Name: Fenotiplendirme Fare Solunum Fonksiyon İn Vivo Akciğer Yayıcı Kapasite (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-06T10:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Öğrenin farelerde akciğer yayıcı kapasitesini ölçme yöntemini. Gaz kromatografisi kullanarak solunum fonksiyonunu değerlendirin ve çeşitli akciğer patolojilerindeki değişiklikleri inceleyin. Bu teknik, insan ölçümleriyle doğrudan karşılaştırma yaparak klinik araştırmalara katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH HL-10342 tarafından desteklenmiştir.

NOT: Tüm hayvan protokolleri Johns Hopkins Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi. 1. Hayvan hazırlanması <ol><li> Aşağıdaki adımda 2.3 belirtildiği gibi ketamin ve xylazin ile anestezi yoluyla, DFCO ölçümü için 6 C57BL / 6 fareler kontrol hazırlayın. </li><li> Kontroller için olanla aynı yöntem kullanılarak, Tablo 1 &#39;de gösterilen farklı akciğer patolojisi olan diğer tüm fareler hazırlayın. Bu modellerin her biri kurmak için gerekli belirli detaylar ilgili referanslar bulunmaktadır. Kontrol fareleri ve diğer patolojik kohortlarda bu çağın tüm 6-12 haftadır. </li></ol> Karbon monoksit için Difüzyon Faktörü 2. ölçümü (DFCO) <ol><li> Azot, oksijen, neon, ve karbon monoksit için zirveleri ölçmek için makine ile birlikte verilen gaz kromatografisi modülünü kurmak. Bu uygulama için sadece neon ve CO veri. NOT: Bu cihaz bir moleküler s kullanırBir 12.00 mikron film 320.00 mikron kimliği ve 10 metre uzunluğunda taşıyıcı gaz olarak helyum ile ieve sütunu. kromatografi kolonu 0.8 ml bir hacme sahiptir, fakat örnek ile bağlantı boruları yeterli temizleme sağlamak için 2 ml kullanıldı. </li><li> Her deney gününde başlangıcında, küçük farelerden gelen numuneler ölçümleri yapmadan önce, yaklaşık olarak% 0.5 Ne,% 0.5 CO ihtiva eden bir gaz karışımı, torbadan doğrudan 2 ml lik bir numuneyi almak ve hava denge ve kalibre etmek için bu örneği kullanmak Gaz kromatografisi. </li><li> Ketamin (90 mg / kg) ve ksilazin (15 mg / kg) ile fareler anestezi ve refleks hareketinin olmaması ile anestezi teyit etmektedir. Kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. (Çok genç farelerde erişkinlerde 18 G veya 20 G) bir taslaktır iğne kanül ile fareler Tracheostomize. NOT: DFCO anestezi sonrası en az 10 dakika tamamlandı ve herhangi bir mekanik havalandırma veya diğer prosedürler öncesinde olduğu. </li><li> 6 haftalıkken daha büyük farelerde, bir 3 ml&#39;lik bir enjektör t kullanımıo gaz karışımı çantasından gaz 0,8 ml çekilme. Trakeal kanül için şırınga bağlayın ve hızlı bir şekilde akciğer şişirmek. Bir metronom kullanarak, 9 sn saymak, ve sonra hızlı bir şekilde 0.8 ml (üfledi hava) çekilme. </li><li> Bu geri 0.8 mi oda havası ile 2 ml kadar nefes vermeyle oluşan seyreltin, en az 15 saniye boyunca dinlenmeye bırakın. Sonra analiz için gaz kromatografisinde içine bütün örnek enjekte. </li><li> Bu ilk DFCO örneği analiz birlikte, gaz karışımı, torba, ikinci bir 0.8 ml fare akciğer şişirmek ve ilk örneğe benzer bu örnek işlem. İki DFCO ölçümleri ortalama. Not: 0.8 ml hacmi çok küçük farelerin akciğerlerinde ölçümler yapmak için çok büyük olduğu için 2 haftalık olarak genç farelerde ölçümleri için, 0.4 ml bir hacim kullanılır. Bu 6 hafta daha yaşlı fareler için 0.8 ml hacmi kullanmak daha iyidir, ve 0.4 ml hacim bazı fareler için gerekli ise, bu çalışılan kohort tüm fareler için sürekli kullanılması gerektiğini söyledi. </li><li> DFCO hesaplayın(CO 9 / CO c) / (Ne 9 / Ne c), c ve 9 indisler enjekte kalibrasyon gazları konsantrasyonları sırasıyla, 9 saniye nefes tutma süresinden sonra kaldırıldı gazlara bakın - 1 olarak. </li><li> Analiz ve tek yönlü ANOVA ile farklılıkları karşılaştırmak ve tüm kohort farelerde çoklu karşılaştırmalar için Tukey düzeltme ile anlamlılık düzeyini değerlendirmek. P &lt;0.05 anlamlı olarak değerini düşünün. NOT: Burada kullanılan farelerin tamamı burada rapor değil akciğer ventilasyonu, mekanik, akciğer lavaj veya histoloji birkaç sonraki ölçümleri içeren deneysel çalışmaların bir parçası idi. Yöntem, kontrol fareleri, yukarıda yapıldığı gibi her deneysel modellerde aynı olduğu için buna ek olarak, çeşitli patolojik modellerden sadece sonuçlar sunulmaktadır. Bu modellerde daha fazla bilgi ek tabloda yer almaktadır. </li><li> Derin anesthe tarafından hayvanları Euthanizetic aşırı doz servikal dislokasyon veya başları kesilerek izledi. Gerekli yerlerde, daha fazla biyolojik veya histolojik işleme ve analiz için ölü farelerin akciğer hücreleri ve / veya dokuları kaldırın. </li></ol>

