Um método para avaliar Inseticida Eficácia contra Bed Bug,
15 de março de 2017
avaliações de inseticidas são muitas vezes alvo contra insetos adultos, em vez de estágios imaturos. Aqui, apresentamos um protocolo para avaliar inseticidas contra ovos de percevejos com uma comparação à primeira fase de percevejos de ninfa. Estes protocolos pode ser modificada para outros insetos para avaliar a eficácia do inseticida nas fases da vida não-adultos.
O objetivo geral deste experimento é avaliar a eficácia de inseticidas no combate a ovos e ninfas de primeiro estágio de percevejos-de-cama. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de entomologia, como os efeitos de ensaios toxicológicos sobre ovos e ninfas pequenas de percevejos-de-cama. A principal vantagem desta técnica é que ela foi desenvolvida para tratar um estágio de vida de inseto particularmente difícil com inseticidas, especialmente o estágio de ovo.
Para iniciar o experimento, retire cinco a 10 fêmeas adultas bem alimentadas e acasaladas de uma colônia e coloque-as em uma placa de Petri com papel de filtro. Prepare 10 repetições para garantir que haverá ovos suficientes para o ensaio com inseticida. Verifique as placas diariamente para verificar se as fêmeas depositaram ovos.
Após as fêmeas colocarem os ovos, retire-as da placa de Petri e coloque-as em novas placas de Petri com papel de filtro novo diariamente. Registre os dados nas placas de Petri antigas e novas. Deixe os ovos envelhecerem de quatro a cinco dias antes de iniciar o ensaio.
Uma vez que os ovos tenham envelhecido adequadamente, remova cuidadosamente os ovos de percevejo das folhas de papel filtro utilizando pinças de ponta macia. Raspe suavemente a base do ovo preso ao papel filtro usando a pinça e, em seguida, segure delicadamente o ovo sem aplicar muita pressão para evitar arremessar os ovos de percevejo. Coloque os ovos de percevejo removidos em seus respectivos grupos dentro das placas de Petri de plástico.
Esfregue a parte inferior de cada placa de Petri externamente com uma folha de amaciante para tecidos para reduzir a eletricidade estática que possa lançar ovos de percevejo. Em seguida, prepare diluições seriadas de inseticidas para obter uma faixa de cinco concentrações diferentes e uma solução controle apenas com água da torneira, cada uma com volume de 20 mL. Utilize tubos de centrífuga de 50 mL previamente cortados na marca de mL e corte malha fina em quadrados grandes o suficiente para caber dentro da tampa.
Parafuse firmemente a malha, eliminando qualquer saliência, nos tubos de centrífuga utilizando a tampa do tubo de centrífuga. Em seguida, com um pincel, coloque um grupo de ovos de percevejo-da-cama sobre a malha no interior de um tubo de centrífuga. Mergulhe o grupo de ovos de percevejo-da-cama no interior do tubo de centrífuga cortado em uma concentração de inseticida durante cinco segundos.
Retire o tubo de centrífuga da solução de inseticida. Coloque o tubo de centrífuga diretamente sobre o papel de laboratório para secar a malha com os ovos no interior. Após a secagem, remova o grupo de ovos do tubo de centrífuga utilizando um pincel de cerdas finas e pequeno e coloque-os em uma placa de Petri limpa com um papel filtro limpo.
Registre a mortalidade dos ovos durante 14 dias para garantir que todos os ovos tenham tempo suficiente para eclodir. Corrija a mortalidade no tratamento controle utilizando a fórmula de Abbott. Insira a mortalidade registrada com as concentrações correspondentes no software de análise para calcular os valores de CL50.
Selecione um grupo de cinco percevejos adultos machos e cinco percevejos adultos fêmeas alimentados no dia anterior e coloque-os em uma placa de Petri com papel de filtro. Deixe os percevejos adultos acasalarem e depositarem ovos durante oito dias. Em seguida, remova os adultos das placas de Petri e permita que os ovos eclosionem em ninfas de primeiro estágio dentro das placas de Petri.
