Name: Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Öğrenin, nanoprecipitation yöntemiyle PLGA-PEG diblok kopolimer nanopartiküller sentezleyerek ilaç taşıma sistemleri geliştirmeyi. Bu teknik, kanser tedavisinde düşük çözünürlüklü ilaçların etkili dağıtımını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Kanser, Carolina Nanoteknoloji Mükemmeliyet Pilot hibe Üniversitesi Kanser Araştırma Fonu ve Ulusal Sağlık Enstitüsü K-12 Kariyer Geliştirme Ödülü Merkezi Karşı Golfçüler tarafından finanse edildi.

1. PLGA-b-PEG polimerin sentezi <ol><li> Terminali karboksilat grupları ile poli (D, L-lactide-co-glycolide) (PLGA) (PLGA-karboksilat) 5mM bir konsantrasyon PLGA (malzeme bölümünde belirtildiği gibi) için herhangi bir çözücü içinde çözülür. PLGA nazik karıştırma bu konsantrasyonda çözünmüş olabilir. </li><li> NHS (moleküler ağırlığı 115,09) ve EDC (molekül ağırlığı 191,7) 25mm bir konsantrasyon PLGA çözelti içinde çözülür. (EDC ve NHS PLGA kıyasla 5 kat aşan bir stokiyometrik eklenir). PLGA-karboksilat EDC ve NHS ekleyerek yaklaşık 1 saat için nazik karıştırma PLGA-karboksilat çözüm için PLGA-NHS dönüştürülür. </li><li> Reaksiyon ürünü PLGA-NHS yıkama solüsyonu metanol eklenerek çöktürülür. Metanol yaklaşık 10 kat fazla hacim çözüm eklenir. Çözüm çökelti PLGA-NHS ve supernatant atın (EDC ve NHS izlerini ortadan kaldırır. Metanol ile yıkama Bu işlem en az üç kez tekrarlanır xg 2000 santrifüj edilir. </li><li> PLGA-NHS pelet yıkama solüsyonu tüm izlerini silmek için 30 dakika süreyle vakum altında kurutulur. </li><li> PLGA-NHS pelet PLGA çözmek için başlangıçta kullanılan aynı konsantrasyonda aynı çözücü yeniden çözülür. Heterobifunctional PEG (amin-PEG-karboksilat) sonra 5mM bir konsantrasyon PLGA çözüm eklenir (1:1 stokiyometrik oranı). Karışımı bir çözüm sürekli karıştırarak 24 saat inkübe edilir. </li><li> 24 saat sonra, reaksiyon ürünü PLGA-b-PEG blok kopolimer aşırı yıkama solüsyonu metanol eklenerek çöktürülür. Üç kez Yukarıda da belirtildiği gibi yıkama ve santrifüj işlemi tekrarlayın. Bu, tüm aşırı girmemiş PEG kaldıracaktır. </li><li> PLGA-b-PEG blok kopolimer, vakum altında kurutulur. </li></ol> 2. PLGA-b-PEG nanoparçacık hazırlık Yüzeyde PEG ile kaplı PLGA çekirdekli Nanopartiküller bu diblock kopolimerler hazırlanabilir. Bir dizi farklı hidrofobik ilaçlar gibi nanopartiküller kapsüllü olabilir. Floresan bileşikler nanopartiküller kapsüllü olabilir veya PLGA konjuge ve böylece bu nanopartiküller floresan görüntüleme için kullanılabilir olabilir. Nanoprecipitation yöntem özellikle kapsüllü olması istenen kargo son derece doğal hidrofobik nanopartiküller yapmak için kullanılır. <ol><li> PLGA-b-PEG blok kopolimeri ve uyuşturucu / kargo (kapsüllü) PLGA çözünür olan herhangi bir çözücü içinde çözülür. PLGA asetonitril, DKMP, tetrahidrofuran, aseton veya etil asetat da dahil olmak üzere pek çok ortak çözücüler tarafından çözülebilir. Nanoparçacık özelliklerini etkiler olarak solvent seçimi kritik öneme sahiptir. Bu nedenle, uygun bir çözücü bu adımda kullanılmalıdır. </li><li> Polimer / ilaç karışımı daha sonra yaklaşık 3 mg / ml son bir polimer konsantrasyonu vererek su karıştırarak 3-5 birimlere damla damla eklenir. (Şekil 2) </li><li> Karıştırarak nanopartiküller self-assembly oluşturmak için izin ve organik çözücü izlerini kaldırmak için düşük basınç altında 2 saat boyunca devam eder. </li><li> Hasat ve saflaştırma: nanopartiküller sonra yıkanmış bir Amicon filtresi (MWCO 20KDa) kullanarak 10 dakika için 2.700 x g santrifüj konsantre ve PBS içinde sulandırılmış. Bu tüm un-sürüklenen bir ilaç / kargo kaldırır. Temel biyofiziksel boyut gibi nitelendirmeler, yüzey yükü ve ilaç yükleme verimliliğini nanoparçacıkların özelliklerini daha iyi anlamak için yapılabilir. </li></ol> 3. Depolama Dondurma-kurutma