer ve steril, soğuk Gey çözümü ile dolu 35 x 10 mm Petri kapları VTA içeren dilim toplamak (Şekil 1C; koronal plaka 18 - 15 E22 20). </li><li> Korteks bölümleri için adımları tekrarlayın 3,2 - 3,6, ancak korteks ve serebellum arasındaki dikey kesme uygulamak ve frontal kutuplu forebrains kadar montaj. Striatum düzeyinde başlayarak yaklaşık 3 koronal dilim (350 mikron kalınlığında) gelecekteki korteks diseksiyon için toplanır. </li><li> Kırık Jilet yapılan bir mikro-bıçak kullanarak, VTA (Şekil 1C) içeren bir stereomikroskop altında frontal korteks ve orta beyin alanları ~ 2 mm genişliğinde koronal bölümünde teşrih. Soğutulmuş Gey çözümü ile dolu küçük yemekler (örneğin odasının slaytlar) doku bölümleri ayrı ayrı toplayın. </li></ol> 4. Korteks ve VTA Doku Dilimleri Montaj MEA (Saat: &lt;1 saat) <ol><li> Odak elektrot dizisi ile bir stereo mikroskop altında oda sıcaklığında pozisyon MEA. Merkezi temiz, tozsuz, 25 plazma ul damlacık ve steril elektrot dizi matris. Küçük spatulae kullanarak, plazma damlacık içine dikkatlice korteks ve VTA bölümüne kaydırın. </li><li> MEA soğutma plakası üzerinde yerleştirin, görüntülemek ~ 15 s için izin soğuk plazma damlacık içine trombin 25 ul eklemek, sonra tekrar odaklayın. Trombin pipet kullanarak, MEA boyunca küçük dairesel hareketler ile plazma / trombin karışımı dikkatli bir şekilde yayılır. Kırılgan elektrot dizisi doğrudan temas etmeyin. Korteks, dizinin ikinci elektrot satır boyunca dorsal sınır dizi yavaşça yerleştirin. Bu şekilde, gelişmekte olan yüzeysel katmanları sonunda dizinin hatırlatma kapsayacaktır. VTA korteks bölümü (Şekil 1D), ventral sınır komşu yerleştirilir. </li><li> Cap ve gevşek MEA / kültür montaj Plazma / trombin koagülasyon için izin kaputun içinde ~ 5 dakika boyunca oda sıcaklığında oturur yüksek nemi korumak için MEA odasına yakın. 3 kültürler için daha fazla 4.3 - Bu arada, 4.1 adımı tekrarlayın. </li><li> 25 x 5 / 8 iğne ile 1 cc şırınga kullanarak kültür odasına küçük damlacıklar 600 ul kültür ortamı dikkatlice ekleyin. </li><li> Sıkıca MEA odası ve yerde MEA / inkübatör (Şekil 1B) içinde sallanan depolama tepsisi kültür montaj kapatın. Için, 3 prosedürü hızlandırmak - 4 ÇÇA örtüşen dizileri monte edilebilir. Montaj süresi 12 ÇÇA &lt;1hr olmalıdır. </li><li> In vitro (DIV) 2 gün sonra, 10 ul mitoz inhibitörü ekleyin. Yenile kültür ortamı 4 SAYI az% 60 ve bundan sonra her 4 günde. </li></ol> 5. Elektrofizyolojik Kayıt ve Uyarıcı Üretimi <ol><li> MEA, her elektrot için 24 kHz ~ 10 dakika ~ 1 hafta 5,6 kayıt spontan aktivite sonra yerel alan potansiyeli (LFP) ve aksiyon potansiyelleri yangın nöron eğilimi önemli deplasmanlar arasındaki ilişki kurmak için (Donanım : MEA1060 w / kararma devre, x1200 kazanç, 12 bit A / D, aralık 0-4096 mV, Çok Kanallı Sistemleri Yazılım: MC_Rack). Zemin iç toprak elektrot yoluyla sağlanan, ya da dışarıdan bir Ag / AgCl yarım hücre ekleyerek. </li><li> Ekstrasellüler başak aktivite (bant geçiren 300 - 200 Hz - 3.000 Hz) 1 bir bant geçiren filtre ile LFP ayırın. Spike aktivite daha off-line başak dizicili (örneğin Plexon A.Ş.) kullanarak tek ve çoklu ünite aktivitesi ayrılabilir. Hesapla başak her elektrot için ortalamaları tetikledi. Korteks kültürler için, ortalamalarının en çok tercih edilen kültür nöronal spike zaman olarak negatif LFP deplasmanlar (nLFP) belirleyecektir. </li><li> (Şekil 2) -3 standart sapma (SD) LFP izleri gürültü her elektrot için bir eşik hesaplayınNLFPs pik süreleri ve genlikleri belirlemek çapraz eşiği (Şekil 2B, C). Ayrıntılar için: 2,4 görmek için; ve süresini ¨ t ardışık zaman aktif sanat (Şekil 2D aynı olan tüm elektrottan nLFPs birleştirerek dizi Spatiotemporal nLFP kümeleri tespit bir kez bin ¨ t (2 ila 8 ms ) seçti , 5). </li><li> Nöronal çığ belirlemek için, her nLFP küme boyutunu hesaplamak, örneğin sayıda aktif elektrotlar veya nLFP amplitüdleri toplamı, bir boyut histogram oluşturmak ve çift-logaritmik koordinatlarda arsa. Nöronal çığ için, boyut dağılımı, düz bir çizgi ile çift logaritmik koordinatları 2 (Şekil 2E, F) yakınlaştıkları bir güç hukuk izler . Güç yasalar istatistiksel testler için 16 Bkz. </li><li> Genlik G akım kontrollü uyaranlar (Stimulus jeneratör STG 1008, Çok Kanallı Sistemler) uygulanır bir elektrot seçerek doku uyarılmış tepkiler. - 200 uA genlik-S 50 μs genlik + S / 2 ve S ile 10 arasında 100 s: elektrot zararı azaltmak için, sınırlı bir dizi bipolar kare dalga ile tek şokların şarj nötr stimülasyon kullanabilirsiniz. Daha fazla bilgi için kullanım kılavuzu bakın. </li><li> Dinamik aralık 9 stimülasyon sonra 500 ms sonra tüm elektrotlar 4 kHz örnekleme hızında LFP yanıtları kaydedildi kayıt uyaran kaydetmek için. Uyaran eserler azaltmak ve pre-amplifikatör doygunluğunu önlemek için uyarılması sırasında baş sahne yükselticiler keser devresi (Multi-kanal sistemleri) kararma kullanın. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: Yeni ÇÇA ile yaklaşık 8 - 9 - 10 kültürlerin birçok hafta boyunca ayakta kalacak. Uzun vadeli kayıtların çoğu bize birçok haftalık kurs 5 üzerinden bireysel kültürlerin gelişimini takip etmek sağlayan kültür ortamı, kuvöz içinde yer alır. Deneyler dayanarak, LFP kayıtları güvenilir 100'den fazla kültür günü için kullanılan ÇÇA ile elde edilebilir. Buna karşılık, ekstrasellüler başak aktivitesi daha güvenilir nispeten yeni ÇÇA (&lt;40 kültür gün) ile ölçülür. Tipik bir deneyde, kültür odası mühürlü tutmak bağlı baş evre (Şekil 1B, sol) ile tepsiye depolama tepsisi (Şekil 1B, sağ) bir MEA aktarmak. 