Name: Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 4 s
Description: Öğrenin manyeto-floresan nanosensörlerle E.coli O157:H7 gibi gıda kaynaklı patojenlerin hızlı tespiti için çift modalite yaklaşımını. Bu yöntem düşük ve yüksek konsantrasyonlarda hassas bakteri tespiti sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser K-INBRE P20GM103418, Kansas soya Komisyonu (KSC/PSU 1663), ACS PRF 56629-UNI7 ve PSU polimer kimya başlangıç Fonu, tüm SS tarafından desteklenmektedir. Biz Üniversitesi videoları çekiyor, Bay Jacob Anselmi, video ile onun en iyi çalışma için teşekkür ederim. Biz de Bay Roger Heckert ve Bayan Katha Heckert cömert destekleri araştırma için teşekkür ederiz.

1. sentez ve çok parametrik Manyeto-floresan Nanosensors (MFnS) Functionalization.
<ol><li>Superparamagnetic demir oksit sentezi nano tanecikleri (IONPs) <ol><li>IONP sentezi için hazırlamak için aşağıdaki 3 çözümleri hazırlamak: çözüm 1: FeCl 3 (0.70 g) ve FeCl 2 H 2 O içinde (2 mL), çözüm 2: NH 4 OH (2.0 mL, 13.4 M) H 2 O (15 mL) ve çözüm 3: polyacrylic asit (0.855 g) H 2 O (5 mL).</li>
		<li>2 M hidroklorik asit (HCl) 90 µL çözüm 1'e ve daha sonra hemen vortexing 875 devirde iken çözüm 2 ile karıştırın. O zaman çözüm 3 ekleyin. Vortexing 60 dakika süreyle devam</li>
		<li>Santrifüj için 1,620 x g., 20 dk santrifüj kapasitesi süpernatant 2.880 x g., 20 dk</li>
		<li>Son süpernatant ile diyaliz arındırmak. Süpernatant bir Diyaliz Ekle (MWCO 6 &#8722; 8 K) ve fosfat tamponlu tuz (PBS) içeren bir ölçek yerleştirin (pH 7.4 =) ve spin bar. Her 2-3 h. ile taze tampon yerine 12 h için emmek izin</li>
	</ol></li> <li>IONPs yüzey için hedef özgü antikorların konjugasyon <ol><li>Aşağıdaki dört çözümleri hazırlamak: çözüm A: 5 mg 1-etil - 3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hidroklorid (EDC) 250 µL MES [2-(N- morpholino) ethanesulfonic asit] arabellek (0.1 M, pH 6.8 =), çözüm B: 3 mg, N-Hydroxysuccinimide (NHS) 250 µL MES arabelleği (0.1 M, pH 6.8 =), Igg1, E. coli mAb fosfat tamponlu tuz (PBS) (pH 7,4) 225 µL içinde çözüm C: 5 µg ve IONP çözüm D: 4 mL (5.0 mmol) PBS (pH 7,4) 1 ml.</li>
		<li>Ekleyin 2-(N-Morpholino) ethanesulfonic asit (MES) arabellek eriyik-e doğru A, o zaman hemen çözüm eklemek A çözüm D 15 içinde küçük artışlarla s, çözüm karıştırma için her eklenmesinden sonra ters çevirme.</li>
		<li>Hemen çözüm B çözüm D için küçük aralıklarla üç dakikalık bir süre içinde eklemek için başlayın. Her eklenmesinden sonra çözüm ters çevirme tarafından Mix.</li>
		<li>5 µL artırımlarıyla çözüm çözüm C eklemek çözüm karıştırma için her eklenmesinden sonra ters çevirme.</li>
		<li>Oda sıcaklığında 3 h için devam etmek ve o zaman kuluçka gecede 4 ° C'de devam etmek tepki izin.</li>
		<li>Arındırmak manyetik sütun PBS kullanma yolu ile elde edilen Ab Birleşik IONPs (pH 7.4, final [Fe] = = 3,5 mmol) herhangi bir çekimsiz antikorlar kaldırmak için.
		<ol><li>Yıkama manyetik sütun PBS (1 mL) ile. Sütun için manyetik plaka ekleyin ve IONP çözüm ekleyin.</li>
			<li>Manyetik sütun PBS (1 mL) ile tekrar yıkayın. Manyetik sütun Manyetik plaka kaldırın. PBS sütununu ekleyin ve çözüm toplamak. Mağaza 4 ° C'de</li></ol></li></ol></li> <li>Floresan 1,1 kapsülleme &#39; - Dioctadecyl - 3,3,3 &#39;, 3 &#39;-Tetramethylindocarbocyanine perklorat (dıı) boya kullanarak antikor Birleşik IONPs polyacrylic asit (PAA) kaplama içine bir Solvent Difüzyon yöntemi.