nanopartiküller 11 depolamak için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Dondurma-kurutma, uzun vadeli istikrar için 12 nanopartiküller fiziksel ve kimyasal özellikleri koruyacaktır . Dondurarak kurutma işlemi parçacıklar üzerinde strese neden ve formülasyon istikrarsızlaştırmak, cryo-koruyucu (donma stresinden koruma) ve LYO-koruyucu (kurutma stres koruma) yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu koruyucu seçim saklama süresi 13 istenilen uzunluğa göre belirlenir. <ol><li> Dondurarak kurutma, toplam katılaşma, Tg donma noktasının altına örnek vardır. </li><li> Kuruma adım, buz süblimasyonu kaldırılır. Sıcaklık ve basınç etkili bir dondurarak kurutma işlemi ulaşmak için optimize edilmelidir. </li></ol> 4. Temsilcisi sonuçları: PLGA-b-PEG Di-blok kopolimeri Karakterizasyonu Polimerlerin başarılı konjugasyon onaylamak için farklı teknikler kullanılabilir. PLGA-b-PEG kompozisyon, 400 MHz 1H nükleer manyetik rezonans (NMR) ile karakterize edilebilir. Jel geçirgenlik kromatografisi (GPC) oluşan ürün Moleküler ağırlığı (PLGA-b-PEG) tarafından kontrol edilebilir. PLGA-b-PEG molekül ağırlığı distribution eğrisi ve elüsyon zaman PLGA ve PEG tek başına farklı olmalıdır. Birlikte, bu tekniklerin oluşan ürün karakterize ve konjugasyon reaksiyon başarılı olup olmadığını belirlemek gerekir. PLGA-b-PEG Karakterizasyonu nanopartiküller Partikül boyut ve boyut dağılımı, dinamik ışık saçılması ile ölçülebilir. Nanoprecipitation süreç içinde farklı parametreler partiküllerin boyutunu etkileyebilir. Başlangıçta kullanılan polimerler (PLGA ve PEG) Moleküler ağırlıkları da tanecik boyut dağılımı etkisi. Geçiş elektron mikroskobu (TEM) de Şekil 3'te görüldüğü gibi nanopartiküllerin boyut dağılımı ve yapısını onaylamak için kullanılabilir. Partikül boyutu aralığı nm aralığında genellikle. Düzensiz boyut dağılımı ile büyük parçacık boyutları ya nanoprecipitation yöntemi ihtiyaçlarını optimizasyonu konjugasyon reaksiyon veya bir hata olduğu anlamına gelebilir. Buna ek olarak, yüzey zeta potansiyel ZetaPALS tarafından ölçülebilir. Uyuşturucu / kargo yükleme verimliliği standart HPLC ile belirlenebilir. Parçacıklar organik çözücü ve HPLC çözülür ilaç / kargo (Şekil 4) absorbansı ölçmek için yapılabilir. Nanopartiküller sabit miktarları 30 Slayt-A-Lyzer MINI Diyaliz üniteleri diyalize bilinen yerlerde ilaç salım kinetik çalışmada yapılabilir. Sabit zaman aralıklarında içerik, diyaliz ünitesinde toplanan ve eşit miktarda organik çözücü nanopartiküller çözmek için eklenir. HPLC, uyuşturucu / kargo içeriği ölçmek için bu numuneler üzerinde yapılır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3398/3398fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. EDC / NHS kimya <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3398/3398fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Polimerik nanopartiküller hazırlamak için Nanoprecipitation yöntemi. PEG-PLGA diblock ve parçacık yüklü olması uyuşturucu ya da kargo içeren (acetonitrile veya DCM) bir çözücü organik çözelti 3-5 mL H 2 O karıştırarak damla damla eklenir <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3398/3398fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Nanopartices Transmisyon Elektron Mikroskobu PEG-PLGA TEM görüntü wortamin içeren nanopartiküller. Fosfotungstik asit, bir kontrast madde olarak kullanılmıştır. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3398/3398fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4. PBS içinde diyaliz sonra nanopartiküller Paklitakselin nanoparçacık ilaç kontrollü salım Release. Kaydetti zamanda parçacıklar diyaliz kaset çıkarıldı asetonitril'de solublized. Çözüm HPLC ile ölçüldü. İki ayrı nanoparçacıkların birçok karşılaştırıldı. <div id="myEventWatcherDiv"></div><div id="myEventWatcherDiv"></div>

