Name: Test Görsel Fonksiyonu için Basit Bir Davranış Testi Xenopus laevis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-12T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Öğrenin Xenopus laevis kurbaga yavrularının görsel fonksiyonunu basit davranış testiyle değerlendirmeyi. Siyah/beyaz tankta yüzme tercihleri ölçülerek görsel yetenekler incelenir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe tarafından finanse edildi: EY015748, EY017964 (MEZ) ve EY019517 (ASV). Bu çalışma aynı zamanda Göz Hastalıkları Anabilim Dalı ve Orta New York Lions Körlük Serbest Grant Engellenir Research tarafından desteklenmiştir. Biz de hayvanların onun mükemmel bakım için ve bu video yıldız için adım için bizim hayvan teknisyeni, Matthew Mellini, teşekkür etmek istiyorum.

Hayvan Bakımı Xenopus Bu çalışmada kullanılan tadpoles Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Upstate Medical University IACUC ve Kılavuz tarafından onaylanan prosedürlere uygun olarak, yükseltilmiş yetiştirilen ve tedavi edildi laevis. . 1. Ön davranış Kurulum: Tadpoles <ol><li> Bir ticari olarak temin edilebilen bir kaynaktan, döllenmiş embriyolar Xenopus elde edilir ya da daha önce tarif edildiği gibi 6, in vitro olarak, oosit döller. </li><li> 20 mM KCI;; 20 mM CaCl 2; 50 mM HEPES 0.1x MMR [10 X Marc&#39;ın Modifiye Ringer (MMR) çözelti stok (10 mM MgCl2 içeren 60 mm Petri kapları 18 ˚ C&#39;de nöral plak sahne embriyolar blastula yerleştirin; 1 M NaCI, 50 ug / ml gentamisin antibiyotik]), pH 7.5 &#39;e ayarlandı ve otoklavda, oda sıcaklığında saklandı. Her gün 0.1x MMR değiştirin ve herhangi bir ölü embriyolar kaldırmak. </li><li> Embriyolar ~ 27 Nieuwkoop ve Faber aşamaya ulaştıklarında - 30 7, inci geçişantibiyotik olmadan 0.1x MMR içine E embriyolar bağırsak bakteri gelişimini sağlamak için. </li><li> Onlar besleme sahne (evre 45) ulaşıncaya kadar tetarlar büyür ve 0.1x MMR ile dolu 100 mm Petri kapları içine taşıyabilirsiniz. Aradan gününde 0.1x MMR değiştirerek, bir hafta boyunca her gün onlara ısırgan tozu süpernatant besleyin. </li><li> 100 mm Petri kabındaki Bir ​​hafta sonra, kurbağa su dolu yarım galon tankları için hayvanlar arasında hareket [0.5 g / L anlık okyanus ve 2 mM sodyum fosfat dibazik (Na 2 HPO 4: 141,96 mw) pH 6.8]. Adım 2.4 gibi onları beslemek, ancak su bulutlu olduğunda suya haftada sadece 2-3 kez değiştirin. Işıklar 06:00 de dönüm ile 12 saat aydınlık/12 karanlık ışık döngüsü içinde hayvanları korumak. </li><li> Bir laboratuar tezgah underpad, en az 12 saat O / N, testten önce gibi beyaz bir yüzeye test konularla yarım galon tankı yerleştirin. </li><li> Aşamaları 45-50 Test tadpoles aşağıdaki aşama 3&#39;te tarif edildiği. </li></ol> . 2. Ön davranış Kurulum: Equipment <ol><li> Davranış tahlil için laboratuara bir alanı kenara. Bu standart floresan aydınlatma ile sessiz, düşük trafik alanda olmalıdır. </li><li> Hayvanlar için test tankları hazırlayın. Iç içe, yarım galon test tankları iki kısımdan oluşur: su ve kurbağa yavrularını yapacak bir iç tank; ve görsel uyaran ile bir dış tankı. <ol><li> İç tank için, bir sharpie, alttan 5 cm ile dış köşelerinde küçük bir işareti yapmak; Bu su hattı (Şekil 1A, yeşil noktalı çizgi). </li><li> Aynı zamanda, iç depo için, Sylgard elastomer gibi eylemsiz bir bileşik ile (köşelerinde ve merkezinde) tank içinde divets doldurun. NOT: içeri dolu değilse tadpoles bu alanlarda oyalanmak </li><li> Dış tank için, beyaz kağıt mendil Şekil 1B siyah elektrik bandı ve diğer yarısı ile bir tankın dışında tam yarısını kapsamaktadır. </li></ol></li><li> Üzerine tankları yerleştirinpikap aşılamak. </li><li> Kur kamerası / tripod bu test tankların üstünde olduğunu böylece. Şekil 1C &#39;de gösterildiği gibi, test alanı görüntülenmesine olanak vermek üzere kamera ayarlayın. </li><li> 5 yüklü QuickTime Player yazılımı ile bir bilgisayara kameranızı bağlayın. Kamerayı açın. QuickTime