Drosophila'da Hızlı Bir Yemek Tercihi Tahlil

Protokolümüz, test hissi ve gıda tüketiminde yer alan tüm genler, reseptörler, nöronlar ve nöro-psikolojik kafalar için tasarım yapmayı sağlayan güçlü bir model organizma olan meyve sineği için ince bir test yapmak üzere tasarlanmıştır. İnsanların tadı olan yiyecekler gibi uçması gibi:tatlı, hafif tuzlu, hafif ekşi veya acı, çok tuzlu veya çok ekşi tadı olan yiyecekleri reddedin. Bu tekniğin gücü hız ve kolaylıktan gelir.

Karmaşık bir kurulum olmadan kısa sürede prh içinde birçok farklı sinek test edebilirsiniz. Yöntemimiz, belirli bir gıda gibi sineklerin ve belirli gen ürünlerinin tat tercihini nasıl etkilediğini anlamak için mükemmel, mükemmel bir testtir. Hayvanların belirli yiyecekleri kabul edip etmediğini belirlemek zor olabilir.

Bu nedenle, hayvan tadı tercihini test etmek için standart bir protokol oluşturmak önemlidir. Test için açlık şişeleri hazırlamak için, test edilecek sinek gen tipi başına her boş plastik sinek şişesinin altındaki bir doku parçasını gevşek bir şekilde sıkıştırın. Böylece kağıt, yoğun bir kütle oluşturmadan, her şişeye yaklaşık üç mililitre saf su ile doyurarak dokuları ayakta durmadan doldurur.

Şişelerin duvarlarında büyük miktarda fazla su damlacıkları olmamasına dikkat ederek. Alternatif olarak, deneyden 24 saat önce karbondioksit iki ila dört günlük sinekleri uyuşturmadan ve sinekleri yaklaşık 70 kişilik gruplara ayırmadan 24 saat önce, sakkarozsuz% 1 Agros'un beş mililitresi ıslatılmış kağıt için değiştirilebilir. Daha sonra her sinek grubunu bir açlık aşağılıklarına ekleyin ve her şişeyi genotip ve açlık başlangıç zamanı ile etiketleyin.

Bir deney yapmadan önce, her farklı boya rengiyle aynı yiyeceği kullanarak her boya için bir dizi seyreltme hazırlayın. 0,5 gram Agros'un mikrodalga güvenli bir kapta 50 mililitre saf su ile birleştirilmesi ve Agro çözeltisini gerektiği gibi karıştırarak çözünene kadar ısıtın. Sakkaroz ve sudaki deneysel bileşikler de dahil olmak üzere her bir gıda bileşenini, test edilen son konsantrasyonun 100 kat veya daha yüksek konsantrasyonunda çözün.

Ve Agro boyayı ve istenen deneysel bileşiği konik, polipropilen santrifüj tüplerinde karıştırın. Karıştırdıktan sonra tüpleri dağıtıma kadar 60 santigrat derece su banyosuna yerleştirin ve deneysel gıda ve boya çözeltilerinin bir mililitresini ilk tahlil kabının bir tarafına ekleyin. Yemeğin diğer tarafına ikinci boya rengiyle etiketlenmiş kontrol gıda çözeltisinin bir mililitresini eklemeden önce Agros'un sertleşene kadar soğumasını bekleyin.

Daha sonra ters kontrol ve deneysel boya çözeltisi çifti ile tahlil çanağı hazırlığını tekrarlayın. Sıfır tercih indeksi sağlayan iki boya konsantrasyonu tanımlamak için sonuçları kullanın. Deneysel bileşik eklenmediğinde.

İki yönlü beslenme tahlil yapmak için. İlk olarak, uçma ve tırmanma gibi belirgin bir motor aktivite gözlenene kadar buzda üç ila beş dakika boyunca bir deneysel sinek aşağılığını geçici olarak felç etti. Sinekler hareketsiz hale getirildikten sonra, şişeyi hafifçe ters çevirin ve sinekleri test odasına aktarmak için dokunun, ardından kapağı hızlı bir şekilde odaya yerleştirin.

Tüm gruplar aktarıldığında, tüm test odalarını 90 dakika boyunca karanlık ve kapalı bir alana taşıyın. Tahlil sonunda, eksi 20 santigrat derece dondurucudaki odaları yaklaşık bir saat boyunca ters çevirin. Her deney grubundaki sineklerin karın rengini incelemek için her odayı bir stereo mikroskop altına yerleştirmeden önce.

Bir sineği sayın, karın sağlam bir beslenmeyi gösteren% 50'den fazla renkliyse, karnın sadece küçük bir yiyecek noktası içerdiği sinekleri atın, bu da zayıf yemenin göstergesidir. Tüm sinekler sayıldığında, her grup için gıda tercih indeksini ölçmek için denklemi kullanın. Bu testte, 35 milimetrelik bir yemek iki haftaya bölündü Agro'nun yiyeceklerini içeren bölmelerde besleyeceğiz, kırmızı veya mavi boya ile birleştiğinde.

Boya önyargısını dışlamak için, mavi ve kırmızı boya konsantrasyonları, sadece bu iki boya eklendiğinde, ıslak aç yetişkin sinek yükleme bly karın renkleri mavi veya kırmızı olarak ortaya çıktıktan 90 dakika sonra yaklaşık sıfır tercih vermek için dikkatlice rafine edildi. Hayvan ağırlıklı olarak mavi veya kırmızı yiyecek tüketmişse, sırasıyla, bir sinek hem mavi hem de kırmızı tüketmişse, karın mor görünüyordu. Sadece önemli miktarda yiyecek yutmuş sinekler puanlanırken, yetersiz gıda alımına sahip sinekler sayılmazdı.

Bu Petri kabı bazlı tahlil ile çok kuyulu tabak bazlı tahlil karşılaştırıldığında, iki besleme yönteminin vahşi tip sineklerdeki tatlı, acı ve tuzlu yiyeceklere yanıt olarak temelde aynı tahlil besleme sonuçlarını verdiğini ortaya koydu. Özellikle, ancak bir Petri kabında yiyecek hazırlamak ve dağıtmak 60 kuyulu çok kuyulu bir tabaktan çok daha hızlıdır. Özellikle yeni bir diyet partisi yaptıktan sonra hangi boya konsantrasyonu kullanılacağını belirlediğinize emin olun.

Bu konsantrasyon sinek hatları arasında farklı olabilir. Bugünkü çiftimiz iki seçenekli test de çok güçlü. Sineklerin nasıl olduğunu sorduğunuz için, hem iç-dış çerçevenin gerçek duruma uygun beslenmeye ve davranışa zarar verdiğini hissedebilirsiniz.