Name: Hazırlama ve Analizler İn Vitro Üç Boyutlu Meme Kanseri Suretler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Keşfedin üç boyutlu meme kanseri suretleri hazırlama ve histolojik kesitlerde hücre büyümesi ölçümü. Perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanarak daha fizyolojik koşullarda hücre davranışlarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Birmingham Metabolik Kemik Hastalıkları Merkezi'ndeki Alabama Üniversitesi, vekillerin histolojik işlemlerini ve kesitlerini gerçekleştirdi. Southern Research (Birmingham, AL), biyoreaktör sisteminin üretimi için destek sağladı. Finansman, Amerika Birleşik Devletleri Savunma Bakanlığı Meme Kanseri Araştırma Programı (BC121367) tarafından sağlandı.

<ol><li>Hakanson, M., Textor, M., Charnley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+3D+environments+to+elucidate+the+effect+of+environmental+parameters+on+drug+response+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol+%28Camb%29%22%5BJournal%5D)">Engineered 3D environments to elucidate the effect of environmental parameters on drug response in cancer.</a> Integr Biol (Camb). 3 (1), 31-38 (2011).</li>
<li>Horning, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3-D+tumor+model+for+in+vitro+evaluation+of+anticancer+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pharm%22%5BJournal%5D)">3-D tumor model for in vitro evaluation of anticancer drugs.</a> Mol Pharm. 5 (5), 849-862 (2008).</li>
<li>Dhiman, H. K., Ray, A. R., Panda, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+chitosan+scaffold-based+MCF-7+cell+culture+for+the+determination+of+the+cytotoxicity+of+tamoxifen%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional chitosan scaffold-based MCF-7 cell culture for the determination of the cytotoxicity of tamoxifen.</a> Biomaterials. 26 (9), 979-986 (2005).</li>
<li>Place, A. E., Jin Huh, S., Polyak, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironment+in+breast+cancer+progression%3A+biology+and+implications+for+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The microenvironment in breast cancer progression: biology and implications for treatment.</a> Breast Cancer Res. 13 (6), 227(2011).</li>
<li>Mao, Y., Keller, E. T., Garfield, D. H., Shen, K., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromal+cells+in+tumor+microenvironment+and+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Stromal cells in tumor microenvironment and breast cancer.</a> Cancer Metastasis Rev. 32 (1-2), 303-315 (2013).</li>
<li>Paulsson, J., Micke, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+cancer-associated+fibroblasts+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer.</a> Semin Cancer Biol. 25, 61-68 (2014).</li>
<li>Roskelley, C. D., Desprez, P. Y., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix-dependent+tissue-specific+gene+expression+in+mammary+epithelial+cells+requires+both+physical+and+biochemical+signal+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 12378-12382 (1994).</li>
<li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2008).</li>
<li>Ivascu, A., Kubbies, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+generation+of+single-tumor+spheroids+for+high-throughput+cell+function+and+toxicity+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">Rapid generation of single-tumor spheroids for high-throughput cell function and toxicity analysis.</a> J Biomol Screen. 11 (8), 922-932 (2006).</li>
<li>Lovitt, C. J., Shelper, T. B., Avery, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+cell+culture+techniques+for+cancer+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Advanced cell culture techniques for cancer drug discovery.</a> Biology (Basel). 3 (2), 345-367 (2014).</li>
<li>Bergamaschi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signature+identifies+breast+cancer+subgroups+with+different+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signature identifies breast cancer subgroups with different clinical outcome.</a> J Pathol. 214 (3), 357-367 (2008).</li>
<li>Oskarsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+components+in+breast+cancer+progression+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Breast%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix components in breast cancer progression and metastasis.</a> The Breast. 22, S66-S72 (2013).</li>
<li>Kelley, L. C., Lohmer, L. L., Hagedorn, E. J., Sherwood, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Traversing+the+basement+membrane+in+vivo%3A+A+diversity+of+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22JBC%22%5BJournal%5D)">Traversing the basement membrane in vivo: A diversity of strategies.</a> JBC. 204 (3), 291-301 (2014).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+fibroblasts+modulate+epithelial+cell+proliferation+in+three-dimensional+in+vitro+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Breast fibroblasts modulate epithelial cell proliferation in three-dimensional in vitro co-culture.</a> Breast Cancer Res. 4, (2004).</li>
<li>Wendt, D., Marsano, A., Jakob, M., Heberer, M., Martin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscillating+perfusion+of+cell+suspensions+through+three-dimensional+scaffolds+enhances+cell+seeding+efficiency+and+uniformity%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Oscillating perfusion of cell suspensions through three-dimensional scaffolds enhances cell seeding efficiency and uniformity.</a> Biotechnol Bioeng. 84 (2), 205-214 (2003).</li>
<li>Marshall, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow-perfusion+bioreactor+system+for+engineered+breast+cancer+surrogates+to+be+used+in+preclinical+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Tissue+Eng+Regen+Med%22%5BJournal%5D)">Flow-perfusion bioreactor system for engineered breast cancer surrogates to be used in preclinical testing.</a> J Tissue Eng Regen Med. , (2015).</li>
<li>Calcagnile, P., Fragouli, D., Mele, E., Ruffilli, R., Athanassiou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymeric+foams+with+functional+nanocomposite+cells%5BTitle%5D)+AND+%22RSC+Adv%22%5BJournal%5D)">Polymeric foams with functional nanocomposite cells.</a> RSC Adv. 4, 19177-19182 (2014).</li>
<li>Naba, A., Clauser, K. R., Lamar, J. M., Carr, S. A., Hynes, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+signatures+of+human+mammary+carcinoma+identify+novel+metastasis+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix signatures of human mammary carcinoma identify novel metastasis promoters.</a> eLife. 3, (2014).</li>
<li>Lochter, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+extracellular+matrix+constituents+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cancer+Biol%22%5BJournal%5D)">Involvement of extracellular matrix constituents in breast cancer.</a> Semin Cancer Biol. 6 (3), 165-173 (1995).</li>
<li>Joiner, K. S., Spangler, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+HistoGel-embedded+specimens+for+use+in+veterinary+diagnostic+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Diagn+Invest%22%5BJournal%5D)">Evaluation of HistoGel-embedded specimens for use in veterinary diagnostic pathology.</a> J Vet Diagn Invest. 24 (4), 710-715 (2012).</li>