Colete as larvas de primeiro ínstar não alimentadas de mesma idade usando um pincel, depois coloque-as em novas placas de Petri limpas até o ensaio com inseticida. Pipete alíquotas de 150 microlitros de cada uma das cinco diluições previamente preparadas de inseticida e água para o grupo controle sobre papéis-filtro individuais. Distribua uniformemente o inseticida aplicando gotas ao redor de toda a borda e centro do papel-filtro.
Coloque individualmente os papéis-filtro tratados sobre painéis individuais de fibra dura. Libere grupos de ninfas de primeiro estágio sobre os papéis-filtro individualmente, enquanto ainda estiverem úmidos com o inseticida, e cubra as ninfas com a parte inferior de uma placa de Petri invertida, colocando um peso sobre a placa de Petri para impedir que as ninfas de primeiro estágio de percevejos escapem. Registre a mortalidade das ninfas de primeiro estágio de percevejos após 24 horas de exposição a todas as concentrações de inseticida.
Corrija a mortalidade no tratamento controle utilizando a fórmula de Abbott. Insira a mortalidade registrada e as concentrações no software de análise para calcular os valores de CL50. A porcentagem de resposta ou mortalidade de ovos de percevejos da cepa Harlin frente a cinco concentrações diferentes de metocloprida beta-ciflutrina aumentou com o aumento da dose.
A mortalidade atingiu 100% na maior concentração testada. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma melhor compreensão de como avaliar a eficácia de inseticidas contra ovos e primeiros estágios ninfais de percevejos-de-cama.
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Visão Geral
Este estudo apresenta um protocolo para avaliar a eficácia de inseticidas contra ovos e primeiros estágios ninfais de percevejos-de-cama. O método tem como objetivo abordar os desafios da avaliação da eficácia de inseticidas em estágios de vida não adultos, os quais muitas vezes são negligenciados nas avaliações tradicionais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Entomologia
- Eficiência de inseticidas
- Estádios de vida dos insetos
Contexto
- Avaliações de inseticidas geralmente focam em insetos adultos.
- Estádios imaturos, como ovos e ninfas, são cruciais para o controle de pragas.
- Compreender os efeitos dos inseticidas sobre esses estádios pode melhorar as estratégias de manejo de pragas.
- Este estudo fornece um método adaptado para avaliar inseticidas em ovos de percevejo-dos-matos.
Objetivo do Estudo
- Avaliar a eficácia de inseticidas sobre ovos e primeiros estágios ninfais de percevejos-de-cama.
- Desenvolver um protocolo que possa ser adaptado para outras espécies de insetos.
- Ampliar o conhecimento na área de entomologia sobre os impactos de inseticidas em estágios não adultos de insetos.
Métodos Utilizados
- Colete 5 a 10 fêmeas adultas de percevejos acasaladas e bem alimentadas.
- Coloque as fêmeas em uma placa de Petri com papel de filtro.
- Prepare 10 réplicas para garantir produção suficiente de ovos.
- Monitore as placas diariamente quanto à postura de ovos.
Resultados Principais
- O protocolo avalia com sucesso a eficácia de inseticidas em ovos de percevejos-das-camas.
- Os primeiros ínstar também foram avaliados para comparar a suscetibilidade.
- Os resultados indicam a importância de direcionar as fases imaturas no controle de pragas.
- Este método pode ser adaptado para outras espécies de insetos.
Conclusões
- A avaliação de inseticidas em estágios não adultos é fundamental para um manejo eficaz de pragas.
- O estudo fornece um protocolo valioso para pesquisas futuras.
- São necessários estudos adicionais para explorar as implicações para outras pragas insetarianas.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
Avaliar a eficácia de inseticidas em todos os estágios de vida, incluindo ovos e primeiros ínstares, é essencial para estratégias abrangentes de controle de pragas nas áreas de biotecnologia e pesquisa e desenvolvimento em saúde pública. Este método permite a avaliação quantitativa do impacto toxicológico em estágios imaturos de percevejos, apoiando a validação de alvos e a redução de riscos mecanicistas em programas de controle de vetores. Ao gerar dados de concentração-resposta e valores de CL50 para estágios não adultos, esta abordagem melhora a confiança preditiva nas fases iniciais de descoberta e na priorização de portfólios para novos compostos inseticidas.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação dos mecanismos inseticidas em estágios vulneráveis do ciclo de vida, esclarecendo o engajamento do alvo em ovos e primeiros estágios larvais.