Player, File altında, &#39;Yeni Film Recording&#39; seçeneğini seçin. Davranış tahlil kurulum hemen bilgisayarda görünür olacaktır. </li><li> Larva davranışını etkileyen dış ipuçları azaltmak, hem de, suyun yüzeyinde yansıyan ışığı azaltmak için tüm kurulum boyunca hafif bir pamuklu bez Örtü. </li><li> Emin olun 35-50 cd / m 2 arasında bez önlemleri altında parlaklık. </li></ol> 3.. Davranış Assay <ol><li> Kurbağa su ile adım 1.2.1 yapılan 5 cm su işareti için iç test deposunu doldurun. </li><li> Bir küçük net kullanarak, yavaşça iç test tankına hayvan taşımak. </li><li> Açık Sbilgisayar ve bir rehber olarak dış tankı kullanarak uickTime yazılım, kamera test alanı görselleştirmek ve kaydetmek mümkün olduğundan emin olun. </li><li> Kamera ile kağıt ve kaydın parçası üzerinde hayvan adı, tarih ve saati yazın. </li><li> Doğru Şekil 2&#39;ye tankın siyah tarafı ile dış tanka test tankı yerleştirin. </li><li> Depoyu düzenlenmesi hemen sonra film kaydı başlatın ve 2 dakika için zamanlayıcı ayarlayın. </li><li> Zamanlayıcı çalar, iç deney tankı kaldırdığınızda, dış tankı 180 ° döndürmek ve dış tankın içindeki iç deney tankı yerleştirin. Sayacı başlatmak. Not: siyah tarafı şimdi diğer tarafta olmalıdır. </li><li> On denemenin toplamı için adım 3.7, sekiz kez daha tekrarlayın. Her deneme işaretleyerek, bir rehber olarak Şekil 2 kullanın. </li><li> Iki ayrı günlerde davranış testi tekrarlayın. </li></ol> 4. Retina Axotomy <ol><li> Onlar tepkisiz kadar% 0.02 tricaine hayvan yerleştirinBir # 3 forseps ile bir kuyruk tutam. </li><li> 0.1x MMR içinde% 1 agaroz eritilir ve daha sonra bir 60 mm Petri kabı ekleyin. Hayvan kısmen sıvı içine daldırılmış, böylece sonra soğutuldu, agaroz küçük dikdörtgen çimen yapmak ve biraz% 0.02 tricaine ile çimen için iribaş ekleyin. </li><li> Pierce 25 G iğne ile, gözün dorsal bölgesi arkasında bir 45 derecelik bir açı ile, deri, karşı tarafta forseps karşı hayvan takviye ise. </li><li> Optik sinir yanındadır ven, makasla kesme özen, dikkatli, # 5 forseps ile deliğe ulaşmak optik sinir kesiyorlar ve yolumdan çevirmek. Şiddetli kanama nedeniyle kaza arteri kırpma var ise, o hızla euthanize% 2 tricaine hayvan. DİKKAT:% 2 tricaine çözüm insanlarda uyuşma neden olabilir. Bu çözüm eldiven ele alınmalıdır. </li><li> Hayvan kurtarmak için ameliyat sonrası, 0.7X MMR ile 100 mm Petri tabağına ve 20 dakika boyunca 50 ug / ml gentamisin içinde hayvan. Next, kurbağa su ile kurtarma tankına transfer iribaş. Hayvan dinlenme O / incelemeleri edelim </li><li> Ertesi sabah, (3,1-3,9 adım) yukarıda tarif edildiği gibi görsel fonksiyonunu test edin. </li></ol> 5.. Sonuçları Analiz <ol><li> Çalışmalar bittikten sonra, iribaş tankın siyah tarafında kalır süreyi ölçmek. <ol><li> Elle zaman görüntüler ve sık sık duraklamasına izin verir yazılımını kullanarak videoları görüntülemek. Video görüntü zaman bakmak. Tank iç başarıyla dış tankın içinde yuva yapar ve kameranın görünümünde karesi alındığında bir iki dakikalık deneme, başlangıç ​​yazın. </li><li> Hayvanların yüzme tankın hangi tarafı tanımlamak için iribaş gözlerinin konumunu kullanın. Iki gözü siyah / beyaz çizgiyi geçti yalnızca diğer tankın bir tarafında üzerinde geçiş tanımlayın. </li></ol></li><li> Hayvan siyah tarafta harcıyor (sn) her bir aralığın başlangıcını ve sonunu yazmak. Pause ve yenidendoğruluğunu sağlamak için videoyu rüzgar. Her deneme içinde sn toplam. </li><li> Ekli Davranış çalışma kitabına girdi bu numaraları. Sayfası, hayvan saniyede toplam zaman, toplam 120 sn deneme ve uçurumdan tankın siyah tarafında harcanan zamanı çıkarılarak beyaz tarafta harcanan zamanın oranını hesaplamak [(120 - toplam saniye harcanan Siyah tarafı) / 120 sn]. 10 çalışmalarda üzerinde çalışma ortalamaları bu oran. </li><li> Gün arasında denemeler (P ≤ 0.05) önemli olup olmadığını belirlemek için bir öğrencinin T-testi, eşleştirilmiş iki kuyruklu dağılımı kullanın. </li></ol>

