Name: Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Öğrenin, faz kontrast ve DIC mikroskopi teknikleriyle saydam biyolojik örneklerin görüntülenmesini. Bu yöntemler hücresel yapıları ve ince detayları yüksek çözünürlükle ortaya çıkararak biyomedikal araştırmalarda temel araçlardır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çeşitli video klipler, faz kontrast gösteren ve DIC mikroskopi başlıklı başka bir video-makale <a href="details.stp?ID=197">alınmıştır Symbiosis,</a> Katmanlar . Vallahi Leadbetter laboratuvarı tarafından yapılan bu katkı nezaketle kabul eder.

Bu deneysel bir yaklaşım için tam metin protokolü mevcuttur <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Hücre Biyolojisi Şu Protokolleri.</a>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

faz kontrast ve diferansiyel girişim kontrast (dic) mikroskopi

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Faz-kontrast mikroskobu genellikle şeffaf olmayan, biyolojik örneklerin ışık emici kontrast üretmek için kullanılır. Teknik Zernike, 1942 yılında, onun başarısı için Nobel ödülü aldı tarafından keşfedildi. , Örnek yapısal detay kenarları vurgulamaktadır doku hücrelerinin, yumurta ve embriyolar da dahil olmak üzere, kalın kesitlerle yüksek çözünürlüklü optik bölümleri sağlar ve faz haleler tipik bir zarar vermez, çünkü 1960&#39;ların sonlarında piyasaya DIC mikroskopi, biyomedikal araştırma popüler oldu faz kontrastlı görüntüler. Bu protokol, bu mikroskopi teknikleri ilkeleri ve pratik uygulamalar vurgulamaktadır.

Bu protokol, Faz ve Diferansiyel Girişim Kontrast ilkeleri ve pratik uygulamalar (DIC) Mikroskopi vurgulamaktadır

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Faz-kontrast mikroskopisi, şeffaf ve ışığı absorbe etmeyen biyolojik numunelerde kontrast oluşturmak için sıklıkla kullanılır. Bu teknik, ... tarafından keşfedilmiştir.

