Name: Meme Kanseri Hücre Hatlarında Hücre Proliferasyonunu belirlenmesi için üç Farklı Yöntemlerle Karşılaştırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Keşfedin meme kanseri hücre hatlarında hücre proliferasyonunu belirlemek için üç farklı yöntemin karşılaştırılmasını. Geleneksel sayım, luminesans ve hücre görüntüleyici yöntemlerinin avantajlarını öğrenin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Hamish Campbell ve Prof. Antony Braithwaite'e transdüksiyonlu MCF-7-LeGO hücre hatlarının geliştirilmesindeki yardımları için teşekkür ederiz. Hunter Tıbbi Araştırma Enstitüsü aracılığıyla Bloomfield Group Vakfı tarafından sağlanan finansman desteğimizi takdir etmek isteriz. BCM, Newcastle Üniversitesi aracılığıyla bir APA bursu ve Hunter Tıbbi Araştırma Enstitüsü aracılığıyla MM Sawyer Bursu ile desteklenmektedir.

Çoğalma Tahliller için hazırlanması 1. Hücreler Not: her yöntem analiz için aynı biçimde aynı şekilde ve tohum iki hücre çizgileri hazırlamak. <ol><li> T- MCF-7-Lego ve MCF-7-Δ40p53 75 cm2 doku kültürü şişeleri 75-80% konfluansa 7 hücreleri büyümek kırmızısız fenol,% 10 cenin sığır serumu ile takviye edilmiş Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) (FBS) , 200 mM L-glutamin, 2 ug / ml insülin, ve% 5 CO2 ile 37 ° C &#39;de 1 ug / ml Puromisinin. Steril bir biyogüvenlik kabini sınıf II hücreleri anlaştım. Not: izdiham hücreleri büyümek için geçen süre tohumlama seyreltme bağlı olarak değişir. Çoğalma denemeleri hücreleri kaplama için hazırlık olarak, 1 hücreleri tohum: takviye edilmiş DMEM içinde 3 seyreltme ve% 75-80 konflüansa kadar 3 gün boyunca normal büyüme koşullarında muhafaza. </li><li> içine medya dökünüz, şişesi hücreleri çıkarmak içinBir çöp konteyneri. Hemen önceden ısıtılmış 2x tripsin 2 ml hücre tabakası yıkayın. Aspire tripsin. % 5 CO2 ile 37 ° C de 5 dakika süreyle bir inkübatör hücre tabakası ve yere önceden ısıtılmış tripsin bir 2 ml ilave edilir. <ol><li> Hücreler ayırmak kez taze DMEM takviye ısıtılan 10 ml hücreleri yıkayın. Oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 491 x g&#39;de, steril bir 15 ml tüp ve santrifüj hücre süspansiyonu aktarın. Dikkatle aspire ve süpernatant atın. </li></ol></li><li> Taze DMEM 5 ml hücre pelletini. 96-delikli plakalardaki hücreler tohum doğru yoğunluğu belirlemek için bir hücre sayımı gerçekleştirin. <ol><li> 900 ul 1X Dulbecco Fosfat Tamponlu Salin (DPBS) içinde hücre süspansiyonu 100 ul seyreltilir. otomatik hücre tezgahın üzerine yeni bir 60 mikron sensörünü yerleştirin. pistonu basılı tutun ve seyreltilmiş hücre süspansiyonu sensörü daldırın. Yavaş yavaş hücre tezgahın üzerine pistonu bırakın. Hücre cou gelen sensörünü çıkarınnter Tamamlandığında. Not: Hücre sayısı hücre / ml hücre sayacı görüntülenir. </li></ol></li><li> % 20 konfluansa ° &#39;de, bir 96-çukurlu plaka içinde (DMEM), 100 ul&#39;lik bir son hacim tohum hücreleri 3-5 gün (Tablo 1 e bakınız) üzerinden çoğalması, hücre büyümesi ve ölçümü için yer açmak için. üç kez tüm hücre hatları tohumu. Not: Bu deney için, üç farklı hücre yoğunlukları en uygun hücre yoğunluğu belirlemek için değerlendirildi. Gerekli hücre sayıları Tablo 1&#39;de özetlenmiştir. Tohum hücreleri düşük yoğunlukta daha uzun vadeli büyüme ölçümü gerekirse. <ol><li> Hemasitometre ve lüminesans tabanlı deneyleri için, (yani deney başına 4 tabak) zaman noktası başına bir tabak hazırlayın. Hücre görüntüleme deneyi için, deney süresince sadece bir plaka hazırlanması. </li></ol></li><li> 24 saat boyunca% 5 CO2 ile 37 ° C &#39;de hücreleri korumak. </li></ol> 2. belirlenmesi Hücre Bize güveninHemasitometre ing <ol><li> bir hücre kültür inkübatörü içinde 37 ° C&#39;de önceden sıcak hem de orta ve tripsin, fırında ya da su banyosu. Bir atık kabı içine hücrelerden aspire medya, 2x tripsin 30 ul ile bir kez yıkayın ve tripsin aspire. </li><li> 2x tripsin 30 ul ile tekrar hücreler yıkanır ve 37 ° C&#39;de 5 dakika süreyle inkübe edilir. Yavaşça plaka hücreleri çıkarmak için plakanın kenarına dokunun. takviye edilmiş DMEM içinde 50 ul ilave edin ve hücreleri, tek bir hücre süspansiyonu oluşana kadar pipetleme ile hücrelerin karışımı. </li><li> % 70 etanol ile yüzey ve cam kapağı temizleme hemasitometre hazırlayın. </li><li> sayma odaları üzerinde cam kapak-slip yerleştirin ve &#39;Newton kırılma halkaları&#39; kapak kayma kenarları ve hemasitometre arasında görülebilir kadar yapıştırın. Not: Bu kapak-slip doğru hemasitometre yapıştırılır işaret etmektedir. </li><li> Yavaşça kılcal hareketi ile sayma odasını doldurmak, kapak kayma altında hücre süspansiyonu 20 ul pipetle.Bir mikroskop 10x büyütme altında hemasitometre yerleştirin ve ızgara düzeninde sayma odaları görselleştirmek. </li><li> ızgara düzeni 4 dış meydanlarında hücreleri saymak. Doğruluğu artırmak için ek dış kareler tekrar sayımı gerekli ya da sayısı kadar 70 ulaştıysa - 100 hücre 14,15. <ol><li> Aşağıdaki gibi ml başına hücre konsantrasyonunu hesaplayın: kare x seyreltme faktörü başına ortalama hücre sayısını (kullanılıyorsa) 10 4 x </li></ol></li><li> Tekrarlayın 2,1-2,8 her 24 saat 96 saat sonrası tohumlama adımları. </li></ol> 3. Lüminesans bazlı analiz kullanılarak hücre çoğalması belirleme Not: Bu bir bitiş noktası ölçümüdür. Reaktif hücrelere ilave edildikten sonra, levha bir kez belirlenebilir. <ol><li> 30 dakika boyunca 22 ° C su banyosu içinde çözülme lüminesans reajanı. </li><li> Yavaşça homojen bir karışım elde etmek için şişeyi ters çevirerek reaktifi karıştırın. </li><li> aşama (tohumlanmış hücrelerin bir plaka dengeye1.5), 30 dakika boyunca oda sıcaklığında karıştırıldı. </li><li> Her bir oyuğa lüminesan reaktif 100 ul ekle. 2 dakika boyunca orbital bir karıştırıcı üzerinde içeriği