<ol><li>Maurer, C. M., Huang, Y. Y., Neuhauss, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+zebrafish+oculomotor+behavior+to+model+human+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Application of zebrafish oculomotor behavior to model human disorders.</a> Rev Neurosci. 22 (1), 5-16 (2011).</li>
<li>Solessio, E., Scheraga, D., Engbretson, G. A., Knox, B. E., Barlow, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circadian+modulation+of+temporal+properties+of+the+rod+pathway+in+larval+Xenopus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Circadian modulation of temporal properties of the rod pathway in larval Xenopus.</a> J Neurophysiol. 92 (5), 2672-2684 (2004).</li>
<li>Moriya, T., Kito, K., Miyashita, Y., Asami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preference+for+background+color+of+the+Xenopus+laevis+tadpole%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Preference for background color of the Xenopus laevis tadpole.</a> J Exp Zool. 276 (5), 335-344 (1996).</li>
<li>Viczian, A. S., Solessio, E. C., Lyou, Y., Zuber, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+eyes+from+pluripotent+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of functional eyes from pluripotent cells.</a> PLoS Biol. 7 (8), (2009).</li>
<li>Choi, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cone+degeneration+following+rod+ablation+in+a+reversible+model+of+retinal+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Cone degeneration following rod ablation in a reversible model of retinal degeneration.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52 (1), 364-373 (2011).</li>
<li>Viczian, A. S., Zuber, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+determination+using+the+animal+cap+transplant+%28ACT%29+assay+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Tissue determination using the animal cap transplant (ACT) assay in Xenopus laevis.</a> J Vis Exp. 16 (39), (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Normal+table+of+Xenopus+laevis+%28Daudin%29+%3A+a+systematical+and+chronological+survey+of+the+development+from+the+fertilized+egg+till+the+end+of+metamorphosis%22">Normal table of Xenopus laevis (Daudin) : a systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis</a>. Nieuwkoop, P. D., Faber, J. , Garland Pub. New York. (1994).</li>
<li>Blackiston, D., Shomrat, T., Nicolas, C. L., Granata, C., Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+second-generation+device+for+automated+training+and+quantitative+behavior+analyses+of+molecularly-tractable+model+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A second-generation device for automated training and quantitative behavior analyses of molecularly-tractable model organisms.</a> PLoS One. 5 (12), (2010).</li>
<li>Rosemberg, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+spatio-temporal+behavior+of+zebrafish+in+the+open+tank+paradigm+after+a+short-period+confinement+into+dark+and+bright+environments%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Differences in spatio-temporal behavior of zebrafish in the open tank paradigm after a short-period confinement into dark and bright environments.</a> PLoS One. 6 (5), (2011).</li>
<li>Dong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+Avoidance+in+Xenopus+Tadpoles+is+Correlated+With+the+Maturation+of+Visual+Responses+in+the+Optic+Tectum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Visual Avoidance in Xenopus Tadpoles is Correlated With the Maturation of Visual Responses in the Optic Tectum.</a> J Neurophysiol. 101 (2), 803-815 (2009).</li>
<li>Lan, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noggin+Elicits+Retinal+Fate+In+Xenopus+Animal+Cap+Embryonic+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Noggin Elicits Retinal Fate In Xenopus Animal Cap Embryonic Stem Cells.</a> Stem Cells. 27 (9), 2146-2152 (2009).</li>
<li>De Robertis, E. M., Kuroda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal-ventral+patterning+and+neural+induction+in+Xenopus+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Dorsal-ventral patterning and neural induction in Xenopus embryos.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 285-308 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz burada kolayca az eğitimli laboratuvar personeli tarafından bir hafta altında yapılabilir basit bir vizyon eşliğinde davranış deneyi rapor. Diğer deneyler hayvan davranışları, özel ekipman ve uzmanlık gerektiren, bu tahlil hızlı bir test görme fonksiyonunu belirlemenize olanak sağlar. Başka bir davranışsal deney, Görsel Kaçınma tahlil, TECTUM Xenopus&#39;ta 10 görsel algı nasıl katkıda belirlemek için geliştirilmiştir. Istikrarlı bir arka plan karşı hareketli, ve böylece, basit deneyinden daha öz...