	<ol><li>IONPs 4 mL için dropwise 2.0 ekleyin dıı boya (2 mmol) 100 µL DMSO, sürekli 1100 devir / dakikada karıştırma ile µL.</li>
		<li>[Fe] son demir konsantrasyonu ile son bir MFnS çözüm oluşturma PBS karşı elde edilen çözüm (MWCO 6-8 KDa, 12 h) diyaliz 2 mmol =.</li>
	</ol></li> <li>MFnS karakterizasyonu <ol><li>spektrofotometrik analiz için bir plaka okuyucu ile floresan emisyon 595, kapsüllenmiş dıı boya algılamak için kullanın nM.</li>
		<li>Dinamik ışık saçılma <ol><li>ortalama boyutu ve MFnS yüzey ücret belirlemek için zetasizer MFnS çözüm örneği yerleştirin. 
			Not: Burada, ortalama boyutu ve fonksiyonel MFnS yüzey ücret 77.09 bulundu nm ve-22.3 mV, sırasıyla.</li>
		</ol></li></ol></li></ol> 2. Bakteriyel Culturing ve hisse senedi çözüm hazırlık <ol><li>bakteri kültürü <ol><li>besin suyu 1 ml dondurularak Pelet (E. coli O157: H7) hidrat ve bir ek 5 mL suyu ekleyin.</li>
		<li>Bu çözümün bir agar plaka ve çizgi uygulamak 100 µL kuluçka için 24 h 37 ° C'de ve ardından bir steril aşılama döngü kullanarak</li>
		<li>Sonra 24 h, izole bir koloni agar plaka seçin ve bir 15 mL kültür suyu ekleyin. Süre optik yoğunluk değeri izleme için 4-6 h, 37 ° C'de kuluçkaya (600 Absorbans nm).</li>
		<li>Bir optik yoğunluk değerini 0.1 alındıktan sonra kültür durdurmak ve seri dilutions gerçekleştirmek.</li>
	</ol></li> <li>Seri dilutions <ol><li>ekleyin 900 µL sekiz steril microcentrifuge tüpler için besin suyu.</li>
		<li>Ekle 100 µL bakteriyel süspansiyon ilk tüp (seyreltme 10 -1).</li>
		<li>Al 100 µL ilk tüp ve ikinci 10 -2 seyreltme elde etmek için ekleyin. Bu model 10 -8 son bir seyreltme ile biten kalan tüpler için devam.</li>
		<li>Transfer 100 µL Ağar kaplamalar ayrı ve 37 24 h için kuluçkaya her tüp ° C.</li>
		<li>Ertesi gün, her tabağa birimleri (CFUs) oluşturan colony saymak. ~ 100 CFUs ile kalıbı seçin. Karşılık gelen dilutions daha fazla deneyler için kullanın (100 µL ~ 100 CFUs =). 
		Not: Burada ~ 100 CFUs sonuçlanan 10 -6 seyreltme oldu.</li>
	</ol></li></ol> 3. MFnS kullanarak hızlı algılama E. coli O157: H7 <ol><li>1-100 arasında değişmektedir CFU sonuçlanan 10 -6 bakteriyel hisse senedi, miktarda artan çeşitli PBS Çözümleri (1 X, pH 7.4, 300 µL) Spike. MFnS tutarlı bir miktar eklemek (100 µL) Bu çözümler için.</li>
	<li>Sadece PBS (1 X, pH 7.4, 300 µL) içeren bir temel çözüm oluşturmak ve MFnS (100 µL).</li>
	<li>37 ° C'de 30 dk için çözümler kuluçkaya ve sonra oda sıcaklığında soğumaya izin.</li>
	<li>Manyetik relaxometer (0,47 Tesla) ve kayıt değişiklikleri gevşeme zamanlarda (T2) her çözümde CFUs göre transfer bireysel çözümler.
	<ol>T2 değerlerde değişiklikleri kaydetmek, sadece PBS ve MFnS içeren temel çözüm T2 değerini ölçerek başlamak için <li>.
		<ol><li>Yer manyetik çözümde relaxometer. İlgili yazılım açık, seçin &#34; T2 gevşeme &#34; ayarı ve basın &#34; ölçü birimi. &#34;</li></ol></li> <li>temel T2, topluluğu takip çeşitli ile çivili ek çözümler T2 değerini ölçmek bakteri konsantrasyonları. 
		Not: Taban çizgisi çivili T2 düşülen T2 T2 değişiklik eşdeğerdir.</li>
	</ol></li> <li>Manyetik relaxometer örnekleri kaldırmak ve 10 dakika süreyle 2880 x g de tüpler santrifüj kapasitesi</li>
	<li>Süpernatant dikkatle boşaltmak ve PBS (1 X, pH 7,4) 100 µL içinde bakteri granül resuspend.</li>
	<li>Eklemek 80 µL, her resuspension bir 96-şey plaka ve kayıt Floresans Koyulukları 595 nM. 
	Not: Test sonuçları bölümünde açıklandığı gibi göl su, süt ve diğerleri dahil olmak üzere farklı çözücüler kullanılarak tekrar edilebilir</li></ol>