<ol><li>Ogilvie, C. M., Forster, R. E., Blakemore, W. S., Morton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+breath+holding+technique+for+the+clinical+measurement+of+the+diffusing+capacity+of+the+lung+for+carbon+monoxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A standardized breath holding technique for the clinical measurement of the diffusing capacity of the lung for carbon monoxide.</a> J Clin Invest. 36 (1 Pt 1), 1-17 (1957).</li>
<li>Miller, A., Warshaw, R., Nezamis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diffusing+capacity+and+forced+vital+capacity+in+5%2C003+asbestos-exposed+workers%3A+Relationships+to+interstitial+fibrosis+%28ILO+profusion+score%29+and+pleural+thickening%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ind+Med%22%5BJournal%5D)">Diffusing capacity and forced vital capacity in 5,003 asbestos-exposed workers: Relationships to interstitial fibrosis (ILO profusion score) and pleural thickening.</a> Am J Ind Med. 56 (12), 1383-1393 (2013).</li>
<li>Enelow, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+consequences+of+alveolar+cell+recognition+by+CD8%28%2B%29+T+lymphocytes+in+experimental+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Structural and functional consequences of alveolar cell recognition by CD8(+) T lymphocytes in experimental lung disease.</a> J Clin Invest. 102 (9), 1653-1661 (1998).</li>
<li>Hartsfield, C. L., Lipke, D., Lai, Y. L., Cohen, D. A., Gillespie, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+mechanical+and+immunologic+dysfunction+in+a+murine+model+of+AIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Pulmonary mechanical and immunologic dysfunction in a murine model of AIDS.</a> Am J Physiol. 272 (4 Pt 1), 699-706 (1997).</li>
<li>Wegner, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+adhesion+molecule-1+contributes+to+pulmonary+oxygen+toxicity+in+mice%3A+role+of+leukocytes+revised%5BTitle%5D)+AND+%22Lung%22%5BJournal%5D)">Intercellular adhesion molecule-1 contributes to pulmonary oxygen toxicity in mice: role of leukocytes revised.</a> Lung. 170 (5), 267-279 (1992).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Sabo, J. P., Kimmel, E. C., Diamond, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+Clara+cell+toxin%2C+4-ipomeanol%2C+on+pulmonary+function+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of the Clara cell toxin, 4-ipomeanol, on pulmonary function in rats.</a> J Appl Physiol. 54 (2), 337-344 (1983).</li>
<li>Depledge, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiration+and+lung+function+in+the+mouse%2C+Mus+musculus+%28with+a+note+on+mass+exponents+and+respiratory+variables%29%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol%22%5BJournal%5D)">Respiration and lung function in the mouse, Mus musculus (with a note on mass exponents and respiratory variables).</a> Respir Physiol. 60 (1), 83-94 (1985).</li>
<li>Depledge, M. H., Collis, C. H., Barrett, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+measuring+carbon+monoxide+uptake+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Radiat+Oncol+Biol+Phys%22%5BJournal%5D)">A technique for measuring carbon monoxide uptake in mice.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 7 (4), 485-489 (1981).</li>
<li>Fallica, J., Das, S., Horton, M. R., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Carbon+Monoxide+Diffusing+Capacity+in+the+Mouse+Lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Application of Carbon Monoxide Diffusing Capacity in the Mouse Lung.</a> J Appl Physiol. 110 (5), 1455-1459 (2011).</li>
<li>Chaudhary, N., Datta, K., Askin, F. B., Staab, J. F., Marr, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+regulates+epithelial+cell+response+to+Aspergillus+and+resultant+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator regulates epithelial cell response to Aspergillus and resultant pulmonary inflammation.</a> Am J Respir Crit Care Med. 185 (3), 301-310 (2012).</li>
<li>Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodology+for+the+measurement+of+mucociliary+function+in+the+mouse+by+scintigraphy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy.</a> J Appl Physiol. 90 (3), 1111-1117 (2001).</li>
<li>Yildirim, A. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palifermin+induces+alveolar+maintenance+programs+in+emphysematous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Palifermin induces alveolar maintenance programs in emphysematous mice.</a> Am J Respir Crit Care Med. 181 (7), 705-717 (2010).</li>
<li>Collins, S. L., Chan-Li, Y., Hallowell, R. W., Powell, J. D., Horton, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vaccination+as+a+novel+treatment+for+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vaccination as a novel treatment for lung fibrosis.</a> PLoS One. 7 (2), e31299(2012).</li>
<li>Alessio, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+Tregs+resolve+experimental+lung+injury+in+mice+and+are+present+in+humans+with+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury.</a> J Clin Invest. 119 (10), 2898-2913 (2009).</li>
<li>Martinez, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+course+of+patients+with+idiopathic+pulmonary+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">The clinical course of patients with idiopathic pulmonary fibrosis.</a> Ann Intern Med. 142 (12 Pt 1), 963-967 (2005).</li>
<li>Zhou, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correction+of+lethal+intestinal+defect+in+a+mouse+model+of+cystic+fibrosis+by+human+CFTR%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Correction of lethal intestinal defect in a mouse model of cystic fibrosis by human CFTR.</a> Science. 266 (5191), 1705-1708 (1994).</li>
</ol>