- Valor Operacional: Apoia a redução de riscos biológicos ao confirmar a atividade em estágios nos quais ensaios tradicionais baseados em adultos podem falhar.
- Valor Preditivo: Aumenta a confiança no alvo por meio do perfil de eficácia específico a cada estágio, orientando decisões de avançar ou não avançar na identificação de compostos líderes.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaios
- Valor Científico: Produz curvas padronizadas e reprodutíveis de concentração-resposta para quantificar a CL50 em ovos e primeiros estágios ninfais de percevejos-de-cama.
- Valor Operacional: Permite o preparo escalonável e de alto rendimento de diluições de inseticidas e protocolos de exposição utilizando ensaios por imersão e contato.
- Prontidão do Ensaio: Gera dados quantitativos de mortalidade adequados para triagem de compostos e análise de relações estrutura-atividade.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Valor Científico: Apoia a modelagem de sistemas relevantes para doenças ao avaliar a eficácia em estágios iniciais da vida que contribuem para a resiliência populacional.
- Valor Operacional: Garante continuidade translacional, desde a descoberta até a validação pré-clínica, ao capturar a suscetibilidade em todo o ciclo de vida.
- Avanço Ajustado ao Risco: Orienta decisões pré-clínicas de avançar ou não ao revelar padrões de resistência ou tolerância específicos a cada estágio.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
O método se integra ao continuum de descoberta, desde a validação inicial do alvo até a identificação de compostos líderes e avaliação pré-clínica, especialmente para o desenvolvimento de vetores de controle e inseticidas de saúde pública.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses sobre mecanismos inseticidas ao permitir a avaliação da eficácia em estágios de vida não adultos, frequentemente ignorados em triagens convencionais.
- Triagem: Oferece prontidão para ensaios por meio de protocolos padronizados de imersão e contato que geram dados quantitativos reprodutíveis de mortalidade.
- Análises: Fornece cálculos de CL50 e modelagem da resposta à concentração, permitindo comparação entre compostos e classificação de potência.
- Pesquisa Translacional: Conecta descobertas iniciais à continuidade pré-clínica ao avaliar a eficácia em todas as fases do ciclo de vida do percevejo-de-cama, um fator-chave no manejo da resistência.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma plataforma reutilizável para avaliar novos compostos inseticidas contra estágios de vida de difícil tratamento, reduzindo o desenvolvimento redundante de ensaios.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva ao revelar a suscetibilidade específica a cada estágio e reduzir a ambiguidade mecanicista da ação de inseticidas.
- Valor Operacional: Fornece protocolos padronizados e reprodutíveis para ensaios com ovos e larvas de primeiro ínstar, minimizando a variabilidade entre laboratórios.
- Valor Estratégico: Melhora a eficiência do capital ao permitir a eliminação precoce de compostos que falham contra estágios imaturos, evitando falhas em fases tardias.
- Impacto na Carteira: Apoia a priorização ajustada ao risco ao identificar compostos com atividade ampla no ciclo de vida, aprimorando as decisões de avanço.
Considerações sobre a Implementação
- Exige experiência em manipulação entomológica, criação de insetos e micro-manipulação de ovos e primeiros estágios larvais.
- Depende da preparação precisa da diluição, do tempo de exposição e de controles ambientais para garantir a validade do ensaio.
- Requer pontuação padronizada de mortalidade e correção utilizando a fórmula de Abbott para análise ajustada ao controle.
- Envolve considerações de adaptação ao estender o protocolo a outras espécies de insetos com morfologia de ovo ou comportamento de estágio larval diferentes.
- As limitações práticas incluem o caráter trabalhoso da coleta, envelhecimento e manipulação individual de ovos, o que pode restringir a produtividade na ausência de automação.