<ol><li>Law, J. W., Ab Mutalib, N. S., Chan, K. G., Lee, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+methods+for+the+detection+of+foodborne+bacterial+pathogens%3A+principles%2C+applications%2C+advantages+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid methods for the detection of foodborne bacterial pathogens: principles, applications, advantages and limitations.</a> Front Microbiol. 5, 770(2014).</li>
<li>Pandey, P. K., Kass, P. H., Soupir, M. L., Biswas, S., Singh, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contamination+of+water+resources+by+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22AMB+Express%22%5BJournal%5D)">Contamination of water resources by pathogenic bacteria.</a> AMB Express. 4, 51(2014).</li>
<li>Zhao, X., Lin, C. W., Wang, J., Oh, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+rapid+detection+methods+for+foodborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Advances in rapid detection methods for foodborne pathogens.</a> J Microbiol Biotechnol. 24 (3), 297-312 (2014).</li>
<li>Heithoff, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraspecies+variation+in+the+emergence+of+hyperinfectious+bacterial+strains+in+nature%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Intraspecies variation in the emergence of hyperinfectious bacterial strains in nature.</a> PLoS Pathog. 8 (4), e1002647(2012).</li>
<li>Ishii, S., Sadowsky, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escherichia+coli+in+the+Environment%3A+Implications+for+Water+Quality+and+Human+Health%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Environ%22%5BJournal%5D)">Escherichia coli in the Environment: Implications for Water Quality and Human Health.</a> Microbes Environ. 23 (2), 101-108 (2008).</li>
<li>Chiou, C. S., Hsu, S. Y., Chiu, S. I., Wang, T. K., Chao, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+parahaemolyticus+serovar+O3%3AK6+as+cause+of+unusually+high+incidence+of+food-borne+disease+outbreaks+in+Taiwan+from+1996+to+1999%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio parahaemolyticus serovar O3:K6 as cause of unusually high incidence of food-borne disease outbreaks in Taiwan from 1996 to 1999.</a> J Clin Microbiol. 38 (12), 4621-4625 (2000).</li>
<li>Zhou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCR+methods+for+the+rapid+detection+and+identification+of+four+pathogenic+Legionella+spp.+and+two+Legionella+pneumophila+subspecies+based+on+the+gene+amplification+of+gyrB%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">PCR methods for the rapid detection and identification of four pathogenic Legionella spp. and two Legionella pneumophila subspecies based on the gene amplification of gyrB.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 91 (3), 777-787 (2011).</li>
<li>Chen, J., Tang, J., Liu, J., Cai, Z., Bai, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+a+multiplex+PCR+for+simultaneous+detection+of+five+foodborne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of a multiplex PCR for simultaneous detection of five foodborne pathogens.</a> J Appl Microbiol. 112 (4), 823-830 (2012).</li>
<li>LeBlanc, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Switching+gears+for+an+influenza+pandemic%3A+validation+of+a+duplex+reverse+transcriptase+PCR+assay+for+simultaneous+detection+and+confirmatory+identification+of+pandemic+%28H1N1%29+2009+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Switching gears for an influenza pandemic: validation of a duplex reverse transcriptase PCR assay for simultaneous detection and confirmatory identification of pandemic (H1N1) 2009 influenza virus.</a> J Clin Microbiol. 47 (12), 3805-3813 (2009).</li>
<li>Mahony, J. B., Chong, S., Luinstra, K., Petrich, A., Smieja, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+bead-based+multiplex+PCR+assay+for+combined+subtyping+and+oseltamivir+resistance+genotyping+%28H275Y%29+of+seasonal+and+pandemic+H1N1+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Virol%22%5BJournal%5D)">Development of a novel bead-based multiplex PCR assay for combined subtyping and oseltamivir resistance genotyping (H275Y) of seasonal and pandemic H1N1 influenza A viruses.</a> J Clin Virol. 49 (4), 277-282 (2010).</li>
<li>Alvarez, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+recognition+of+influenza+A%2FH1N1%2F2009+antibodies+in+human+serum%3A+a+simple+virus-free+ELISA+method%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Specific recognition of influenza A/H1N1/2009 antibodies in human serum: a simple virus-free ELISA method.</a> PLoS One. 5 (4), e10176(2010).</li>
<li>Huang, C. J., Dostalek, J., Sessitsch, A., Knoll, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-range+surface+plasmon-enhanced+fluorescence+spectroscopy+biosensor+for+ultrasensitive+detection+of+E.+coli+O157%3AH7%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Long-range surface plasmon-enhanced fluorescence spectroscopy biosensor for ultrasensitive detection of E. coli O157:H7.</a> Anal Chem. 83 (3), 674-677 (2011).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+visual+detection+of+highly+pathogenic+Streptococcus+suis+serotype+2+isolates+by+use+of+loop-mediated+isothermal+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid visual detection of highly pathogenic Streptococcus suis serotype 2 isolates by use of loop-mediated isothermal amplification.</a> J Clin Microbiol. 51 (10), 3250-3256 (2013).</li>
<li>Han, F., Wang, F., Ge, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+potentially+virulent+Vibrio+vulnificus+strains+in+raw+oysters+by+quantitative+loop-mediated+isothermal+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detecting potentially virulent Vibrio vulnificus strains in raw oysters by quantitative loop-mediated isothermal amplification.</a> Appl Environ Microbiol. 77 (8), 2589-2595 (2011).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+detection+of+pathogenic+bacteria+and+screening+of+phage-derived+peptides+using+microcantilevers%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Rapid detection of pathogenic bacteria and screening of phage-derived peptides using microcantilevers.</a> Anal Chem. 86 (3), 1671-1678 (2014).</li>
<li>Banerjee, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+Magneto-fluorescent+Nanosensors+for+the+Ultrasensitive+Detection+of+Escherichia+coli+O157%3AH7%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Multiparametric Magneto-fluorescent Nanosensors for the Ultrasensitive Detection of Escherichia coli O157:H7.</a> ACS Infect Dis. 2 (10), 667-673 (2016).</li>
<li>Shelby, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+magnetic+relaxation+nanosensors%3A+an+unparalleled+%26%2334%3Bspin%26%2334%3B+on+influenza+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Novel magnetic relaxation nanosensors: an unparalleled &#34;spin&#34; on influenza diagnosis.</a> Nanoscale. 8, 19605-19613 (2016).</li>
<li>Bui, M. P., Ahmed, S., Abbas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-Digit+Pathogen+and+Attomolar+Detection+with+the+Naked+Eye+Using+Liposome-Amplified+Plasmonic+Immunoassay%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Single-Digit Pathogen and Attomolar Detection with the Naked Eye Using Liposome-Amplified Plasmonic Immunoassay.</a> Nano Lett. 15 (9), 6239-6246 (2015).</li>
<li>Farnleitner, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+enzymatic+detection+of+Escherichia+coli+contamination+in+polluted+river+water%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid enzymatic detection of Escherichia coli contamination in polluted river water.</a> Lett Appl Microbiol. 33 (3), 246-250 (2001).</li>
<li>Huh, Y. S., Lowe, A. J., Strickland, A. D., Batt, C. A., Erickson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surface-enhanced+Raman+scattering+based+ligase+detection+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Chem+Soc%22%5BJournal%5D)">Surface-enhanced Raman scattering based ligase detection reaction.</a> J Am Chem Soc. 131 (6), 2208-2213 (2009).</li>
<li>Jayamohan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+sensitive+bacteria+quantification+using+immunomagnetic+separation+and+electrochemical+detection+of+guanine-labeled+secondary+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Highly sensitive bacteria quantification using immunomagnetic separation and electrochemical detection of guanine-labeled secondary beads.</a> Sensors (Basel). 15 (5), 12034-12052 (2015).</li>
<li>Kaittanis, C., Naser, S. A., Perez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step%2C+nanoparticle-mediated+bacterial+detection+with+magnetic+relaxation%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">One-step, nanoparticle-mediated bacterial detection with magnetic relaxation.</a> Nano Lett. 7 (2), 380-383 (2007).</li>
<li>Meeker, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+Photothermal+and+Antibiotic+Killing+of+Biofilm-Associated+Staphylococcus+aureus+Using+Targeted+Antibiotic-Loaded+Gold+Nanoconstructs%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Synergistic Photothermal and Antibiotic Killing of Biofilm-Associated Staphylococcus aureus Using Targeted Antibiotic-Loaded Gold Nanoconstructs.</a> ACS Infect Dis. 2 (4), 241-250 (2016).</li>
<li>Wang, Y., Ye, Z., Si, C., Ying, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subtractive+inhibition+assay+for+the+detection+of+E.+coli+O157%3AH7+using+surface+plasmon+resonance%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Subtractive inhibition assay for the detection of E. coli O157:H7 using surface plasmon resonance.</a> Sensors (Basel). 11 (3), 2728-2739 (2011).</li>
<li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+bioassay+for+single+bacterial+cell+quantitation+using+bioconjugated+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A rapid bioassay for single bacterial cell quantitation using bioconjugated nanoparticles.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (42), 15027-15032 (2004).</li>
</ol>