Ilgi ve hiçbir şey yok çatışmalar ifşa.

Bu çalışmada, biz fare akciğer gaz alışverişi yeteneğini ölçmek için yeni bir metrik tanımladı. Bu metrik difüzyon kapasitesi, yani, akciğer birincil işlevi ölçen bir genel klinik ölçüm, gaz alışverişi yeteneği benzerdir. difüzyon kapasitesi kolayca ve hızlı bir şekilde fareler ve insanlar hem de yapılabilir ancak akciğer fonksiyonel bir ölçüdür. Farelerde akciğer hastalığı tespiti için önemli bir hedef kontrol ve deney kohort arasında akciğer fonksiyon değişiklikleri ölçmek için. Bu amaca ulaşmak için, tanımlanmış ve a...

Fare hemen akciğer hastalıklarının çeşitli modellemek için kullanılan birincil bir hayvandır. Bu tür patolojiler altında yatan mekanizmaları incelemek için, fenotipik yöntemler bunu patolojik değişiklikler ölçmek ki ihtiyaç vardır. Havalandırma mekaniği ölçülür birçok fare çalışma olmasına rağmen, bu ölçümlerin genelde normal insanlarda yapılan akciğer fonksiyonunun standart değerlendirmelere ilgisiz. Bu insan hastalığı için fare modellerinde sonuçların çeviri kolaylaştırabilir fareler ve insan deneklerde eşdeğer ölçümleri gerçekleştirmek için yeteneği beri, talihsiz bir durumdur. Insan deneklerde en yaygın ve en kolay yapılan ölçümlerin bir karbon monoksit (DLCO) 1,2 difüzyon kapasitesi olduğunu, ancak bu ölçüm sadece nadiren fare modellerinde yapılmıştır. Prosedürler genellikle hantal veya req olabilir çünkü 3-7 bildirilmiştir bu çalışmalarda, kısmen, hiçbir izlem çalışmaları olmuşturkarmaşık bir ekipmana uire. Başka bir yaklaşım bilinçli farelerde CO difüzyon ölçümü mümkün olmanın avantajına sahip bir sabit devlet sisteminde, bir CO, yeniden soluk yöntemi kullanmaktır. Ancak bu yöntem çok hantal ve sonuçları farenin havalandırma düzeyi yanı sıra O 2 ve CO 2 konsantrasyonları 8,9 ile değişebilir. Bu zorluklar onun çeşitli avantajlara rağmen, farelerde akciğer patolojileri tespit etmek difüzyon kapasitesi rutin kullanımını engellemiştir gibi görünüyor. Farelerde difüzyon kapasitesi ölçümü ile ilgili sorunları aşmak için, basit araçlarla ayrıntıları farelerde ölçmek için son 10 bildirilmiştir. prosedür hızlı bir şekilde tüm ilham gaza eşit bir hacim örnekleyerek kirlenmemiş alveol gaz örnekleme zor sorunu ortadan kaldırır. Bir çok tekrarlanabilir ölçüm Bu prosedür sonuçları, pa bir dizi duyarlı karbon monoksit (DFCO), difüzyon faktörü olarak adlandırılanAkciğer fenotipinde thologic değişir. (CO 9 / CO c) / (Ne 9 / Ne c), c ve 9 indisler enjekte kalibrasyon gazların yoğunlaşması ve 9 sn nefes tutma süresinden sonra kaldırıldı gazlara bakın - DFCO böylece 1 olarak hesaplanır sırasıyla. DFCO 1 tüm CO tam alımını yansıtan ve 0 CO hiçbir alımını yansıtan, 0 ve 1 arasında değişen bir boyutsuz değişken vardır. Bu sunumda bu difüzyon kapasitesi ölçümü yapmak için nasıl göstermek ve neredeyse tüm amfizem, fibrozis, akut akciğer hasarı, ve viral ve mantar enfeksiyonları dahil olmak üzere mevcut fare akciğer hastalığı modellerinin değişiklikleri belgelemek için nasıl kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Gaz Kromatografı</td><td>Inficon</td><td>Micro GC Model 3000A</td><td>Agilent karşılaştırılabilir bir model yapar</td></tr><tr><td>18 G Luer saplama iğnesi</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>Diğer birkaç olası satıcı</td></tr><tr><td>3 ml plastik şırınga</td><td>Becton Dickenson</td><td></td><td>Diğer birkaç olası satıcı</td></tr><tr><td>Polipropilen gaz numune torbaları</td><td>SKC</td><td>1 veya 2 L kapasite iyi çalışıyor</td><td>Diğer gaz geçirmez çantalar iyi çalışacaktır</td></tr><tr><td>Gaz tankı, %0,3 Ne, %0,3 CO, denge havası; (boyut ME)</td><td>Airgas, Inc</td><td>Z04 NI785ME3012</td> Bu, fosfat tamponlu salin içinde seyreltilmiş insanlarda 25 TCID50 / influenza virüsü A / PR8 faresinde <td>DLCO için kullanılan standart</td></tr><tr><td>karışımdır.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Domuz pankreas elastazı</td><td>Elastin Ürünleri, Owensville, MO</td><td></td><td>5.4 U</td></tr><tr><td>Bleomisin</td><td>APP İlaçları, Schaumburg, IL</td><td></td><td>0.25 U</td></tr><tr><td>Escherichia coli LPS</td><td>Sigma L2880</td><td></td><td>3 & mu; g/g vücut ağırlığı; O55:B5</td></tr><tr><td>Aspergillus fumigatus (izolat Af293) conidia, patates dekstroz agar üzerinde yetiştirilen olgun kolonilerden toplanmıştır.</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fenotiplendirme fare solunum fonksiyon İn vivo akciğer yayıcı kapasite

Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity

Fare hemen akciğer hastalıklarının çeşitli modellemek için kullanılan birincil bir hayvandır. Bu tür patolojiler altında yatan mekanizmaları incelemek için, fenotipik yöntemler patolojik değişiklikler ölçmek ki ihtiyaç vardır. Bundan başka, fare modelleri ile translasyon uygunluğu sağlamak için, bu ölçümlerin kolaylıkla hem insanlarda hem farelerde yapılabilir testler olmalıdır. Ne yazık ki, bu literatürde akciğer fonksiyonunun birkaç fenotipik ölçümleri insanlara doğrudan uygulama var. Tek istisna rutin insanlarda yapılan bir ölçüm olan karbon monoksit için difüzyon kapasitesi. Bu yazıda, hızlı ve basit farelerde bu difüzyon kapasitesini ölçmek için bir araç açıklar. Prosedür 1 dk gazı analizi zaman izlediği bir anestezi fare izleyici gazları ile kısa akciğer enflasyon, içerir. Bu amfizem, fibroz, akut akciğer yaralanması ve influenza da dahil olmak üzere pek çok akciğer hastalıkları, tespit etmek için bu yöntem yeteneğini test ettikmantar enfeksiyonları akciğer, yanı sıra genç yavrular izleme akciğer olgunlaşmasının. Sonuçlar önemli tüm akciğer patolojileri düşüşler yanı sıra, akciğer olgunlaşması ile difüzyon kapasitesinde bir artış göstermektedir. Akciğer difüzyon kapasitesi Bu ölçüm, böylece mevcut patolojik akciğer modellerinin çoğu ile fenotipik yapısal değişiklikleri tespit yeteneği ile geniş bir uygulama olan solunum fonksiyon testi sağlar.

Şekil 1, var Aspergillus ve influenza enfeksiyonu hem önemli düşüşler, hem de fibrotik amfizematöz önemli düşüş vardı ve akut grupları A, B, C, D, E ve F yetişkin farelerden DFCO ölçümlerini göstermektedir Akciğer hasarı modelleri. Şekil 2 2-6 hafta fareler yaş olarak zamanla DFCO'da G Grubu gelişimsel değişiklikleri gösterir. Bu sefer boyunca akciğer gelişimi ile hafif fakat anlamlı bir artış vardı. küçük bir enflasyon hacmi kullanılarak etkisi de 6 haftalık bir zaman noktasında oldukç...

Farelerde akciğer yayılma kapasitesini hızlı ve basit bir şekilde ölçmenin bir yolunu tarif ediyoruz ve bunun birden fazla yaygın akciğer patolojisindeki fenotip değişikliklerine yeterince duyarlı olduğunu gösteriyoruz. Bu nedenle bu metrik, fare modellerine doğrudan öteleme ilgisi getirir, çünkü yayılma kapasitesi insanlarda da kolayca ölçülür.