karıştırın. Plaka, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübasyona izin verin. </li><li> Çok modlu plaka okuyucu yazılımı kullanarak bir parlaklık deney kurma. <ol><li> Çok modlu plaka okuyucu açın ve yazılımı açın. &#39;Görev yöneticisi&#39; olarak, &#39;deney&#39; seçin ve dosya &#39;new&#39;.Select oluşturmak&#39; &#39;yan araç çubuğundan ve altında&#39; protokol prosedürü &#39;sekmesinde,&#39; seçin. </li><li> Seç &#39;Grenier 96 düz dipli&#39; plaka tipi ve &#39;kullanım kapak&#39; kutusunu işaretleyin. &#39;Okundu yöntem&#39; kutusunun altında &#39;okumak&#39; eylemi seçin. &#39;Lüminesans&#39; algılama yöntemini seçin. &#39;Tamam&#39; ı tıklatın. </li><li> okuma adım kutusunda, &#39;Tam plakanın&#39; sekmesinin altında taranacak kuyu seçin ve boş kuyu hareket kuyu seçin. </li><li> (: Delik, ayna: yok örneğin, fiş, Em) boş filtreye filtre seti ayarlayın. için kazanç ayarlayın135, oyuk başına 0.5 saniyelik bir entegrasyon süresi ve 6.5 mm kadar bir yüksekliğe sahip oku. lüminesans okuma ayarları kaydetmek için &#39;OK&#39; tıklayın. </li></ol></li><li> Bir Lüminesans Oku Sahne <ol><li> &#39;Enstrüman kontrolü&#39; sekmesini seçerek plaka tutucu çıkarın ve &#39;kapağı sağlamaya, plaka sahibinin üzerine 96-plaka out&#39;.Place plaka üzerine tıklayın. altında &#39;araç kontrolü&#39; sekmesinin plaka &#39;tıklayarak plaka yuvasını kapatın. Işıklı okuma gerçekleştirmek için araç çubuğundan &#39;şimdi okuma&#39; üzerine tıklayın. </li><li> iyi daha fazla analiz için bir elektronik tabloya her biri için nispi Işıklı birimi (RLU) ölçümleri ihracat. </li></ol></li><li> Tekrarlayın hücrelerin ekim sonra yayılması 96 saat her 24 saat kadar kaydetmek için 3.1-3.6 adımları tekrarlayın. </li></ol> 4. Hücre Imager Kullanımı Cep Sayısı belirlenmesi <ol><li> Çok modlu hücre görüntüleyici yazılımı kullanarak bir hücre görüntüleme deney kurma <ol><li> Çok modlu hücre kamera ve açık th açıne yazılımı. </li><li> &#39;Görev yöneticisi&#39; olarak, &#39;deneyleri&#39; sekmesini seçin ve &#39;araç çubuğunu tıklayın&#39; dosyasını &#39;new&#39;.On oluşturmak&#39; protokol &#39;sekmesini ve açık&#39; prosedürü &#39;tab.Select&#39; ayarlanan sıcaklık &#39;eylem. &#39;Açık&#39; için inkübatör ayarlayın ve 37 ° C sıcaklığı ayarlamak ve bir sonraki adım &#39;kutu ile devam etmeden önce&#39; ön ısıtma &#39;kontrol edin. Ayarları kaydetmek için &#39;OK&#39; tıklayın. </li><li> &#39;Okumak&#39; eylemi seçin. , &#39;Image&#39; algılama yöntemine tıklayın &#39;son nokta / kinetik&#39; okuma türünü ve &#39;filtreleri&#39; optik türünü seçin. plaka üzerinde tam plaka &#39;sekmesinin üzerine OK&#39;.Click&#39; tıklayın ve kuyu yansıması. Ayarları kaydetmek için &#39;OK&#39; tıklayın. </li><li> &#39;Amaç&#39; seçenekler açılır menüden 2.5X hedefi seçin. GFP 469, 525 ve Parlak Field: &#39;kanalların sekmesinin altında, iki kanal seçin. Her iki kanal için &#39;otomatik&#39; pozlama kontrol edin ve iyice otomatik pozlama seçin. </li><li> aut belirlemeko odak ayarları, &#39;otomatik odaklama&#39; seçin ve &#39;seçenekleri&#39; üzerine tıklayın. otomatik odaklama seçenekleri için, &#39;o zaman otomatik odak tarama ve&#39; yöntemini seçin. Ayarları kaydetmek için &#39;OK&#39; tıklayın. </li><li> Set yatay ve dikey aralığı (um) = 2.881 ve dikey aralık (mikron) = 2.127 ile 3 x 2 montajda kuyu başına birden fazla görüntüleri taramak için 0.Select iyi (um) merkezinden ofset dikey. Prosedür ayarları kaydetmek için &#39;OK&#39; tıklayın. Not: Okuma parametreleri için Tablo 2&#39;ye bakınız. </li></ol></li><li> Seçilen Plate Oku Deneme Sahne <ol><li> Kapağı sağlanması üzerinde, &#39;araç kontrolü&#39; sekmesine tıklayın ve &#39;plaka dışarı&#39; function.Place plaka tutucuya 96-plaka seçin. &#39;Enstrüman kontrolü&#39; sekmesi altında, fonksiyon &#39;plaka&#39; seçin. Seçin plaka sekmesinden &#39;şimdi okuma&#39;. 96 saat sonrası tohumlama için her 24 saat kadar okumak tekrarlayın. </li></ol></li><li> Kullanımı Cep Kont AnaliziHücre Görüntüleyici Yazılımı. <ol><li> Bir görüntüyü analiz etmek, görüntülü plaka üzerinde &#39;veri&#39; sekmesine tıklayın, seçin &#39;resim [GFP 469, 525 + Aydınlık alan]&#39;. iyi görüntülü bir çift tıklayın. </li><li> Yüklenen bir resmin üzerine tıklayın. Seç &#39;analiz&#39; ve montajı tek bir görüntü analiz edilecek seçin. GFP &#39;OK&#39;.Check&#39; Click &#39;sadece kanal ve Tablo 3&#39;te belirtilen olarak ayarlanmış parametreler. Click&#39; görüntülü hücrelere parametreleri uygulamak için BAŞLAT &#39;. </li><li> görüntü başına hücre sayımı belirlemek için kullanılır görüntülü hücrelerin üzerine yerleştirilen hücre sayım maskesi, gözlemleyin. Click Deney boyunca görüntülenmiş her plaka için bu ayarları &#39;değişiklikleri uygulamak&#39; ve korumak. </li><li> Bir kez geri görüntülü plaka, açılan menüden &#39;veri&#39; damla tıklayın ve &#39;hücre sayımı&#39; seçeneğini seçin. Bu kuyu başına toplam hücre sayısını oluşturur. </li><li> daha fazla analiz için o &#39;ihracat&#39; sekmesini tıklayarak bir elektronik tabloya tüm veri ihracatoyuk başına hücre sayımı f. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lane, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+p53%2C+guardian+of+the+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cancer. p53, guardian of the genome.</a> Nature. 358 (6381), 15-16 (1992).</li>
<li>Olivier, M., Hollstein, M., Hainaut, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TP53+mutations+in+human+cancers%3A+origins%2C+consequences%2C+and+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">TP53 mutations in human cancers: origins, consequences, and clinical use.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 2 (1), a001008(2010).</li>