<li>Varsegi, G. M., Shidham, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Block+Preparation+from+Cytology+Specimen+with+Predominance+of+Individually+Scattered+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells.</a> J Vis Exp. (29), e1316(2009).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Breast+Fibroblasts+Inhibit+Growth+of+the+MCF10AT+Xenograft+Model+of+Proliferative+Breast+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human Breast Fibroblasts Inhibit Growth of the MCF10AT Xenograft Model of Proliferative Breast Disease.</a> Am J Pathol. 170 (3), (2007).</li>
<li>Otali, D., He, Q., Stockard, C. R., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservation+of+immunorecognition+by+transferring+cells+from+10%25+neutral+buffered+formalin+to+70%25+ethanol%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Preservation of immunorecognition by transferring cells from 10% neutral buffered formalin to 70% ethanol.</a> Biotech Histochem. 88 (0), 170-180 (2013).</li>
<li>Webster, S. S., Jenkins, L., Burg, K. J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+Techniques+for+Porous%2C+Absorbable%2C+Polymeric+Scaffolds%2C+Used+in+Tissue+Engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histotechnol%22%5BJournal%5D)">Histological Techniques for Porous, Absorbable, Polymeric Scaffolds, Used in Tissue Engineering.</a> J Histotechnol. 26 (1), 57-65 (2003).</li>
<li>Troy, T. -C., Arabzadeh, A., Enikanolaiye, A., Lariviere, N., Turksen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemistry+on+Paraffin+Sections+of+Mouse+Epidermis+Using+Fluorescent+Antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemistry on Paraffin Sections of Mouse Epidermis Using Fluorescent Antibodies.</a> J Vis Exp. (11), (2008).</li>
<li>Carpenter, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CellProfiler%3A+image+analysis+software+for+identifying+and+quantifying+cell+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">CellProfiler: image analysis software for identifying and quantifying cell phenotypes.</a> Genome Biol. 7 (10), R100(2006).</li>
<li>Kwon, Y. -J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gli1+enhances+migration+and+invasion+via+up-regulation+of+MMP-11+and+promotes+metastasis+in+ERa+negative+breast+cancer+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Gli1 enhances migration and invasion via up-regulation of MMP-11 and promotes metastasis in ERa negative breast cancer cell lines.</a> Clin Exp Metastasis. (28), (2011).</li>
<li>Evilsizor, M. N., Ray-Jones, H. F., Lifshitz, J., Ziebell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primer+for+Immunohistochemistry+on+Cryosectioned+Rat+Brain+Tissue%3A+Example+Staining+for+Microglia+and+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Primer for Immunohistochemistry on Cryosectioned Rat Brain Tissue: Example Staining for Microglia and Neurons.</a> J Vis Exp. (99), e52293(2015).</li>
<li>Pal, A., Kleer, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+cultures%3A+a+tool+to+study+normal+acinar+architecture+vs.+malignant+transformation+of+breast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three dimensional cultures: a tool to study normal acinar architecture vs. malignant transformation of breast cells.</a> J Vis Exp. (86), e51311(2014).</li>
<li>Hasselbach, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+High+Grade+Glioma+Cell+Culture+from+Surgical+Specimens+for+Use+in+Clinically+Relevant+Animal+Models+and+3D+Immunochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Optimization of High Grade Glioma Cell Culture from Surgical Specimens for Use in Clinically Relevant Animal Models and 3D Immunochemistry.</a> J Vis Exp. (83), e51088(2014).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Hanging+Drop+Cell+Culture+Protocol+for+Generation+of+3D+Spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids.</a> J Vis Exp. (51), e2720(2011).</li>
<li>Materne, E. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Multi-organ+Chip+-+A+Microfluidic+Platform+for+Long-term+Multi-tissue+Coculture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture.</a> J Vis Exp. (98), e52526(2015).</li>
<li>Sadlonova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Molecular+Distinctions+Between+Normal+Breast-Associated+Fibroblasts+and+Breast+Cancer-Associated+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Identification of Molecular Distinctions Between Normal Breast-Associated Fibroblasts and Breast Cancer-Associated Fibroblasts.</a> Cancer Microenviron. 2, 9-21 (2009).</li>
<li>Wang, J. D., Douville, N. J., Takayama, S., ElSayed, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+molecular+absorption+into+PDMS+microfluidic+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of molecular absorption into PDMS microfluidic channels.</a> Ann Biomed Eng. 40 (9), 1862-1873 (2012).</li>
<li>Halldorsson, S., Lucumi, E., Gomez-Sjoberg, R., Fleming, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+and+challenges+of+microfluidic+cell+culture+in+polydimethylsiloxane+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Advantages and challenges of microfluidic cell culture in polydimethylsiloxane devices.</a> Biosens Bioelectron. 63, 218-231 (2015).</li>
<li>Regehr, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+implications+of+polydimethylsiloxane-based+microfluidic+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture.</a> Lab Chip. 9 (15), 2132-2139 (2009).</li>
<li>Burdett, E., Kasper, F. K., Mikos, A. G., Ludwig, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+tumors%3A+a+tissue+engineering+perspective+in+cancer+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+B+Rev%22%5BJournal%5D)">Engineering tumors: a tissue engineering perspective in cancer biology.</a> Tissue Eng Part B Rev. 16 (3), 351-359 (2010).</li>
<li>Caruso, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+coagulative+necrosis+in+malignant+epithelial+tumors+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Lett%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of coagulative necrosis in malignant epithelial tumors (Review).</a> Oncol Lett. 8 (4), 1397-1402 (2014).</li>
<li>Elmore, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%3A+A+Review+of+Programmed+Cell+Death%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death.</a> Toxicol Pathol. 35 (4), 495-516 (2007).</li>
<li>Majno, G., Joris, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis%2C+oncosis%2C+and+necrosis.+An+overview+of+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Apoptosis, oncosis, and necrosis. An overview of cell death.</a> Am J Pathol. 146 (1), 3-15 (1995).</li>
<li>Ogino, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathological+epidemiology+of+epigenetics%3A+emerging+integrative+science+to+analyze+environment%2C+host%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathological epidemiology of epigenetics: emerging integrative science to analyze environment, host, and disease.</a> Mod Pathol. 26 (4), 465-484 (2013).</li>
<li>Otali, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effects+of+formalin+fixation+and+tissue+processing+on+immunorecognition%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Combined effects of formalin fixation and tissue processing on immunorecognition.</a> Biotech Histochem. 84 (5), 223-247 (2009).</li>
</ol>

