Name: Mikrotübül Polimer Mekaniğinin İncelenmesi için Mikroakışkan Tabanlı Bir Yaklaşımın Geliştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-30T14:20:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Keşfedin mikrotübül polimer mekaniğini mikroakışkan tabanlı bir yaklaşımla. Bu yöntem, hava kabarcığı sorunlarını ortadan kaldırarak yüksek verimli test imkanları sunar ve sitoskelet dinamiklerinin anlaşılmasına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mikroakışkanlar, sıvı akış kanallarının karmaşık tasarımı ve üretimi ile genellikle bir mikrolitreden daha az olan küçük sıvı hacimlerinin hassas kontrolünü sağlar 1,2. Küçük ölçekli mikroakışkan cihazlar, benzersiz mühendislik olaylarına yol açar. Yani, sıvı akışındaki atalet ve viskoz kuvvetler arasındaki oranın boyutsuz bir ölçüsü olan Reynolds sayısı küçüktür, tipik olarak mikroakışkanlarda O(10) veya daha düşüktür ve mikroakışkan cihazlarda viskoz kuvvetlerin önemini vurgular. Ek olarak, konvektif ile difüzif taşımayı karşılaştıran Péclet sayısı, konvektif taşımanın mikroakışkanlarda genellikle ihmal edilebilir olduğunu gösterir 3,4,5. Mikroakışkanlardaki bu difüzyon odaklı, laminer akış rejimi, hassas sıvı gradyanlarını koruyarak tek bir cihaz üzerinde paralel deneyleri desteklediği için avantajlıdır.
Fotolitografi, mikroakışkan cihazlarınimalatı için birincil yöntem olmaya devam etmektedir 6,7,8. Kısacası, bu süreç, mikroakışkan tasarımın 'ana' kazınmış bir şablonunun oluşturulmasını içerir (Şekil 1). Işığa duyarlı bir substrat hazırlanır ve mikroakışkan tasarımın bir fotomaskesi, fotorezist alanlarını seçici olarak ultraviyole radyasyona maruz bırakır. Sonraki aşındırma yöntemleri, alt tabakayı geliştirerek tasarımın bir rahatlamasını sağlar. Polidimetilsiloksan (PDMS) genellikle master üzerine dökülür ve sertleştirilir. Tasarımın olumsuz özelliklerini benimseyen kürlenmiş PDMS, daha sonra master'dan çıkarılır ve bir cam lamel üzerine yapıştırılır. Tüm bu üretim süreci tipik olarak 1-2 gün sürer ve hızlı tasarım yinelemelerine ve birden fazla cihazın üretilmesine olanak tanır. Yumuşak litografi ve mikrofabrikasyon işlemlerinin ayrıntılı incelemeleri diğer referanslardamevcuttur 1,2,3,10,11,12,13.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68185/68185fig01.jpg"> 
Şekil 1: Geleneksel fotolitografi sürecine ve mikrofabrikasyon sürecine genel bakış. (A) Geleneksel fotolitografi işlemi ve (B) mikrofabrikasyon işlemi. Uygulamaya ve istenen fotorezist özelliklerine bağlı olarak, aynı tasarım master'ı verecek olsalar bile, negatif veya pozitif bir fotorezist kullanılabilir. İstenen özellik yüksekliği veya fotorezist erime sıcaklığı gibi özellikler, uygun fotorezist tipinin belirlenmesine yardımcı olur. Bu rakam Rogers'ın (2022)14 izniyle değiştirilmiştir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68185/68185fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Mikroakışkanların kullanımı, birçok araştırma alanındaki olanakları genişletmiştir ve en son etkisi biyolojik bilimlerde olmuştur. Küçük ölçeği göz önüne alındığında, mikroakışkanlar, hücreler veya proteinler gibi sınırlı, değerli kaynakların hassas yönetimine izin verir. Daha da etkili olanı, mikroakışkan sistemlerin, substrat sertliğindeki modifikasyonlar, bir numuneye kuvvet uygulanması ve hatta elektrik akımının entegrasyonu gibi fizyolojik koşulları taklit edecek şekilde ayarlanabilirliğidir. Ek olarak, mikroakışkanların kullanımı, birden fazla reaktifi paralel olarak manipüle etme ve sistem tasarımlarını hızlı bir şekilde prototipleme ve yinelemeli olarak iyileştirme yeteneği sunar. Bu özellikler, tüm laboratuvar iş akışlarının genellikle "çip üzerinde laboratuvar" olarak adlandırılan tek bir cihazda minyatürleştirilmesini sağlar1,6,9,15,16,17,18,19.