<li>Olivier, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+value+of+somatic+TP53+gene+mutations+in+1%2C794+patients+with+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The clinical value of somatic TP53 gene mutations in 1,794 patients with breast cancer.</a> Clin Cancer Res. 12 (4), 1157-1167 (2006).</li>
<li>Bourdon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53+isoforms+can+regulate+p53+transcriptional+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">p53 isoforms can regulate p53 transcriptional activity.</a> Genes Dev. 19 (18), 2122-2137 (2005).</li>
<li>Avery-Kiejda, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecular+weight+variants+of+p53+are+expressed+in+human+melanoma+cells+and+are+induced+by+the+DNA-damaging+agent+cisplatin%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Small molecular weight variants of p53 are expressed in human melanoma cells and are induced by the DNA-damaging agent cisplatin.</a> Clin Cancer Res. 14 (6), 1659-1668 (2008).</li>
<li>Avery-Kiejda, K. A., Morten, B., Wong-Brown, M. W., Mathe, A., Scott, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+relative+mRNA+expression+of+p53+isoforms+in+breast+cancer+is+associated+with+clinical+features+and+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">The relative mRNA expression of p53 isoforms in breast cancer is associated with clinical features and outcome.</a> Carcinogenesis. 35 (3), 586-596 (2014).</li>
<li>Weber, K., Bartsch, U., Stocking, C., Fehse, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicolor+panel+of+novel+lentiviral+%26%2334%3Bgene+ontology%26%2334%3B+%28LeGO%29+vectors+for+functional+gene+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A multicolor panel of novel lentiviral &#34;gene ontology&#34; (LeGO) vectors for functional gene analysis.</a> Mol Ther. 16 (4), 698-706 (2008).</li>
<li>Riss, T. L., Moravec, R. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiss%2C+TL+%22Cell+Biology%22">Cell Biology</a>. Celis, J. E. , Third Edition, Academic Press. 25-31 (2006).</li>
<li>Ng, K. W., Leong, D. T., Hutmacher, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+challenge+to+measure+cell+proliferation+in+two+and+three+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng%22%5BJournal%5D)">The challenge to measure cell proliferation in two and three dimensions.</a> Tissue Eng. 11 (1-2), 182-191 (2005).</li>
<li>Riss, T. L., Moravec, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+multiple+assay+endpoints+to+investigate+the+effects+of+incubation+time%2C+dose+of+toxin%2C+and+plating+density+in+cell-based+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+Drug+Dev+Technol%22%5BJournal%5D)">Use of multiple assay endpoints to investigate the effects of incubation time, dose of toxin, and plating density in cell-based cytotoxicity assays.</a> Assay Drug Dev Technol. 2 (1), 51-62 (2004).</li>
<li>Butzler, M., Worzella, T., Hungriano, M., Osorio, F., Hanegraaff, I., Cowan, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aButzler%2C+M+%22Automated+cytotoxicity+profiling+using+the+CyBi-FeliX+instrument%2C+cell+health+assays+and+thaw-and-use+cells%22">Automated cytotoxicity profiling using the CyBi-FeliX instrument, cell health assays and thaw-and-use cells</a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://au.promega.com/resources/pubhub/automated-profiling-using-the-cybi-felix-instrument-cell-health-assays-and-thaw-and-use-cells">http://au.promega.com/resources/pubhub/automated-profiling-using-the-cybi-felix-instrument-cell-health-assays-and-thaw-and-use-cells</a> (2014).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CellTiter-Glo+2.0+Assay+Technical+Manual+%23403%22">CellTiter-Glo 2.0 Assay Technical Manual #403</a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.promega.com/~/media/files/resources/protocols/technical%20manuals/101/celltiterglo%202%200%20assay%20protocol.pdf">http://www.promega.com/~/media/files/resources/protocols/technical%20manuals/101/celltiterglo%202%200%20assay%20protocol.pdf</a> (2015).</li>
<li>Banks, P., Brescia, P. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBanks%2C+P+%22Application+Guide%3A+Automated+Digital+Microscopy%22">Application Guide: Automated Digital Microscopy</a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.biotek.com/resources/articles/automated-digital-microscopy.html">http://www.biotek.com/resources/articles/automated-digital-microscopy.html</a> (2015).</li>
<li>Bastidas, O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBastidas%2C+O+%22Cell+Counting+with+Neubauer+Chamber%3A+Basic+Hemocytometer+Usage%22">Cell Counting with Neubauer Chamber: Basic Hemocytometer Usage</a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.celeromics.com/en/resources/Technical%20Notes/cell-article-chamber.php">http://www.celeromics.com/en/resources/Technical%20Notes/cell-article-chamber.php</a> (2016).</li>
<li>Bastidas, O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBastidas%2C+O+%22Technical+Note%3A+Cell+Count+for+Low+Concentration+Samples%0A++%22">Technical Note: Cell Count for Low Concentration Samples
 </a>. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.celeromics.com/en/resources/docs/Articles/Low-concentration-cell-counting.pdf">http://www.celeromics.com/en/resources/docs/Articles/Low-concentration-cell-counting.pdf</a> (2012).</li>
<li>Riss, T. L., Moravec, R., Niles, A. L., et al. Cell Viability Assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRiss%2C+TL+%22Assay+Guidance+Manual%5BInternet%5D%22">Assay Guidance Manual[Internet]</a>. Sittampalam, G. S., Coussens, N. P., Nelson, H., et al. , (2013 May 1 [Updated 2015 Jun 29]) 
 