Yazarlar, rekabet eden hiçbir finansal çıkarları olmadığını beyan ederler.

Burada 3D kültür için bir yöntem daha yakın modeller, insan meme kanseri rekapitülasyon 3D morfoloji gelişimine izin vermek için bir hacim içinde, hücre dışı matrisin (ECM) ile, insan da dahil olmak üzere stromal fibroblastlann doku çevresinde bileşenlerinin içerdiğini tarif edilmiştir . tarif edilen 3D kültür yöntemi ECM&#39;nin 3B hacmi içine dahil edilen birden çok hücre tipinde geleneksel 2B hücre kültürü daha insan hastalığının daha iyi temsil eder. Mimari dokusu, mikroçevresinin ve çok boyutluluk gelen sinyaller h...

Daha doğru bir şekilde in vivo olarak tümör mimarisi ve mikro-taklit üç boyutlu (3D) kültür modelleri hücreler ile bunların mikro çevreleri arasındaki karmaşık etkileşimler incelemek için ve aday terapilerinin etkinliğini test etmek için amaçlanmıştır çalışmaları için önemlidir. Tümör boyut etkiler oksijen ve besin eğimleri, ilaç maruziyeti, interstisyel basınç / kan akımı ve 3D mimarisi 1-4 tekdüzelik. Uygun bir stromal mikroçevresinin varlığı tümör boyutluluğu ve etkileri, hücre-ECM sinyalizasyon ve stromal hücreleri ve malign epitel hücreleri arasındaki parakrin sinyalizasyon katkıda bulunur. Tümör boyutluluk ve hücresel fonksiyonu üzerindeki mikro-etkileri de ilaç yanıtı 1,3,5-8 değiştiren her iki faktörün birlikte, kurulur. Buna ek olarak, hücresel büyüme kinetiği, metabolik oranları ve hücre sinyal affe bu faktörler ile, 3D, iki boyutlu (2D) kültür ve kültür arasındaki farklılıkhücresel yanıtı 1,3,8-10 cting. İn vitro olarak, tümör taşıyıcı mikro-Örnek ECM bileşenleri ve stromal hücre popülasyonları da dahil olmak üzere modüle edilebilir. Malign epitel hücreleri tümörün daha fazla yayılma 5,6,10 inhibe ECM ve kanserle ilişkili stromal hücreler tarafından ya da tümör progresyonunu teşvik etmek için sinerjik / koruyucu bir şekilde ya da bastırıcı bir şekilde etkilenmektedir. Her iki çerçevede, stroma ilaç dağıtım 1,6 azalma parakrin sinyalizasyonu ile ve / veya elde edilen tümör geçiş basıncı artırarak terapötik cevabı ve ilaç olarak etkileyebilir. Bu nedenle, klinik öncesi modellerin içine ECM ve stromal hücrelerin eklenmesi 2B kültüründe de model olamaz tümörün yönlerini özetlemek yardımcı olacaktır. Burada bir yöntem olup, ECM bileşenleri ve s de dahil olmak üzere, bir mikro-ortam rekapitülasyon dahil meme kanseri temsilciler, kurma3B hacimde tromal hücreler tarif edilir. Meme kanserinde, stromal hücre popülasyonu baskın kanserle ilişkili fibroblastlar (CAF), stromal ECM oluşan büyük ölçüde laminin ve kolajen tip IV dahil olmak üzere, bazal membran bulunan matris bileşenlerinin küçük bir oran ile kollajen tip I oluşmaktadır 1,4,11-13. Bu nedenle, göğüs karsinoması mikro bu bileşenlerin (yani, CAF, kolajen I ve bazal membran) suretler halinde dahil edilmiştir. Bu yöntem, bir katı, un perfüze 3D suretler (Şekil 1A) oluşturmak için ya da biyoreaktör sisteminde (Şekil 1B) ile vekil ile orta perfüzyon, uyarlanabilir kullanılabilir. Her iki yaklaşım da burada açıklanmıştır. Bu yöntem, aynı zamanda, tümör ile ilişkili makrofaj gibi stromal elemanları içerecek şekilde ya da uygun olduğu şekilde, hücresel ve ECM bileşenleri ayarlayarak diğer katı tümörler modellemek için modifiye edilebilir. <pMeme karsinoması vekil için sınıf = &quot;jove_content&quot;&gt; Burada tarif edilen, MDA-MB-231 (231), meme kanseri hücre soyu, CAF daha önce insan göğüs karsinoma 14 izole kullanmışlardır ve bir ECM (% 90 kolajen I oluşan 6 mg / ml) ve% 10 büyüme faktörü indirgenmiş bazal membran malzemesi (BM). taşıyıcı ya da 8 oyuklu oda slayt (katı vekil) yetiştirilir veya biyoreaktör sistemi sürekli bir besin perfüzyon (perfüze vekil) temin etmek üzere kullanılır. ECM içeren bir hücre hacmine uygun herhangi bir perfüzyon biyoreaktör sistemi 15 kullanılabilir. Örnek olarak, bizim biyoreaktör sistemi doku suretler hazırlanmasını tarif etmektedir. Bu sistem, in-house geliştirilmiş ve ticari olarak mevcut değildir edildi. bizim odak burada 3D doku suretler hazırlanması ve analizi olduğundan, bizim biyoreaktör sistemi imalatı ve montajı özelliklerine ilişkin geniş detaya gitmiş değil. Ancak, ayrıntılı bir