Une Nanoémulsion Tripeptide-stabilisé de l’acide oléique

Compte tenu de la large gamme de courtes séquences peptidiques, cette méthode peut être étendue à de nombreuses autres conceptions de nanoparticules. La modification du peptide peut rendre le système adapté au diagnostic. L’encapsulation du platine anticancéreux aux médicaments dont l’agent stabilisateur biodégradable et à faible toxicité est très pertinente pour les applications pharmaceutiques.

Les études préliminaires in vivo sur le cancer de l’ovaire sont prometteuses et feront l’objet d’études plus approfondies. Pour commencer, suspendre 50 milligrammes de cisplatine en quatre millilitres d’eau ultra-pure à 60 degrés Celsius. Ajouter la solution nitrate d’argent drop-wise à la solution de cisplatine et remuer le mélange à 300 à 400 RPM pendant deux heures à 60 degrés Celsius dans l’obscurité.

Après cela, utilisez 10% par l’acide chlorhydrique de poids pour confirmer qu’il n’y a pas d’ions argentés libres dans la solution. Si aucun chlorure d’argent supplémentaire ne se forme à l’ajout d’acide chlorhydrique, centrifugeuse le mélange à 3220 fois la gravité pendant 10 minutes. Décanter le supernatant et le filtrer à travers un filtre à seringues de 0,2 micromètre.

Ensuite, testez le filtrate pour le platine en appliquant deux à trois gouttes à 10 deux cristaux de chlorure. Le platine est présent si la suspension devient brun foncé ou orange. Ensuite, ajoutez 13,3 milligrammes d’hydroxyde de sodium dans un millilitre d’eau en suspension de 94,2 milligrammes d’acide oléique en trois millilitres d’eau à 60 degrés Celsius.

Remuer le mélange pendant deux heures à 60 degrés Celsius. Ensuite, éteignez le feu et continuez à remuer à température ambiante pendant 16 à 24 heures pour obtenir le produit brut comme un précipité huileux brun-jaune. Centrifuger le mélange de réaction à 3220 fois la gravité pendant 10 minutes, et enlever le supernatant.

Séchez les produits sur un évaporateur rotatif à 25 degrés Celsius. Suspendre le produit brut en cinq millilitres d’acétylisation en vortexant et en récupérant le produit par centrifugation. Répétez ce processus de lavage au moins deux trois fois de plus pour obtenir l’acide oléique pur platine II conjugué comme un solide jaune pâle.

Tout d’abord, faire tremper 5,7 grammes de résine Wang protégée par fmoc L-phenylalanine dans 25 millilitres de diméthylformamide pendant une heure. Ensuite, faire tremper la résine dans 15 millilitres de 20% de pipérine dans DMF pendant cinq minutes tout en secouant à 80 RPM pour dé-protéger l’amine. Égoutter la résine et répéter la protection pendant 20 minutes.

Lavez la résine avec du DMF et de l’alcool d’isopropylique par la suite. Une fois que la déprotection a été confirmée, ajouter fmoc protégé L-tyrosine TBTU et DIPEA et agiter le mélange pendant 16 à 24 heures pour effectuer le couplage. Laver la résine avec du DMF et de l’alcool isopropylique.

Effectuez le test Kaiser et continuez avec la déprotection et le lavage comme décrit précédemment. Couple et dé-protéger fmoc protégé lysine de la même manière. Lavez la résine avec du DMF, de l’IPA, du méthanol, du dichlorométhane et de l’éther de diéthyle par la suite.

Réserver un gramme de résine kyf pour la modification fitc. Faire tremper le reste de la résine dans 95 % d’acide trifluoroacétique. 2,5% de triisopropylsilane et 2,5% d’eau pendant trois heures pour fendre le tripeptide de la résine.

Précipiter le peptide brut avec de l’éther de déthyle refroidi à 20 degrés Celsius. Lavez le précipité trois fois par centrifugation en portions de 30 à 40 millilitres d’éther de déthyle froid et séchez-le sous vide. Ensuite, mélanger le gramme restant de résine KYF avec 120,1 milligrammes d’acide 6-acétaohexanoïque dans 30 millilitres de DMF avec TBTU et DIPEA.

Agiter le mélange de 16 à 24 heures à température ambiante pour obtenir le tripeptide modifié à l’azide. Ensuite, combinez 253 milligrammes de cette résine avec 3,78 milligrammes de cuivre solide (I)iodure 71,9 milligrammes de florisean propargyl et 2,24 milligrammes de DIPEA. Laisser le mélange réagir en secouant pendant 24 heures.