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065/">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144065/</a> (2013).</li>
<li>Quent, V. M., Loessner, D., Friis, T., Reichert, J. C., Hutmacher, D. W. Discrepancies between metabolic activity and DNA content as tool to assess cell proliferation in cancer research. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aQuent%2C+VM+%22J+Cell+Mol+Med%22">J Cell Mol Med</a>. 14 (4), 1003-1013 (2010).</li>
<li>Crane, J., Mittar, D., Soni, D., McIntyre, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrane%2C+J+%22Cell+Cycle+Analysis+Using+the+BD+BrdU+FITC+Assay+on+the+BD+FACSVerse+System%22">Cell Cycle Analysis Using the BD BrdU FITC Assay on the BD FACSVerse System</a>. , (2013 May 1 [Updated 2015 Jun 29]) 
 
 <a target="_blank" href="https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSVerse_CellCycleAnalysis_AppNote.pdf">https://www.bdbiosciences.com/documents/BD_FACSVerse_CellCycleAnalysis_AppNote.pdf</a> 1-12 (2011).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Bu protokol, kültürlenmiş hücrelerde hücre çoğalmasını ölçmek için üç farklı yöntem incelenmiştir. Her yöntem 96 saat boyunca hücre çoğalmasının tekrarlanabilir ve hassas ölçümler yeteneğine sahip olduğunu ve sonuçlar (Şekil 2 ve 3) test edilen yöntemlerin her karşılaştırılabilirdir. Lüminesans bazlı analiz ve hücre görüntüleme yöntemi Hem 96 saat sonra, hücre çoğalmasında lineer artış gösteren, en güçlü sonuç (Şekil 2B, C). Ayrıca, zamanla hücre görüntüleme transduse v...

Tümör bastıncı gen p53, hücre döngüsünün durdurulması, apoptoz ve yaşlanma 1 de dahil olmak üzere hücresel süreçleri, bir dizi önemli bir düzenleyicidir. Bu genomik stabilite bakımından sorumlu olan, ve bu nedenle, hücre ölümü ve hücre büyümesinin dengesini sağlamak için çok önemlidir. P53 mutasyonlar kanser yaygındır ve kontrolsüz kanseri hücre çoğalması 2 giden p53 etkisizleştirme başlıca nedenidir. İlginç bir şekilde, p53 mutasyonlar diğer mekanizmalar p53 fonksiyonunun kaybının sorumlu olduğunu göstermektedir, meme kanserlerinin 3 yaklaşık% 25&#39;ini oluşturmaktadır. En son keşfedilen p53 izoformları insan kanserlerinde bir dizi fazla sentezlendiği gösterilmiştir ve p53 fonksiyonunu 4,5 modüle edebilirler. P53 izoformu Δ40p53, göğüs kanseri en yüksek şekilde tanımlanan izoform olduğu daha önce gösterilmiştir ve normal komşu Tiss karşılaştırıldığında önemli ölçüde, meme kanseri hücrelerinde yukarı-regüle edildiğiniue 6. Bunu takiben, stabil bir şekilde LEGO&#39;nun-Ig2-Puro + vektörüne (GFP +) 7 kullanarak Δ40p53 aşın sunmak için insan göğüs kanseri hücre çizgisi, MCF-7 kalıt. Bu hücreler yüksek Δ40p53 sentezleme göğüs kanseri hücrelerinin hücre proliferasyonu oranlarını arttırır araştırmak için kullanıldı. In vitro 8,9 kültürlenen hücrelerin hücre çoğalmasını ölçmek için bir çok, doğrudan ve dolaylı yöntem vardır. Bu süre boyunca sürekli ölçümleri, veya nokta tahlilleri 10 olarak da gerçekleştirilebilir. Geleneksel yöntemler, bir hemasitometre kullanarak hücre sayımı olarak, hala yararlıdır. Bu tahlil düşük maliyetli ve hücre sayısının doğrudan ölçüsüdür, ancak sayıları hata ve geniş standart sapma en aza indirmek için büyük hücre sayımları ve çok yetenekli eğitim güvenmek yok. Yüksek verimli biçimleri ile uyumlu ölçümler yapmak için gerekli çukurlu levha tahlillerinin geliştirilmesine yol açmıştır. Bu parlaklık bazlı deneyler measuhücre 11,12 metabolik aktivitesi ile orantılıdır bir lüminesan sinyal göre hücre sayıları yeniden. Daha yakın zamanlarda, yüksek içerik görüntüleme platformları tanıtımı nicel ve nitel fenotipik veri toplama sağlarken hücre çoğalmasını izlemek yeni araçlar için izin verilen ve sistemlerin 13 çeşitli içerir olmuştur. Tüm bu yöntemler sürekli ölçüm ya da bitiş noktası deneyleri yoluyla, hücre büyümesini ölçmek için yollar sağlamak ve her bağlı buna göre tartılır olabilir bütün bunlar duyarlılık açısından, örnek numaraları verimi ve hücre bilgileri ile avantaj ve dezavantajları bir dizi sahip araştırma sorusu üzerine. Bu protokol, hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve çok-yuvalı plaka formatlarında farklı aralıkları kullanılarak, her yöntem ile, in vitro olarak hücre proliferasyonunu ölçmek için üç farklı yöntem tarif eder. Bu protokol hemositometre sayma cha kullanımını karşılaştırmayı amaçladıkmber, 96 saatlik bir süre boyunca, hücre çoğalmasının ölçülmesi bir lüminesans-bazlı hücre canlılığı deneyi ve hücre görüntüleme. Bunu yapmak için, vektör transduse hücreleri (MCF-7-LEGO&#39;nun) büyüme üç farklı hücre yoğunlukları kullanılarak Δ40p53 (MCF-7-Δ40p53) aşırı ifade etmek için dönüştürülmüş hücrelere karşılaştırılmıştır. Hücre çoğalması kadar 96 saat boyunca her 24 saatte ölçülmüştür. Her yöntemin kendine özgü avantajları ve dezavantajları var bulundu ve deney amaca bağlı olarak, her hala çoğalması oranı hakkında bilgi veren değerli bir yöntemdir oldu.