<ol><li>Drotleffa, S., Lungwitz, U., Breuniga, M., Dennis, A., Blunk, T., Tessmarc, J., Goëpferich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+polymers+in+pharmaceutical+and+biomedical+sciences%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Biomimetic polymers in pharmaceutical and biomedical sciences.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 58, 385-407 (2004).</li>
<li>Bulte, J. W. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBulte%2C+JWM+%22Nanoparticles+in+Biomedical+Imaging%22">Nanoparticles in Biomedical Imaging</a>. 3, (2008).</li>
<li>Omid, C., Farokhzad, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Nanotechnology+on+Drug+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+NANO%22%5BJournal%5D)">Impact of Nanotechnology on Drug Delivery.</a> ACS NANO. 3, 16-20 (2009).</li>
<li>Li, Y. -P., Pei, Y. -Y., Xian-Ying, Z., Zhou-Hui, G., Zhao-Hui, Z., Wei-Fang, Y., Jian-Jun, Z., Jian-Hua, Z., Xiu-Jian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEGylated+PLGA+nanoparticles+as+protein+carriers%3A+synthesis%2C+preparation+and+biodistribution+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">PEGylated PLGA nanoparticles as protein carriers: synthesis, preparation and biodistribution in rats.</a> Journal of Controlled Release. 71, 203-211 (2011).</li>
<li>Hermanson, G. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHermanson%2C+GT+%22Bioconjugate+techniques%22">Bioconjugate techniques</a>. , 2nd Edition, (2008).</li>
<li>Jeong, B., Bae, Y. H., Lee, D. S., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+block+copolymers+as+injectable+drug-delivery+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Biodegradable block copolymers as injectable drug-delivery systems.</a> Nature. 388, 860-862 (1997).</li>
<li>Yoo, H. S., Park, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folate+receptor+targeted+biodegradable+polymeric+doxorubicin+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Folate receptor targeted biodegradable polymeric doxorubicin micelles.</a> Journal of Controlled Release. 96, 273-283 (2004).</li>
<li>Cheng, J., Teply, B. A., Sherifi, I., Sung, J., Luther, G., Gu, F. X., Levy-Nissenbaum, E., Radovic-Moreno, A. F., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formulation+of+Functionalized+PLGA-PEG+Nanoparticles+for+In+Vivo+Targeted+Drug+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Formulation of Functionalized PLGA-PEG Nanoparticles for In Vivo Targeted Drug Delivery.</a> Biomaterials. 28, 869-876 (2007).</li>
<li>Gu, F., Zhang, L. F., Teply, B. A., Mann, N., Wang, A., Radovic-Moreno, A. F., Langer, R., Farokhzad, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+engineering+of+targeted+nanoparticles+by+using+self-assembled+biointegrated+block+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Science%22%5BJournal%5D)">Precise engineering of targeted nanoparticles by using self-assembled biointegrated block copolymers.</a> Proceedings of the National Academy of Science. 105, 2586-2591 (2008).</li>
<li>Sanna, V., Pintus, G., Roggio, A. M., Punzoni, A., Posadino, A. M., Arca, A., Marceddu, S., Bandiera, P., Uzzau, S., Sechi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+Biocompatible+Nanoparticles+for+the+Delivery+of+%28-%29-Epigallocatechin+3-Gallate+to+Prostate+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Targeted Biocompatible Nanoparticles for the Delivery of (-)-Epigallocatechin 3-Gallate to Prostate Cancer Cells.</a> J. Med. Chem. 54, 1321-1332 (2011).</li>
<li>Abdelwahed, W., Degobert, G., Stainmesse, S., Fessi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freeze-drying+of+nanoparticles%3A+Formulation%2C+process+and+storage+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Freeze-drying of nanoparticles: Formulation, process and storage considerations.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 58, 1688-1713 (2006).</li>
<li>Holzer, M., Vogel, V., Mäntele, W., Schwartz, D., Haase, W., Langer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physico-chemical+characterisation+of+PLGA+nanoparticles+after+freeze-drying+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutics+and+Biopharmaceutics%22%5BJournal%5D)">Physico-chemical characterisation of PLGA nanoparticles after freeze-drying and storage.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 72, 428-437 (2009).</li>
<li>Lee, M. K., Kim, M. Y., Kim, S., Lee, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryoprotectants+for+Freeze+Drying+of+Drug+Nano-Suspensions%3A+Effect+of+Freezing+Rate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cryoprotectants for Freeze Drying of Drug Nano-Suspensions: Effect of Freezing Rate.</a> Journal of Pharmaceutical Sciences. 98, 4808-4817 (2009).</li>
<li>Wang, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofunctionalized+targeted+nanoparticles+for+therapeutic+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+opinion+on+biological+therapy%22%5BJournal%5D)">Biofunctionalized targeted nanoparticles for therapeutic applications.</a> Expert opinion on biological therapy. 8, 1063-1070 (2008).</li>
<li>Jeong, B., Bae, Y. H., Kim, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+release+from+biodegradable+injectable+thermosensitive+hydrogel+of+PEG-PLGA-PEG+triblock+copolymers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Drug release from biodegradable injectable thermosensitive hydrogel of PEG-PLGA-PEG triblock copolymers.</a> J. Control Release. 63, 155-163 (2000).</li>
<li>Gref, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodegradable+long-circulating+polymeric+nanospheres%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biodegradable long-circulating polymeric nanospheres.</a> Science. 263, 1600-1603 (1994).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Diblock co-polimerler kullanarak nanoprecipitation yöntem polimer nanopartiküller mühendisi basit ve hızlı bir yöntem temsil eder. Nanopartiküller az çözünebilir bileşiklerin teslimat için kullanılabilir bir hidrofobik çekirdeğin oluşmaktadır. Bir hedefleme ligand potansiyeli daha fazla konjugasyon için benzer parçaları sağlarken hidrofilik yüzey tabakası mükemmel sulu çözünürlük sağlar. Lipozomlar dahil olmak üzere birçok nanoparçacık platformları, polimerik nanoparçacıkların, dendrimers, m...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> EDC </td><td> Thermo Scientific </td><td> 22980 </td><td> Konjugasyon Reaktif </td></tr><tr><td> NHS </td><td> Thermo Scientific </td><td> 24500 </td><td> Konjugasyon Reaktif </td></tr><tr><td> amin-PEG-karboksilat </td><td> Laysan Bio Inc. </td><td> NH2-PEG-CM-5000 </td><td> Polimer (herhangi bir PEG MW, 5000 kullanabilir miyim burada listelenir) </td></tr><tr><td> PLGA-carbxylate </td><td> Lactel </td><td> B6013-2 </td><td> Polimer </td></tr><tr><td> Diklorometan (DKMP) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 34856 </td><td> Çözücü </td></tr><tr><td> Asetonitril&gt;% 99 saflıkta </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 34851 </td><td> Çözücü </td></tr><tr><td> Metanol&gt;% 99 saflıkta </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 34860 </td><td> Yıkama </td></tr></tbody></table>