Bu nanoteknoloji gösterdiği uygulama henüz FDA tarafından onaylanmış değil.

Bu iletişim kuralı basit tamamen işlevsel MFnS üretmek için tasarlanmış mümkün olduğunca. Ancak, değişiklik Protokolü'nün kullanıcının nihai hedef bağlı olarak yararlı olabilecek çok önemli noktalar vardır. Örneğin, farklı antikor kullanımı birçok diğer patojenleri hedefleme için izin verecek. Ayrıca, bu iletişim kuralını molekülleri hedefleme olarak antikor kullanımı sınırlı değildir. Konak hücre reseptörleri gibi hedef patojenler için özel bağlayıcı ilgi olan herhangi bir molekül molekü...

Bakteriyel kontaminasyon hem de kalıcı geçtiği ticari gıda üretilen ve su kaynaklarının giderek hızlı ve spesifik tanı platformları için bir ihtiyaç yarattı. 1 , 2 , Salmonella, Staphylococcus, Listeria, Vibrio, Shigella, Bacillus ve Escherichia cins daha yaygın bakteriyel kirletici için yiyecek ve su kirlenmesi sorumlu bazılarıdır. 3 , 4 kez bakteriyel kontaminasyon Bu patojenler tarafından ateş, kolera, gastroenterit ve ishal gibi belirtiler olur. 4 su kaynaklarının kirlenme kez yeterince filtrelenmiş su erişimi olmayan topluluklar üzerinde ciddi ve olumsuz etkileri vardır ve gıda kontaminasyonu hastalıklar ve ürün geri çekme çabaları çok sayıda için açmıştır. 5 , 6
Bakteriyel kirlenme tarafından neden olduğu hastalıkların oluşumunu azaltmak için bir dizi hangi su ve yiyecek verimli satış veya tüketim önce taranabilir yöntemleri geliştirmek için çaba olmuştur. PCR,1,7,8,9,10 ELISA,11,12 döngü-aracılı izotermal amplifikasyon () gibi 3 teknikleri LAMBA),13,14 diğerleri arasında15,16,17,18,19,20,21, 22,23,24 son zamanlarda çeşitli patojenler tespiti için kullanılır. Geleneksel bakteriyel kültür yöntemleri ile karşılaştırıldığında, bu tekniklerin özgüllük ve zaman açısından çok daha verimli. Ancak, bu teknikler hala yanlış pozitif ve negatif, karmaşık prosedürleri ve maliyet ile mücadele. 1 , 3 , 25 multiparametric Manyeto-floresan nanosensors (MFnS) bakteriyel algılama için alternatif bir yöntem olarak önerilen bu nedenle içindir.
Bu nanosensors benzersiz olarak birlikte manyetik gevşeme ve floresan yöntemleri, hızlı ve doğru bir çift-algılama platformu için izin eşleyin. E. coli O157: H7 örnek kirletici kullanarak, MFnS dakika içinde olduğu kadar az 1 CFU algılama yeteneğini gösterilmiştir. Patojen özel antikorlar özgüllüğü artırmak için kullanılır ve algılama ve miktar her iki düşük ve yüksek kirlilik aralıklardaki bakteriyel kirletici için manyetik ve floresan modaliteleri kombinasyonu sağlar. 16 bakteriyel kontaminasyon durumunda patojen özgü antikorların hedefleme yetenekleri nedeniyle bakteri çevresinde nanosensors swarm. Manyetik nanosensors ile bakteri arasındaki manyetik demir çekirdekli ve çevresindeki su proton arasındaki etkileşimi sınırlar. Bu artış T2 gevşeme zamanlarda manyetik bir relaxometer tarafından kaydedildiği şekilde neden olur. Çözüm bakterilerde konsantrasyon yükselir gibi bakteri, alt T2 değerleri kaynaklanan artan sayıda nanosensors dağıtmak. Tersine, Floresans emisyon nanosensors patojen için doğrudan bağlı artan sayıda nedeniyle bakteri konsantrasyonu ile orantılı artar. Santrifüjü örnekleri ve bakteriyel Pelet yalıtım sadece doğrudan herhangi bir serbest yüzer nanosensors kaldırılması ve doğrudan Floresans emisyon sayısı ile korele bakteri iliştirilmiş nano tanecikleri tasarruf etmek bakteri içinde çözüm sunuyoruz. Bu mekanizma şematik gösterimi şekil 1' de temsil edilir.
Bu MFnS platform bakım noktası tarama unutmayın, düşük maliyetli ve taşınabilir özellikleri kaynaklanan ile dizayn edilmiştir. MFnS oda sıcaklığında kararlı olduğunu ve sadece doğru algılama bakteriyel kirletici için çok düşük konsantrasyonlarda gerekmektedir. Ayrıca, sentez sonra MFnS kullanımı basittir ve alanında eğitimli uzmanları kullanımı gerektirmez. Son olarak, bu tanı platform, bu tarafından bir platformda her türlü patojenler birçok farklı ortamlarda algılamak için kullanılan bir araç sağlayarak son derece özelleştirilebilir hedefleme için sağlar.

<table><tbody><tr><td>Demir Klorür Tetrahidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>I90-500</td><td></td></tr><tr><td>Ferrik Klorür Heksahidrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>I88-500</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum Hidroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A669S-500</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144S-500</td><td></td></tr><tr><td>Poliakrilik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>323667-100G</td><td></td></tr><tr><td>EDC</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>22980</td><td></td></tr><tr><td>NHS</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC157270250</td><td></td></tr><tr><td>Anti-E. coli O111 antikoru&nbsp;</td><td>sera care</td><td>5310-0352</td><td></td></tr><tr><td>Anti-E. coli O157:H7 antikoru [P3C6]&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab75244</td><td></td></tr><tr><td>DiI Leke</td><td>Fisher Scientific</td><td>D282</td><td></td></tr><tr><td>Besin Suyu</td><td>Difco</td><td>233000</td><td></td></tr><tr><td>Dondurularak kurutulmuş E. coli O157:H7 pelet</td><td>ATCC</td><td>700728</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Relaxomteter&nbsp;</td><td>Bruker</td><td>mq20</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>NANO-ZS90</td><td></td></tr><tr><td>Plaka Okuyucu&nbsp;</td><td>Tecan</td><td>Infinite M200 PRO</td><td></td></tr><tr><td>Manyetik Kolon&nbsp;</td><td>QuadroMACS</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5804 Serisi</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj (accuSpin Micro 17)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-100-676</td><td></td></tr><tr><td>Zemin Modeli Sallama İnkübatörü</td><td>SHEL LAB</td><td>SSI5</td><td></td></tr><tr><td>Analitik Terazi</td><td>Metler Toledo</td><td>ME104E</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Vorteks Karıştırıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-370</td><td></td></tr><tr><td>Açık Hava Sallanan Çalkalayıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-217-765</td><td></td></tr></tbody></table>

gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak manyeto-floresan nanosensor: e. coli o157: h7 hızlı tespiti

Foodborne Pathogen Screening Using Magneto-fluorescent Nanosensor: Rapid Detection of E. Coli O157:H7