<table><tbody><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Eagle Medium, fenol kırmızısı içermeyen</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>21063-045</td><td>%10 FBS, 200 mM L-glutamin, 2 ve mikro ile desteklenmiş; g / ml insülin ve 1 &mikro; g/ml puromisin</td></tr><tr><td>L-glutamin çözeltisi (100x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin çözeltisi insan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)</td><td>Bovogen Biologicals</td><td>SFBS-F-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Puromisin dihidroklorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9620-10ML</td><td></td></tr><tr><td>%0,5 tripsin-EDTA çözeltisi (10x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15400-054</td><td>DPBS</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salininde (DPBS) 2x'e seyreltin (1x)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>30028-02</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü şişesi, 75 cm2 büyüme alanı</td><td>Greiner Bio-One</td><td>658175</td><td></td></tr><tr><td>Scepter 2.0 Hücre Sayacı</td><td>Merck Millipore</td><td></td><td>Otomatik hücre sayacı</td></tr><tr><td>96 kuyulu çok kuyulu plaka, düz tabanlı</td><td>Nunc</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>Geliştirilmiş Neubauer Hemositometre</td><td>BOECO Almanya</td><td>BOE 01</td><td></td></tr><tr><td>Olympus IX51 ters mikroskop</td><td>Olympus</td><td>IX51</td><td></td></tr><tr><td>CellTiter-Glo 2.0 Testi</td><td>Promega</td><td>G9242</td><td>Lüminesans tabanlı test</td></tr><tr><td>Cytation 3 Hücreli Görüntüleme Çok Modlu Okuyucu</td> Lüminesans, floresan için <td>BioTek</td><td></td><td>Plaka okuyucu ve parlak alan hücre görüntüleme</td></tr><tr><td>Gen5 Veri Analiz Yazılımı</td><td>BioTek</td><td>GEN5</td><td></td></tr></tbody></table>

meme kanseri hücre hatlarında hücre proliferasyonunu belirlenmesi için üç farklı yöntemlerle karşılaştırılması

Comparison of Three Different Methods for Determining Cell Proliferation in Breast Cancer Cell Lines

Hücre proliferasyonunun ölçülmesi, her biri farklı hassasiyet seviyelerine, tekrarlanabilirliğe ve yüksek verimli biçimlendirme ile uyumluluğa sahip bir dizi farklı yöntemle gerçekleştirilebilir. Bu protokol, hücre proliferasyonunu in vitro olarak ölçmek için geleneksel hemositometre sayma odası, nispi hücre sayısının bir ölçüsü olarak canlı hücrelerin metabolik aktivitesindeki değişikliği kullanan lüminesans tabanlı bir test ve bir sayma algoritması kullanarak hücre sayısını ölçen çok modlu bir hücre görüntüleyici dahil olmak üzere üç farklı yöntemin kullanımını açıklar. Her yöntem, hücre proliferasyonunun ölçümü için zaman, maliyet ve yüksek verim uyumluluğu dahil olmak üzere kendi avantajlarını ve dezavantajlarını sunar. Bu protokol, her yöntemin zaman içinde hücre proliferasyonunu doğru bir şekilde ölçebildiğini ve farklı hücresel yoğunluklarda büyümeyi tespit etmek için hassas olduğunu göstermektedir. Ek olarak, bir hücre görüntüleyici kullanılarak hücre proliferasyonunun ölçülmesi, morfoloji, birleşme gibi daha fazla bilgi sağlayabildi ve zaman içinde hücre proliferasyonunun sürekli izlenmesine izin verdi. Sonuç olarak, her yöntem hücre proliferasyonunu ölçme yeteneğine sahiptir, ancak seçilen yöntem kullanıcıya bağlıdır.

kültürlenmiş hücrelerin çoğalmasını,-Δ40p53 MCF-7 hücrelerinin transduse hücre proliferasyon ölçüm farklı yöntemler incelenmesi transdüksiyona MCF-7-LEGO&#39;nun Meme kanseri hücre dizisi ile karşılaştırılmıştır. Karşılaştırıldı üç yöntem - şematik diyagramda özetlenen analizi-alışılmış hemositometre yöntem olup, hücre canlılığı, lüminesans deneyi ve hücre görüntüleme (Şekil 1). Her yöntemin avantajları ve doğru zamanla hücre sayımı ölçmek için dezavantajları vardır, ve ...