Xenopus laevis göz oluşumunu çalışmak için bir model organizma olarak kullanılmaktadır. Gözleri görme gelişimi ve fonksiyonu üzerinde bir etkiye sahip test genlerin ya da yollar için en az bir hafta içinde vadeye kadar büyüyen, hızla gelişir. Görme fonksiyonunu test etmek için, optokinetik ve optomotor yanıtı sırasıyla 1,2, Zebra balığı ve Xenopus iribaşlara kullanılmaktadır. Xenopus iribaşların gözleri zebrabalıkları nispeten daha küçük olduğundan, bu deney Xenopus&#39;ta ince kuyruk-Flip ve göz hareketleri davranışları tespit için özel ekipman kullanımı ve eğitimli personel gerektirir. Xenopus&#39;ta daha sağlam bir davranış, burada 3 tanımlanan bir beyaz arka plan ile bir tank içinde yüzme için tercihtir. Bir buçuk siyah / yarı-beyaz tankı bir iribaş yerleştirirken, ön-metamorfik iribaş hızla tankın beyaz tarafına yüzer. Daha önce pluripotent hücre-türevli olmadığını belirlemek için bu tahlil kullanılmıştırGözleri 4 fonksiyonel vardı. Burada, premetamorphic Xenopus iribaşların görme fonksiyonunu test etmek için kullanılabilir, bu tahlilde ayrıntılı bir versiyonu, rapor etmektedir. Sadece en Ksenopus laboratuvarlarda bulunan bir monte dijital video kamera, dijital kamera yazılımı ve standart ekipman gerektirir çünkü bu deney, optomotor tepki deneyi daha basittir. Buna ek olarak, kaydedilen tepki taksitli sonuçlarına özel bir eğitim gerektirir. Bizim temsilcisi sonuçları çift retina axotomy geçirmiş iribaşların aynı grup, tankın etrafına rastgele yüzmek olduğunu göstermektedir. Ayrıca bir göz görsel tepki açısından test edilebilir gösteren temsili bir tadpole arasındaki davranış deney sonuçları dahil ettik. Deneyde sırasında elde edilen sayı eklenir ve analiz edilebilir, böylece bir çalışma dahil edilmiştir. Bu çalışma, test edilen tadpoles görsel bir tepki var olup olmadığını belirlemek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Kapaklı 1/2 Galon Flex-Tank</td><td>eNasco</td><td>SB19271M</td><td>Boyut: 5-3 / 8 "x 7" x 3-3 / 4 "</td></tr><tr><td>Siyah elektrik bandı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Beyaz kağıt mendil</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Büyük aşılama döner tablası</td><td>VWR</td><td>50809-022</td><td>Boyut: Dia 114.3 x & nbsp; Y 76,2 mm (4 1/2&nbsp; x&nbsp; 3")</td></tr><tr><td>Durasorb alt bezi</td><td>VWR</td><td>82004-836</td><td>Boyut: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24")</td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Krackeler Scientific, Inc.</td><td>1945-34155-CS</td><td></td></tr><tr><td>Standart tripod</td><td></td><td>Çeşitli</td><td></td></tr><tr><td>iSight kamera veya web kamerası</td><td>Apple</td><td>M8817LL/A</td><td>Daha büyük kurbağa yavruları için iyidir ancak küçük olanları görmek zordur</td></tr><tr><td>Taşınabilir bilgisayar</td><td>Apple/PC</td><td>Çeşitli</td><td>MacOSX Lion 10.7.5 MiniDV handycam video kamera SONY DCR-HC42 çalıştıran 13" MacBook, 2 GHz Intel Core 2 Duo kullandık</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>6 iletkenli ve 4 iletkenli alfa FireWire 400 ile bilgisayara firewire ile bağlanır;</td></tr><tr><td>Handycam istasyonu</td><td>SONY</td><td>DCRA-C121</td><td>Bu, firewire'ı kameraya bağlamak için kullanılabilir</td></tr><tr><td>QuickTime Player yazılımı</td><td>Quicktime</td><td>Sürüm 10.1</td><td></td></tr><tr><td>26 G İğne (5/8" uzunluk)</td><td>VWR</td><td>BD305115</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11295-10</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık</td><td></td> Ürünler<td></td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin sülfat [50 mg / ml]</td> <td>Fisher Scientific</td><td>17-528Z</td><td>RT</td></tr><tr><td>Sylgard 184'te saklanır silikon elastomer</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9644388</td><td></td></tr><tr><td>Anında okyanus</td><td>Doktorlar Foster ve Smith</td><td>CD-116528</td><td>Stok çözeltisi = RT'de depolanan 100 g / L</td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0876</td><td>Stok çözeltisi = RT'de depolanan 0,4 M</td></tr><tr><td> İn vitro döllenmiş embriyolar</td><td>eNasco</td><td>LM00490MX</td><td>100 embriyo / birim</td></tr></tbody></table>