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7-var bağlı su bazlı hem de ve gıda kaynaklı hastalıklar ve bir tehdit rağmen gıda ve su filtreleme yöntemleri kullanılan şu anda kalır. Polimeraz zincir tepkimesi (PCR) ve enzim bağlı immunosorbent deneyleri (ELISA) özellikle patojenik kirleticiler, algılayabilir gibi konvansiyonel bakteri algılama yöntemleri, bunlar geniş numune hazırlama ve uzun bekleme süreleri gerektirir. Ayrıca, bu uygulamaları talep gelişmiş Laboratuvar Cihazları ve ayarları ve eğitimli profesyoneller tarafından yürütülmelidir. Burada, bir protokol manyetik ve floresan parametreleri nanoparçacık tabanlı bir platform, eşsiz kombinasyonu özellikleri basit bir tanı tekniği için önerilmiştir. Önerilen multiparametric Manyeto-floresan nanosensors (MFnS) E. coli O157: H7 kirlenme olduğu kadar az 1 adet az 1 h çözümünüzde mevcut koloni oluşturan ile algılayabilir. Ayrıca, MFnS gibi karmaşık medyada son derece işlevsel kalır yeteneği süt ve göl su doğrulanmadı. Ek özgüllük deneyleri de MFnS yalnızca belirli hedef bakteri, hatta huzurunda benzer bakteriyel tür algılama yeteneğini göstermek için kullanılmıştır. Manyetik ve floresan yöntemleri eşleştirme algılama ve patojen bulaşma her iki erken ve geç-aşamalı kirlenme algılama içinde yüksek performans sergileyen konsantrasyonları, geniş bir alanda miktar sağlar. Etkinliği, uygun fiyatta ve MFnS taşınabilirliği için bakım noktası tarama bakteriyel kirletici için ideal bir aday ayarları, geniş bir ticari olarak paketlenmiş gıda su depoları dan onları.

MFnS etki mekanizması şekil 1' de temsil edilir. MFnS bakteriyel kirletici yüzeyi kümeleme MFnS magnetic cores ve çevresindeki hidrojen çekirdekleri arasındaki etkileşimler etkilemektedir. Bu kümeleme, manyetik gevşeme sonucu olarak değerlerini artırmak. Bakteriyel kirletici konsantrasyonu arttıkça, kümeleme azaltır ve T2 değerleri değişikliği azalır. Bu nedenle, bir floresan modality eklenmesi önemlidir. Bakteri konsantrasyonu arttıkça, her iki düşük ve yüksek konsantrasyon aralıklardaki ba...

Hızlı algılama özellikle patojenik bakterilerin manyetik gevşeme ve floresan emisyon modaliteleri kombinasyonu ile hedef ve bu protokol genel amacı, düşük maliyetli, taşınabilir için fonksiyonel nanosensors sentez etmektir.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 has been linked to both waterborne and foodborne illnesses, and remains a threat despite the food- and ...