Bu protokol, meme kanseri hücre dizilerinde hücre proliferasyonunu analiz etmek için üç farklı yöntemin kullanımını açıklar. Bu, geleneksel hücre sayımı, lüminesans tabanlı hücre canlılığı ve bir hücre görüntüleyici kullanımı yoluyla hücre sayımının kullanımını içerir. Her biri, hücre proliferasyonunun tekrarlanabilir ölçümü için avantajlar sunar.

Meme Kanseri Hücre Hatlarında Hücre Proliferasyonunu belirlenmesi için üç Farklı Yöntemlerle Karşılaştırılması

Measuring cell proliferation can be performed by a number of different methods, each with varying levels of sensitivity, reproducibility and compatibility ...

Bu gösterimin genel amacı, üç farklı hücre proliferasyon analizini karşılaştırmak ve her bir yöntemin avantajları ile dezavantajlarını sunmaktır. Bu yöntem, en uygun hücre proliferasyon yönteminin kullanımı gibi kanser araştırmaları alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Hücre görüntüleyici adımlarının öğrenilmesi zor olduğu için bu yöntemin hazırlık aşaması kritik öneme sahiptir.Uygun hücre sayım maskesini uygulamadan önce hücrelere odaklanmanız gerekir. Bu prosedüre başlamak için, fenol kırmızı içermeyen DMEM kullanarak iki MCF-7 hücre hattını T75 santimetrekare doku kültürü flasklarında üç gün boyunca %75 ila %80 konfluense kadar büyütün. Üç gün sonra, medyumu bir atık konteynerine dökerek hücreleri flasklardan uzaklaştırın.Ardından, hücre tabakasını hemen iki mililitre önceden ısıtılmış iki kat trypsin ile yıkayın. Trypsini aspire edin ve hücre tabakasını inkübatöre yerleştirmeden önce üzerine iki mililitre daha önceden ısıtılmış trypsin ekleyin. Hücreler ayrıldıktan sonra, onları 10 mililitre ısıtılmış taze supplementli DMEM ile yıkayın.Ardından, hücre süspansiyonunu steril bir 15 milliliter tüpe aktarın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca santrifüjleyin. Beş dakika sonra, supernatanı dikkatlice aspire edin ve bertaraf edin. Sonrasında, hücre peletini beş milliliter taze desteklenmiş DMEM içinde yeniden süspanse edin.Hücre sayımı yapmak için, hücre süspansiyonunun 100 microliter kısmını 900 microliter bir kat DPBS içinde seyreltin. Ardından, otomatik hücre sayıcısına yeni bir 60-micrometer sensör yerleştirin. Pistonu basılı tutun ve sensörü seyreltilmiş hücre süspansiyonuna daldırın.Hücre sayacı üzerindeki pistonu yavaşça bırakın. İşlem tamamlandığında sensörü hücre sayacından çıkarın. Hücre büyümesine yer kalması ve üç ila beş gün boyunca proliferasyonun ölçülebilmesi için, hücreleri 96 kuyucuklu bir plakaya yaklaşık %20 konfluens olacak şekilde 100 µL son hacimde ekleyin.Hemositometre kullanarak hücre sayısını belirlemek için hem besiyerini hem de tripsini bir hücre kültürü inkübatöründe, etüvde veya su banyosunda 37 °C'ye kadar önceden ısıtın. Ardından, hücrelerdeki besiyerini aspire ederek bir atık kabına aktarın. Sonrasında, hücreleri 30 µL iki kat konsantrasyonlu tripsin ile bir kez yıkayın ve besiyerini tekrar atık kabına aspire edin.Ardından, hücreleri tekrar 30 µL iki katı tripsin ile yıkayın ve 37 °C'de beş dakika inkübe edin. Hücrelerin yerinden ayrılması için plağın kenine hafifçe vurun. Sonrasında, 50 µL takviye edilmiş DMEM ekleyin ve tek hücre süspansiyonu oluşana kadar hücreleri pipetleyerek karıştırın.Cam lamelini sayım odacıklarının üzerine yerleştirin ve lamel kenarları ile helositometre arasında Newton kırınım halkaları görülene kadar sabitleyin. Ardından, 20 µL hücre süspansiyonunu lamelin altına nazikçe pipetleyin ve sayım odacığının kapiler hareketle dolmasını sağlayın. Sonrasında, sayım odacıklarını 10x büyütmede ızgara düzeninde görüntüleyin.Bu prosedürde, lüminesans reaktifini 22 °C'lik bir su banyosunda 30 dakika boyunca çözdürün. Homojen bir karışım elde etmek için şişeyi nazikçe ters çevirerek karıştırın. Ardından, ekilmiş hücrelerin bulunduğu bir plakayı oda sıcaklığında 30 dakika boyunca dengeleyin.Ardından, her kuyucuğa 100 µL lüminesans reaktifi ekleyin. İçeriği orbital çalkalayıcıda iki dakika boyunca karıştırın. Daha sonra, plakayı oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübe edin.Çok modlu plaka okuyucu yazılımını kullanarak bir lüminesans deneyi kurmak için, çok modlu plaka okuyucuyu açın ve yazılımı başlatın. Görev Yöneticisi'nde (Task Manager) Deneyler (Experiments) ve Yeni Oluştur (Create New) seçeneklerini seçin. Ardından, yan araç çubuğundan Dosya'yı (File) seçin ve Protokol (Protocol) sekmesi altından Prosedür'ü (Procedure) seçin.Ardından, plaka tipi olarak Greiner 96 düz taban seçeneğini seçin ve Kapak Kullan (Use Lid) kutucuğunu işaretleyin. Okuma yöntemi (Read method) kutusu altındaki Okuma (Read) işlemini seçin. Daha sonra, tespit yöntemi olarak Lüminesans'ı (Luminescence) seçin ve Tamam'a tıklayın. Okuma Adımı (Read Step) kutusunda, Tam Plaka (Full Plate) sekmesi altından taranacak kuyucukları seçin ve boş kuyucuk olarak görev yapacak kuyucukları belirleyin.Filtre Setini Boş Filtre (Empty Filter) olarak ayarlayın. Kazancı (Gain) 135'e, Entegrasyon Süresini kuyuk başına 5 saniyeye ve Okuma Yüksekliğini 