Birleştirilmiş nükleozomları görselleştirmek ve karakterize etmek için statik atomik kuvvet mikroskobu

Ökaryotik kromatinin temel tekrar eden birimi olan nükleozomlar, histon proteinlerinin bir çekirdeğinin etrafına sarılmış DNA dönüşlerini içerir.

Statik atomik kuvvet mikroskobu ile birleştirilmiş nükleozomları görselleştirmek için, AFM, yüzeyi pozitif yüklü hale getirmek için işlevselleştirilmiş ince bir mika şeridi ile başlayın. Şeridi küçük kareler halinde kesin. Monte edilmiş bir nükleozom süspansiyonunu pipetleyin.

Nükleozomdaki negatif yüklü DNA, elektrostatik etkileşimler yoluyla işlevselleştirilmiş mika şeridinin pozitif yüklü grubuna bağlanır. Nükleozomun aşırı kalabalıklaşmasını önlemek için tamponla yıkayın.

Mika şeridini bir numune destek diskine sabitleyin. AFM enstrüman tablasına monte edin.

Prob tutucuyu cihazın optik kafasına takın. Tutucu, tepesinde bir ucu olan önceden monte edilmiş bir AFM konsol içerir.

Doğru sapma ölçümü için lazer ışınını konsol arkasına hizalayın. Ucu nükleozom içeren yüzeyle doğrudan temas edecek şekilde konumlandırın.

Temas modlu görüntüleme sırasında, konsol ucu nükleozom yüzeyini tararken, ucun atomları ile numune arasındaki etkileşimleri takiben itici kuvvetler ortaya çıkar. Bu, konsolun bükülmesine neden olur. Lazer ışını farklı şekilde