Test Görsel Fonksiyonu için Basit Bir Davranış Testi Xenopus laevis

Bu prosedürün genel amacı, hayvanın siyahla kaplı test tankının yarısında geçirdiği süreyi kaydederek kurbağa yavrularının görsel işlevini test etmektir. Bu, önce kurbağa yavrularını 45 ila 50. aşamalara yükselterek gerçekleştirilir. İkinci adım, davranış testi için bir kamera ile birlikte yarı siyah, yarı beyaz bir tank kurmaktır.

Ardından, dış tanka kurbağa yavrusu olan ikinci bir tank yerleştirin. Her kurbağa yavrusu kaydı için, ortamındaki arka plan değiştikçe görme güdümlü davranış. Son adım, kurbağa yavruları üzerinde retinal bir sodomi yapmak ve ardından davranış testini tekrarlamaktır.

Sonuç olarak, bu basit, ucuz tahlilden elde edilen veriler, kurbağa yavrularının, foto görüş testleri altında, tankın bir tarafında diğerine göre yüzmeyi tercih ettiklerini göstermek için kullanılır. Bu yöntemi kullanmanın optik kinetik tepki veya kuyruk çevirme testi gibi diğer tekniklere göre temel avantajı, çoğu opus laboratuvarında kolayca bulunabilen ekipmanı kullanan ucuz, basit bir yöntem olmasıdır. Kurbağa yavrularını hazırlamak için önce döllenmiş ksenopus embriyoları, put mark'ları, modifiye halkalar veya mililitre başına 50 mikrogram ile 60 milimetre Petri kaplarında 10 kat seyreltilmiş MMR elde edin.

Gentamisin antibiyotik, blastulayı nöral plaka evresindeki embriyolara yerleştirir. Petri kaplarında 18 santigrat derecede iki ila 15. aşamalar. Embriyolar yaklaşık 27 ila 30 lehine yeni bir kaba ulaştığında, bağırsak bakteri üremesine izin vermek için bunları antibiyotiksiz 0.1 XMMR'ye geçirin.

Kurbağa yavruları 45. aşama civarında beslenme aşamasına ulaştığında, onları 0,1 XMMR ile 100 milimetrelik Petri kaplarına taşıyın. Ertesi gün, onları ısırgan otu tozu süpernatan ile besleyin. 100 milimetrelik Petri kabında bir hafta sonra, yarım galonluk bir tankı kurbağa suyuyla doldurun.

Hayvanları tanka taşıyın ve ısırgan otu tozu süpernatan besleme programına devam edin, ancak suyu haftada sadece iki ila üç kez değiştirin. Hayvanlar yarım galonluk tanklardayken, onları 12 saatlik ışık, 12 saatlik karanlık döngüde tutun ve ışıklar sabah 6:00'da yanar Testten önce, yarım galonluk tankı test denekleriyle birlikte en az 12 saat boyunca gece boyunca beyaz bir yüzeye yerleştirin. Davranış testi, standart floresan aydınlatmalı sessiz, düşük trafikli bir alanda yapılmalıdır.

İç tankın ne olacağının dış köşelerinde iki yuvalama yarım galonluk test tankı hazırlayın. Su hattını alttan beş santimetre yukarıda işaretlemek için bir Sharpie kullanın. Ayrıca iç tank için, iç kısmındaki herhangi bir bölmeyi tanımlayın.

Kurbağa yavrularının içlerinde kalmasını önlemek için bunları inert bir bileşikle doldurun. Şimdi dikkatinizi ikinci dış tanka çevirin. Bir sonraki adım için siyah elektrik bandı ve beyaz kağıt mendil edinin.

Burada gösterildiği gibi tankın bir yarısının dışını kaplamak için bandı ve diğerinin dışını kaplamak için kağıt mendili kullanın. Tanklar hazırlandıktan sonra, bir aşılama döner tablası kurun ve iç içe geçmiş tankları üzerine yerleştirin. Kameranın tankların içini yukarıdan görüntüleyebilmesi için bir tripod ve web kamerası yerleştirin.

Web kamerasını video yakalama ve oynatma yazılımı olan bir bilgisayara bağlayın. Kamerayı açın ve yeni bir film kaydı yapmaya hazırlanın. Ardından, kameranın ve tankların üzerine hafif bir pamuklu bez örtün.

Kurbağa yavrularına dış ipuçlarını azaltmak için, parlaklık ölçer kullanın ve kumaşın altındaki parlaklığın metrekare başına 35 ila 50 mum arasında olduğunu kontrol edin. İç test tankını alarak davranış testini başlatın. Beş santimetre işaretine kadar kurbağa suyu ile doldurun.