6,5 milimetreye ayarlayın. Lüminesans okuması ayarlarını kaydetmek için Tamam'a tıklayın.Lüminesans okuması gerçekleştirmek için, Instrument Control sekmesini seçerek plaka tutucuyu dışarı çıkarın ve Plate Out seçeneğine tıklayın. Kapak kapalı olduğundan emin olarak 96 kuyucuklu plakayı plaka tutucuya yerleştirin. Instrument Control sekmesi altındaki Plate In seçeneğine tıklayarak plaka tutucuyu kapatın.Ardından, lüminesans okuması gerçekleştirmek için araç çubuğundaki Şimdi Oku (Read Now) düğmesine tıklayın. Bundan sonra, her bir kuyucuk için RLU ölçümlerini daha ileri analizler yapmak üzere bir hesap çizelgesine aktarın. Bir hücre görüntüleme deneyi kurmak için çok modlu hücre görüntüleme cihazını açın ve yazılımı başlatın.Görev Yöneticisi'nde, Deneyler sekmesini ve Yeni Oluştur'u seçin. Dosya araç çubuğunda, önce Protokol sekmesine, ardından Prosedür sekmesine tıklayın. Sıcaklığı Ayarla işlemini seçin.İnkübatörü Açık konuma getirin ve Sıcaklığı 37 °C olarak ayarlayın. Ön Isıtma seçeneğini işaretleyin, ardından ayarları kaydetmek için Tamam'a tıklayın. Sonrasında, Okuma işlemini seçin.Saptama yöntemi olarak Image seçeneğine tıklayın. Ardından, Endpoint/Kinetic okuma tipini ve Filters optik tipini seçip OK butonuna tıklayın. Sonrasında Full Plate sekmesine tıklayarak plakada görüntülenmesi istenen kuyucukları seçin. Ayarları kaydetmek için OK butonuna tıklayın.Şimdi, Objectives açılır menü seçeneğinden 2,5x objektifini seçin. Channels sekmesi altında, GFP 469,525 ve Bright Field seçeneklerini belirleyin. Her iki kanal için de Auto Exposure seçeneğini işaretleyin ve otomatik pozlama kuyucuğunu seçin.Otomatik odaklama ayarlarını belirlemek için Seçenekler'e tıklayın. Otomatik odaklama seçenekleri için Tarama yöntemini ve ardından otomatik odaklamayı seçin. Ayarları kaydetmek için Tamam'a tıklayın.Ardından, kuyucuk merkezinden olan yatay ve dikey ofset değerlerini sıfıra ayarlayın. Her kuyucuk için üç çarpı iki montaj düzeninde birden fazla görüntü taramayı seçin. Daha sonra, prosedür ayarlarını kaydetmek için Tamam'a tıklayın.Seçili plaka üzerindeki deneyi okumak için Instrument Control sekmesine tıklayın ve Plate Out işlevini seçin. Kapak kapalı olduğundan emin olarak, 96 kuyucuklu plakayı plaka tutucuya yerleştirin. Instrument Control sekmesi altında, Plate In işlevini seçin.Ardından, plaka sekmesinden Şimdi Oku (Read Now) seçeneğini belirleyin ve ekimden sonra 96 saate kadar her 24 saatte bir okumayı tekrarlayın. Bir görüntüyü analiz etmek için, görüntülenen plaka üzerindeki Veri (Data) sekmesine tıklayın ve GFP 469, 525 artı Aydınlık Alan (Bright Field) Resmini seçin. Daha sonra, görüntülenen kuyucuğa çift tıklayın.Şimdi, yüklü bir görüntüye tıklayın. Analyze seçeneğini seçin ve ardından montajdaki analiz edilecek tek görüntüyü seçin. Sonrasında, OK düğmesine tıklayın. Ardından, yalnızca GFP kanalını işaretleyin ve parametreleri Tablo 3'te belirtildiği şekilde ayarlayın.Ardından, parametreleri görüntülenen hücrelere uygulamak için Start'a tıklayın. Görüntü başına hücre sayısını belirlemek için kullanılan ve görüntülenen hücrelerin üzerine yerleştirilen hücre sayım maskesini gözlemleyin. Değişiklikleri Uygula'ya tıklayın ve deney boyunca görüntülenen her plaka için bu ayarları koruyun.Bu şekilde, MCF-7-LeGO hücreleri ve MCF-7-delta 40p53 hücrelerinde hücre proliferasyonunu ölçmek için incelenen farklı yöntemler arasındaki korelatif ilişkileri karşılaştırmak amacıyla lineer regresyon analizi gerçekleştirilmiştir. Farklı hücre proliferasyonu ölçüm yöntemleri arasındaki anlamlılık belirlenmiş ve Pearson korelasyon katsayısı hesaplanmıştır. En güçlü korelasyon, lüminesan tabanlı analiz ile hücre imajlama cihazının karşılaştırılması arasında gözlemlenmiştir.Burada, hücreler yaklaşık %100 konfluense ulaşana kadar her 24 saatte bir hücre görüntüleyici kullanılarak yakalanan GFP pozitif MCF-7-LeGO ve MCF-7-delta 40p53 meme kanseri hücrelerinin temsili görüntüleri gösterilmektedir. Bu yöntem, hücre büyümesinin birkaç gün boyunca görsel olarak izlenebilmesi ve farklı hücre hatları arasındaki hücre boyutu ile hücre morfolojisinin karşılaştırılabilmesi dahil olmak üzere faydalı hücresel bilgiler sağlar. Test edilen her bir yöntemin avantaj ve dezavantajlarının özeti burada gösterilmiş olup, bu özet yöntemlerin her birinin çok yönlülüğünü ortaya koymakta ve okuyucuların en uygun yöntemi seçmelerine yardımcı olacaktır.Bu videoyu izledikten sonra, üç farklı hücre proliferasyon analizi hakkında iyi bir bilgiye sahip olmalı ve hangisinin kendi deneysel tasarımınıza en uygun olduğunu belirleyebilmelisiniz.

comparison-three-different-methods-for-determining-cell-proliferation

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

, Hücrelerden oluşan bir nüfus hücre döngüsü konumunun belirlenmesi, ya da sinyalleri çoğalması nasıl etkilediğini anlamak, bu protokolü kullanarak flow sitometri ile kolayca ölçülebilir. Biz hücreleri boyama ve hücre döngüsü konumlarını miktarının belirlenmesi için basit bir deneysel yaklaşım raporu.