test görsel fonksiyonu için basit bir davranış testi<em&gt; xenopus laevis</em

A Simple Behavioral Assay for Testing Visual Function in Xenopus laevis

Kurbağa kurbağa yavruları görsel fonksiyon ölçümü, Xenopus laevis, canlı hayvanlarda körlüğe için tarama sağlar. Optokinetik yanıtı, test edilen bütün omurgalı gözlenmiştir bir görüntü-bazlı, dönüşlü bir davranıştır. Böylece kuyruk kapak tepkisi ince yanıtı kaydetmek için eğitimli bir teknisyen gerektirir alternatif tedbir olarak kullanılan Tadpole gözler küçük. Biz tadpoles siyah ve beyaz her iki taraf ile bir tank içinde yerleştirilen zaman bir tank beyaz tarafında yüzmek için tercih ettiği gerçeğine dayalı alternatif bir davranış testi geliştirdi. Burada sunulan deney, kolaylıkla ölçülür bir yanıt oluşturan bir basit, ucuz bir alternatiftir. Kurulum en Ksenopus laboratuarlarında hazır bir tripod, web kamerası ve iç içe test tanklar, oluşur. Bu makalede önce ve optik sinir kesilmesinin ardından, iribaşların davranışını gösteren bir film içermektedir. Bir gözün işlevini test etmek için, biz de Repre dahilHer göz ardışık günlerde retina axotomy uygulanan hangi bir kurbağa yavrusu bir sentative sonuçları. Gelecek çalışmalar seferde birçok iribaşların vizyonunu test etmek için bu testte bir otomatik versiyonunu gelişebilir.

Önceki raporlar bu testte, Biz iribaşların gözünde ya görme işlevini test etmek için bu tahlil değişti Arkaplan Renk Tercihi Tahlili 3 premetamorphic Ksenopus tadpoles siyah / beyaz tankın beyaz tarafına yüzmeyi tercih ettiğini göstermiştir ve çağrıda Bir haftadan daha az. Bu şekilde, gözleri histolojik inceleme için toplanabilir. Bu tepki görsel işaretlerin kaynaklanmaktadır kadar burada gösterir. Film 1, sol ve sağ panellerinde tadpoles aynı hayvandır. ...

Xenopus tadpoles siyah / beyaz tankın beyaz tarafında yüzme tercih laevis&#39;den. Bu davranış, onların vizyonu tarafından yönlendirilir. Bu davranışa dayanarak, iribaşların görme fonksiyonunu test etmek için basit bir test sunuyoruz.

Test Görsel Fonksiyonu için Basit Bir Davranış Testi<em&gt; Xenopus laevis</em

Measurement of the visual function in the tadpoles of the frog, Xenopus laevis, allows screening for blindness in live animals. The optokinetic response ...