5 için korteks, korteks-VTA ortak kültürleri 6, anestezi sıçan 6 ve in vivo 7 uyanık maymun, yüzeysel katmanları nöronal çığ sırasında nöronal ateşleme de ağırlıklı olarak LFP pik negatif sapma yakın oluşur (nLFP .) Bu nedenle, yerel olarak senkronize nöronal grupların uzaysal organizasyon nLFPs dizi 17 uzay ve zaman içinde ortaya çıkması ölçerek tahmin edilebilir . MEA Aktivite temporal kümeler halinde ortaya eğilimindedir, bu faaliyetin bir elektrot diğer sitelerde faaliyet eşlik ediyor. Birkaç saniye arayla meydana gelen 3 kümeleri komplo üzerine, bu tür faaliyet dönemlerinde LFP tipik dalga şekilleri Şekil 2A gösterilmiştir. Her küme için, negatif alan deplasmanlar 1 bir pencere içinde çeşitli elektrotlar görülebilir. S SD birden çok negatif bir eşik çapraz nLFP doruklarına açılan nLFP tepe kere şeklinde faaliyet nokta 'sütun' tesadüf nLFPs yakınında çeşitli elektrotlar (Şekil 2B) temsil eden bir raster uygun görüntülenmiştir. Bu faaliyetin Spatiotemporal organizasyonu oldukça karmaşık, daha az ya da çok düşük temporal çözünürlükte homojen görünüyor 'sütun', yüksek temporal çözünürlük ve böylece (Şekil 2C) ayrı kümeler oluşur. Aslında, Spatiotemporal nLFP kümeleri ortaya çıkması son derece kortikal ağlarda organize edilmektedir. Daha spesifik olarak, organizasyon nöronal çığ için ölçek değişmez. Bu, belirli bir zamansal çözünürlük ¨ t küme boyutları ihtimali hesaplanarak gösterilmiştir. Burada, kümeler aynı veya ardışık zaman kutuları (Şekil 2B) meydana nLFPs oluşmaktadır. Böyle bir küme boyutu Küme başına nLFPs veya Küme başına entegre nLFP amplitüdleri toplam sayısı olarak ifade edilir, küme boyutu dağılımları eğimi -1.5 2,4,5,7 gösterilmiştir güç hukuku, ortaya koymaktadır ( Şekil 2E, F). Bu dağıtım boyutları kxs, k sabit bir faktör oranı küme boyutları ölçek değişmeyen sipariş tanımlar unutmayın, s. bağımsız -1.5 k, Bu güç hukuku organizasyon dizi boyutu 2 bağımsız, temporal çözünürlük ¨ t 2 ve önemli nLFP tanımlamak için kullanılan eşik 7 fonksiyonudur. Nöronal grup büyüklüğü 7 ile nLFP genlik ölçekler, nLFPs ölçek değişmeyen örgütü ölçekli değişmeyen, yani fraktal, sipariş o yansıtırf yerel tüm boyutları içeren nöron gruplarının senkronize. <img src="/files/ftp_upload/2949/2949fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 (A) monte MEA dişli cam yüzük ile yan ve üst görünümleri ve buna karşılık gelen kap. (B) inkübatör içinde. Sol: headstage inkübatör koşul altında, tek bir kültür kayıt için izin monte. Sağ: kültür büyümesi için çok sayıda ÇÇA tutarak Tepsi. Yan jantlar: alternatif kültür gelişimi için gerekli olan batık ve atmosfere maruz kalan faz step motor kontrollü sallanan cihaz. (C), korteks VTA co-kültür için kullanılan koronal sıçan dilimleri için şematik çizimi. VTA ventral tegmental alan (VTA gri) içeren Cortex bölümlerde (sol) ve beynin bölümleri (orta, sağ), kırık çizgileri boyunca keserek elde edilir. Ctx: korteks; wm: beyaz cevher; cpu: striatum; VTA: pons: pontin alan. 15 ile ilgili koronal plakaları da 8, 18, ​​ve 20 Bkz. (D), MEA ve kültürünün ilk 9 DIV gelişimi tek bir korteks-VTA ortak kültürler Yerleştirme ve büyüme. Kültür ve dizi ilerici genişleme, düzleşme unutmayın. Yansıtıcı doku parçaları, dejenere olmuş hücre ve doku artıkları göstermektedir. Sağlıklı doku, görünür ışık transillüminasyon altında opak ve grimsi. <img src="/files/ftp_upload/2949/2949fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 kortikal Organotipik kültürler Nöronal çığ. (A) Overplot dizi spontan aktivite üç dönem, birkaç saniye ile ayrılır. Her faaliyet dönemi dizi birçok elektrotlar üzerinde olumsuz LFP deplasmanlar (her renk bir faaliyet dönemine etiketler) oluşur unutmayın. (B) her elektrot nLFPs Negatif tepe kez bir aktivite raster içine monte edilir. 'Column' benzeri yapılar yakın senkron aktivite dönemleri göstermiştir. (C), yüksek bir zaman ölçeği senkronize görünür sütun yüksek zamansal ölçeklerde (3 zamansal ölçeklerde gösterilen) birden fazla sütun oluşur unutmayın. (D) nöronal çığ algoritması şematik gösterimi. Gürültü SD-x bir eşik geçen olumsuz LFP deplasmanlar (nLFP), 2 x 2 elektrot dizi zirve zaman ve genlik tanımlanır. NLFPs uzaysal organizasyon genişliği ¨ t gittikçe aktif zaman bidonları içine kümelenmiş. NLFP aktif site sayısı, yani elektrotlar da bir küme boyutu tarafından belirlenen (s = 4) veya nLFP amplitüdleri entegre toplamı (s = 130 μV). Yaşam süresi, ¨ t katları ile ölçülür. (E, F) Güç hukuk küme boyutu dağıtım nöronal çığ gibi kümeleri tanımlar. Dizi (burada 200 mikron) Δd belirli bir interelectrode mesafeler seçim dinamikleri dikkate alınmalıdır hangi belirli bir ¨ t tanıtır unutmayın. Daha spesifik olarak, hangi oran Δd / ¨ t güç hukuk eğimi α nöronal çığ 2,4,5 -1.5 yaklasik hangi ağ ortalama yayılma hızı yakındır. Lütfen Şekil 2'de büyük halini görmek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2949/2949largefig2.jpg">buraya tıklayın</a> .