Mikroakışkanların hücre biyolojik uygulamalarından biri, mikrotübül polimerlerinin araştırılmasıdır. Mikrotübüller, hücre hücre iskeletinin önemli bir bileşenidir ve hücre bölünmesi ve hücre içi kargo taşınması gibi süreçlerde hayati bir rol oynar20,21. Hücre iskeletinin en sert elemanı olan mikrotübüller, Pleksiglas22,23 ile karşılaştırılabilir bir elastik modül sergiler. Sağlam mekanik özellikleri, örneğin kalbin sistolik ve diyastolik fazları24 sırasında döngüsel olarak büküldükleri ve gevşedikleri kardiyomiyosit kasılması da dahil olmak üzere çeşitli hücresel fonksiyonlar için çok önemlidir. Mikroakışkan cihazlar, mikrotübüllerin özelliklerini ve in vitro olarak daha yüksek dereceli yapılarını araştırmak için daha önce benimsenmiştir. Gerçekten de mikroakışkanlar, mikrotübül polimerizasyon dinamiklerini, mikrotübül-mikrotübül etkileşimlerini ve mikrotübül ile ilişkili proteinlerin mikrotübül mekanik özellikleri üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılmıştır 25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41.
Mikroakışkanların mikrotübül alanına girmesi birçok heyecan verici keşfi beraberinde getirmiş olsa da, bu cihazların mikrotübül araştırmaları için uyarlanmasında hala iyileştirme alanı bulunmaktadır. Bu çalışmada, mikroakışkan cihazlardaki mikrotübülleri incelemeye devam eden iki özel sınırlamayı ele alıyoruz: tipik olarak mikroakışkan cihazların manuel manipülasyonu ile ortaya çıkan cihaz içinde hava kabarcığı oluşumu potansiyeli ve yüksek verimli tahlillerin yetersiz kullanımı. İlk olarak, borunun takılması ve çıkarılması gibi manuel manipülasyonlar, kanallarda kabarcık oluşumuna neden olabilir. Bir akış hücresi içinde hava kabarcığı oluşumu felakettir, çünkü hava kabarcıkları proteinleri denatüre edebilir, mikrotübül polimerlerini kesebilir ve hücre kültürlerini olumsuz etkileyebilir42,43. Ek olarak, cihazdaki keskin köşeler ve eğik açılar, düzgün olmayan yüzey ıslanmasına neden olarak hava sürüklenme olasılığını artırır. Hava kabarcıklarının oluşumunu, kalıcılığını ve etkisini azaltmak için çok sayıda teknik geliştirilmiştir; Bununla birlikte, kabarcık azaltma yöntemlerinin kullanımı evrensel değildir 42,43,44,45,46. Ayrıca, mikroakışkan kullanmanın en büyük avantajlarından biri yüksek verimli deney yeteneği olmasına rağmen, mikroakışkanlar henüz mikrotübül araştırmalarını büyütmek için kullanılmamıştır. Mikroakışkan cihazlar, aynı cihaz üzerinde birden fazla deneysel koşulu paralel olarak test etmek için tasarlanabilir. Örneğin, sıvı gradyanları, farklı mikrotübül ile ilişkili proteinlerin veya ilaçların akışını yönlendirmek için kullanılabilir ve bunların aynı cihaz içindeki bölünmüş mikrotübüllerin belirli bölgelerine hedeflenen dağıtımını sağlar.
Burada, yinelemeli olarak bu sınırlamaları ele alan bir mikroakışkan cihaz tasarladık. Cihazın imalatının adım adım protokolünü sağlıyoruz, böylece daha geniş bir kitlenin mikrotübül araştırmalarında mikroakışkan teknolojisini kullanmasını sağlıyoruz. Bu cihaz tasarımı, kabarcık yakalama özelliklerini içerir ve manuel müdahaleyi azaltmak için otomatik bir akış kontrol sistemi kullanır ve aynı zamanda yüksek verimli analizler için cihazdaki çözüm gradyanlarını mümkün kılar. Özetle, bu mikroakışkan tasarımın geliştirilmesi, daha geniş mikrotübül araştırma alanındaki deneysel tasarımlarda değerli iyileştirmeler sunarken, mikrotübül mekaniğinin daha geniş bir şekilde araştırılmasını ve anlaşılmasını kolaylaştırabilir.