nanoprecipitation tekniği diblock polimerik nanopartiküller formülasyonu

Formulation of Diblock Polymeric Nanoparticles through Nanoprecipitation Technique

Nanoteknoloji harnessing ölçekte nanometre (nanopartiküller) parçacıkların eşsiz özelliklerini içerir nispeten yeni bir bilim dalıdır. Nanopartiküller boyutları, bileşimi ve yüzey kimyası dikkatli bir şekilde kontrol edilebilir kesin bir biçimde tasarlanmış olabilir. Bu onların kargo temel özellikleri, çözünürlük, yayınım, biodistribution, sürüm özellikleri ve immünojenite gibi bazı değiştirmek için benzeri görülmemiş bir özgürlük sağlar. , Kuruluşundan bu yana, nanoparçacıkların, ilaç dağıtım, görüntüleme ve hücre biyolojisi 1-4 da dahil olmak üzere birçok alanda, bilim ve tıp kullanılmıştır. Ancak, tam olarak algılanan teknik bir engel nedeniyle &quot;nanoteknoloji laboratuvarları dışında kullanılmıştır değildir. Bu makalede, potansiyel uygulamaları çok geniş bir yelpazesi olan bir polimer esaslı nanoparçacık platformu sentezlemek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Hidrofobik bir etki alanı ve hidrofilik etki alanı hem de bir diblock co-polimer sentezlemek için ilk adım. PLGA ve PEG model polimerler olarak kullanarak, EDC / NHS kimya 5 (Şekil 1) kullanarak bir konjugasyon tepki nitelendirdi. Ayrıca polimer arınma süreci tartışacağız. Sentezlenmiş diblock co-polimer hidrofilik-hidrofobik etkileşimler yoluyla nanoprecipitation sürecinde nanopartiküller içine kendi kendine bir araya getirebilirsiniz. Açıklanan polimer nanoparçacık çok yönlü. Nanoparçacık hidrofobik çekirdek ilaç dağıtım experiments6 için az çözünen ilaç taşımak için kullanılabilir. Ayrıca, nanopartiküller, DMSO gibi bir çözücü gerektirir wortmannin az çözünür moleküler biyoloji reaktifleri, toksik solventlerin sorunun üstesinden gelebilir. Bununla birlikte, DMSO hücreleri için toksik ve deney ile müdahale edebilirsiniz. Bu kötü çözünen ilaçlar ve reaktifler etkili minimal toksisite ile polimer nanopartiküller kullanılarak teslim edilebilir. Polimer nanoparçacıkların da floresan boya ile yüklenir ve hücre içi ticareti çalışmaları için kullanılmaktadır. Son olarak, bu polimer nanopartiküller yüzey PEG yoluyla ligandlar hedefleyen konjuge olabilir. Bu hedef nanopartiküller 7-10 veya hücreleri belirli epitoplar etiket kullanılabilir.

Bu makale diblock co-polimerler kullanarak polimer bazlı nanopartiküller sentezlemek için nanoprecipitation yöntem açıklanır. Biz diblock sentezi co-polimerler, nanoprecipitation tekniği ve potansiyel uygulamalar ele alınacaktır.

Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu

Nanoteknoloji, nanometre ölçeğindeki parçacıkların benzersiz özelliklerinden yararlanmayı içeren nispeten yeni bir bilim dalıdır...