<ol><li>Spitzer, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+activity+in+early+neuronal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Electrical activity in early neuronal development.</a> Nature. 444, 707-712 (2006).</li>
<li>Beggs, J. M., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+avalanches+in+neocortical+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal avalanches in neocortical circuits.</a> J. Neurosci. 23, 11167-11177 (2003).</li>
<li>Beggs, J. M., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+avalanches+are+diverse+and+precise+activity+patterns+that+are+stable+for+many+hours+in+cortical+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal avalanches are diverse and precise activity patterns that are stable for many hours in cortical slice cultures.</a> J Neurosci. 24, 5216-5229 (2004).</li>
<li>Stewart, C. V., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inverted-U+profile+of+dopamine-NMDA-mediated+spontaneous+avalanche+recurrence+in+superficial+layers+of+rat+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Inverted-U profile of dopamine-NMDA-mediated spontaneous avalanche recurrence in superficial layers of rat prefrontal cortex.</a> J. Neurosci. 26, 8148-8159 (2006).</li>
<li>Stewart, C. V., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeostasis+of+neuronal+avalanches+during+postnatal+cortex+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Meth%22%5BJournal%5D)">Homeostasis of neuronal avalanches during postnatal cortex development in vitro.</a> J. Neurosci. Meth. 169, 405-416 (2007).</li>
<li>Gireesh, E. D., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+avalanches+organize+as+nested+theta-+and+beta%2Fgamma-oscillations+during+development+of+cortical+layer+2%2F3%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Neuronal avalanches organize as nested theta- and beta/gamma-oscillations during development of cortical layer 2/3.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 7576-7581 (2008).</li>
<li>Petermann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+cortical+activity+in+awake+monkeys+composed+of+neuronal+avalanches%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Spontaneous cortical activity in awake monkeys composed of neuronal avalanches.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 15921-15926 (2009).</li>
<li>Kinouchi, O., Copelli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+dynamical+range+of+excitable+networks+at+criticality%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Physics%22%5BJournal%5D)">Optimal dynamical range of excitable networks at criticality.</a> Nature Physics. 2, 348-351 (2006).</li>
<li>Shew, W. L., Yang, H., Petermann, T., Roy, R., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+avalanches+imply+maximum+dynamic+range+in+cortical+networks+at+criticality%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal avalanches imply maximum dynamic range in cortical networks at criticality.</a> J. Neurosci. 29, 15595-15600 (2009).</li>
<li>Shew, W. L., Yang, H., Yu, S., Roy, R., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Information+capacity+is+maximized+in+balanced+cortical+networks+with+neuronal+avalanches%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Information capacity is maximized in balanced cortical networks with neuronal avalanches.</a> J Neurosci. 5, 55-63 (2011).</li>
<li>Karpiak, V., Plenz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+maintenance+of+organotypic+cultures+for+multi-electrode+array+recordings%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Preparation and maintenance of organotypic cultures for multi-electrode array recordings.</a> Current Protocols in Neuroscience. 1, 6-6 (2002).</li>
<li>Hammerle, H., Egert, U., Mohr, A., Nisch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+recording+in+neuronal+networks+with+substrate+integrated+microelectrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens.+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Extracellular recording in neuronal networks with substrate integrated microelectrode arrays.</a> Biosens. Bioelectron. 9, 691-696 (1994).</li>
<li>Nisch, W., Bock, J., Egert, U., Hammerle, H., Mohr, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thin+film+microelectrode+array+for+monitoring+extracellular+neuronal+activity+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens.+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">A thin film microelectrode array for monitoring extracellular neuronal activity in vitro.</a> Biosens. Bioelectron. 9, 737-741 (1994).</li>
<li>Egert, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+organotypic+long-term+culture+of+the+rat+hippocampus+on+substrate-integrated+multielectrode+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A novel organotypic long-term culture of the rat hippocampus on substrate-integrated multielectrode arrays.</a> Brain Res. Protoc. 2, 229-242 (1998).</li>
<li>Altman, J., Bayer, S. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAltman%2C+J+%22Atlas+of+Prenatal+Rat+Brain+Development%22">Atlas of Prenatal Rat Brain Development</a>. , CRC Press. Boca Raton. (1995).</li>
<li>Clauset, A., Shalizi, C. R., Newman, M. E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Power-law+distributions+in+empirical+data%5BTitle%5D)+AND+%22arXiv%22%5BJournal%5D)">Power-law distributions in empirical data.</a> arXiv. , (2009).</li>
<li>Plenz, D., Thiagarajan, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organizing+principles+of+neuronal+avalanches%3A+cell+assemblies+in+the+cortex%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The organizing principles of neuronal avalanches: cell assemblies in the cortex?</a> Trends Neurosci. 30, 101-110 (2007).</li>
<li>Cäser, M., Bonhoeffer, T., Bolz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+organization+and+development+of+slice+cultures+from+rat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular organization and development of slice cultures from rat visual cortex.</a> Exp. Brain Res. 477, 234-244 (1989).</li>
<li>Cäser, M., Schüz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+of+neurons+in+neocortical+slice+cultures.+A+light+and+electron+microscopic+study+on+in+situ+and+in+vitro+material%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hirnforsch%22%5BJournal%5D)">Maturation of neurons in neocortical slice cultures. A light and electron microscopic study on in situ and in vitro material.</a> J. Hirnforsch. 33, 429-443 (1992).</li>
<li>Götz, M., Bolz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+vasoactive+intestinal+polypeptide+%28VIP%29-containing+neurons+in+organotypic+slice+cultures+from+rat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Development of vasoactive intestinal polypeptide (VIP)-containing neurons in organotypic slice cultures from rat visual cortex.</a> Neurosci. Lett. 107, 6-11 (1989).</li>
<li>Götz, M., Bolz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+and+Preservation+of+cortical+layers+in+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Formation and Preservation of cortical layers in slice cultures.</a> J. Neurobiol. 23, 783-802 (1992).</li>
<li>Bolz, J., Novak, N., Götz, M., Bonhoeffer, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+target-specific+neuronal+projections+in+organotypic+slice+cultures+from+rat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Formation of target-specific neuronal projections in organotypic slice cultures from rat visual cortex.</a> Nature. 346, 359-362 (1990).</li>
<li>Bolz, J., Novak, N., Staiger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+specific+afferent+connections+in+organotypic+slice+cultures+from+rat+visual+cortex+cocultured+with+lateral+geniculate+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Formation of specific afferent connections in organotypic slice cultures from rat visual cortex cocultured with lateral geniculate nucleus.</a> J. Neurosci. 12, 3054-3070 (1992).</li>
<li>Novak, N., Bolz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+specific+efferent+connections+in+organotypic+slice+cultures+from+rat+visual+cortex+cocultured+with+lateral+geniculate+nucleus+and+superior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Formation of specific efferent connections in organotypic slice cultures from rat visual cortex cocultured with lateral geniculate nucleus and superior colliculus.</a> Eur. J. Neurosci. 5, 15-24 (1993).</li>
<li>Plenz, D., Aertsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+dynamics+in+cortex-striatum+co-cultures.+I.+Anatomy+and+electrophysiology+of+neuronal+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neural dynamics in cortex-striatum co-cultures. I. Anatomy and electrophysiology of neuronal cell types.</a> Neurosci. 70, 861-891 (1996).</li>
<li>Plenz, D., Aertsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+dynamics+in+cortex-striatum+co-cultures.+II.+Spatio-temporal+characteristics+of+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci%22%5BJournal%5D)">Neuronal dynamics in cortex-striatum co-cultures. II. Spatio-temporal characteristics of neuronal activity.</a> Neurosci. 70, 893-924 (1996).</li>
<li>Plenz, D., Kitai, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+cortex-striatum-mesencephalon+cultures%3A+the+nigro-striatal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Organotypic cortex-striatum-mesencephalon cultures: the nigro-striatal pathway.</a> Neurosci. Lett. 209, 177-180 (1996).</li>
<li>Plenz, D., Kitai, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Up%27+and+%27down%27+states+in+striatal+medium+spiny+neurons+simultaneously+recorded+with+spontaneous+activity+in+fast-spiking+interneurons+studied+in+cortex-striatum-substantia+nigra+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Up' and 'down' states in striatal medium spiny neurons simultaneously recorded with spontaneous activity in fast-spiking interneurons studied in cortex-striatum-substantia nigra organotypic cultures.</a> J. Neurosci. 18, 266-283 (1998).</li>
<li>Plenz, D., Herrera-Marschitz, M., Kitai, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+organization+of+the+globus+pallidus-subthalamic+nucleus+system+studied+in+organotypic+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Morphological organization of the globus pallidus-subthalamic nucleus system studied in organotypic cultures.</a> J. Comp. Neurol. 397, 437-457 (1998).</li>
<li>Plenz, D., Kitai, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+basal+ganglia+pacemaker+formed+by+the+subthalamic+nucleus+and+external+globus+pallidus+%5Bsee+comments%5D%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A basal ganglia pacemaker formed by the subthalamic nucleus and external globus pallidus [see comments].</a> Nature. 400, 677-682 (1999).</li>
<li>Plenz, D., Kitai, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+high-frequency+oscillations+in+local+circuits+of+rat+somatosensory+cortex+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Generation of high-frequency oscillations in local circuits of rat somatosensory cortex cultures.</a> J Neurophysiol. 76, 4180-4184 (1996).</li>
<li>Klostermann, O., Wahle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+spontaneous+activity+and+morphology+of+interneuron+types+in+organotypic+cortex+and+thalamus-cortex+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci%22%5BJournal%5D)">Patterns of spontaneous activity and morphology of interneuron types in organotypic cortex and thalamus-cortex cultures.</a> Neurosci. 92, 1243-1259 (1999).</li>
<li>Cowan, R. L., Wilson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+firing+patterns+and+axonal+projections+of+single+cortico-striatal+neurons+in+the+rat+medial+agranular+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Spontaneous firing patterns and axonal projections of single cortico-striatal neurons in the rat medial agranular cortex.</a> J. Neurophysiol. 71, 17-32 (1994).</li>
<li>Porter, L. L., Rizzo, E., Hornung, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+affects+parvalbumin+expression+during+cortical+development+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dopamine affects parvalbumin expression during cortical development in vitro.</a> J Neurosci. 19, 8990-9003 (1999).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