açıklamasıBu sistem ve gelişimi 16 yayımlanmıştır. Bu biyoreaktör sistemi içinde, bir polidimetilsiloksan (PDMS) akış kanalı PDMS köpük tarafından desteklenen vekil, ev için kullanılan (Calcagnile ve ark., 17 tarafından tarif edilenlere benzer yöntemler kullanılarak oluşturulan). Bu hacmi sürekli vekil oksijen ve besin kaynağı bir microphysiologic pompası vasıtasıyla ortamı ile perfüze 4 Mikrokanallarda (çapı her 400 mikron) tarafından nüfuz edilir. suretler uygun analiz tedavisi veya diğer manipülasyonlar yanıt olarak hücresel fonksiyonun ilgili önemli bilgileri elde etmek çok önemlidir. Suretler fiksasyon ve işlendikten sonra salgılanan ürünleri veya histolojik bölümlerde analiz için, konfokal mikroskopi veya non-invaziv görüntüleme diğer araçlar, koşullu ortam, ya da perfüzyon tahlil dolaylı hücresel analizi kullanılarak sağlam suretler doğrudan görüntüleme de dahil olmak üzere çeşitli yöntemlerle analiz edilebilir içinparafin. histolojik bölümlerde değerlendirilebilir Bu tür bir parametre, hücre yoğunluğu. Bu hücre yoğunluğu ölçmek için bir yaklaşım sunmaktayız (yani, kesit alanı başına çekirdekli hücrelerin sayısı) hematoksilin ve eozin (H &amp; E) ile boyandı vekil histolojik kesitlerinin fotomikrograflarının uygulanan yarı-otomatik bir görüntü işleme teknikleri kullanılarak. Hücre yoğunluğu zamanla hücre sayısı nispi değişimin bir göstergesi olarak kullanılabilir ya da farklı büyüme koşulları ve tedavi kaynaklanır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" /> Şekil 1. 3D ses ve biyoreaktör sistemi. Sürecin A) şematik katı 3D suretlerimi oluşturmak için. En: ECM (pembe), (sarı) epitel karsinoma hücreleri ve CAF (turuncu) içeren katı 3D hacmi karikatür; Alt:. 8-iyi odasının slayt içeren suretler üstten görünümü B) şematik sürecinin 3D suretlerimi perfüze üretir. En: cakanallı 3D hacmin rtoon orta perfüzyon ve içeren ECM (pembe), epitel karsinoma hücreleri (sarı) ve CAF (turuncu) için izin vermek; Orta: PDMS köpük (siyah ok) içeren PDMS akış kanalının görüntü hücresi + ECM enjekte ve çapı 400 mikron ölçme polimer kaplı paslanmaz çelik tel (pembe ok) tarafından nüfuz edilecek; Alt:., Suret ihtiva eden ve sürekli ortam perfüzyon için izin vermek için biyoreaktör sistemine bağlı PDMS akış kanalının görüntüsü (peristaltik pompa ve ortam haznesi gösterilmemiştir) C) kültürden sonra, katı ve perfüze suretler hem de işlem adımları görüntüleri. Sol: jel ve vekil işlem örneği içeren cryomold görüntü; Orta: Sabit ve işlenmiş vekil içeren bir parafin blok görüntü; Sağ:. Bir vekil bir H &amp; E boyalı histolojik kesiti olan bir cam slayt görüntüsü <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">bir görmek için buraya tıklayınız</a>Bu rakamın daha büyük bir versiyonu.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagel Ortamı 1x (DMEM)</td> <td>Corning CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu (FBS)</td> <td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr>% <tr><td>0.25 Tripsin + 2.21 & nbsp; mM EDTA 1x</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü plakaları, 100&nbsp; mm</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229620</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Doku Kültürü plakaları, 35&nbsp; mm</td><td>CellTreat Bilimsel Ürünler</td><td>229638</td><td>PDMS köpük oluşumu için&nbsp;</td></tr><tr><td>9" Cam pipet</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>13-678-20D</td><td>Steril</td></tr><tr><td>10 ml pipet</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229210B</td><td>Steril</td></tr><tr><td>1.000 ve mikro; l piptette uçları</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-166</td><td>Steril Filtreli</td></tr><tr><td>200 & l pipet uçları</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-141</td><td>Steril Filtreli</td></tr><tr><td>10 & l pipet uçları</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-158</td><td>Steril Filtreli</td></tr><tr><td>15 ml konik</td><td>tüpler CellTreat Scientific Products</td><td>229410</td><td>Steril</td></tr><tr><td>50 ml konik tüpler</td><td>CellTreat Scientific Products</td><td>229422</td><td>Steril</td></tr><tr><td>1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td>Steril</td></tr><tr><td>Tripan mavisi</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td>steril</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>24236-10</td><td>PDMS elastomer ve kürleme maddesi. Şirket içi biyoreaktörümüz için kullanılır.