Bu prosedürün genel amacı, nano çöktürme yöntemi kullanılarak polimerik nanopartiküller sentezlemektir. Bu işlem, öncelikle A-P-L-G-A PEG kopolimeri üretmek için bir E-D-C-N-H-S reaksiyonu gerçekleştirilerek sağlanır. Ardından, nano çöktürme yoluyla ilgili ilaç veya kargonun enkapsülasyonu yapılarak nanopartiküller üretmek için PLGA PEG kopolimeri kullanılır.Bu aşamada; boyut, yüzey yükü ve ilaç yükleme etkinliği dahil olmak üzere temel biyofiziksel karakterizasyon, dinamik ışık saçılması, transmisyon elektron mikroskopisi veya HPLC aracılığıyla gerçekleştirilebilir. Nanopartiküllerin düşük çözünürlüğe sahip antikanser terapötiklerini iletebilmesi nedeniyle, bu tekniğin etkileri tümör tedavisine kadar uzanmaktadır ve bu durum mevcut tedavilerden daha etkili olabilir. Bu yöntem, kanser tedavisine dair içgörü sağlayabilir.Ayrıca hücresel taşınım gibi diğer sistemlerin incelenmesinde de kullanılabilir. Nanopartiküller, hedefleyici bir ligand ile konjuge edilebilir ve tekniği gösteren bir görüntüleme ajanı kullanılarak in vivo veya in vitro olarak görselleştirilebilir. Bugün laboratuvarımızdan iki teknisyen, Rohit Sukumar ve Natalie Cummings eşlik edecekler. PLGA PEG kopolimer sentezine başlamak için, karboksilatlı PLGA'yı nazikçe karıştırarak 5 mM konsantrasyonda Asetonitril içerisinde çözün.Ardından, PLGA'ya kıyasla beş kat stokiyometrik fazlalık sağlayacak şekilde 25 millimolar konsantrasyonlar elde etmek için yeterli miktarda NHS ve EDC ekleyin; PLGA karboksilatın PGA NHS'ye dönüştürülmesine izin vermek için çözeltiyi yaklaşık bir saat boyunca hafifçe karıştırın. Bir saat sonra, çözeltiye yaklaşık 10 kat hacim fazlasında yıkama çözeltisi olan metanol ekleyerek PGA NHS reaksiyon ürününü çöktürün; PGA NHS'yi peletlemek için çözeltiyi 2000 ×g'de santrifüjleyin, santrifüj işleminin ardından EDC ve NHS kalıntılarını uzaklaştırmak için süpernatanı atın. Metanol ile yıkama prosedürü en az üç kez tekrarlanır.Yıkama işlemi tamamlandıktan sonra, yıkama çözeltisinin tüm kalıntılarını gidermek için P-L-G-A-N-H-S'yi 30 dakika boyunca vakum altında kurutun. Ardından, P-L-G-A-N-H-S peletini, başlangıçta PLGA'yı çözmek için kullanılan konsantrasyonun aynısında aceto NI trial içinde yeniden çözün.Çözündükten sonra, PLGA çözeltisine hetero bifonksiyonel PEG ekleyin. Beş milimolar konsantrasyonda ekleme yapın.Karışım çözeltisini 24 saat boyunca sabit karıştırma ile inkübe edin. PLGA PEG blok kopolimer reaksiyon ürününü, aşırı miktarda metanol ekleyerek çöktürün. Tüm fazla reaksiyona girmemiş PEG'i uzaklaştırmak için yıkama ve santrifüj işlemini üç kez daha tekrarlayın.Sentezin son adımı olarak, PLGA PEG blok kopolimerini vakum altında kurutun; nanoparçacık çöktürme işlemi, PLGA PEG blok kopolimerinin ve kapsüle edilecek ilacın A-P-L-G-A çözücüsü içinde