1. Teknik konular: <ol><li> Steril ÇÇA hazırlanması ve kültür hazırlama tekniği. Steril koşullar altında bir laminer akış kaputu içinde yapılmaktadır. Nöronal aktivitenin etkileyen Antibiyotikler, hazırlanması ve kültür işlemi sırasında herhangi bir zamanda kullanılmaz. </li><li> Plazma / trombin koagülasyon ve doku bağlılık MEA MEA Doku sağkalım üzerine plazma / trombin koagülasyon ve doku atmosfere maruz kalma süresi için gerekli zaman arasında dikkatli bir denge gerektirir. Atmosfere uzun süreli maruz kalma, doku dejenerasyonu tetikler kısa bir pıhtılaşma süresi, MEA kesitler erken dekolmanı riski vardır. Trombin çözüm gücü pıhtılaşma sürecinin hızını belirler, çünkü, sağlıklı kültürler MEA yüzeyine başarıyla takmak için çok önemli bir parametredir. Şu anda 1000 adet (1 NIH birim = 0.324 ± 0.073 mg 1KU) kullanarak en iyi sonuçları almak. Önemlisi, eksik kültür sırasında plazma rüptürlerinin teşvik mekansal heterojen koagülasyon Plazma / trombin solüsyonu sonuçları karıştırma. Bu plazma &#39;delik&#39; kültür sağlığı ciddi etkiler ve Mikroelektronlar kültürünü ayırmak, böylece elektrofizyolojik kayıt kalitesinden ödün. MEA / doku montaj sırasında soğutma plakaları ile Çalışma koagülasyon yavaşlatır ve homojen bir karışım için plazma / trombin çözüm ve doku kesitlerinde doğru konumlandırma sağlar. Benzer şekilde, tek damlacıkları orta, batığın koagülasyon sadece 5 dakika sonra kültür için kültür odası ekleyerek yüzey gerilimi nedeniyle doku müfrezelerin riskini büyük ölçüde azaltır. Başarılı bir kültür MEA düzleştirmek ve biraz eksik doku MEA kişiyi ya da doku dejenerasyonu (örneğin Şekil 1D) herhangi önemli belirtileri olmaksızın, hafta boyunca sağlıklı bir büyüme gösteren genişletmek olacaktır. </li><li> Doku diseksiyonu. Micro bıçak diseksiyonu süreci büyük ölçüde iyileştirilmiştir. Geniş ~ 2 mm &#39;bıçaklar&#39; pense kullanarak bölmek ve bir neşter sahibi ile onları tutun, çift kenar Jilet (100.050-00 - kırılabilir bisturi ağızları Güzel Bilim Araçları) kullanın. Bıçağın düz, dikey bir firma hareket kullanarak koronal dilim disseke doku örnekleri böylece büyük ölçüde geliştirerek genel kültür sağlık doku çekerek nedeniyle mekanik stresi azaltarak. </li><li> Doku soğutma. Hazırlanması sırasında dilimleri ve doku bölümleri uygun soğutma kültür başarısı için şarttır. Biz bir metal disk altına iliştirilmiş peltier elementleri inşa ısmarlama soğuk tabak kullanın. Peltier elemanı tarafından üretilen ısı, soğuk su perfüzyon ile kaldırılır. Bu hazırlık süresi büyük ölçüde azaltır ve hazırlık her aşamasında soğutma standartlaştıran (Dold Laboratuvar ve Mühendislik 131 Plantation Dr Seguin, TX 78.155; (830) 560-1471)). </li><li> İnkübatör durumu hassas iç sallanan koşulları ile ısmarlama bir inkübatör ÇÇA dilim yetiştirilmesi başarımız için çok önemli olmuştur . (Şu anda piyasada bulunan) Multichannelsystems tarafından in-house tasarım orijinal dayanarak, iç sallanan cihaz iki büyük yan tekerleklere bağlı tepsiler oluşur. Step motorlar ve bilgisayarlı kontroller (, açı sallanan hız sallanan ve aralıklı duraklar) kesin bir sallanan yörünge için izin verir. Sonuçta, dilim kültürleri yavaş değişmesinde atmosfer ve kültür ortamına maruz kalması gerekir. Geleneksel yaklaşım, orada uzun ekseni boyunca yavaş yavaş döndürmek dar tüpler içine dilim kültürler yerleştirmektir. Burada, yavaş rotasyon nedeniyle mekanik stres dönme kendisi üretemez, ve dönme hızı, yaklaşık 5 optimum &#39;besleme / nefes döngüsü elde etmek için yeterince yüksek - 10 dakika süresi. MEA odası, toplam hacmi ~ 2 cc, ve doku kendisi tarafından orta klima için gerekli küçük bir kültür orta hacimli daha kompakt iç, önemli bir sorun teşkil etmektedir. ± ~ 70 ° açı (çevrim süresi: ~ 200 s) arasında MEA sallanan, sıvı faz ve atmosfer arasındaki kültür geçişleri gibi sallanan hızı yavaşlatmadan, ve ekstrem açılar atmosfere uzun pozlama için sallanan durdurulması kültür yaşam için gereklidir. </li></ol> 2. Nöronal çığ çalışma korteks kültürler Gelişimsel yaş Akut sıçan korteks dilim yaygın PND 0 - 1 ve MEA birçok hafta kültür. Erken çalışmalar tek korteks dilim kültürleri, in vitro birkaç hafta sonra, in vivo hücre sınıfları 18,18-21 kolayca mukayese edilebilir, tanımlanabilir hücre tipleri ile katmanlı yapısını korumak olduğunu açıkça ortaya koymuştur. Bu in vitro sistemde katmanlı organizasyon uygun talamik çalışma için kullanılır olmuştur22-24 geliştirme sırasında korteksin innervasyon yanı sıra, striatum 25,26 olarak subkortikal yapıları sürüş için. Aslında, beyin bölgeleri içinde ve arasında nöronal bağlantıları oluşumunda özgüllüğü örneğin korteks-bazal ganglia devresi 27-30, kompleksin yapımı için çok detaylı bir projeksiyon sistemleri yeniden ele in vitro sistemlerde sağlar. - 4 in vitro, tek korteks dilim 31 ve korteks dilim, striatum 26 veya talamus spontan 32 gösteri ile birlikte kültürlü, yukarı ve aşağı genellikle üretan anestezisi sıçan 33 in vivo olarak bulundu devletlerin 6 hafta sonra -Devletlerin bu kadar ince zamansal organizasyon damgasını taşıyan iç içe θ ve γ-salınımlar piramidal nöronlar ve hızlı spike GABAerjik internöronlar 31 elektrofizyolojik olgun bir ağ göstergesidir. Daha da önemlisi, dopamin D2 reseptör stimülasyonu yokluğunda, parvalbumin pozitif kortikal internöronlar olgunlaşması korteks dilim kültürler 34 yaklaşık 2 hafta gecikti. Bu bulgular doğrultusunda, gelişim süresi içerisinde yuvalanmış θ, β ve γ-salınımlar in vivo korteks dilim için projelendirme dopaminerjik nöron içeren ventral tegmental alan (VTA) ile birlikte kültüre zaman buna uygun korteks 6. Bu çalışmaların en önemlisi olgun hızlı GABAerjik inhibisyonuna bağlıdır ve korteks 2,4 yüzeysel katmanları bulunan nöronal çığ, eğitim, büyük bir özenle kortikal doku olgunlaşmasını sağlamak için alınması gerektiğini göstermektedir. Nöronal çığ 2 saat boyunca tek korteks kültürlerde ortaya çıkan, in vivo gelişimine uygun bir gelişim süresi içerisinde gerektiren 5 hafta 4, korteks ortak kültür korteks dilim dilim uygun bir dopamin reseptör stimülasyonu, örneğin gerekir VTA 6 ile.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Entegre düzlemsel multielectrode dizi </td><td> Çok Kanallı Sistemler ( <a href="http://www.multichannelsystems.com">www.multichannelsystems.com</a> ) ALA Bilimsel Araçlar (Www.alascience.com) </td><td> <a href="http://www.multichannelsystems.com/products-mea/product-details/products/158/20030ir-ito-wo.html">200/30iR-ITO-w/o</a> </td><td> Titanyum Nitrat (TiN) elektrotlar (30 mm çapında), düşük empedans (~ 1 kHz 1.5 kohm) ve mükemmel bir geniş bant kayıtları (w / o ring olmadan) ile sonuçlanan büyük bir yüzeye sahip </td></tr><tr><td> Odası cam </td><td> www.aceglass.com </td><td> 7620-32 </td><td> Dişli cam silindir </td></tr><tr><td> Odası kap </td><td> www.aceglass.com </td><td> 7622-114 </td><td> Teflon insert Plastik kap </td></tr><tr><td> Sylgard 184 </td><td> www.wpiinc.com </td><td> SYLG184 </td><td> İki parça silikon elastomer </td></tr><tr><td> Poly-D-lizin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6407-5mg </td><td> γ-ışınlanmış, liyofilize toz, hücre test kültür. Kullanmadan önce 5 ml deiyonize su ile sulandırılır. </td></tr><tr><td> Gey Dengeli Tuzlu su </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9779-500ml </td><td> filtrelenmiş steril ve kültür test </td></tr><tr><td> tavuk plazma </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P3266-5ml </td><td> Kullanmadan önce 5 ml deiyonize su ile liyofilize, sulandırmak. </td></tr><tr><td> trombin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T6634-1KU </td><td> sığır, plazma, liyofilize toz şeklinde. </td></tr><tr><td> at serumu </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H1138-100 ml </td><td> donör sürü test, ısı inaktive, hücre kültürü </td></tr><tr><td> Bazal Orta Kartal </td><td> Invitrogen </td><td> 21010-046 </td><td> 1x, 500 ml - (+) Earle Kullanıcı Tuzlar, (-) L-glutamin) </td></tr><tr><td> Hank Tamponlanmış Tuzlu Çözüm </td><td> Invitrogen </td><td> 24020-117 </td><td> 500 ml (+ -) Magnezyum (+), kalsiyum, w / fenol kırmızısı) </td></tr><tr><td> Odası slaytlar </td><td> Steril Lab-Tek Odası Slayt w / kapağı (Nunc) </td><td> 177429 </td><td></td></tr><tr><td> Üridin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> U3003 </td><td></td></tr><tr><td> ARA-C sitozin-β-D-arabinofuranoside </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C6645 </td><td></td></tr><tr><td> 5-floro-2&#39;-dezoksiuridin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F0503 </td><td></td></tr></tbody></table>