</td></tr><tr><td>PDMS Köpük</td><td></td><td></td><td>Şirket içi biyoreaktörümüzde kullanılmak üzere şirket içinde üretilmiştir.</td></tr><tr><td>Yüksek Konsantrasyonlu Sığır Kollajen Tip I</td><td>Gelişmiş Biomatrix</td><td>5133-A</td><td>FibriCol ~ 10 mg / ml</td></tr><tr><td>Büyüme Faktörü Azaltılmış Matrigel (Temel Membran)</td> <td>Corning</td><td>354230</td><td>Bodrum membran malzemesi</td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>Moleküler Biyoloji Sınıfı Su</td><td>Fisher</td><td>BP2819-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 10x & nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek Hazneli Kızak Sistemi&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>177402</td><td>8 kuyulu</td></tr><tr><td>Biyoreaktör</td><td></td><td></td><td>Şirket içinde üretilmiştir.</td></tr><tr><td>Geri Yaylı 304 Paslanmaz Çelik & </td><td>Şirket içi biyoreaktör sistemimizde mikro kanallar oluşturmak için</td>PTFE polimer <td>McMaster-Carr</td><td>1749T19</td> Paslanmaz çelik tellerle kaplanmıştır. 0.016" Çap</tr><tr><td>BioPharm Plus platinle kürlenmiş silikon pompa hortumu, L/S 14</td><td>Masterflex</td><td>EW-96440-14</td><td>Şirket içi biyoreaktör sistemimizde kullanım için. Boru İç Çapı: 1,6 mm, Hortum dikeni boyutu: 1/16 inç.</td></tr><tr><td>2-Stop Boru Setleri, parlamayan PVC, 1.52&nbsp; mm ID</td><td>Cole-Parmer&nbsp;</td><td>EW-74906-36</td><td>Şirket içi biyoreaktör sistemimizde kullanım için (mikroperistalitik pompalı).&nbsp;</td></tr><tr><td>Altı Kanallı hassas mikro peristaltik pompa</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74906-04</td><td>Şirket içi biyoreaktör sistemimizle kullanım için</td></tr><tr><td>Tüberkülin Şırıngaları</td><td>BD Medical</td><td>309625</td><td>26 gauge 3/8 inç iğne; Steril</td></tr><tr><td>Diseksiyon Doku Forseps</td><td>FisherBrand</td><td>13-812-36</td><td>5.5 inç</td></tr><tr><td>Mini Tüp Döndürücü</td><td>Boekel Scientific</td><td>260750</td><td>Vekil rotasyon için ekipman seçeneği. 50 ml'lik tüpler için atlıkarınca ile kullanılır (model numarası 260753)</td></tr><tr><td>50 ml tüp karuseli</td><td>Boekel Scientific</td><td>260753</td><td>Mini tüp döndürücü</td></tr><tr><td>Bambino ile kullanılır&nbsp; Hibridizasyon Fırını</td><td>Boekel Scientific</td><td>230301</td><td>Vekil rotasyon için ekipman seçeneği</td></tr><tr><td>HistoGel Numune İşleme Jeli</td><td>Thermo Scientific</td><td>HG-4000-012</td><td>Adım 5.2'de açıklanan Numune İşleme Jeli</td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Andwin Scientific</td><td>4566</td><td>15 mm x 15 mm x 5 mm</td></tr><tr><td>Doku İşaretleme</td><td>Boyası Cancer Diagnostics, inc.&nbsp;</td><td>03000P</td><td>Vekilleri işaretlemek için kullanılabilir,&nbsp; birden fazla örneğin bir doku kasetine dahil edilmesine izin verir&nbsp;</td></tr><tr><td>Menteşeli doku kasetleri&nbsp;</td><td>FisherBrand</td><td>22-272-416</td><td></td></tr><tr><td>Formalin</td><td>Fisher</td><td>23-245-685</td><td></td></tr><tr><td>GoldSeal Düz Cam Slaytlar</td><td>Thermo Scientific</td><td>3048-002</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, 200 kanıt (% 100), USP</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2805M</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen</td><td>Termo Bilimsel Richard-Allan Bilimsel</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>Arıtıcı</td><td>Termo Bilimsel Richard-Allan Bilimsel</td><td>7401</td><td></td></tr><tr><td>Mavileştirme Çözeltisi</td><td>Termo Bilimsel Richard-Allan Bilimsel</td><td>7301</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Termo Bilimsel Richard-Allan Bilimsel</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL montajı medya</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>83124</td><td></td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-548-5G</td><td></td></tr></tbody></table>