Işık mikroskobu, biyomedikal araştırma alanındaki en etkin araçlardan biridir, hatta belki de en etkili olanıdır. Uygulamanıza bağlı olarak, numunelerin incelenmesi için farklı aydınlatma modları tercih edilir. Bu video, geçirgen ışık aydınlatmasının iki optik modunu, faz kontrast ve DIC veya diferansiyel girişim kontrast mikroskobisini gösterecektir.Merhaba, ben San Antonio'daki Texas Sağlık Bilimleri Merkezi Üniversitesi'nin merkezi Optik Görüntüleme tesisinden Victoria San Frolic. Bugün size faz kontrast ve diferansiyel girişim kontrast mikroskobisi kullanarak örneklerin nasıl doğru şekilde inceleneceğini göstereceğim. Hadi başlayalım.Standart parlak alan mikroskobu, şeffaf ve renksiz örneklerin görüntülenmesi için yeterli değildir. Faz kontrastlı mikroskopi, genellikle ışığı soğurmayan şeffaf biyolojik örnekler için kontrast oluşturmak amacıyla kullanılır. Bu teknik, başarısıyla Nobel Ödülü'ne layık görülen Zurninac tarafından 1942 yılında keşfedilmiştir.Faz kontrast mikroskobu, bir faz plakası veya halkası içeren özel faz kontrast objektiflerinin ve diyafram yerine bir kondansatör anulusunun eklendiği bir parlak alan ışık mikroskobudur. Anulus genellikle kondansatör taretinde bulunur ve farklı objektifler için uygun anulus boyutunun seçilmesi gerekir. Kohler aydınlatması kurulduktan sonra uygun faz objektifi seçilmeli ve ardından kondansatördeki uygun faz anulusu konuma getirilmelidir.Objektif faz halkası ve kondansatör anülü, konsentrik ve örtüşecek şekilde uygun şekilde hizalandıktan sonra, örneği görüntüleyebilir ve odağı doğru şekilde ayarlayabiliriz. Şimdi mikroskop altında faz kontrastının nasıl göründüğünü gösterelim. İşte bir sıçan karaciğer kesitine bakış.Faz kontrastı altında. Bu yöntem, kontrastı grinin farklı tonlarından siyah ve beyaz tonlarına dönüştürerek biyolojik materyalin görünümünü iyileştirir. Bununla birlikte, numunelerin çevresinde ince yapıları gölgeleyen bir halo oluştuğunu fark edeceksiniz.Bu hale, faz halkasının aydınlatmasından kaynaklanan bir artefaktır. Şimdi, parlak alan moduna geçtiğimizde bu örneği görüntülemenin çok zor olduğunu fark edeceksiniz. Tekrar faz kontrastına döndüğümüzde, 1960'ların sonlarında tanıtılmasından beri olduğu gibi, sıçan karaciğer dokusundaki hücrelerin yapısını ve şeklini net bir şekilde görebiliyoruz.Diferansiyel girişim kontrastı veya DIC mikroskobu, kontrastlı arayüzleri belirginleştirerek ince yapıların yüksek çözünürlüklü görüntülerini oluşturduğu için biyomedikal araştırmalarda popüler hale gelmiştir; elde edilen görüntü oldukça ince bir optik kesittir. Aslında, DIC'in optik kesitler oluşturabilme yeteneği, onu konfokal mikroskobun tamamlayıcı bir iletim ışığı aydınlatma modu haline getirmiştir. DIC mikroskobu, ışık kaynağı ile kondanser arasına yerleştirilmiş bir polarizatör gibi şu ek bileşenlere sahip bir parlak alan ışık mikroskobudur.Kondansatör kısmında bir DIC ışın ayırma prizması, objektifin hemen arkasında bir DIC ışın birleştirme prizması ve iki blenden önceki sonsuzluk boşluğunda bir analizör bulunur. DIC optiklerinden en iyi performansı elde etmek için, öncelikle ışık mikroskobunu Kohler aydınlatması için hizalamak ve ardından DIC elemanlarını optik yola yerleştirmek önemlidir. Kaynaktan gelen ışık bir polarizörden geçer ve ardından ilk prizma tarafından ayrılır.Bu eşleşmiş ışınlar birbirine yakın seyreder. Eğer çiftin her ikisi de numunedeki aynı malzemeden geçerse, ikinci prizma tarafından yeniden birleştirildiklerinde birbirleriyle girişim yapmazlar ve bu nedenle gri görünürler. Ancak bir yapının kenarında, çiftin bir ışını ortağından farklı bir malzemeden geçer ve değişime uğrar.Bu ışınlar ikinci prizma tarafından yeniden birleştirildiğinde, ya parlak bir nokta oluşturan yapıcı bir girişim ya da karanlık bir nokta oluşturan yıkıcı bir girişim gerçekleştireceklerdir. İşte DIC kontrastı altında diyatomlara bir bakış. Diyatom yapısının ince detaylarının kolayca görülebildiğini fark edeceksiniz.Ancak, DIC optikleri çıkarılırsa bu detaylar kaybolur. Numune üzerindeki kontrast bir tarafında parlak, diğer tarafında ise daha karanlıktır. Bu durum topografya izlenimi verir, ancak aslında bu bir illüzyondur.Gölge oluşturma etkisinin yönü, polarizör bir geçiş noktası üzerinden ters Kontrast'a döndürülerek tersine çevrilebilir. Faz kontrastı ve DIC'in optik modlarını inceledik. Hatırlatmak gerekirse, faz kontrastı giderme işlemi, kontrastlı örnekleri siyahtan beyaza doğru belirginleştirir ve hem renksiz hem de şeffaf olan örnekleri görüntülemek için kullanışlıdır.DIC ayrıca numunede kontrast oluşturur. Bunu, ince bir optik kesitin yüksek çözünürlüklü bir görüntüsünü oluşturarak yapar. İşte bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, mikroskopi çalışmalarınızda başarılar dileriz.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Neisseria meningitidis (Nm), gram negatif bir insana özgü solunum patojen, insan α-aktinin bağlayabilirsiniz . Burada insan beyninin mikrovasküler endotel hücreleri (HBMECs) içine bakteriyel girmesinden sonra intraselüler α-aktinin bakterinin colocalisation görselleştirilmesi için bir protokol mevcut.

Görselleştirme ve Miktar hücre içi Etkileşimleri Neisseria meningitidis</emKonfokal Görüntüleme α-aktinin> ve İnsan

Hücreler içinde birden fazla floresan etiketli molekül türünü aynı anda görüntülemek için floresan fotoaktivasyon lokalizasyon mikroskobunun (FPALM) kullanımını gösteriyoruz. Açıklanan teknikler, tek hücreler içinde onlarca nanometrelik bir hassasiyetle binlerce ila yüz binlerce ayrı floresan etiketli proteinin lokalizasyonunu sağlar.