<table><tbody><tr><td>0,6 mL mikrosantrifüj tüpleri (şeffaf)</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Düşük tutma tipi tercih edilir</td></tr><tr><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpleri (şeffaf)</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Düşük tutma tipi tercih edilir</td></tr><tr><td>1,5 mm standart biyopsi punch</td><td>Integra LifeSciences</td><td>33-31A-P/25</td><td></td></tr><tr><td>100x/1,49 sayısal açıklık TIRF objektif</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22 x 22 mm cam lameller</td><td>ThorLabs</td><td>CG15CH</td><td></td></tr><tr><td>3" tek tarafı cilalı silikon gofretler</td><td>Üniversite Gofret</td><td>447</td><td></td></tr><tr><td>4" Petri kabı</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>450 ve mikro; L, Üstü Açık İnce Duvar Ultra Şeffaf Tüp</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td>345843</td> 488, 561 ve 640 nm katı hal lazerleri <td>protokolünde 'airfuge tüpü' olarak anılır</td></tr><tr><td></td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>A-95 Sabit Açılı Rotor</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td></td><td></td>347595</tr><tr><td>Aseton</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Airfuge Hava Tahrikli Ultrasantrifüj</td><td>Beckman Coulter, Inc.</td><td>347854</td><td>Protokolde 'airfuge' olarak anılır</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Mikro Ölçekli Protein Etiketleme Kiti</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A30006</td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Andor iXon Ultra EM-CCD</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Andor NEO sCMOS</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoCAD Autodesk</td><td></td><td></td><td>Jenerik versiyonları kullanılabilir</td></tr><tr><td>Sığır beyni etiketlenmemiş tübülin (saflaştırılmış)</td> <td>Yok</td><td></td><td>Evde üretilmiştir, ancak satın alınabilir</td></tr><tr><td>Kazein</td><td>MilliporeSigma</td><td>C7078</td><td></td></tr><tr><td>Katalaz</td><td>MilliporeSigma</td><td>C9322</td><td></td></tr><tr><td>Temiz Kuru Hava (CDA) (basınçlı gaz)</td> <td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Basınçlı hava beslemesi</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Mikroakışkana bağlanır akış kontrolörü</td></tr><tr><td>COMSOL Multiphysics yazılımı</td><td>COMSOL, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Özel pirinç sahne adaptörü</td><td>N/A</td><td></td><td>22 mm x 22 mm lamellerimizi mikroskoba sığdırmak için evde üretilmiştir</td></tr><tr><td>Deiyonize su</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dessicator</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>D-glikoz</td><td>MilliporeSigma</td><td>G7528</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>EGTA</td><td>MilliporeSigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Elveflow Akıllı Arayüz (ESI) yazılımı</td><td>Elveflow</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flanşsız PFA bağlantı parçaları ETFE &frac14 ile; "-28 ila 1/16" Dış çap yüksükler&nbsp;</td><td>Darwin Mikroakışkanlar</td><td>CIL-XP-245X</td><td>Micrewtube kaynak şişelerinden gelen boruları basınçlı rezervuar rafı aracılığıyla akış sensörüne bağlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Fluiwell 4 Kanallı 2 mL Düşük Basınçlı</td><td>Fluigent</td><td>14002001</td><td>Akış kontrol sistemini micrewtubes'a bağlamak için kullanılır. 'Basınçlı rezervuar rafı' olarak da adlandırılır</td></tr> <tr><td>Davlumbaz</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glikoz oksidaz</td><td>MilliporeSigma</td><td>G6125</td><td></td></tr><tr><td>GMPCPP</td><td>Jena Bioscience</td><td>NU-405L</td><td></td></tr><tr><td>Guanozin trifosfat (GTP)</td><td>MilliporeSigma</td><td>G8877</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak plaka</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HS-625 yüksek hızlı emisyon filtresi tekerleği</td><td>Parmak Gölleri Enstrümantasyon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ImageJ yazılımı</td><td>N/A</td><td></td><td>Açık erişimli</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İzopropil alkol</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Karl Suss MA-6 maske hizalayıcı</td><td>SUSS MicroTec</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>MilliporeSigma</td><td>1.05833</td><td></td></tr><tr><td>MATLAB