organotipik kültürleri nöronal Çığ Çok elektrot dizi kayıtlar

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

Korteks, herhangi bir giriş veya motor çıkış yokluğunda bile, kendiliğinden aktif. Gelişimi sırasında, bu faaliyet göç ve farklılaşma korteks hücre tipleri ve nöron bağlantıları 1 oluşumu için önemlidir. Olgun hayvan, sürekli aktivite uyarımlar sorunsuz bir şekilde gelecekteki eylemler hesaplamak için içine entegre edilmiş bir hayvan geçmiş ve mevcut durumunu yansıtır. Bu nedenle, devam eden yani spontan aktivite organizasyonu açık bir anlayış korteks fonksiyonu anlamak için bir ön koşuldur. Çok sayıda kayıt teknikleri, korteks devam eden etkinlik, bireysel faaliyetleri geçici olarak ekstrasellüler Mikroelektronlar yerel alan potansiyeli (LFP) tespit edilebilir büyük olaylar toplamı, elektroensefalografi (EEG) magnetoencephalogram, (MEG birçok nöron oluşan olduğunu ortaya ) ve fonksiyonel manyetik rezonans görüntüleme (fMRI) BOLD sinyal. Mezoskopik ölçekte yüksek zamansal ve mekansal çözünürlükte (nöron binlerce) ile nöronal nüfus aktivite eğitim LFP şu anda tercih edilen bir yöntemdir. Ekstraselüler mikroelektrot, mekansal neighbored nöronlar mikrovolt yüzlerce LFP hızlı deplasmanlar sonucu faaliyetleri yerel olarak eşitlendi. Mikroelektronlar bir dizi kullanırken, bu tür sapmaların kuruluşların uygun uzay ve zaman içinde takip edilebilir. Nöronal çığ ölçek değişmeyen 2,3 beyin devam eden nöronal aktivitenin uzaysal organizasyon açıklar . Anestezi sıçan 6 in vivo, in vitro 4,5 kurulan korteksin yüzeyel katmanlara özeldir ve uyanık maymun 7. Önemlisi, hem teorik ve ampirik çalışmalar 2,8-10 nöronal çığ, bilgi transferi ve bilgi işlem optimize korteks zarif dengeli bir kritik devletin dinamikleri işaret öneririz . Tam kontrollü koşullar altında kararlı çığ aktivite kayıtları için izin nöronal çığ geliştirme, bakım ve düzenleme mekanizmalarını incelemek üzere, in vitro hazırlıklarında son derece yararlıdır . Geçerli protokol, düzlemsel, entegre mikroelektrot dizileri (MEA) da 11-14 yetişen Organotipik korteks kültürlerin, yani dilim kültürleri, yüzeysel katmanı gelişme yararlanarak in vitro nöron çığ nasıl çalışma açıklar .