hazırlama ve analizler<em&gt; İn vitro</em&gt; Üç boyutlu meme kanseri suretler

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

Üç boyutlu (3D) bir kültür, iki boyutlu kültüründen in vitro hücre davranışını model fizyolojik olarak daha uygun bir yöntemdir. Meme karsinomu kapsayan karsinomları, fibroblastlar ve hücre dışı matrisin (ECM) de dahil olmak üzere kanser epitelyal hücreleri ve stromal bileşenleri içeren karmaşık 3D dokulardır. Ancak, meme kanserinin en in vitro modeller nedenle stroma atlama sadece kanser epitelyal hücrelerden oluşur ve in vivo olarak tümör 3D mimari. karsinom uygun 3D modelleme tümör biyolojisi, davranış ve tedaviye yanıtın doğru anlaşılması için önemlidir. Ancak, kültür ve 3D modelleri hacmi süresi kültürü içinde oksijen ve besin mevcudiyeti ile sınırlıdır. Burada, meme kanseri, epitelyal hücreleri ve stromal fibroblastlann stroma içeren bir şekilde kültüre edilebilir 3B meme kanseri vekil üretmek üzere ECM&#39;nin dahil edildiği bir yöntem ortaya koymaktadırKatı 3D yapı veya oksijen ve besin sağlamak için bir perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanılarak. kurulum ve ilk büyüme döneminden sonra, suretler klinik öncesi ilaç testleri için de kullanılabilir. Seçenek olarak ise, bir vekil hücresel ve matris bileşenleri, biyolojik çeşitli sorular gidermek için modifiye edilebilir. kültürden sonra, suretler sabit ve ilgi parametrelerinin değerlendirilmesi için klinik göğüs karsinoma örneklerinin işleme benzer bir şekilde, parafin için işlenir. ImageJ ve CellProfiler görüntü analiz yazılım sistemleri suretler histolojik kesitlerinin fotomikrograflarının uygulanır, açıklanmıştır Bu tür bir parametre, bu hücre yoğunluğu değerlendirmesi alan başına çekirdekli hücrelerin sayısını belirlemek için. Bu, zaman içinde hücre sayısı değişikliği veya değişen büyüme koşulları ve tedavi sonucunda, hücre sayısındaki değişim bir göstergesi olarak da kullanılabilir.

7 gün yukarıda tarif yetiştirilen hem katı hem de perfüze 3D meme kanseri suretler hazırlanmıştır. Daha sonra, suretler, tespit edilmiş parafine işlenmiş, kesit ve yukarıda tarif edildiği gibi, hematoksilin ve eosin ile boyandı. çekirdekli alan başına hücreleri (her ikisi de 231 hücre ve CAF) her vekil sayısı ölçüldü. Şekil 12&#39;de görülebileceği gibi, H &amp; E ile boyanmış bölümlerin temsil edici fotomikrografikler hücre yoğunluğu başlangıçta dahil olsa da, katı sure...

Oksijen ve besin sağlamak için bir perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanılarak kültürlenebilen 3D meme kanseri vekilleri oluşturmak için bir yöntem gösteriyoruz. Büyümeyi takiben, vekiller sabitlenir ve ilgilenilen parametrelerin değerlendirilmesi için parafine işlenir. Böyle bir parametrenin, hücre yoğunluğunun değerlendirilmesi açıklanmaktadır.

Hazırlama ve Analizler<em&gt; İn Vitro</em&gt; Üç Boyutlu Meme Kanseri Suretler

Three dimensional (3D) culture is a more physiologically relevant method to model cell behavior in vitro than two dimensional culture. Carcinomas, ...