yazılımı</td><td>MathWorks</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MEGAPOSIT SPR 220 7.0 fotorezist</td><td>Dow, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroakışkan Bağlantı Parçaları 6-40 ila 1/4 "-28 Adaptör Kiti</td><td>Darwin Mikroakışkanlar</td><td>LVF-KFI-08</td><td>Micrewtube kaynak şişelerinden gelen boruyu basınçlı rezervuar rafı (Fluiwell rafı) aracılığıyla akış sensörüne bağlamak için kullanılır</td></tr> <tr><td>Mikroakışkan Bağlantı Parçaları Dişi Luer Kilit Adaptör Kiti</td><td>Darwin Mikroakışkanlar</td><td>LVF-KFI-04</td><td>Şırıngayı boruya bağlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Mikroakışkan akış kontrolörü</td><td>Elveflow</td><td>OB1 MK3+</td><td></td></tr><tr><td>Mikroakışkan akış sensörü</td><td>Elveflow</td><td>MFS3</td><td>Bu akış sensörü aralığı 0-80 &mu'dur; L&nbsp;</td></tr><tr><td>MICROPOSIT MF-319 geliştiricisi</td><td>Dow, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse Ti</td><td></td></tr><tr><td>NIS-Elements yazılımı</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Azot (basınçlı gaz)</td> <td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objektif ısıtıcı</td><td>Tokai Hit</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek Parça Parmak Geçirmez 10-32 1/16 "OD Boru için Koni Bağlantı Elemanı&nbsp;</td><td>Darwin Mikroakışkanlar</td><td>CIL-F-120X</td><td>Şırıngayı boruya bağlamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Paclitaxol (Taxol)</td><td>Tocris Bioscience</td><td>1097</td><td></td></tr><tr><td>Fotolitografi maskeleri</td><td>N/A</td><td></td><td>Tasarımlarımız kullanılarak harici bir tarafça yapılmıştır</td></tr><tr><td>BORULAR</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>172615000</td><td></td></tr><tr><td>Plazma temizleyici</td><td>Harrick Plazma</td><td>PDC-32G</td><td></td></tr><tr><td>Plazma akış ölçer sistemi</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-FMG</td><td>Basınçlı gazın akış kontrolünü sağlamak için plazma temizleyici ile entegre olur</td></tr><tr><td>Plastik ampul pipeti</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pluoronic F-127</td><td>MilliporeSigma</td><td>P2443</td> Potasyum klorür Research Products International P41000 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>protokolünde 'poloxomer 407' olarak anılırSaint Gobain Performans Plastikleri&nbsp; Tube Tygon .020 ID</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50-206-8921</td><td>Protokolde '1.5 mm boru' ve 'boru' olarak anılır</td></tr><tr><td>Neşter</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Spin kaplayıcı</td><td>Uygun Maliyetli Ekipman, LLC.</td><td>200x</td><td>Bu modelin üretimi durdurulabilir</td></tr><tr><td>Standart pipetler ve uç setleri</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standart plastik şırınga</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>10 mL Luer-slip şırınga kullandık</td></tr><tr><td>Sylgard 184 silikon elastomer kiti</td><td>Dow, Inc.</td><td></td><td>Protokolde 'PDMS' ve 'kürleme maddesi' olarak anılır</td></tr><tr><td>T339 Dudaklı Contalı ve Düz Vidalı Kapaklı Micrewtube</td><td>Medline Industried, LP.</td><td>T339</td><td>Protokolde 'kaynak şişe' olarak anılır. Hem 0.5 mL hem de 1.5 mL boyutlarını</td></tr><tr><td>kullandık TAMRA, SE; 5- (ve-6) -Karboksitetrametilrodaminon, Süksinimidil Ester</td><td>Invitrogen</td><td>C1171</td> Trikloro (1H, 1H, 2H, 2H-perflorooktil) silan MilliporeSigma <td>protokolünde 'TTR' olarak anılır</td></tr><tr><td></td><td>448931</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trion Phantom RIE ICP&nbsp;</td><td>Trion Teknoloji A.Ş.</td><td></td><td>Bu plazma temizleyici sadece protokolün Adım 1.1'inde kullanılır. Bunun yerine PDMS yapıştırma için kullanılana benzer başka bir plazma temizleyici kullanılabilir; Silikon gofretin temizlenmesi için bu sistem tarafından elde edilebilecek çok daha düşük vakumu tercih ediyoruz</td></tr><tr><td>TRITC Poliklonal Antikor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A6397</td><td>Protokolde 'anti-rodamin antikoru' olarak anılır</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vakum pompası</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mikrotübül polimer mekaniğinin İncelenmesi için mikroakışkan tabanlı bir yaklaşımın geliştirilmesi