Bu prosedürün genel amacı, hayvanın test tankının siyahla kaplı olan yarısında geçirdiği süreyi kaydederek iribaşların görsel fonksiyonlarını test etmektir. Bu işlem, öncelikle iribaşların 45 ila 50. evrelere kadar büyütülmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım ise davranış analizi için yarısı siyah, yarısı beyaz bir tankın ve bir kameranın kurulmasıdır.Ardından, içinde bir iribaş bulunan ikinci bir tankı dış tankın içine yerleştirin. Her bir iribaş için, çevresindeki arka plan değiştirilirken görme güdümlü davranışı kaydedin. Son adım, iribaşlara retinal eksodomi uygulamak ve ardından davranış analizini tekrarlamaktır.Nihayetinde, bu basit ve düşük maliyetli deneyden elde edilen veriler, fototopik görme testleri altında iribaşların tankın bir tarafında yüzmeyi diğerine tercih ettiğini göstermek için kullanılır. Bu yöntemi, optik kinetik yanıt veya kuyruk çevirme deneyi gibi diğer tekniklere tercih etmenin temel avantajı; çoğu laboratuvarda kolayca bulunabilen ekipmanların kullanıldığı, ucuz ve basit bir yöntem olmasıdır. İribaşları hazırlamak için öncelikle döllenmiş Xenopus embriyoları temin edin; ardından mark's, modifiye ringers veya 10 kat seyreltilmiş MMR çözeltisini, 50 µg/mL konsantrasyonda olacak şekilde 60 mm'lik Petri kaplarına koyun.Blastula aşamasından nöral plak aşamasına kadar olan embriyoları Gentamisin antibiyotiğine yerleştirin. Petri kaplarında, 18 °C'de 2 ile 15. aşamalar arasında tutun. Embriyolar yaklaşık 27 ila 30. aşamalar civarında yeni bir kap aşamasına ulaştığında, bağırsak bakteriyel büyümesine izin vermek için onları antibiyotiksiz 0.1 XMMR'ye aktarın.İribaşlar yaklaşık 45. evre civarında beslenme aşamasına geldiğinde, onları 0.1 XMMR içeren 100 milimetrelik Petri kaplarına taşıyın. Ertesi gün, onlara ısırgan otu tozu süpernatantı ile besleme yapın. 100 milimetrelik Petri kabında bir hafta geçirdikten sonra, yarım galonluk bir tankı kurbağa suyu ile doldurun.Hayvanları tanka taşıyın ve ısırgan otu tozu süpernatant besleme programına devam edin, ancak suyu haftada sadece iki veya üç kez değiştirin. Hayvanlar yarım galonluk tanklarda olduğunda, ışıkların sabah saat 06:00'da açıldığı 12 saat aydınlık, 12 saat karanlık döngüsünde tutun. Testten önce, deneklerin bulunduğu yarım galonluk tankı, testten en az 12 saat önce gece boyunca beyaz bir yüzey üzerine yerleştirin. Davranış analizi, standart floresan aydınlatmalı, sessiz ve trafiğin az olduğu bir alanda gerçekleştirilmelidir.İç tank olarak kullanılacak tankın dış köşelerine iki adet iç içe geçen yarım galonluk test tankı hazırlayın. Bir Sharpie kalemi kullanarak, tabandan beş santimetre yüksekliğe su hattını işaretleyin. Ayrıca, iç tankın iç kısmındaki tüm çöküntüleri belirleyin.Irbaşlarının içlerinde oyalanmasını önlemek için buraları inert bir bileşik ile doldurun. Şimdi dikkatinizi ikinci dış tanka verin. Bir sonraki adım için siyah elektrik bandı ve beyaz peçete temin edin.Şurada gösterildiği gibi, tankın bir yarısının dış kısmını bantla, diğer yarısının dış kısmını ise pelür kağıdıyla kapatın. Tanklar hazırlandıktan sonra, bir inokülasyon döner tablası kurun ve iç içe geçmiş tankları üzerine yerleştirin. Kameranın tankların iç kısmını yukarıdan görüntüleyebilmesi için bir tripod ve web kamerası konumlandırın.Web kamerasını, video yakalama ve oynatma yazılımı yüklü bir bilgisayara bağlayın. Kamerayı açın ve yeni bir film kaydı yapmaya hazırlanın. Ardından, kameranın ve tankların üzerine hafif pamuklu bir kumaş örtün.