Fenotiplendirme Fare Solunum Fonksiyon İn Vivo Akciğer Yayıcı Kapasite

The mouse is now the primary animal used to model a variety of lung diseases. To study the mechanisms that underlie such pathologies, phenotypic methods ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, kalibre edilmiş bir gaz kromatografı kullanarak bir farenin akciğerlerinin yayılma kapasitesinin nasıl ölçüleceğini öğrenmektir. Bu, anestezi uygulanmış bir farenin akciğerlerinin neon ve karbon monoksit içeren gazla şişirilmesi, gazın akciğerlerde dokuz saniye tutulması ve gazın toplanmasıyla gerçekleştirilir. Akciğerlerden çekilen gaz daha sonra iki mililitreye seyreltilir ve gaz kromatografına enjekte edilir.Akciğerdeki neon ve karbon monoksitin diferansiyel alımı, yayılma kapasitesini hesaplamak için kullanılır. Bu ölçüm, geniş bir akciğer hastalığı modelleri yelpazesinde akciğer fonksiyon kaybını değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin, farede solunum fonksiyonunu ölçmek için mevcut diğer tüm yöntemlere göre temel avantajı, bunun insanlarda benzer ölçümlerle doğrudan karşılaştırılabilen çok basit, tekrarlanabilir bir ölçüm olmasıdır.Bu yöntem, çeşitli akciğer patolojileri ile ortaya çıkan akciğer yapısındaki değişiklikleri takip etmek için kullanılabilir. Bu protokol, nitrojen, oksijen, neon ve karbon monoksit tepe noktalarını ölçmek için makineyle birlikte verilen gaz kromatograf modülünün kurulmasıyla başlar. Bu uygulama için sadece neon ve karbon monoksit verilerine ihtiyaç vardır.Cihaz, taşıyıcı gaz olarak helyum içeren bir moleküler elek sütunu kullanır. Bu özel gaz kromatografı 0.8 mililitrelik bir kolona sahiptir ve başlamadan önce bu kolonun yeterli şekilde temizlenmesini sağlamak için iki mililitrelik bir numune kullanılır. Bir dizi ölçüm, makineyi her zaman doğrudan gaz numune torbasından iki mililitre gaz kullanarak kalibre eder.Ortaya çıkan ilk tepe neon, daha sonra bu prosedür için ölçmediğimiz oksijen ve nitrojendir. Son olarak, karbon monoksit zirvesi, gaz kromatografının zamanı olarak görünür. Tüm bu zirveleri ölçmek bir dakikadan biraz daha azdır.Başlamak için, fareleri ketamin ve ksilazin ile uyuşturun. Bir ayak parmağı tutamına yanıt olarak refleks hareketinin olmaması ile anesteziyi onaylayın. Gözleri korumak için daha sonra veteriner merhemi sürün, ardından fareleri bir studen kanülü ile trakeostomi yapın.Yetişkinler için 18 gauge kanül veya çok genç fareler için 20 gauge kanül kullanın. Ardından, metronomu her saniye sesli tıklamalarla başlatın. Altı haftadan daha eski fareler için, gaz karışım torbasından 0,8 mililitre gaz çekmek için üç mililitrelik bir şırınga kullanın.Fare dört haftadan küçükse, 0,4 mililitre gaz kullanın, ardından şırıngayı trakeal kanüle bağlayın ve