çözülmesiyle başlar. Çözücü seçimi, nanoparçacığın özelliklerini etkilediği için kritiktir. Ardından, yaklaşık 3 mg/mL nihai polimer konsantrasyonu elde etmek için polimer ilaç karışımını, karıştırılan 3 ila 10 hacim suya damla damla ekleyin. Damla damla.Doğru boyutta nanoparçacıkların oluşması için organik çözeltinin sulu faza eklenmesi kritik öneme sahiptir. Nanoparçacıkların kendi kendine düzenleme (self-assembly) yoluyla oluşmasını sağlamak ve organik çözücü kalıntılarını gidermek için indirgenmiş basınç altında karıştırma işlemini iki saat boyunca sürdürün. İki saatlik karıştırma işleminin ardından.Nanopartikülleri, bir Amcon filtresi kullanarak 2.700 ×g'de 10 dakika boyunca santrifüj ederek konsantre edin. Ardından, hapsolmamış ilaç kalıntılarını uzaklaştırmak için nanopartikülleri PBS ile yıkayın ve işlemi santrifüj ile takip edin. Son olarak, nanopartikülleri bu aşamada PBS içerisinde yeniden süspande edin.Nanopartiküllerin özelliklerini daha iyi anlamak için boyut, yüzey yükü ve ilaç yükleme verimliliği dahil olmak üzere temel biyofiziksel karakterizasyon gerçekleştirilebilir. Nanopartiküller, yazılı protokolde açıklandığı şekilde saklanabilir; PLGA PEG nanopartiküllerini karakterize etmek için boyut, dağılım ve yapıyı doğrulamak amacıyla transmisyon elektron mikroskopisi kullanılmıştır. Parçacık boyutu genellikle nanometre aralığındadır.Düzensiz boyut dağılımlarına sahip büyük partikül boyutları, ya konjugasyon reaksiyonunda bir hata olduğunu ya da nano çöktürme yönteminin optimizasyon gerektirdiğini gösterebilir. Burada, Paklitaksel yükleme verimliliğinin ve salınımının standart HPLC ile kantifiye edildiği bir ilaç salınım kinetik çalışması gösterilmektedir. Nanopartiküllerin bilinen sabit miktarları, belirli zaman aralıklarında diyalize edilmiştir.Diyaliz ünitesindeki içerik toplandı ve nanopartikülleri çözmek için eşit hacimde organik çözücü eklendi. Ardından bu örneklere HPLC uygulandı. Paclitaxel içeriğini miktar belirlemek için, uzmanlaşıldığında bu nano çöktürme tekniği üç saat içinde uygun şekilde gerçekleştirilebilir.Bu tekniği uygularken, gelişimin ardından büyük partiküller oluşmasını önlemek için organik fazı her zaman sulu faza yavaşça eklemeyi unutmayın. Bu teknik, nanotıp alanındaki kanser araştırmacılarının, bu prosedürün ardından kanser hastalarında bir zamanlar çok toksik olduğu düşünülen düşük çözünürlüklü ilaçların kullanımını keşfetmelerine yol açmıştır. Düşük çözünürlüklü ilaçların etkili olup olmadığı, sistemik toksisitenin artık bir sorun teşkil edip etmediği veya hedefleme ligandlarının nanopartikülleri hedeflerine doğru şekilde yönlendirip yönlendirmediği gibi soruları yanıtlamak için in vivo etkinlik çalışmaları veya görüntüleme çalışmaları gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