Korteks kritik devlet dinamikleri göstergesi nöronal çığ, yani uzay-zamansal ölçek değişmeyen aktivite patlamaları, çalışma için sağlam bir yol. Çığ faaliyet uzun vadeli ölçümler için tam kontrollü koşullar altında düzlemsel bütünleşik çoklu-elektrod (MEA) ile sağlar kültürlü korteks yüzeysel katmanları geliştirme kendiliğinden ortaya çıkar.

Organotipik Kültürleri nöronal Çığ Çok elektrot Dizi Kayıtlar

Korteks, herhangi bir belirli girdi veya motor çıktı olmaksızın bile kendiliğinden aktiftir. Gelişim sürecinde bu aktivite, ... için önemlidir.

Bu deneyin amacı, korteksteki kritik durum dinamiklerinin karakteristik özelliği olan sağlıklı beyin aktivitesinin nöronal avalanslar şeklinde kendi kendini organize etmesini incelemektir. Bu, koronal katmanlı korteks kesitinin, kortekse gelişimsel olarak önemli dopaminerjik girdiler sağlayan bir orta beyin kesitiyle birleştirilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak, korteks-orta beyin ko-kültürü, kültürdeki nöronal aktivitelerin çok noktalı stimülasyonuna ve kaydedilmesine olanak tanıyan bir çoklu elektrot dizisi (multi electrode array) üzerinde büyütülür.Ardından, ko-kültürün ilk bir ila iki hafta boyunca, kültürü normal hava ve besiyeri maruziyetine tabi eden döngülerle çalışan özel tasarım bir inkübatörde düzleşmesine, yayılmasına ve MEA yüzeyine tutunmasına izin verilir. Uzaysal-zamansal yerel alan potansiyeli patlamalarının kendiliğinden nöronal avalanşlara dönüştüğünü gösteren sıvı sonuçlar elde edilir. Bu sonuçlar, MEA kayıtlarına ve avalanş boyutlarındaki güç yasasını tanımlayan çevrimdışı avalanş analizine dayanmaktadır.Bu tekniğin, disosiye kültürler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, sistemler nörobilimi boyutudur. Birçok beyin bölgesini birlikte kültürleyebiliriz ve bu çok bölgeli kültürler, kortikal katmanlar ve projeksiyon sistemleri gibi geniş ölçeklerde doğru bir beyin organizasyonu oluşturur. Bu tekniğin uygulamaları, yalnızca nöronal avlanmaların incelenmesinin ötesine geçer.Örneğin, kesin şekilde kontrol edilen in vitro koşullar altında, ağ düzeyindeki uyarana verilen yanıtı inceleyebiliriz. Plazma trombin karışımının uygun şekilde uygulanması ve dokunun MEA üzerine yerleştirilmesi öğrenmesi zor işlemler olduğundan, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir. Bu adımlar; uygun zamanlama, doğru sıcaklık gradyanı ve hassas MEA yüzeyine doğrudan temas etmekten kaçınılmasını gerektirir.Kayıtlar için steril ve sızdırmaz bir cam hazne hazırlamak için, önce Teflon plastik kapaklı dişli cam silindirleri, dişin altından yaklaşık iki milimetre mesafeden kesin. Bunlar, kültür haznesinin güvenli ve sıkı bir şekilde kapatılması için gereklidir. Ardından cam halkaları üç kez suyla durulayarak temizleyin ve sonrasında 200 proof etil alkol içerisinde beş dakika kaynatın.Bunları kuruması için kenara ayırın; cam halkaları MEA yüzeyine yapıştırmak için bir silikon çözeltisi gereklidir. Bir cell guard 180 4 silikon elastomer kiti kullanın ve A ile B parçalarının 15 mililitresini iyice karıştırın. Ardından, hava kabarcıklarının çıkması için 15 dakika bekletin.Çözeltiyi bir mililitre Eloqua olacak şekilde ayırın ve gelecekteki kullanımlar için -20 °C'de saklayın. Şimdi, küçük gauge bir iğneye sahip şırınga ile 23 °C'de bir mililitre silikon alıp bunu cam halkanın cilalanmamış kesik yüzeyine uygulayarak cam halkayı MEA'ya yapıştırın. Ardından cam halkayı MEA üzerinde ortalayın ve daha güçlü bir sızdırmazlık için halkanın dış çevresine ek bir silikon tabakası uygulayın.Bunu bir ısıtıcı plaka üzerinde yaklaşık 60 °C'de bir ila iki saat boyunca kürlenmeye bırakın. Ardından, MEA haznesini ve hazne kapaklarını, önce üç kez deiyonize suyla, ardından son durulama için üç kez %70 alkolle yıkayarak laminar akışlı kabin altında sterilize edin. Hazneyi alkol içinde 10 dakika boyunca bekletin.Ardından, hazne ve kap iç yüzeyini 10 dakika boyunca UV ışığına maruz bırakın. 120 °C'de 45 dakika boyunca otoklavlayın. Sterilize olduktan sonra kurumaya bırakın.Şimdi kültür odası içindeki MEA yüzeyini poly D lysine ile kaplayın. Bu deneyde kullanılan yeni MEA'lar oldukça lipofilik olduğundan, kaplama işlemini tekrarlayan damlacıklar halinde gerçekleştirin. Çözeltiyi elektrot ızgarasından aspire edin.Saklama ve gelecekteki kullanım için MEA haznesini mühürlemek üzere kapağı takın. Bu prosedür, yaklaşık 12 ko-kültür için korteks ve VTA kesitleri sağlar ve sağlıklı, doğum sonrası bir ila iki günlük hayvanlar kullanılarak steril koşullar altında, laminer akışlı kabin içerisinde gerçekleştirilmelidir; doku toplama işlemi için toplam süre bir saatten kısa olmalıdır. Dekapitasyon sonrası, önce kafa derisindeki deriyi çıkarmak için iki yan makas kesiği yaparak beyin çıkarma işlemine başlayın.Kafatası önce çıkarılır ve ardından ince göz makasları kullanılarak, korteks-serebellum birleşim noktasında bir sagittal orta hat kesisi ve bir koronal kesi yapılarak açılır. Beyni açığa çıkarmak için bu dört kafatası flebinin tamamı geriye doğru çevrilir. Ardından, sivriltilmiş bir spatula ile olfaktör bulb üzerinden frontal olarak kesi yapılır.Ardından spatulayı beynin altına dört bir yandan yerleştirin. Beyni nazikçe kafatasından kaldırın ve hızlı soğutma ile geçici saklama için soğutulmuş gaz çözeltisinin içine kaydırın.Yukarıdaki prosedürü iki beyin daha için tekrarlayın. VTA dokusunu elde etmek için beyinleri steril, kuru bir Petri kabına aktarın. Küçük bir spatula kullanarak, her bir beyni nazikçe yaklaşık bir santimetre yana kaydırarak fazla sıvıyı uzaklaştırın.Ardından, beyin sapını çıkarmak için serebellum seviyesinden koronal dikey bir kesi yapmak üzere bir jilet kullanın. Şimdi, dilimleme prosedürü sırasında beyinlerin mekanik stabilizasyonu için bir agar bloğunu bir montaj diskine yapıştırın. Daha sonra, disk üzerindeki agar bloğunun birkaç milimetre önüne ince bir hat şeklinde hızlı yapıştırıcı sürün, ancak küçük bir spatula kullanarak yapıştırıcının agara temas etmediğinden emin olun.Her bir beyni frontal polleri aşağı gelecek şekilde transfer edin ve sabitleyin. Frontal pollerin sabitleme diskine yapıştırıldığından ve ventral tarafların herhangi bir yapıştırıcı kalıntısı olmadan agara temas ettiğinden emin olun. Bu işlem, kesme sırasında uygun mekanik stabilizasyon ve kesilen dilimlerin kolayca kaldırılmasını sağlar.Ardından, monte edilmiş beyinlerin bulunduğu montaj diskini, soğutulmuş gaze çözeltisi ile doldurulmuş bir vibratom tepsisine dikkatlice daldırın ve sabitleyin. Daha