Sıvı Faz İzoelektrik Odaklama: Biyoaktif Molekülleri Ham Gymnema sylvestre Ekstraktından Ayırmak İçin Bir Elektroforez Tekniği

Sıvı fazlı bir elektroforez ünitesi olan önceden monte edilmiş bir izoelektrik odaklama, IEF hücresi ile başlayın. Bu sütun, uçlarında farklı pozitif ve negatif terminallere sahip, bölümlere ayrılmış, yatay gözenekli bir odadır.

Şimdi, bir molekül üzerindeki net yükün sıfır olduğu bir pH olan pI, değişen izoelektrik noktalara sahip farklı yüklü bileşenlerin karmaşık bir karışımını içeren bitki özünü alın.

Ekstrakt, daha sonra numune bileşenlerinin fraksiyonlanmasını kolaylaştıran değişken yüklü amfolitlerle desteklenir.

Numuneyi kolonun yükleme portlarına yükleyin. Şu anda, IEF sütunu sabit bir pH'a sahiptir. Ardından, elektroforezi başlatmak için yüksek voltaj uygulayın.

Elektrik alanı altında, çözünür amfolitler zıt yüklü elektrotlara doğru göç eder ve kolon boyunca doğrusal bir pH gradyanı oluşturur. Numune bileşenleri, sıvı faz pH gradyanı boyunca göç etmeye başlar ve pI'lerinin altındaki pH'ta konumlandırılanlar net bir pozitif yük taşır.

Bunlar, bileşenler pI'lerine ulaşana kadar negatif elektrota doğru göç eder, burada yükleri nötralize olur ve göç durur. Benzer şekilde, pI'lerinin üzerindeki pH'taki bileşenler pozitif elektrota doğru göç eder ve pI'lerine ulaştıklarında dur