Bu prosedür setinin genel amacı, in vitro meme kanseri sürgüsü olarak işlev görecek üç boyutlu hücre kültürleri oluşturmak ve bu sürgülerin histolojik kesitlerinde hücre büyümesini ölçmek için bir yöntem sunmaktır. Üç boyutlu hücre kültürü, hücre davranışını in vitro olarak modellemede, iki boyutlu hücre kültürüne göre fizyolojik olarak daha ilgili bir yöntemdir. Deneysel koşullarda hücresel bileşim değiştirilerek, bu prosedür seti çeşitli biyolojik soruları yanıtlamak ve aday terapötiklerin etkinliğini değerlendirmek için uyarlanabilir.Hücreleri ECM'ye dahil etmek için, buz üzerinde, hücreleri ve beraberindeki makaledeki tablo bir'de listelenen ilgili ilk dört bileşeni iki milimetrelik bir mikrosantrifüj tüpüne ekleyin. Ardından, pipetleme yaparak nazikçe karıştırın ve herhangi bir kabarcık oluşumundan kaçının. Karışımın yedi pH değerini belirten turuncu-pembe bir renk gösterdiğinden emin olmak için 10XD MEM içindeki fenol kırmızısını kullanarak pH seviyesini izleyin.Karışım sarı görünüyorsa ve pH çok düşükse, uygun renk elde edilene kadar yavaşça, her seferinde bir damla olacak şekilde yüzde 7,5 sodyum bikarbonat ekleyin. Karışımı buz üzerinde tutmayı unutmayın ve erken ECM polimerizasyonunu önlemek için hızlı çalışın. Katı 3D kültürler için, erken ECM polimerizasyonunu önlemek amacıyla chamber slide'ı buz üzerinde tutun.Sekiz kuyucuklu chamber slide'ın her bir kuyucuğuna 100 µL hücre ECM karışımını yavaşça pipetleyin ve karışımın daha iyi dağılmasına yardımcı olmak için hücre ECM karışımını kuyucuğun kenarları boyunca pipetleyin. Ardından, ECM polimerizasyonuna izin vermek için sürrogatları 37 °C'de, %5 CO2 ortamında 45 dakika boyunca inkübe edin. Kırk beş dakika sonra her bir kuyucuğa 100 µL kültür medyası ekleyin ve deney süresince 37 °C'de ve %5 CO2 ortamında inkübe edin.Kültür ortamını her iki günde bir değiştirin. 3D kültürün bir kısıtlaması, oksijen ve besin maddelerinin hacim içine difüzyonunun hücre canlılığını desteklemek için yetersiz kalabilmesidir. Bir biyoreaktör sisteminin eklenmesi, bu kısıtlamanın aşılmasına ve büyümenin artırılmasına yardımcı olabilir.Bir biyoreaktör sisteminde 3 boyutlu kültürlerin perfüzyonunu sağlamak için, sürgatların yerleştirildiği biyoreaktör sistemi kısmını steril şekilde hazırlayın ve birleştirin. Bir hücre kültürü kabininde, 26 gauge iğneli bir şırınga kullanarak, hücreli ECM karışımını perfüzyon biyoreaktörünün hücreleri içermesi için tasarlanmış alanına enjekte edin ve hızla bir sonraki adıma geçin. Hücrelerin sürgatlar içinde daha eşit dağılımını sağlamak için, sürgatları barındıran biyoreaktör bileşenini 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin.ECM polimerizasyonunu sağlamak için, örnekleri in situ hibridizasyon fırınında veya bir inkübatörde 37 °C'de 45 dakika boyunca inkübe ederken 18 rpm hızında sürekli olarak döndürün. Polimerizasyonun ardından ve besiyeri ilavesiyle birlikte, biyoreaktör düzeneğini pompaya bağlayın. Besiyeri perfüzyonunu 37 °C ve yüzde 5 CO2 içeren bir inkübatörde başlatın.Deney süresince ortam perfüzyonuna devam edin ve spesifik deney tasarımının gerektirdiği şekilde kültür ortamını değiştirin. Deneyin sonunda, işlem sırasında sürgatların bütünlüğünü korumak ve histolojik kesit alımını kolaylaştırmak için sürgatları numune işleme jeli ile kaplayın. Bunun için, numune işleme jelini 60 °C'lik bir su banyosunda kullanıma hazır hale gelene kadar eritin.Ardından, etiketlenmiş bir kriyokalıbın tabanına yaklaşık 300 µL örnek işleme jeli pipetleyin. Bir skapel bıçağı ve pens kullanarak, sürrogatı biyoreaktörden veya sekiz bölmeli bir oda slaytının kuyucuğundan dikkatlice çıkarın ve örnek işleme jeli içeren kriyokalıpların içine yerleştirin. Kriyokalıptaki sürrogatı örtmek için yaklaşık 300 µL örnek işleme jeli pipetleyin.Ardından, 30 dakika boyunca dört °C'de inkübe edin. Numune işleme jeli katılaştığında, sürrogat içeren numune işleme jelini kriyokalıptan çıkarın ve bir doku kasetine yerleştirin. Aynı doku kasetine birden fazla sürrogat konulacaksa, fiksasyon ve işlem sonrası örnekleri ayırt etmek için doku işaretleme boyaları kullanılabilir.Ardından, tam fiksasyonun sağlanması için sürrogatı içeren doku kasetini, oda sıcaklığında on ila on iki saat boyunca yüzde on nötr tamponlu formulaya yerleştirin. Fiksasyonun ardından, sürrogatı içeren doku kasetini yüzde 70'lik etanole aktarın. Sabitlenmiş sürrogat artık parafin işlemine ve ardından yapılacak histolojik kesit almaya hazırdır.H ve E boyalı kesitlerin hücre yoğunluğunu ölçmek ve foto-mikroskobik görüntülerini almak için sürgatın bir görüntü dosyasını açın. ImageJ'deki Polygon aracını kullanarak ve ECM kenarlarını kılavuz alarak, fareyi sürükleyip anchor noktaları oluşturmak için tıklayarak sürgat alanının çevresini çizin. Çizim tamamlandıktan sonra, Analyze sekmesi altından Measure seçeneğini belirleyin.Ardından, sürrogat alanını ölçmek için kullanılan görüntü dosyalarını, dosyaları dosya listesine sürükleyerek Cell Profiler'a yükleyin. Daha sonra, Names and Types Import modülünde içe aktarılan her bir görüntüye bir isim atayın ve görüntü tipini seçin. Analiz hattı oluşturulduktan sonra, Test Modu'nu başlatın ve Cell Profiler'da Run düğmesine tıklayın.Ardından, test görüntüsündeki çekirdeklerin çoğunun uygun şekilde tanımlandığından ve hücreleri tanımlamak için optimal parametrelerin seçildiğinden emin olmak için filtrelenmiş nesneleri değerlendirin. Dahil edilen çekirdekler yeşil daire içine alınacaktır. Sonra projeyi kaydedin, test modundan çıkın ve Analyze Images'a tıklayın.Burada, yedi gün boyunca büyütülmüş perfüze bir sürrogata ait H ve E boyalı kesitin temsili bir görüntüsü gösterilmektedir. Ve bu da, besiyerinin her iki günde bir değiştirildiği ve yedi gün boyunca büyütüldüğü katı bir sürrogata ait H ve E boyalı kesitin temsili bir görüntüsüdür. Hücresellik, katı sürrogatlarda çok daha düşüktür.Bu grafik, yedi günlük büyümenin ardından birim alan başına düşen ortalama çekirdekli hücre sayısının karşılaştırmasını göstermektedir. Perfüze edilmiş ve katı bir sürrogat. Bu sayısal veriler, H ve E boyalı kesitlerin foto-mikrograflarındaki hücre yoğunluğunu desteklemektedir.Ve bu grafik, perfüze edilmiş ve katı süragatlerin yedi günlük büyümesinin ardından hücre proliferasyonunun bir ölçüsü olan Ki-67 etiketleme indeksinin karşılaştırmasını göstermektedir. Bu veriler, perfüze süragatlarda daha fazla büyümeyi bir kez daha desteklemektedir. Bu prosedürün ardından, RNA ve protein ekspresyonu gibi soruları yanıtlamak için süragatlerin histolojik kesimleri üzerinde in situ hibridizasyon ve aminohistokimya gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, üç boyutlu in vitro doku sürgatlerinin nasıl hazırlanacağı ve işleneceği ile H ve E boyalı histolojik kesitlerde sürgat analizinin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