Development of a Microfluidics-Based Approach for Investigating Microtubule Polymer Mechanics

Mikrotübül Polimer Mekaniğinin İncelenmesi için Mikroakışkan Tabanlı Bir Yaklaşımın Geliştirilmesi

In this protocol, we describe the design and fabrication of a microfluidic device developed for the investigation of microtubule polymer mechanics. The ...

development-microfluidics-based-approach-for-investigating

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz altın Mikroelektronlar bir silikon taban üzerinde bir poli (etilen glikol), kendinden montajlı tek tabaka (PEG-SAM) oluşturmak için bir prosedür mevcut. PEG-SAM, tek bir adımda oluşan ve silikon ve altın yüzeyler biofouling engeller. Elektroforez sonra nano ölçekli desenlendirme biyomoleküllerin için kullanılır.

Desenlendirme Biyomoleküller Mikroelektronlar Kendinden monte mono tabakaları Zehirli

Sebat uzunluğu veya biyopolimerlerin eğilme rijitliği ölçmek için bir yöntem tarif edilmiştir. Yöntem deneysel olarak bireysel mikrotübül kalıcılığı uzunluğunu belirlemek için bir kinesin tahrik mikrotübül kayma deneyi kullanmaktadır ve aktin bazlı kayma deneyleri için uyarlanabilir.

Kayma Tahliller kullanma Biyopolimerler eğilme Katılığı Ölçümleri

Mikrotübüller doğal kararsız polimerler, büyüme ve kısalması arasında kendi anahtarlama stokastik ve kontrol etmek zordur. Burada photoablatable stabilize kapaklar ile segmentli mikrotübülleri kullanarak protokolleri açıklar. Parçalara Mikrotübüllerin depolimerizasyonu böylece sökmeden mikrotübül uçları ile hareketleri analizi yardımcı, yüksek zamansal ve mekansal çözünürlük ile tetiklenebilir.

Sökme Mikrotubul saplı tarafından Driven Hareketleri Eğitim için Segment Mikrotübüller hazırlanması

Maya tomurcuklanan nedeniyle güçlü genetik ve mikrotübül hücre iskeletinin basitliği için in vivo olarak mikrotübül dinamiklerinin çalışmak için avantajlı bir modeldir. Aşağıdaki protokol dönüşümü ve kültür maya hücreleri eş odaklı mikroskopi görüntü elde ve kantitatif maya hücrelerini canlı mikrotübül dinamiklerini analiz etmek açıklamaktadır.