Bir hayvanı yarım galonluk kabından bilgisayardaki iç test tankına aktarmak için bir ağ kullanın. Kayıt yazılımının açık olduğundan ve kayıt tutmak için test alanını kaydettiğinden emin olun. Hayvanın adını, tarihini ve saatini bir kağıda yazın.

Bunu kayıt için kameranın altına yerleştirin. Bu yapıldıktan sonra, iki dakika boyunca bir zamanlayıcı önceden ayarlayın. Ardından, dış tankı döner tabla üzerine yönlendirin, böylece siyah taraf sağda olur.

Şimdi test tankını dış tanka yerleştirin. Kayıt alanında, örtüyü kapatın ve dış tankın yönünü sağlamak için bilgisayar ekranını kullanın. Videonun kaydedildiğinden emin olun ve zamanlayıcıyı başlatın.

Zamanlayıcı bip sesi çıkardığında, örtüyü yerinde tutun ve iç test tankını çıkarın. Ardından, dış tankı 180 derece döndürün, böylece siyah taraf şimdi solda olur. Test tankını dış tanka geri koyun ve iki dakikalık zamanlayıcıyı başlatın.

Yine, iç tankı çıkarın. Dış tankı 180 derece döndürün ve iç tankı her iki dakikada bir toplam 10 kez değiştirin. İşiniz bittiğinde video kaydını durdurun.

Kurbağa yavrusunu yarım galonluk tankına geri koyun. Retinol ex sodomi gerçekleştirmek için bir mikroskop hazırlayın. 60 milimetrelik bir Petri kabını 0.1 XMMR'de eritilmiş %1 aros ile doldurun ve katılaşmasına izin verin.

Kurbağa yavrusu büyüklüğünde küçük bir dikdörtgen aros parçasını çıkarın. Devam etmeye hazır olduğunuzda, test hayvanını alın ve %0.02 Trica içine yerleştirin. Üç numaralı forseps ile bir kuyruk tutamına yanıt vermediğinde devam edin.

Sonra hayvanı tabağa aktarın. Petri kabını mikroskoba monte ederek devam edin. Hayvanı bir tarafta forseps ile desteklemeye hazırlanın.

Karşı tarafta, gözün sırt bölgesinin arkasındaki cildi 45 derecelik bir açıyla delmek için 25 gauge bir iğne kullanın, beş numara, forseps ile dikkatlice deliğe uzanın ve yanındaki damardan kaçınarak optik siniri kesin. Ameliyattan sonra siniri yoldan çekin ve forsepsleri geri çekin. Hayvanı, mililitre başına 0.7 XMMR ve 50 mikrogram ile 100 milimetrelik bir Petri kabına yerleştirerek kurtarın.

20 dakika boyunca gentamisin. Bundan sonra, kurbağa yavrusunu kurbağa suyu ile bir geri kazanım tankına aktarın. Teste hazırlanmak için tankı beyaz bir yüzeye yerleştirin.

Hayvanın gece boyunca dinlenmesine izin verin. Ertesi sabah görsel işlevi test etmek için davranışsal testi kullanın. Bu filmde, deney için temsili veriler gösterilmektedir.

Solda ameliyattan önceki hayvanlar, sağda ise her iki gözün retina aksonları kesildikten sonra aynı hayvanlar var. Bu, alt köşelerdeki şema ile gösterilir. Su, hayvanları siyah taraftan itmek veya onları beyaz tarafa çekmek için hiçbir şey eklenmediğini göstermek için rahatsız edildi.

Ameliyat öncesi kurbağa yavruları arka plan rengine 30 saniyeden daha kısa sürede tepki verirken, kör kurbağa yavruları tankın etrafında amaçsızca yüzer. Bu grafik, üç koşul altında tek bir hayvan için beyaz ve siyah bölgelerde geçirilen sürenin yüzdesini göstermektedir. İlk olarak, hayvan tahlil kullanılarak herhangi bir ameliyattan önce gözlemlendi.

Sağ optik sinirin kesilmesinden iki gün sonra, iki günlük test boyunca davranışı gözlendi. Son olarak, her iki optik sinir de kesildikten sonra, tahlil ile iki gün daha gözlem yapıldı. Hayvan, en az bir optik sinir sağlam olduğunda tankın beyaz tarafında daha fazla gün geçirdi.

Bu videoyu izledikten sonra, çoğu kurbağa laboratuvarında bulunan basit reaktifler ve ekipmanlar kullanılarak kurbağa yavrularının görüşünü nasıl test edeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Deneylerinizde iyi şanslar.