akciğerleri hızla şişirin. Metronom tıklamalarıyla senkronize olarak zihinsel olarak birden 10'a kadar saymaya başlayın. Sayım 10'a ulaştığında, 0,8 mililitrelik hacmi hızla geri çekin.Solunan bu gazı en az 15 saniye oda, hava ve ağırlık ekleyerek iki mililitreye seyreltin. Akciğerleri mümkün olduğunca çabuk şişirmek ve söndürmek çok önemlidir. Hızlı bir şişirme çok kolaydır, ancak 0.8 mls'yi hızlı bir şekilde hassas bir şekilde geri çekmek biraz pratik gerektirir, ardından tüm numuneyi gaz kromatografına enjekte edin.Analiz için, hayvana ve hayvandan gaz kromatografına aktarılırken numunenin kontaminasyonunu önlemek önemlidir. Bu, GC numuneyi ölçerken işareti bir parmakla kapatarak dikkatli bir şekilde yapılabilir. Fare akciğerini torbadan başka bir 0,8 mililitre gaz karışımı ile şişirin ve ardından bu numuneyi ilkiyle aynı şekilde işleyin.İki ölçümden elde edilen ortalama değerleri kullanarak DFCO'yu hesaplayın. C alt simgesi, kalibrasyon gazlarını ifade eder ve dokuz alt simge, hayvandan toplanan numuneleri ifade eder. Dokuz saniyelik nefesten sonra tutun.C 57 siyah altı fareden alınan nominal kontrol DFCO değeri yaklaşık 0.77'dir. PR sekiz influenza modeli kullanılarak yapılan bir çalışmada, elastaz kurulumundan 21 gün sonra amfizem modelinde altıncı ve sekizinci günlerde ilerleyici bir fonksiyon kaybı görülmüştür. DFCO orta derecede azaldı, ancak Blio Mycin kurulumunun neden olduğu fibroz modelinde çok daha büyük değişiklikler oldu.Bleomisinin neden olduğu fibrotik yol, patolojik modellerin herhangi birinde gözlenen DFCO'daki en büyük değişikliğe neden oldu. Bu önemlidir, çünkü yayılma kapasitesi aynı zamanda insanlarda fibrozun güvenilir bir belirtecidir. CFTR geni, kistik fibrozda çok önemli bir rol oynar ve bu genin eksik olduğu fareler üzerinde yapılan bir çalışmada, DFCO'da önemli bir azalma olmuştur.DFCO, bu nakavt farelerde mantar enfeksiyonu ile daha da azaldı. Akciğer hasarı için yaygın olarak kullanılan bir model LPS'den kaynaklanır. LPS'ye maruz kalan farelerde, DFCO ölçümleri ile değerlendirildiği gibi bir günden dördüncü güne kadar ilerleyen zamana bağlı akciğer fonksiyon kaybı olmuştur, DFCO ölçümü iki haftalık kadar genç farelerde başarılı bir şekilde yapılabilir.Akciğerin daha küçük boyutu, 0,4 mililitrelik daha küçük bir şişirme hacmi gerektirir. Bu daha küçük hacimle ölçülen DFCO, bir kez ustalaştıktan sonra akciğer olgunlaştıkça beklenen artışı gösterebilir. Bu teknik, diğer herhangi bir solunum fonksiyon ölçümü veya değerlendirmesi yapmadan önce fare başına sadece birkaç dakika içinde yapılabilir.Bu prosedürü denerken, şişirme ve indirme adımının hızlı bir şekilde gerçekleştirildiğinden emin olmak ve kontaminasyonun önlenmesi için numuneyi aktarırken dikkatli olmak önemlidir.

