Visualização e imagem ao vivo do Oligodendrocyte organelas em fatias Organotypic cérebro usando microscopia Confocal e vírus Adeno-associado
October 23rd, 2017
Microambiental oligodendrócitos promovem a propagação do potencial de ação rápida e sobrevivência neuronal. Aqui descrito é um protocolo para oligodendrocyte específicas de expressão de proteínas fluorescentes em organotypic fatias de cérebro com imagens subsequentes de lapso de tempo. Além disso, apresenta-se um procedimento simples para a visualização de mielina imaculada.
O objetivo geral desta transdução viral e registro de lapso de tempo é visualizar o movimento das mitocôndrias de oligodendrócitos em fatias cerebrais organotípicas. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo dos oligodendrócitos. Por exemplo, como os oligodendrócitos e suas organelas respondem às mudanças no ambiente local. A principal vantagem desta técnica é que ela fornece informações detalhadas sobre a estrutura dos oligodendrócitos e a dinâmica das organelas em uma preparação onde todas as diferentes células cerebrais estão presentes e os oligodendrócitos produzem mielina compacta. Transduzir oligodendrócitos em culturas de fatias no sétimo dia in vitro. Primeiro, extraia 1,3 microlitros de AAV diluído por fatia. Certificando-se de que a parte externa da ponta da pipeta esteja seca, segure a pipeta acima do córtex o mais próximo possível sem tocar na fatia com a ponta da pipeta e empurre lentamente a solução para fora da pipeta. Quando a solução tocar a fatia, mova a ponta da pipeta sobre o córtex para espalhar a solução por toda a área do córtex. Depois que todas as fatias de um prato forem transduzidas, devolva o prato à incubadora e repita o processo nos outros pratos. Examine as fatias quanto à expressão de marcadores fluorescentes e visualize as fatias quando os níveis de expressão dos marcadores fluorescentes forem suficientes e as fatias parecerem saudáveis. Comece a configurar o banho de imagem usando massa de modelar para prender as agulhas da seringa dobradas em um 45
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Visão Geral
Este estudo concentra-se na dinâmica dos oligodendrócitos através de um protocolo para expressão específica de oligodendrócitos de proteínas fluorescentes em fatias cerebrais organótipos. Ao empregar imagens de lapso de tempo, os pesquisadores visam visualizar o movimento das mitocôndrias dos oligodendrócitos e entender sua resposta às mudanças ambientais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia Celular
- Técnicas de Imagem
Fundamento
- Os oligodendrócitos mielinizantes são cruciais para uma sinalização neuronal eficiente.
- Eles melhoram a propagação do potencial de ação e apoiam a sobrevivência neuronal.
- Compreender o comportamento dos oligodendrócitos pode fornecer insights sobre a função e patologia cerebral.
Objetivo do Estudo
- Visualizar o movimento das mitocôndrias dos oligodendrócitos em um modelo de fatia cerebral organótipo.
- Investigar como os oligodendrócitos respondem a mudanças ambientais locais.
- Fornecer um método que auxilie na avaliação da estrutura e dinâmica dos oligodendrócitos.
Métodos Utilizados
- O experimento utiliza fatias cerebrais organótipos para observar o comportamento dos oligodendrócitos.
- Os oligodendrócitos são transduzidos no sétimo dia in vitro usando um vetor viral.
- O método de imagens de lapso de tempo captura as mudanças dinâmicas dos oligodendrócitos.
- Técnicas cuidadosas de pipetagem são empregadas para garantir uma transdução uniforme nas fatias.
Principais Resultados
- A abordagem permite a observação detalhada do movimento dos oligodendrócitos e da dinâmica mitocondrial.
- Insights sobre as respostas estruturais dos oligodendrócitos são esperados a partir dos dados de imagem.
Conclusões
- Este protocolo facilita a visualização da dinâmica dos oligodendrócitos em um modelo relevante.
- Os resultados podem melhorar a compreensão das funções dos oligodendrócitos e suas implicações para a saúde neuronal.