sonra, dikkatlice temizlenmiş bir jiletle, orta beynin 400 µm kalınlığında koronal kesitlerini, en yüksek vibrasyon frekansında ve nispeten düşük ilerleme hızında kesin; vakumlu pompa uçlu ters bir pasta pipeti kullanarak VTA içeren dilimleri toplayın ve kortikal kesitler için steril soğutulmuş gaze çözeltisi ile doldurulmuş 35 x 10 mm Petri kaplarına aktarın. Önceki dilimleme adımlarını tekrarlayın, ancak korteks ile serebellum arasında dikey bir kesi yapın ve dört beyni frontal pol yukarı gelecek şekilde monte edin.Striatum seviyesinden başlayarak yaklaşık 350 mikrometre kalınlığında üç koronal kesit toplayın. Şimdi, kırık jiletlerden yapılmış bir mikro bıçak kullanarak, bir stereo mikroskop altında frontal korteks ve VTA'yı içeren orta beyin bölgelerinden yaklaşık iki milimetre genişliğinde koronal kesitler çıkarın. Doku kesitlerini, soğutulmuş gaze solüsyonu ile doldurulmuş küçük kaplara ayrı ayrı toplayın.Dokuyu MEA haznesinin birinci konumuna yerleştirmeye başlamak için, önce oda sıcaklığındaki MEA'yı, elektrot dizisi netleşmiş olacak şekilde bir stereo mikroskop altında konumlandırın. Ardından, temiz, tozsuz ve steril elektrot dizisi matrisinin merkezine 25 µL plazma damlası damlatın. Küçük bir spatula kullanarak bir korteks ve VTA kesitini dikkatlice plazma damlasının içine kaydırın.Şimdi MEA'yı bir soğutma plakasına yerleştirin ve görüntüyü yeniden odaklayın. Plazma damlacığına 25 microliter trombin eklemeden önce yaklaşık 15 saniye boyunca soğumasını bekleyin. Ardından, trombin pipet ucuyla plazma-trombin karışımını MEA üzerine küçük dairesel hareketlerle dikkatlice yayın.Kırılgan elektrot dizisine doğrudan dokunmamaya dikkat edin. Ardından, korteksi, dorsal kenarı dizinin ikinci elektrot sırası boyunca hizalanacak şekilde dizinin üzerine nazikçe yerleştirin. Bu sayede, gelişmekte olan yüzeysel katmanlar zamanla dizinin geri kalanını kaplayacaktır.Ardından, VTA'yı korteks kesitinin ventral sınırına bitişik şekilde yerleştirin. Şimdi, yüksek nemi korumak için MEA haznesinin kapağını kapatın ve gevşekçe sıkın. Plazma trombini koagülasyonunun gerçekleşmesi için MEA kültür düzeneğinin oda sıcaklığında, çeker ocak içinde yaklaşık altı dakika boyunca beklemesine izin verin.Bu sırada, üç kültür daha hazırlamak için prosedürü tekrarlayın. Ardından, 25 gauge 5/8 boyutunda bir iğneye sahip 1 cc'lik bir şırınga kullanarak, kültür odacıklarına dikkatlice küçük damlalar halinde 600 µL kültür ortamı ekleyin. Daha sonra MEA odacığını sıkıca kapatın ve MEA kültür düzeneğini inkübatör içindeki sallanan saklama tepsisine yerleştirin.İki gün sonra, in vitro ortamda, 10 µL mitoz inhibitörü ekleyin. Ardından, in vitro sürecin dördüncü gününde ve sonrasında her dört günde bir, kültür medyasının %60'ını yenileyin. Normal büyüme sırasında, kültür önemli ölçüde düzleşecek ve dorsal yönde hafifçe genişleyecektir.Yüzeyel kortikal katmanların gelişimi nedeniyle, sağlıklı bir kültür parlak alan mikroskobunda opak grimsi dokusuyla tanımlanır. Buna karşın, kültürlerin hazırlanmasından yaklaşık 10 ila 12 gün sonra ortaya çıkan ve ölü dejeneratif hücrelerin karakteristik özelliği olan parlak yansıtıcı veziküller oluştuğunda, kayıt ve stimülasyon için hazır hale gelirler. Bir kayıt oturumuna başlamak için MEA, saklama tepsisinden kayıt kafa aşamasına aktarılır.Yerel alan potansiyelini veya LFP'yi kaydetmek için 1 ila 200 hertz değerinde bir bant geçiren filtre kullanın. Çoklu ünite aktivitesi, 300 ila 3000 hertz değerindeki bir bant geçiren filtre kullanılarak da incelenebilir. Sağlıklı spontan aktivite, genellikle farklı boyut ve sürelerdeki patlamalar şeklinde gerçekleşme eğilimindedir.LFP ile ünite aktivitesi arasındaki ilişkiyi incelemek için, LFP'nin spike tetiklemeli ortalamaları hesaplanabilir. Bu korteks kültürleri için, negatif LFP sapmaları, stimülüsle tetiklenen aktiviteyi kaydetmek amacıyla nöronal spike'lar ile korele edilmiştir. İlk olarak, stimülasyonların zamansal dalga formu ve genliği, bir stimülasyon jeneratörünü kontrol eden yazılımla belirlenir.Yararlı bir stimülasyon paradigması, bipolar kare dalga formuna sahip, akım kontrollü, yük nötr tek şoktur. Ardından, stimülasyonların uygulanması için kullanılacak bir elektrot seçilir. Tipik stimülasyon kaynaklı LFP yanıtları, spontan aktivite patlamalarına benzer görünür.Blanking devreleri, stimülasyon artefaktlarını azaltmak ve amplifikatör doygunluğunu önlemek için stimülasyon sırasında amplifikatörlerin bağlantısını keser. Stimülasyon elektrodunun stimülasyondan sonra toparlanması için birkaç saniye gerekir ve bu nedenle yanıt aktivitesini kaydetmek için kullanılamaz. MEA üzerinde, genellikle diğer bölgelerdeki aktivite ile birlikte, tek bir elektrottaki aktivite ile karakterize spatiotemporal kümeler ortaya çıkma eğilimindedir.Aynı zamanda, bu tür aktivite dönemleri sırasındaki tipik LFP dalga formları, her küme için birkaç saniye arayla meydana gelen üç kümenin üst üste çizilmesiyle burada gösterilmiştir. Birden fazla negatif sd eşiğini aşan NLFP pikleri çıkarıldığında, bir saniyelik pencere içinde birkaç elektrotte negatif LFP sapmaları görülebilir; NLFP pik zamanları şeklindeki aktivite, nokta sütunlarının çeşitli elektrotlardaki neredeyse eşzamanlı NPS'leri temsil ettiği bir Rasta üzerinde kolayca görselleştirilebilir. Bu aktivitenin spasyotemporal organizasyonu oldukça karmaşıktır.Düşük zamansal çözünürlükte aşağı yukarı homojen görünen sütunlar, daha yüksek zamansal çözünürlükte ayrı kümelerden oluşur ve bu durum böylece devam eder. Uzay, GEOTEMPORAL ve LFP kümelerinin ortaya çıkışı, kortikal ağlarda oldukça düzenlidir. Daha spesifik olarak, bu organizasyon nöronal avalanşlar için ölçekten bağımsızdır.Bu durum, belirli bir zamansal çözünürlükte (Delta T) küme boyutlarının olasılığının hesaplanmasıyla gösterilir. Burada kümeler, aynı veya ardışık zaman aralıklarında meydana gelen NL FPS'lerden oluşur; böyle bir kümenin boyutu, küme başına toplam NFP sayısı veya küme başına entegre NLFP genlikleri cinsinden ifade edildiğinde, küme boyutu dağılımları eksi 1,5'e yakın bir üste sahip bir güç yasası ortaya koyar. Bu videoyu izledikten sonra, nöronal aktivitenin öz-organizasyonunu incelemek amacıyla beyin dokusunun nasıl dikkatle diseke edileceği ve çok elektrotlu diziler üzerinde kültürlerin nasıl büyütüleceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Bu yöntemler, kortikal ağlarda spontan aktivite ile uyarılmış aktivite arasındaki ilişkiyi incelemek için de kullanılmıştır.