Floresan Fotoaktivasyon Lokalizasyon Mikroskobu ile Biyolojik Yapıların Eş Zamanlı Çok Renkli Görüntülenmesi

Parlak alan ve diferansiyel girişim kontrast görüntülerinin bir kombinasyonu aracılığıyla hücresel kütle, hacim ve yoğunluğun kantitatif ölçümlerini gerçekleştirmek için standart bir optik mikroskobun kullanımını açıklıyoruz.

Nicel Optik Mikroskopi: Hücresel biyofizik ölçümü Standart Optik Mikroskop ile Özellikleri

Konfokal mikroskopi çekici süspansiyonlar için model sistemler olarak incelenmiştir hareketsiz resim ve koloit akıcı polimer karışımları için kullanılır. Görüntü analizi algoritmaları geometrik hapsi nedeniyle değişiklikleri ölçmek kolloidal parçacıkları için yapısal ve dinamik ölçümleri hesaplamak için kullanılır.

Kuşatılmış Quiescent ve akan Koloidno polimer Karışımlarının Eşodaklı Görüntüleme

Bu protokol, ultrafast mikroakışkan akışta tek hücreli görüntüleme için asimetrik tespit zamanlı streç optik mikroskopi sisteminin uygulanmasını ve görüntüleme akış sitometrisi uygulamalarını anlatmaktadır.

Asimetrik Algılama Zaman-Streçi Optik Mikroskopi (ATOM) ile Mikroakışkan Görüntüleme Akış Sitometresi

Burada geleneksel epi-floresan görüntüleme, tek molekül algılama tabanlı süper kararlılık düşsel ve çok renkli tek molekül algılama birleştiren, bir tümleşik mikroskobu sistem inşaat pratik bir rehber mevcut de dahil olmak üzere tek molekül floresans rezonans enerji görüntüleme, maliyet-etkin bir şekilde bir set-up içine aktarın.

Çoklu görüntüleme modları bir floresan mikroskop ile iletken

Bu protokolün amacı, Plazmonik nano madde örneklerinin hazırlanması ve diferansiyel girişim kontrastı (DıC) mikroskobu ile tek parçacık spektroskopisi gerçekleştirme konusunda kanıtlanmış bir yaklaşımın ayrıntısı olmaktır.

Iletim bazlı Nomarski-tipi diferansiyel girişim kontrast mikroskobu ile Plazmonik nanopartiküller üzerinde spektroskopisi gerçekleştirme

Diferansiyel dinamik mikroskopi (DDM), dinamik ışık saçılması ve mikroskopi özelliklerini birleştirir. Burada, vimentin ağlarındaki parçacıkların subdifüzyon ve kafesli dinamiklerini ve aktif miyozin güdümlü aktin-mikrotübül kompozitlerinin balistik hareketini ölçerek yeniden yapılandırılmış sitoiskelet ağlarını karakterize etmek için DDM'yi kullanma süreci sunulmaktadır.

Diferansiyel Dinamik Mikroskopi Kullanarak Sitoiskelet Dinamiğinin Ölçülmesi

Bu protokol, yüksek çözünürlüklü hücresel ve alt hücresel görüntüleme için çoklu dizi dedektörüyle entegre edilmiş lazer taramalı konfokal mikroskop sisteminin gelişmiş görüntüleme uygulamalarını ve paylaşılan kaynak yönetimini detaylandırır. Bu iş akışı, tek bir platform içinde konfokalden süper çözünürlükle (~120 nm) çok modal görüntülemeyi mümkün kılarak nano ölçekli görselleştirmeyi daha erişilebilir kılar.

Süper Çözünürlüklü Görüntüleme ve Paylaşılan Yönetim: Multiplex Algılama ile Konfokal Mikroskopi İçin Bir Protokol

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

Öğrenin, faz kontrast ve DIC mikroskopi teknikleriyle saydam biyolojik örneklerin görüntülenmesini. Bu yöntemler hücresel yapıları ve ince detayları yüksek çözünürlükle ortaya çıkararak biyomedikal araştırmalarda temel araçlardır.

Faz Kontrast ve Diferansiyel Girişim Kontrast (DIC) Mikroskopi

Daha fazla video keşfet