Bu protokolün temel amacı, E.coli O157:H7 gibi bakteriyel kontaminantları tespit edebilen çift modlu nanosensörler tasarlamak ve sentezlemektir. Manyeto-floresan nanosensörler, demir oksit nanoparçacıkların iki aşamalı bir prosedürle fonksiyonelleştirilmesi yoluyla sentezlenir. İlk olarak, hedefleyici antikorlar nanoparçacığın yüzeyine konjuge edilir.Ardından, floresan boya kodlamasına yüklenir. Bu modalitelerin eşleşmesi, hem düşük hem de yüksek konsantrasyonlu çözeltilerde bakteriyel kontaminantların hızlı ve hassas bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Az miktarda bakteri varlığında, konjuge antikorların hedeflemesi nedeniyle nanosensörler bakterilerin etrafında toplanacaktır.Bu sürüleşme, nanosensörlerin manyetik çekirdeğinin çevredeki su protonları ile olan etkileşimlerini değiştirerek manyetik relaksasyon değerlerindeki değişimlerin hassas bir şekilde tespit edilmesine olanak tanır. Çözeltilerdeki bakteriyel kontaminantların konsantrasyonu arttıkça sürüleşme azalır ve manyetik modalitenin kontaminasyonu nicelleştirme yeteneği düşer. Ancak bakteriyel konsantrasyon arttıkça, biyo nanosensörlerin floresan yayılımı da artar.Manyetik ve floresan modalitelerin eşleştirilmesinin önemli olmasının nedeni budur. Bu kombinasyon, dakikalar içinde tek bir E.coli O157:H7 koloni oluşturan birimin bile tespit edilmesine olanak sağlamıştır. Magneto-floresan nanosensörlerin sentezindeki ilk adım, hem ferro hem de ferrik klorür içeren bir demir tuzu çözeltisinin hazırlanmasıdır.Demir, nanosensörlere manyetik relaksasyon platformlarına uyum sağlamasına olanak tanıyan manyetik bir çekirdek sağlayacaktır. Gerekli olan ek çözeltiler poliakrilik asit ve amonyum hidroksittir. Demir tuzu çözeltisine hidroklorik asit eklenir ve ardından bu karışım vorteksleme yapılırken amonyum hidroksit çözeltisine ilave edilir.Son olarak poliakrilik asit çözeltisi eklenir ve reaksiyon devam ederken elde edilen karışım bir saat daha vortekslenir. Büyük molekülleri çöktürmek ve boyutu 100 nanometreden küçük nanopartikülleri izole etmek için sonuç çözeltisi santrifüjlenir. Çözelti daha sonra saflaştırma için gece boyunca diyaliz edilir.Bir sonraki adım, hedefleyici antikorların yeni sentezlenen demir asit nanopartiküllerinin poliakrilik asit kaplamasına konjugasyonudur. Gerekli malzemeler arasında MES tamponu, EDC, NHS ve seçilen antikorlar yer almaktadır. Nanopartikül çözeltisine önce EDC, ardından NHS ve son olarak antikor eklenir.Karışım, reaksiyon devam ederken üç saat boyunca bir masaüstü karıştırıcıya yerleştirilir. Çözelti, manyetik bir kolon kullanılarak saflaştırılır. Manyetize kolon nanopartikülleri yakalayarak yalnızca serbest yüzen antikorların çıkmasına izin verir.Ardından kolon PBS tamponu ile yıkanır ve konjuge nanosensörler toplanır. Nanopartiküller, tespit için kullanılan ikinci temel modaliteyi sağlayan floresan boya ekleme işlemine hazır hale gelir. Nanosensörümüzün en temel özelliklerinden biri, birçok nedenden dolayı önemli olan manyetik ve floresan modalitelerin kombinasyonudur.İlk olarak, modalitelerin kombinasyonu her birinin diğerini bir nevi çapraz kontrol etmesine olanak tanır; bu da günümüzde kullanılan farklı tanı platformlarının karşılaştığı en büyük engellerden biri olan yalancı pozitif ve yalancı negatif riskini büyük ölçüde azaltır. İkinci olarak, modalitelerin kombinasyonu, bakteriyel kontaminasyonu sadece tespit edebildiğimiz değil, aynı zamanda miktarını belirleyebildiğimiz aralığı önemli ölçüde genişletir. Nanosensörlerin hazırlanmasındaki son adım, floresan boyanın nanoparçacık kaplamasına enkapsülasyonudur.Bu işlem, vorteksleme sırasında çözeltiye boya eklenerek ve ardından boyanın nanosensör kaplamasına difüze olması için yeterli süre tanınarak kolayca gerçekleştirilir. Tam olarak fonksiyonelleştirilmiş nanosensörler, saflaştırma için son bir kez daha diyalize edilir. Nanosensörleri karakterize etmek amacıyla, boyut ve floresan emisyonu bir zetasizer ve bir floresan plaka okuyucu kullanılarak kaydedilir.Nanosensörden küçük bir numune, bir küvet içindeki su çözeltisine eklenir ve boyut kaydı için zetasizer cihazına yerleştirilir. Floresan analizi için nanosensörden bir numune 96 kuyucuklu plakaya yerleştirilir ve floresan plaka okuyucuya yerleştirilir. İdeal olarak nanosensörlerin çapı yaklaşık 70 nanometre civarında olacak ve 575 nanometre floresan emisyonuna sahip olacaktır.Nanosensörlerin sentezine ek olarak, laboratuvar ortamında bakteriyel hedefleri sağlamak için bakterilerin kültüre edilmesi gereklidir. Besiyerinde bir kültür hazırlamak için bakterilerin gliserol stokları kullanılır. Bu çözeltinin ardından inkübe edilmesine izin verilir.