multi-electrode-array-recordings-neuronal-avalanches-organotypic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Multielectrode array (MEA) kayıtları nöronların büyük nüfus elektriksel aktivite eğitimi için bir yöntem sağlar. Burada, aynı anda doku uyarıcı fare vomeronasal epitel kayıt MEA hazırlanması ayrıntılar mevcut.

Vomeronasal Epitel Multielectrode Dizi Kayıtlar

Bu video, fare omurilik bölümlerinde nöronal ağ aktivitesini incelemek için mikroelektrot dizisi tabanlı bir testi göstermektedir. İlk olarak, dilimin yüzeysel dorsal boynuzundan (SDH) gelen elektrofizyolojik aktivite kaydedilir. Daha sonra, depolarizasyonu uzatmak için bir potasyum kanal inhibitörü eklenir ve bu da nöronal ağ boyunca senkron ritmik aktivite ile sonuçlanır.

Fare Omurilik Dilimlerinde Nöronal Ağların Mikroelektrot Dizisi Tabanlı Değerlendirmesi

Tek ünite elektrofizyolojik kayıtlar kullanılmak üzere microwires organize dizileri implante teknik sorunlar bir dizi sunuyor. Bu teknik ve gerekli ekipman yerine getirilmesi için yöntemler tarif edilmiştir. Ayrıca, yüksek uzaysal seçicilik ile farklı nöral altbölgeler kayıt örgütlü mikrotel dizilerin faydalı kullanımı tartışılmıştır.

Hayvanlar davranmak, Awake Tek-birim Recordings Microwires Organize Dizileri implantasyon için Usulü

Biz burada insan epileptik kortikal doku çoklu elektrot dizisi kayıtları nasıl gerçekleştirileceğini açıklar. Interiktal ve iktal olayların epileptik doku rezeksiyonu, dilim hazırlık ve multi-elektrot dizisi kayıtları ayrıntılı olarak gösterilmiştir.

İnsan Epileptik Ameliyat sonrası Kortikal Doku Çok elektrot Dizi Kayıtlar

Burada in vitro propriyospinal bağlantıları işlevsel rejenerasyonu çalışma çoklu elektrot dizileri üzerinde kültürlü omurilik dilimleri dayanan bir protokol mevcut.

Çok elektrot Dizileri Yetiştirilen Organotipik Omurilik Co-kültürler Fonksiyonel Rejenerasyon incelenmesi

4 aminopyridine uyarılan epileptiform aktivite kayıt ve elektrik modülasyon elektrot dizileri kullanma kemirgen beyin dilimler halinde gerçekleştirme göstermektedir. Özel kayıt odası doku canlılığı uzun süreli deneysel oturumları boyunca korur. Elektrot eşleme yaşamak ve uyarıcı çiftlerinin seçimi özel bir grafik kullanıcı arabirimi tarafından yapılmaktadır.

Kayıt ve modülasyon Epileptiform aktivite elektrot dizilerin birleştiğinde kemirgen beyin dilimleri içinde

Bu protokol, birden fazla beyin bölgesinden fare(Mus musculus)ve gelincikte(Mustela putorius furo) kronik ve akut in vivo elektrofizyolojik kayıtlar için karbon fiber mikroelektrod dizileri oluşturmak için bir prosedür açıklanmaktadır. Mikroelekrod dizisi implantasyonuna ham karbon fiberlerin satın alınmasını takiben atılan her adım, mikroelekrod dizisi yapımına vurgu yaparak ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Kronik ve Akut In Vivo Kayıtlar için Karbon Fiber Mikroelekrod Dizilerinin yapımı ve uygulanması

Omurilik dorsal boynuzunda ağ düzeyinde nosiseptif aktiviteyi araştırmak için mikroelektrot dizisi teknolojisinin ve 4-aminopiridin kaynaklı kimyasal stimülasyonun kombine kullanımı özetlenmiştir.

Spinal Nosiseptif Devrelerde Ağ Aktivitesini Mikroelektrot Dizileri Kullanarak Kaydetme

Burada, özellikle hipokampal, koku soğanı devreleri ve insan nöronal ağlarında, büyük ölçekli nöronal toplulukların hesaplama dinamiklerini araştırmak için HD-MEA'yı kullanıyoruz. Hesaplama araçlarıyla birlikte uzay-zamansal aktiviteyi yakalamak, nöronal topluluk karmaşıklığı hakkında içgörüler sağlar. Yöntem, beyin fonksiyonlarının anlaşılmasını geliştirir, potansiyel olarak biyobelirteçleri ve nörolojik bozukluklar için tedavileri tanımlar.

CMOS Entegre Yüksek Yoğunluklu Mikroelektrot Dizisi Üzerinde Multimodal Büyük Ölçekli Nöronal Topluluk Dinamiğinin Kaydedilmesi ve Analizi

Burada, ex vivo beyin dilimlerinden nöbet benzeri aktiviteyi kaydetmek için tamamlayıcı metal oksit yarı iletken yüksek yoğunluklu mikroelektrot dizi sistemlerini (CMOS-HD-MEA'lar) kullanmak için bir protokol özetliyoruz.

Tamamlayıcı Metal Oksit Yarı İletken Yüksek Yoğunluklu Mikroelektrot Dizi Sistemi Kullanılarak Akut Beyin Dilimlerinden Yüksek Kaliteli Nöbet Benzeri Aktivite

Bu protokol, in vitro epilepsiyi modellemek için dorsal-ventral kaynaşmış asembloidleri çoklu elektrot dizileri üzerinde stabil bir şekilde plakalamayı amaçlamaktadır.

İnsan Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Beyin Topluluklarını Kullanarak Epilepsiyi Modellemek için Çok Elektrotlu Bir Dizi Platformu

Öğrenin, çok elektrot diziler üzerinde korteks ve ortabeyin ko-kültürleri kullanarak nöronal çığların kendiliğinden organizasyonunu incelemeyi. Bu yöntem, kritik durum dinamiklerini ve ağ düzeyinde yanıtları kontrollü koşullarda çalışmanıza olanak tanır.

Organotipik Kültürleri nöronal Çığ Çok elektrot Dizi Kayıtlar

Daha fazla video keşfet