phenotyping-mouse-pulmonary-function-vivo-with-lung-diffusing

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

SCIREQ Inc, Montreal, Qc; İşbu Protokol solunum sistemi mekaniği ölçümleri yanı sıra zorla salınım tekniği kullanarak farelerde inhale metakoline hava yolu duyarlılığı değerlendirilmesi (flexiVent yürütmek için gerekli prosedürleri ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sağlar , Kanada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Burada, farelerde akciğer basınç-hacim eğrisini basit ve güvenilir bir şekilde ölçmek için bir protokol sunuyoruz ve bu, iki yaygın akciğer patolojisi olan pulmoner fibroz ve amfizemde fenotipik parankimal değişiklikleri tespit etmek için yeterince duyarlı olduğunu gösteriyor. Bu metrik, gelişen patoloji ile akciğerin yapısal değişikliklerini ölçmek için bir araç sağlar.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Obezite sıklığı artıyor ve kronik akciğer hastalıkları riskini artırır. Temel mekanizmaları ve Önleme stratejileri, iyi tanımlanmış hayvan kurmak için modelleri ihtiyaç vardır. Burada, üç yöntem (glikoz tolerans testi, vücut pletismografisi ve akciğer fiksasyon) obezite etkisi farelerde akciğer sonuçlar üzerine eğitim sağlamak.

Mayi glikoz tolerans testi, akciğer işlev ölçümü ve akciğer fiksasyonu obezite ve pulmoner sonuçlar üzerine Engelli metabolizma etkisini incelemek için

Çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde solunum işlevin sonucunu önerilen yordamları ayrıntılı bir açıklama sağlamak için mevcut makale hedefidir.

Solunum fonksiyon çift-odası pletismografisi tarafından bilinçli farelerde değerlendirilmesi

Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Yumurtalık kanseri Ortotopik hayvan modellerinde daha iyi insan hastalığı çoğaltmak ve bu nedenle kanser progresyonu ve tedaviye tümör yanıt anlayışımızı geliştirmek. Bir fare modelinde lusiferaz ifade over tümör hücrelerinin bir İntrabursal enjeksiyon alır. Tedavi ağızdan sonda ile yönetilmektedir. Tümör büyüme...

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Aşağıdaki protokol tecrit, havalandırma ve sağ ventrikül afterload kan akımı, hava akımı, hava yolu değişiklikleri ve vasküler değişiklikler etkilerini ölçmek için sabit veya pulsatil pulmoner vasküler basınç-akım ilişkileri ölçmek için fare akciğerler instrumenting sürecini özetliyor.

İzole, Havalandırmalı ve Enstrumanlı Fare Akciğer Karakterizasyonu Pulsatif Akış ile perfüze

Öğrenin farelerde akciğer yayıcı kapasitesini ölçme yöntemini. Gaz kromatografisi kullanarak solunum fonksiyonunu değerlendirin ve çeşitli akciğer patolojilerindeki değişiklikleri inceleyin. Bu teknik, insan ölçümleriyle doğrudan karşılaştırma yaparak klinik araştırmalara katkı sağlar.

Fenotiplendirme Fare Solunum Fonksiyon İn Vivo Akciğer Yayıcı Kapasite

Daha fazla video keşfet