formulation-diblock-polymeric-nanoparticles-through-nanoprecipitation

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu makalede, kendi kendine bir araya iki bloklu kopolimer esaslı supramolecules elde edilen nano gözenekli şablon üzerine akımsız metal kaplama ile de sıralı nikel nanofoams hazırlanmasını tarif etmektedir.

Buradaki iki bloklu kopolimer Supramolecules ikinci Gyroid Nikel Nanoyapılar

Çeşitli polimer kapsüllenmiş metal nanopartikül türlerini "homo-" ve "ko-polimerler" oluşan uzun zincirlere "polimerize etmek" için protokoller rapor ediyoruz.

Polistiren kullanma<em&gt; Bloğu</em&gt; -poli (Akrilik asit) Bunların homo- ve ko-polimerizasyon için monomer olarak metal Nanopartiküller -kaplı

Bu makale, görünür ışık aracılı dispersiyon polimerizasyonu kullanılarak polimerik kendi kendine monte nanopartiküller üretmek için bir süreci açıklamaktadır. Polimerizasyonu kontrol etmek için düşük enerjili görünür ışığın kullanılması, yüksek katı madde içeriğinde kendi kendine monte edilen solucan benzeri misellerin tekrarlanabilir oluşumuna izin verir.

Photoredox Katalizörü kullanarak görünür ışık aracılığı ile dispersiyon polimerleştirilmesi ile solucan gibi miseller Facile sentezi

Metoksi-polietilen glikol (MPEG-b -PPheGE) üzerine fenil glisidil eter (PheGE) anyonik polimerizasyon yaşayan önemli adımlar anlatılmıştır. Elde edilen blok kopolimer miseller (BCMS) fizyolojik olarak uygun koşulları elde edildi altında 4 gün boyunca doksorubisin% 14 (% ağırlık) ve ilacın sürekli bırakılmasını sağlar ile yüklendi.