Memeli Hücreler, Hücre Döngüsü Pozisyon Analizi

Immün hücre fonksiyonu ve proliferasyonu izlemek için hücre izleme boyalar başarıyla kullanımı pek çok kritik adımlar içerir. Biz yöntemleri açıklanmaktadır: 1) membran boyalarla parlak, homojen, tekrarlanabilir etiket-ing almak; 2) florokromlar ve veri toplama şartlarının belirlenmesi ve 3) boya seyreltme esas hücre çoğalması ölçmek için bir model seçerek.

Cep Takip Boyalar kullanarak Hücre Bölünmesi İzleme için optimize Boyama ve Çoğalma Modelleme Yöntemleri

Bu videoda, bir insan kemik dokusu eksplant model sisteminde kanser hücresi proliferasyonunu ve kolonizasyonunu ölçmek için femur kemik eksplantlarına bitişik meme kanseri hücrelerinin kültürlenmesi açıklanmaktadır.

BC Hücrelerinin Birlikte Kültürlenmesi: Kanser Hücresi Proliferasyonunu İncelemek için Meme Kanseri Hücrelerinin Kemik Parçalarıyla Kültürlenmesi

Bu makalede, meme kanseri hücre istilasını ölçmek için üç boyutlu (3D) tahlillerin kullanımı için ayrıntılı yöntemler sağlar. Özellikle, biz hücreleri istila oluşur membran bütünlüğünün kaybı incelemek için bu tür deneyleri kurmak için gerekli prosedürleri, ölçümlerini ve veri analizi gibi yöntemleri tartışmak.

Üç boyutlu (3D) Modeli Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Kantitasyonu

Biyoloji lisans öğrencileri için hayvan hücre kültürünü kullanarak ileri hücresel ve moleküler kavramları araştıran uygun bir laboratuvar modülü açıklanmıştır. Öğrenciler, kemoterapi ajanlarına maruz kalarak bir meme kanseri hücre modelini büyütür, karakterize eder ve manipüle eder. Hücre canlılığı, hem standart hem de yeni bir yöntem kullanılarak hücre sayımı yoluyla test edilir.

Çekirdek Biyoloji Kavramları öğretmek için Fare Meme Tümör Hücreleri kullanma: Basit Lab Modülü

Çevredeki normal dokuların invazyonu, malign tümörlerin tanımlayıcı bir özelliğidir. Burada, bir dizi ileri insan kanseri modeliyle örneklenmiş doğal bir 3D biyomatrise basit, yarı otomatik bir mikro plaka istila testi sunuyoruz.

Üç boyutlu (3D) Tümör Sfero Yayılması deneyindeki

Oksijen ve besin sağlamak için bir perfüzyon biyoreaktör sistemi kullanılarak kültürlenebilen 3D meme kanseri vekilleri oluşturmak için bir yöntem gösteriyoruz. Büyümeyi takiben, vekiller sabitlenir ve ilgilenilen parametrelerin değerlendirilmesi için parafine işlenir. Böyle bir parametrenin, hücre yoğunluğunun değerlendirilmesi açıklanmaktadır.

Hazırlama ve Analizler<em&gt; İn Vitro</em&gt; Üç Boyutlu Meme Kanseri Suretler

Burada, 2D kültürden çok daha iyi in vivo tümörlerin fiziko-kimyasal degradelerini taklit eden 3D kanser hücresi kürelerinin içinde canlanıyor ve ölümü değerlendirmek için birkaç basit yöntem sunuyoruz. Bu nedenle, küroid modeli, kanser ilaç etkinliğinin değerlendirilmesi için gelişmiş çeviri ile in vivo koşullara izin verir.

Hücre viability ve ölüm kanser hücrelerinin 3D Küroid kültürlerde değerlendirilmesi

Bu protokol, insan meme hücrelerinin dönüşümünü değerlendirmek için deneysel in vitro araçlar sağlar. Hücre çoğalma hızının takibi, ankraj-bağımsız büyüme kapasitesi ve hücre soylarının 3Boyutlu kültürlerde bazal membran matrisi ile dağılımı nın detaylı adımları tanımlanmıştır.

İnsan Meme Epitel Hücrelerinde Onkojenik Dönüşümün İn Vitro Değerlendirilmesi

Bu çalışma, gerçek zamanlı izleme ile üç in vitro model kullanarak, yaşlanan HeLa hücrelerinden yaşlanmayla ilişkili salgı fenotipi (SASP) faktörlerinin yaşlanmayan HeLa hücreleri üzerindeki proliferatif etkilerini değerlendirmektedir. Kanserde hücre-hücre etkileşimlerini daha iyi anlamak için her yöntemin avantajları ve sınırlamaları sistematik olarak karşılaştırıldı.

SASP Faktörlerinin Kanser Hücrelerinin Proliferasyonu Üzerindeki Etkisinin Üç Farklı Metodolojinin Karşılaştırmalı Analizi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Keşfedin meme kanseri hücre hatlarında hücre proliferasyonunu belirlemek için üç farklı yöntemin karşılaştırılmasını. Geleneksel sayım, luminesans ve hücre görüntüleyici yöntemlerinin avantajlarını öğrenin.

Meme Kanseri Hücre Hatlarında Hücre Proliferasyonunu belirlenmesi için üç Farklı Yöntemlerle Karşılaştırılması

Daha fazla video keşfet