Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu

Bu prosedürün genel amacı, bir nano çökeltme yöntemi kullanarak polimerik nanopartikülleri sentezlemektir. Bu, önce A-P-L-G-A PEG kopolimeri oluşturmak için bir E-D-C-N-H-S reaksiyonu gerçekleştirilerek gerçekleştirilir. PLGA PEG kopolimeri daha sonra nanopartiküller üretmek için kullanılır ve ilgilenilen ilacı veya kargoyu nano çökeltme yoluyla kapsüller.

Bu noktada, boyut, yüzey yükü ve ilaç yükleme verimliliği dahil olmak üzere temel biyofiziksel karakterizasyon, dinamik ışık saçılma iletim elektron mikroskobu veya HPLC aracılığıyla gerçekleştirilebilir. Bu tekniğin etkileri, tümörlerin tedavisine doğru uzanır, çünkü nanopartiküller, mevcut tedavilerden daha etkili olabilecek, zayıf çözünür anti-kanser terapötikleri sağlayabilir. Bu yöntem kanser tedavisi hakkında fikir verebilir.

Hücresel kaçakçılık gibi diğer sistemleri incelemek için de kullanılabilir. Nanopartiküller bir hedefleme ligandı ile konjuge edilebilir ve tekniği gösteren bir görüntüleme ajanı kullanılarak in vivo veya in vi in vitro olarak görselleştirilebilir. Bugün laboratuvarımızdan iki teknisyen, Rohit Sukumar ve Natalie Cummings, PLGA PEG kopolimerinin sentezine başlamak için, PLGA'yı, karboksilatı Asetonitril içinde hafifçe karıştırarak beş milimolar konsantrasyonda çözün

Ardından, PLGA ile karşılaştırıldığında beş X storia metrik fazlalığı sağlayan 25 milimolar konsantrasyonlar elde etmek için yeterli NHS ve EDC ekleyin, PLGA karboksilatının PGA NHS'ye dönüştürülmesine izin vermek için çözeltiyi yaklaşık bir saat hafifçe karıştırın. Bir saat sonra, yıkama çözeltisi metanolünü yaklaşık 10 kat hacimde ekleyerek PGA NHS reaksiyon ürününü çökeltin, çözeltiye fazla metanol ekleyin, çözeltiyi 2000 kez G'de pelete santrifüjleyin, santrifüjlemeyi takiben P-L-G-A-N-H-S, EDC ve NHS izlerini gidermek için SUP natin'i atın. Metanol ile bu yıkama prosedürü en az üç kez tekrarlanır.

Yıkama tamamlandıktan sonra. Yıkama solüsyonunun kalıntılarını gidermek için P-L-G-A-N-H-S'yi 30 dakika vakum altında kurutun. Şimdi kırmızı, P-L-G-A-N-H-S peletini aseto NI denemesinde başlangıçta PLGA'yı çözmek için kullanılan aynı konsantrasyonda çözün.

Bir kez çözüldü. PLGA çözümüne hetero iki işlevli PEG ekleyin. Beş milimolar konsantrasyon ekleyin.

Karışım çözeltisini 24 saat sonra sürekli karıştırarak 24 saat inkübe edin. Fazla miktarda metanol ekleyerek PLGA PEG blok kopolimer reaksiyon ürününü çökeltin. Yıkama ve santrifüjleme işlemini gerçekleştirin ve tüm fazla reaktif olmayan peg'i çıkarmak için üç kez daha gerçekleştirin.

Sentezdeki son adım olarak, PLGA PEG blok kopolimerinin bir vakum nanopartikül çökeltme altında kurutulması, PLGA PEG blok kopolimerinin ve kapsüllenecek ilacın A-P-L-G-A çözücüsü içinde çözülmesi ile başlar. Çözücü seçimi, nanopartikülün özelliklerini etkilediği için kritiktir. Daha sonra, mililitre başına yaklaşık üç miligramlık bir nihai polimer konsantrasyonu elde etmek için polimer ilaç karışımını damla damla üç ila 10 hacim karıştırma suyuna ekleyin. Damla damla.

Organik çözeltinin sulu faza eklenmesi, doğru boyutta nanopartiküller oluşturmak için kritik öneme sahiptir. Nanopartiküllerin kendi kendine toplanarak oluşmasına ve organik çözücünün izlerini çıkarmasına izin vermek için düşük basınç altında iki saat boyunca karıştırmaya devam edin. İki saat karıştırdıktan sonra.

Nanopartikülleri bir Amon filtresi kullanarak 10 dakika boyunca 2.700 kez G'de santrifüjleme ile konsantre edin. Daha sonra, hapsedilmemiş herhangi bir ilacı çıkarmak için nanopartikülleri PBS ile yıkayın ve ardından santrifüjleme yapın. Son olarak, bu noktada PBS'deki nanopartikülleri yeniden oluşturun.

Nanopartiküllerin özelliklerini daha iyi anlamak için boyut, yüzey yükü ve ilaç yükleme verimliliği dahil olmak üzere temel biyofiziksel karakterizasyon yapılabilir. Nanopartiküller, PLGA PEG nanopartiküllerini karakterize etmek için yazılı protokolde açıklandığı gibi saklanabilir, nanopartiküllerin boyutunu, dağılımını ve yapısını doğrulamak için transmisyon elektron mikroskobu kullanıldı. Parçacık boyutu genellikle nanometre aralığındadır.

Eşit olmayan boyut dağılımlarına sahip büyük parçacık boyutları, konjugasyon reaksiyonunda bir hatayı veya nano çökeltme yönteminin optimizasyona ihtiyaç duyduğunu gösterebilir. Burada, Paklitaksel yükleme verimliliğinin ve salınımının standart HPLC ile ölçüldüğü bir ilaç salım kinetik çalışması gösterilmektedir. Nanopartiküllerin bilinen sabit miktarları sabit zaman aralıklarında diyalize edildi.

Diyaliz ünitesindeki içerik toplandı ve nanopartikülleri çözmek için eşit hacimde organik çözücü ilave edildi. Daha sonra bu numuneler üzerinde HPLC yapıldı. Paklitaksel içeriğini ölçmek için, Bir kez ustalaştıktan sonra, bu nano çökeltme tekniği üç saat içinde düzgün bir şekilde gerçekleştirilebilir.

Bu tekniği uygularken, gelişiminden sonra büyük parçacıkların oluşmasını önlemek için organik fazı her zaman sulu faza yavaşça eklemeyi unutmayın. Bu teknik, nanotıp alanındaki kanser araştırmacılarının, bu prosedürü takiben kanser hastalarında bir zamanlar çok toksik olduğu düşünülen az çözünür ilaçların kullanımını keşfetmelerinin yolunu açtı. İn vivo etkinlik çalışmaları veya görüntüleme çalışmaları gibi diğer yöntemler, zayıf çözünür ilaçların etkili olup olmadığı, sistemik toksisitenin artık bir sorun olmadığı veya hedefleme ligandlarının nanopartikülleri hedeflerine uygun şekilde hedeflediği gibi soruları yanıtlamak için gerçekleştirilebilir.