İlk inkübasyon süresini takiben, geniş bir bakteri konsantrasyonu aralığı elde etmek için seri dilüsyonlar gerçekleştirilir. Her konsantrasyondan yüz mikrolitre, besiyeri agar plaklarına ekilir ve ardından 24 saat boyunca inkübe edilir. Bu inkübasyonun ardından, her bir seyreltilmiş stokun mililitredeki koloni oluşturan birim veya CFU sayısı belirlenmek amacıyla her plaktaki koloniler sayılır.Bakteriyel stok çözeltiler hazırlandığına göre, artık hazırlanan nanosensörlerle birlikte kullanılabilirler. Bu bakterinin belirli serotipinin diğer serotiplerden ayrılan önemli bir özelliği şudur: Örneğin, diğer serotiplerle enfekte olursanız, enfeksiyon oluşması için çok sayıda koloni oluşturan birimle karşılaşmanız gerekir. Ancak bu özel E.coli türünde, 10 ila 100 CFU veya koloni oluşturan birim, enfeksiyon oluşturmak için yeterlidir.Teknolojimiz, tek bir koloni dahi gözden kaçmayacak şekilde, bakteriyel kontaminasyonun tespiti üzerine kurulmuştur. Manyetik relaksometrede okuma yapmak için çözeltileri hazırlamak amacıyla, öncelikle bir Eppendorf tüpüne 300 µL PBS pipetlenir. Ardından bakteri stok örneği eklenir ve son olarak nanosensörler ilave edilir.Çözelti daha sonra bir cam tüpe aktarılır ve buharlaşmayı önlemek için üzerine bir parça parafilm yerleştirilir. Ardından cam tüp, daha büyük bir NMR tüpünün içine yerleştirilerek manyetik relaksometreye yerleştirilir. Gösterildiği gibi, baz hattı T2 okuması elde etmek için bakteri içermeyen, sadece nanosensör ve PBS içeren bir baz hattı çözeltisi kullanılır.Ardından, çeşitli konsantrasyonlarda bakteri içeren çözeltiler analiz için manyetik relaksometreye yerleştirilir ve T2 değerlerindeki değişimler, nanosensörler ile bakteriler arasındaki bağlanmadan kaynaklanır. Gösterildiği gibi, bu modalite kullanılarak sadece bir bakteriyel CFU'nun varlığı bile dakikalar içinde tespit edilebilmektedir. Ancak, bakteri konsantrasyonu arttıkça MR okumaları daha az ölçülebilir hale gelmektedir; bu nedenle, floresan emisyon verilerinin kullanımı da doğru bir bakteri kantifikasyonu için aynı derecede önemlidir.Floresan verileri toplanmadan önce numune öncelikle santrifüj edilmelidir. Çözelti cam tüpten bir Eppendorf tüpüne aktarılır ve ardından santrifüj edilir. Bu işlem, bakterileri ve onlara bağlı nanosensörleri, çözeltide serbest halde yüzen nanosensörlerden ayırır.Süpernatan atılır ve bakteriyel pelet PBS içinde yeniden süspande edilir. Son olarak örnek, floresan emisyon yoluyla analiz edilebilir. Emisyon şiddeti, çözeltide kalan nanosensör miktarına ve dolayısıyla mevcut bakteri miktarına bağlı olacaktır.Görüldüğü üzere, bakteriyel konsantrasyon arttıkça floresan sinyali güçlenmekte ve aynı zamanda daha hassas hale gelmektedir. Bu nedenle, hem manyetik hem de floresan modalitelerin eşleştirilmesi, bakteriyel kontaminasyonun hem erken hem de geç gelişim aşamalarında tespit edilmesine ve miktarının belirlenmesine olanak tanır. Bu nanosensörler, PBS gibi basit çözeltilerdeki bakterilerin tespit edilmesinin yanı sıra, göl suyu veya süt gibi daha karmaşık ortamlarda da işlev görme kapasitesine sahiptir.Ayrıca, bu nanosensörler, hedef dışı bakterilerin ve ısı ile inaktive edilmiş hedef bakterilerin varlığında özgünlük açısından test edilmiştir. Gösterildiği üzere, konjuge antikorların özgünlüğü sayesinde, magneto-floresan nanosensörlerin hedef dışı veya canlı olmayan bakterilerle etkileşimi çok azdır veya hiç yoktur. Bu durum, diğer türlerin varlığında belirli bakterilerin saptanmasındaki etkinliklerini kanıtlamaktadır.Son olarak, bu nanosensörlerin diğer patojenlerin tespiti için de kolayca özelleştirilebileceğini belirtmek önemlidir. Laboratuvarımızda hazırladığımız bu nanosensörleri artık bir ay içinde sentezleyebilir veya formüle edebilirsiniz. Bunu bir ay içinde yapabilirsiniz ve bu bir aylık üretim size yaklaşık 10 yıllık uygulama imkanı sağlayabilir.