İribaşlar için dışsal uyaranları azaltmak amacıyla, bir lüminansmetre kullanın ve örtü altındaki lüminansın metrekare başına 35 ila 50 mum arasında olduğunu kontrol edin. İç test tankını çıkararak davranış analizini başlatın. Tankı beş santimetre işaretine kadar kurbağa suyu ile doldurun.Bir hayvanı, yarım galonluk kabından bilgisayarın yanındaki iç test tankına aktarmak için bir ağ kullanın. Kayıtların tutulması amacıyla kayıt yazılımının açık olduğundan ve test alanını kaydettiğinden emin olun. Hayvanın adını, tarihi ve saati bir kağıda yazın.Kayıt için bunu kameranın altına yerleştirin. Bu işlem tamamlandıktan sonra, iki dakikaya bir zamanlayıcı ayarlayın. Ardından, dış tankı, siyah tarafı sağda kalacak şekilde döner tabla üzerinde konumlandırın.Şimdi test tankını dış tankın içine yerleştirin. Kayıt alanındaki perdeyi kapatın ve dış tankın yönelimini doğrulamak için bilgisayar ekranını kullanın. Videonun kaydedildiğinden emin olun ve zamanlayıcıyı başlatın.Zamanlayıcı öttüğünde, örtüyü konumunda tutun ve iç test tankını çıkarın. Ardından, siyah taraf sola gelecek şekilde dış tankı 180 derece döndürün. Test tankını dış tanka geri yerleştirin ve iki dakikalık zamanlayıcıyı başlatın.İç tankı tekrar çıkarın. Dış tankı 180 derece döndürün ve toplam 10 kez olmak üzere her iki dakikada bir iç tankı yerleştirin. İşlem tamamlandığında video kaydını durdurun.İribaşıyı yarım galonluk tankına geri koyun. Retinol eksonomisini gerçekleştirmek için bir mikroskop hazırlayın. 60 milimetrelik bir Petri kabını 0.1 XMMR içinde eritilmiş %1 agar ile doldurun ve katılaşmaya bırakın.Aros'tan iribaş boyutunda küçük dikdörtgen bir parça kesin. Devam etmeye hazır olduğunuzda, deney hayvanını alın ve %0,02 Trica içerisine yerleştirin. Hayvan, üç numara pens ile kuyruk sıkıştırmasına tepki vermediğinde işleme devam edin.Ardından hayvanı kaba aktarın. Petri kabını mikroskopa yerleştirerek işleme devam edin. Hayvanı bir taraftan forseps ile sabitlemeye hazır olun.Karşı tarafta, gözün dorsal bölgesinin arkasındaki deriyi 45 derecelik bir açıyla delmek için 25 gauge iğne kullanın, beş numara pensle delikten içeriye dikkatlice girin ve yanındaki vene dikkat ederek optik siniri kesin. Siniri kenara çekin ve cerrahi işlem sonrası pensi geri çekin. Hayvanı, 0.7 XMMR ve 50 µg/mL içeren 100 mm'lik bir Petri kabına yerleştirerek iyileşmeye bırakın.20 dakika boyunca Gentamycin uygulayın. Ardından, iribaşı kurbağa suyu içeren bir toparlanma tankına aktarın. Tankı, test hazırlığı için beyaz bir yüzeye yerleştirin.Hayvanın gece boyunca dinlenmesini sağlayın. Ertesi sabah, görsel fonksiyonu test etmek için davranışsal analizi uygulayın. Bu video, deney için temsili verileri göstermektedir.Solda cerrahi işlem öncesindeki hayvanlar, sağda ise her iki gözden gelen retinal aksonlar kesildikten sonraki aynı hayvanlar yer almaktadır. Bu durum, alt köşelerdeki şematik çizimlerle belirtilmiştir. Hayvanları siyah taraftan uzaklaştıracak veya beyaz tarafa çekecek herhangi bir madde eklenmediğini göstermek için su hareketlendirilmiştir.Ameliyat öncesi iribaşlar arka plan rengine 30 saniyeden kısa sürede tepki verirken, kör iribaşlar tankın etrafında amaçsızca yüzerler. Bu grafik, üç farklı koşul altındaki tek bir hayvanın beyaz ve siyah bölgelerde geçirdiği sürenin yüzdesini göstermektedir. İlk olarak, hayvan herhangi bir cerrahi işlemden önce analiz yöntemi kullanılarak gözlemlenmiştir.Sağ optik sinir kesildikten sonraki iki ardışık günde, davranış iki günlük test süresince gözlemlendi. Son olarak, her iki optik sinir de kesildikten sonra, analizle iki günlük daha gözlem yapıldı. En az bir optik sinir sağlam olduğunda, hayvan tankın beyaz tarafında daha fazla gün geçirdi.Bu videoyu izledikten sonra, çoğu kurbağa laboratuvarında bulunan basit reaktifler ve ekipmanlar kullanarak iribaşların görme yeteneğinin nasıl test edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Deneylerinizde başarılar dileriz.