preparation-analysis-vitro-three-dimensional-breast-carcinoma

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Kantitatif PCR kullanarak, köklü civciv CAM modeli, uzak organlara insan tümör hücreleri metastaz kantitatif analiz etmek için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Kuş Embriyo Model kullanarak Kanser metastaz Kantitatif Analiz

Optik Projeksiyon Tomografi İnsan Meme Kanseri Örnekler ve Analiz Uzun vadeli Kültür

Bu videoda, perinöral invazyonu incelemek için civciv koryoallantoik membran veya CAM üzerinde dorsal kök gangliyonları ve kanser hücrelerini birlikte kültürleme yöntemini açıklıyoruz.

Civciv Korioallantoik Membran veya CAM Tümör Modeli: Tümör Hücrelerinin Perinöral İnvazyonunu Simüle Etmek İçin Bir In Ovo Yöntemi

Bu makalede, meme kanseri hücre istilasını ölçmek için üç boyutlu (3D) tahlillerin kullanımı için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özellikle, biz hücreleri istila oluşur membran bütünlüğünün kaybı incelemek için bu tür deneyleri kurmak için gerekli prosedürleri, ölçümlerini ve veri analizi gibi yöntemleri tartışmak.

Üç boyutlu (3D) Modeli Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Kantitasyonu

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Burada, doğrudan/dolaylı ilişkileri monosit ve kollajen bozulması, bağışıklık hücre işe alım, hücre gibi sonuçlar ile çalışma olarak birincil meme kanser hücrelerinin de Morfoloji çözümlenecek bir üç boyutlu kültür yöntemi açıklamak işgali ve promosyon inflamasyon kanserle ilgili.

Monosit ve bir hücre dışı matriks içinde birincil meme kanseri hücreleri arasındaki iletişimi analiz özü (ECME)-üç boyutlu sistem tabanlı

Bu çalışma, yeşil floresan protein ve biyolüminesans sinyallerinin yanı sıra kantitatif moleküler algılama tekniğinin entegrasyonu ile tümör yüklemesini doğru bir şekilde değerlendirmek için gelişmiş bir protokol hazırlaştır.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Hasta BMPC örneklerinin üç boyutlu kültürleri ve kemik metastatik prostat kanserinin ksenogreftleri orijinal tümörlerinin fonksiyonel heterojenliğini korur ve bu da kistler, sferoidler ve kompleks, tümör benzeri organoidlerle sonuçlanır. Bu makale, heterojen hasta türemiş örneklerin 3D kültürü ve IFC kullanılarak analizleri için bir optimizasyon stratejisi ve protokolü sağlar.

Hasta Prostat Kanseri Kemik Metastazı Örneklerinden ve Ksenogreftlerinden Elde Edilen Üç Boyutlu (3D) Organoidlerin Oluşturulması ve Analizi

Bu makale, daha önce tarif edilen üç boyutlu kollajen bazlı iskelelerde nöroblastom hücre hatlarını tohumlamak, önceden belirlenmiş bir zaman dilimi için hücre büyümesini sürdürmek ve çeşitli hücre büyümesi ve hücre davranışı analizleri ve aşağı akış uygulamaları için iskeleleri almak için gereken adımları listeler.

Kollajen Bazlı İskeleler Kullanılarak Nöroblastomun Üç Boyutlu İn Vitro Biyomimetik Modeli

Meme epitel hücreleri ve endotel hücreleri arasındaki çapraz konuşma, meme kanserinin ilerlemesine, tümör büyümesine ve metastaz yapmasına önemli ölçüde katkıda bulunur. Bu çalışmada meme kanseri hücrelerinden vasküler ve/veya lenfatik endotel hücreleri ile birlikte sferoidler yapılmış ve meme kanseri araştırmaları için in vitro sistem olarak uygulanabilirliklerini ortaya koymaktadır.

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Bu protokol, in vitro/in vivo fonksiyonel tahliller, transkriptomik ve hesaplamalı analiz dahil olmak üzere murin CAF'lerini kültürleme, manipüle etme ve analiz etme yöntemlerini ana hatlarıyla belirtir. Ayrıca, insan meme kanseri tümörlerinden oluşan bir koleksiyondan lazer yakalama mikro diseke stromal ve epitel bileşenlerinin halka açık transkriptomlarını analiz etmek için geliştirilen web tabanlı bir platformu tanımlar.

Moleküler ve Hesaplamalı Çalışmalar için Araçlar Olarak Fare Meme Tümörlerinden Kanserle İlişkili Fibroblastlar

Keşfedin üç boyutlu meme kanseri suretleri hazırlama ve histolojik kesitlerde hücre büyümesi ölçümü. Perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanarak daha fizyolojik koşullarda hücre davranışlarını inceleyin.

Hazırlama ve Analizler

Daha fazla video keşfet