foodborne-pathogen-screening-using-magneto-fluorescent-nanosensor

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Bu videoda, nanosensörler kullanarak gıda ve su numunelerindeki bakteriyel kirleticileri tespit etmek için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. Hedef patojenik bakteriler, manyetik gevşeme ve floresan emisyon modalitelerinin bir kombinasyonu ile tespit edilir.

Manyeto-floresan nanosensörler kullanarak bakteriyel kontaminasyonu tespit etme

H7 benzersiz bir genetik işaretleyici, Z3276 hedefleme: A QPCR tahlil Escherichia coli O157 tespiti için geliştirilmiştir. QPCR canlı hücre algılaması için propidyum monoazide (PMA), tedavi ile kombine edilmiştir. Bu protokol, çok sayıda numune, kolay ve uygun kullanım için bir 96 oyuklu plaka formatı değiştirilmiş ve uyarlanmıştır...

Live Algılama<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: PMA-qPCR H7 Hücreler

Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır.  Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

RNA parçalayan DNAzime, üreaz ve manyetik boncuklardan yararlanan modifiye bir turnusol testi kullanarak E. coli'nin kolorimetrik tespiti için bir protokol açıklıyoruz.

Turnusol Testi kullanarak Bakterilerin Kolorimetrik Tespiti

Bir fare modeli enterohemorrhagic bioluminescence etiketli bakteri kullanarak E. coli (EHEC) kolonizasyon için detaylı bir protokol sunulmuştur. Kollarındaki bu bakteriler tarafından bir non-invaziv görüntüleme sistemi içinde canlı hayvan vivo içinde tespiti geçerli anlayışımız EHEC kolonizasyon ilerletebilirsiniz.

Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Salmonella spp. /Shigella spp. ortak patojenler için ishal atfedilen. Burada, biz yüksek üretilen iş platformu Salmonella spp. testi ile taranması için tarif / gerçek zamanlı PCR kullanarakShigella spp. rehberli kültürü ile kombine.

Salmonella spp. testi ile taranması için yüksek üretilen iş platformu /Shigella spp.

Bu protokol, bir mikroakışkan çipe dayalı bir sürekli akışlı polimeraz zincir sisteminin nasıl oluşturulacağını ve laboratuvarda bir kapiler elektroforez sisteminin nasıl oluşturulacağını açıklar. Laboratuvarda nükleik asitlerin analizi için basit bir yöntem sunar.

Escherichia coli'nin Sürekli Akış-PCR Mikroakışkan Çipinde Amplifikasyonu ve Kapiler Elektroforez Sistemi ile Tespiti

Çeşitli bakteriyel patojenler, doğru bir şekilde tespit edilmez ve derhal tedavi edilmezse solunum yolu enfeksiyonlarına neden olabilir ve ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir. Döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla bu patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, klinik ortamlarda solunum yolu enfeksiyonlarının etkili bir şekilde yönetilmesini ve kontrol edilmesini sağlar.

Mikroakışkan çip bazlı döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla alt solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti

Öğrenin manyeto-floresan nanosensörlerle E.coli O157:H7 gibi gıda kaynaklı patojenlerin hızlı tespiti için çift modalite yaklaşımını. Bu yöntem düşük ve yüksek konsantrasyonlarda hassas bakteri tespiti sağlar.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Daha fazla video keşfet