a-simple-behavioral-assay-for-testing-visual-function-xenopus

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Edimsel koşullanma paradigması kullanarak rasgele nokta kinematograms ve bilgisayar tarafından oluşturulan omurgasızlar video oynatma kullanan bir kertenkele görsel duyarlılık testi.

Kertenkeleler Hareket Hız ve Yön Visual Hassasiyet Test

Görsel-Motor Yanıt hafif artışlarla ve azaltır yanıt larva zebrafish motor çıkışını ölçmek için geliştirdi. Biz de dahil olmak üzere başka bir görme testi optokinetik refleks tarafından test edildiğinde tamamen kör olduğu düşünülüyordu optokinetik yanıt (NRC) mutantlar, hiçbir zebrafish vizyon mutant inceledi.

Işık Parlaklıkları değişiklikler Zebra balığı, Duyarlılık Tedbir Davranış Testi

VisioTracker göz hareketlerinin kayıt dayalı larva ve küçük yetişkin balık görsel performans kantitatif analizi için otomatik bir sistemdir. Bu tür görsel sistem gelişimi ve işlevi, farmakoloji, nöral devre çalışmaları ve sensorimotor entegrasyon gibi alanlarda yüksek verimli araştırma sağlayarak, görsel uyarana özellikleri ve gerçek zamanlı analiz üzerinde tam denetime sahiptir.

VisioTracker, Okülomotor Analizi Yenilikçi Otomatik Yaklaşım

Bu videoda zebra balıklarında optokinetik tepki testi açıklanmaktadır. Video, görsel hareketli uyarana dayalı olarak refleksif göz hareketlerini ölçer ve zebra balıklarında görme keskinliğini belirler.

Optokinetik Yanıt Testi: Zebra Balıklarında Görme Keskinliğini Ölçmek İçin Bir Yöntem

Video, zebra balığı larvalarının kaçınma ve timotaksis testini anlatıyor. Video, zebra balığı larvalarının görsel caydırıcı uyarana yanıt olarak davranışlarını inceler.

Zebra Balığı Kaçınma ve Timotaksis Deneyi: Caydırıcı Görsel Uyarana Yanıt Olarak Larva Davranışını İncelemek İçin Yüksek Verimli Bir Yöntem

Zebra balığı birçok araştırma alanları için değerli bir araç olmuştur. Burada görsel bir yanıt ortaya çıkarmak ve yetişkin Zebrafish fonksiyonel görme keskinliği hesaplamak için bir yöntem ortaya koymaktadır.

Zebra balığı görme keskinliğinin bir nicel ölçü olarak Optokinetik Tepki

Zebra balığı larvalarının mikromanipülasyon ve elektroretinografi tekniklerini kullanarak elektroretinografik (ERG) analizi için bir yöntem sunuyoruz. Bu, zebra balığı larvalarının in vivo görsel işlevini test etmek için basit ve anlaşılır bir yöntemdir.

Zebra balığı Larva Görsel Tepki Elektroetinogram Analizi

Xenopus kurbağa yavrularını içinde vivo sinir sisteminin işlevi araştırmak için benzersiz bir platform sunuyoruz. Biz metodolojileri yaşayan koku bilgi işleme değerlendirmek için tarif Xenopus larva normal yetiştirme koşullarında veya yaralanma sonra.

Fonksiyonel yaşam Xenopus kurbağa yavrularını koku yollar değerlendirilmesi

Fare vizyonu incelemek için, biz bir giderek test yaptı. Fareler tavan üzerinde bir monitör ile büyük bir kare arenada yerleştirildi. Giderek yükselen görsel uyarıcı, farelerde sürekli olarak donma veya uçuş reaksiyonlarını uyarmaktadır.

Fare vizyonu değerlendirmek için görsel stimuli Looming kullanma

Bu protokol, bir günlük Xenopus laevis embriyolarının göz tomurcuklarına bir DNA/DOTAP karışımının nasıl mikroenjekte edilebildiğini ve tek tek yeşil floresan proteinin (GFP) tek tek görüntülenme ve yeniden nasıl yeniden yapılandırılabildiğini göstermeyi amaçlamaktadır. bozulmamış, yaşayan Xenopus kurbağa yavruları.

Xenopus laevis Embriyolarında Göz tomurcuklarına DNA'nın mikroenjeksiyonu ve GFP'nin Sağlam Optik Aksonal Arbors'u İfade Etme Görüntülemesi, Yaşayan Xenopus Kurbağaları

Diyabet sonucu hem gözlerde hem de beyinde nöral dejenerasyon kemirgenler üzerinde yapılan davranışsal testlerle gözlemlenebilir. Mekansal bilişin bir ölçüsü olan Y labirenti ve görsel fonksiyonun bir ölçüsü olan optomotor yanıtı, hem potansiyel teşhisler hem de tedaviler hakkında fikir sağlar.

Diyabetik Sıçanlarda Y-Labirenti Yoluyla Optomotor Yanıtı ve Bilişsel İşlev Yoluyla Görsel İşlevin Davranışsal Değerlendirmesi

Öğrenin Xenopus laevis kurbaga yavrularının görsel fonksiyonunu basit davranış testiyle değerlendirmeyi. Siyah/beyaz tankta yüzme tercihleri ölçülerek görsel yetenekler incelenir.

Test Görsel Fonksiyonu için Basit Bir Davranış Testi

Daha fazla video keşfet