Yüksek çözünürlüklü görüntüleme ve Bireysel Astral Mikrotubul Dynamics Analizi Budding Maya

Burada canlı hücre dönen disk konfokal mikroskopisi ve MATLAB tabanlı görüntü işleme kullanarak prometafazda senkronize hücrelerde mikrotübül dinamiği analizinin sağlam ve ayrıntılı bir yöntemini sıyoruz.

Monopolar Mitotik İğlerde Dönen Disk Mikroskobu ile Mikrotübül Dinamiğinin Ölçülmesi

Burada, iki mikrotübül popülasyonunun dinamiklerini aynı anda ölçmek ve karşılaştırmak için TIRF mikroskopi tabanlı in vitro resusyon testi sunulmaktadır. Çapraz bağlı mikrotübül demetleri ve tek mikrotübüller üzerindeki çoklu mikrotübül ile ilişkili proteinlerin kolektif aktivitesini eşzamanlı olarak görüntülemek için bir yöntem açıklanmaktadır.

Çapraz Bağlı ve Tek Mikrotübüllerin Dinamiğinin In Vitro TIRF Mikroskobu ile Eşzamanlı Görselleştirilmesi

Dinamik mikrotübüllerin ve floresan olarak etiketlenmiş mikrotübülle ilişkili proteinlerin eşzamanlı görüntülenmesi için girişim-yansıma mikroskobu ve toplam-iç-yansıma-floresan mikroskobu uygulamak için bir protokol sunuyoruz.

Dinamik Mikrotübülleri ve İlişkili Proteinleri Görüntülemek için Eşzamanlı Girişim Yansıması ve Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu

Burada, mikrotübül demetlerini in vitro olarak yeniden yapılandırmak ve eşzamanlı optik yakalama ve toplam iç yansıma floresan mikroskobu kullanarak içlerinde uygulanan kuvvetleri doğrudan ölçmek için bir protokol sunuyoruz. Bu tahlil, aktif mikrotübül ağları içindeki protein toplulukları tarafından üretilen kuvvetlerin ve yer değiştirmelerin nano ölçekte ölçülmesine izin verir.

Yeniden yapılandırılmış aktif mikrotübül demetleri içindeki kuvvetleri doğrudan ölçme

Basit aktin filament mikroakışkan tahlilleri için, floresan mikroskobu ile birlikte, bireysel aktin filamentlerini gerçek zamanlı olarak doğru bir şekilde izlemeyi ve sırayla farklı protein çözeltilerine maruz bırakmayı sağlayan protokoller sunuyoruz.

Tek Aktin Filamentlerin ve Demetlerin Montaj Dinamiğini İncelemek için Mikroakışkanlar ve Floresan Mikroskobu Kullanma

Bu makalede, bitki bazlı bir mikrotübül çapraz bağlayıcısı olan MAP65 ve kalabalıklaştırıcı ajan olarak PEG kullanılarak taktoidler şeklinde mikrotübül montajlarının oluşumu için bir protokol sunulmaktadır.

Mikrotübül taktoidlerinin kendi kendine montajı

Bu protokol, in vitro toplam iç floresan (TIRF) mikroskopi testi kullanarak dinamik aktin ve mikrotübülleri görselleştirmek için bir kılavuzdur.

Aktin ve Mikrotübül Eşleşme Dinamiğinin In Vitro Total İç Yansıma Floresan (TIRF) Mikroskobu ile Görselleştirilmesi

Keşfedin mikrotübül polimer mekaniğini mikroakışkan tabanlı bir yaklaşımla. Bu yöntem, hava kabarcığı sorunlarını ortadan kaldırarak yüksek verimli test imkanları sunar ve sitoskelet dinamiklerinin anlaşılmasına katkı sağlar.

Mikrotübül Polimer Mekaniğinin İncelenmesi için Mikroakışkan Tabanlı Bir Yaklaşımın Geliştirilmesi

Daha fazla video keşfet