π-π İstifleme etkileşimlerle Stabilize blok kopolimer miselleri hazırlanması için bir amfifilik kopolimerin anyonik polimerizasyonu

Nanomalzemeler çok yönlü kontrollü tedavi teslimat temel bilim ve çevirim uygulamalar için mekanizmalar kullanır, ancak onların imalat kez en Biyomedikal laboratuvarlarda kullanılamaz uzmanlık gerektirir. Burada, iletişim kuralları ölçeklenebilir imalat ve terapötik flash nanoprecipitation kullanarak çeşitli kendi kendine monte nanocarriers yüklenmesini için mevcut.

Ölçeklenebilir, Hızlı montaj ve biyoaktif proteinler ve Immunostimulants yükleme yolu ile birden parlamak Nanoprecipitation çeşitli sentetik Nanocarriers içine

Flash NanoPrecipitation (FNP) polimer çekirdek-kabuk nano tanecikleri üretmek için ölçeklenebilir bir yaklaşımdır. Laboratuvar ölçekli formülasyonları hidrofobik veya hidrofilik therapeutics Kapsülleme için açıklanmıştır.

Hidrofobik ve hidrofilik bileşikler polimer nano tanecikleri Kapsülleme için NanoPrecipitation flash

Kristalizasyon odaklı Self-montaj (CDSA), dar uzunlukta dağılımların silindirik nanoyapılarını üretebilmek için benzersiz bir yetenek gösterir. Ε-kapolakton ve Metil metakrilat ve n, n-dimetil akrilamid sonraki zincir uzantılarının organokatalyzed halka açma polimerizasyonu gösterilmiştir. 500 Nm uzunluğa kadar Monodisperse silindirleri üreten bir canlı CDSA Protokolü özetlenmiştir.

Biodegradable blok kopolimerlerin kristalizasyon Driven kendinden montajı ile Monodisperse silindirik Nanopartiküllerin sentezini

Nanoparçacık izleme analizi (NTA) ve polimerik gen teslimat nanopartiküller değerlendirmek için high-throughput Akım sitometri için bir protokol tanımlanmıştır. NTA nanoparçacık parçacık büyüklüğü dağılımı ve plazmid başına parçacık dağılımını karakterize etmek için kullanılmaktadır. Yüksek throughput flow sitometri gen teslimat biyomalzemelerin bir kütüphane için nicel transfeksiyon etkinliği değerlendirilmesini sağlar.

Polimerik Gen Taşıyıcı Değerlendirilmesi Nanoparçacık İzleme Analizi ve Yüksek throughput Flow Sitometri tarafından Nanopartiküller

Bu biyolojik olarak parçalanabilir bir polimerik nano-tanecikleri kullanılarak anjiyojenez için tedavi edici faktörler aşırı ifade programlama kök hücrelerin bir yöntem tarif eder. Tarif edilen işlemler in vitro yağ elde edilen kök hücreleri transfekte etmek ve bir murin arka bacak anjiyojenezi, iskemi modelinde desteklemek için programlanmış kök hücrelerin etkinliğini doğrulamak, polimer sentezi içerir.

Biyobozunur polimerik nano partiküllerin kullanılması Tedavi Angiogenezis Programlama Kök Hücreler

Yivli bir mikroakışkan kanaldan geçen iki bitişik sıvı, bir prepolimer çekirdeğinin etrafında bir kılıf oluşturmaya yönlendirilebilir; böylece hem şekil hem de kesit belirlenir. Tiyol tıklama kimyası gibi fotoinitiated polimerizasyon, çekirdek sıvısını önceden belirlenmiş boyut ve şekle sahip bir mikrofiber haline hızlı bir şekilde katılaştırmak için çok uygundur.

Önceden Tasarlanmış Boyut ve Şekle Sahip Polimerik ve Biyohidred Elyafların Mikroakışkan İmalatı

Öğrenin, nanoprecipitation yöntemiyle PLGA-PEG diblok kopolimer nanopartiküller sentezleyerek ilaç taşıma sistemleri geliştirmeyi. Bu teknik, kanser tedavisinde düşük çözünürlüklü ilaçların etkili dağıtımını sağlar.

Nanoprecipitation Tekniği Diblock Polimerik Nanopartiküller formülasyonu

Daha fazla video keşfet