Ensuite, lavez soigneusement la résine de roulement KYF modifiée fitc. Fendre le FITC modifié KYF de la résine et la purifier de la même manière que le tripeptide non modifié. Pour commencer à préparer la nanoemoulsion, dissoudre 10 milligrammes de l’acide oléique platine II conjuguer en 1,5 millilitres d’IPA.

Dessinez cette solution dans une seringue de 5 millilitres, fixez une aiguille de calibre 20 et montez la seringue sur une pompe à seringues au-dessus de la zone de réaction. Réglez la pompe à seringues à 0,1 millilitre par minute. Pour une nanoémulsion avec kyf modifié FITC, dissoudre un milligramme de KYF modifié FITC et un milligramme de KYF non modifié dans 20 millilitres d’eau.

Pour une nanoémulsion avec KYF non modifié, dissoudre au lieu de cela deux milligrammes de KYF dans 20 millilitres d’eau. Chauffer la solution KYF modifiée ou non modifiée par le FITC à 37 degrés Celsius. Assurez-vous que la solution KYF est en mouvement à environ 400 RPM, et que la seringue est alignée avec la solution.

Puis, démarrer la pompe seringue pour commencer à ajouter l’acide oléique platine deux conjugué drop sage. Une fois le conjugué ajouté, réduire la vitesse d’agitation à 150 rPM et laisser refroidir la solution à température ambiante. Continuer à remuer pendant 16 à 24 heures.

Ensuite, concentrez la nanoémultion dans une unité de filtre centrifuge de 10 000 Dalton. Lavez la nanoémulsion dans une unité de filtre centrifuge trois fois avec quatre portions millilitres d’eau ultrapure. Et puis le stocker comme une solution aqueuse à quatre degrés Celsius.

Le produit final est opalescent pour les nanoparticules KYF et fluorescent pour les nanoparticules modifiées par le FITC. Les gouttelettes dans une nanoémulsion préparée avec kyf non modifié étaient sphériques, bien dispersées, et relativement uniformes dans la taille. D’après les images de microscopie électronique de transmission, les noyaux avaient environ 107 nanomètres de diamètre.

La nanoémulsion modifiée par le FITC, qui apparaît ici en vert, pourrait pénétrer dans les cellules de diverses lignées de cellules cancéreuses ovariennes. Alors que le diamètre hydrodynamique des deux formulations a augmenté pendant quatre mois de stockage dans l’eau, les dimensions globales ont été préservées. En outre, aucune opsonisation de l’émulsion n’a été observée après une journée d’incubation dans le sérum bovin fœtal à 20 %.

La sortie de platine de l’émulsion a été la plus lente à pH 7,4 avec seulement 20,8% du platine libéré après quatre heures. La libération de platine s’est accélérée à mesure que le pH diminuait. La nanoémulsion enduite kyf contenant du platine a réduit la viabilité de ces lignées de cellules cancéreuses ovariennes à un degré beaucoup plus élevé que ce qui a été réalisé par le carboplatine, l’analogue cliniquement pertinent.

La nanoémulsion a également montré une réduction comparable ou plus grande de la viabilité que le cisplatine dans cinq des six lignées cellulaires. La nanoémulsion enduite de KYF a constamment induit une réduction comparable ou plus grande de la viabilité que l’acide oléique platine II conjugué seul. Il s’agit d’une méthode simple et efficace pour encapsuler les thérapeutiques hydrophobes dans l’échafaudage de nanoparticules de base de tripeptide.

Les peptides courts sont biodégradables et ont une faible toxicité, ce qui est important pour la médecine et la biotechnologie. Effectuez cette procédure sous le capot des vapeurs pour éviter l’exposition à des solvants organiques. L’acide oléique platine et les nanoémulsions de platine KYF ont des propriétés anticancéreuses et doivent donc être manipulés avec un soin particulier.

Cette méthode est simple en termes d’activité et d’équipement à faible filabilateur, mais elle repose sur une application correcte de la stratégie de synthèse et des concepts chimiques sous-jacents. Notre méthode peut être étendue pour fournir d’autres petites molécules de drogue. Le noyau de nanoparticules se compose d’acide oléique et est donc adapté à l’encapsulation des agents hydrophobes.