Immunofluorescence Imaging of Neutrophil Extracellular Traps in Human and Mouse Tissues

Lavinia Schoenfeld; Birgit Appl; Laia Pagerols-Raluy; Annika Heuer; Konrad Reinshagen; Michael Boettcher

doi:10.3791/65272

Journal

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Immunology and Infection

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मानव और माउस ऊतकों में न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप की इम्यूनोफ्लोरेसेंस इमेजिंग

Immunofluorescence Imaging of Neutrophil Extracellular Traps in Human and Mouse Tissues

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Immunofluorescence Imaging of Neutrophil Extracellular Traps in Human and Mouse Tissues

मानव और माउस ऊतकों में न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप की इम्यूनोफ्लोरेसेंस इमेजिंग

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07:36 min

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August 18, 2023

DOI:

10.3791/65272-v

DOI:

10.3791/65272-v

•

07:36 min

August 18, 2023

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Lavinia Schoenfeld¹, Birgit Appl¹, Laia Pagerols-Raluy¹, Annika Heuer³, Konrad Reinshagen¹, Michael Boettcher^1,2

¹Department of Pediatric Surgery, University Medical Center Hamburg-Eppendorf,University of Hamburg, ²Department of Pediatric Surgery, University Medical Center Mannheim,University of Heidelberg, ³Division of Spine Surgery, Department of Trauma and Orthopedic Surgery,University Medical Center Hamburg-Eppendorf (UKE)

Transcript

ऊतक इमेजिंग के लिए एंटीबॉडी चयन के बीच, निर्धारण प्रक्रिया एपिटोप मास्किंग द्वारा एक चुनौती है। इसलिए, एंटीबॉडी बाइंडिंग के लिए इन एंटीजन को उजागर करने के लिए अनुकूलित रिट्रीवर चरण की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, ऊतक अंतर्निहित ऑटोफ्लोरेसेंस एक उच्च पृष्ठभूमि धुंधला होने के माध्यम से कठिनाइयों का कारण बन सकता है।

हालांकि, साहित्य में प्रोटोकॉल में विभिन्न दृष्टिकोणों का उपयोग छवियों के बीच एक मानकीकृत तुलना में बाधा डालता है। हमारे अध्ययन का उद्देश्य मानकीकृत प्रक्रियाओं की मांग को संबोधित करना और इमेजिंग प्रक्रिया के दौरान चुनौतियों पर काबू पाने में शोधकर्ता की सहायता करना है। हमने विभिन्न अलग-अलग प्रोटोकॉल की तुलना करके विभिन्न ऊतकों पर लागू एक बहुमुखी इमेजिंग प्रोटोकॉल स्थापित किया।

इसलिए हमारा काम एंटीबॉडी उपयोग से लेकर नमूना माउंटिंग तक मार्गदर्शन और समस्या निवारण युक्तियां प्रदान करता है, संभावित नुकसान को उजागर करता है। हमारे निष्कर्ष सिट्रूलिनेटेड हिसोन थ्री के लिए एक नया प्राथमिक एंटीबॉडी पेश करके अनुसंधान को आगे बढ़ाते हैं, और पृष्ठभूमि धुंधला पन को कम करने के लिए एक ऑटोफ्लोरोसेंट कम करने वाला एजेंट है। इसके अलावा, सफल इमेजिंग के लिए, हम नमूनों की सावधानीपूर्वक हैंडलिंग और एंटीजन पुनर्प्राप्ति के लिए निरंतर उच्च तापमान बनाए रखने के महत्व पर जोर देते हैं।

Summary

न्यूट्रोफिल एक्स्ट्रासेल्युलर ट्रैप (एनईटी) विभिन्न बीमारियों से जुड़े होते हैं, और इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग अक्सर उनके विज़ुअलाइज़ेशन के लिए किया जाता है। हालांकि, विभिन्न धुंधला प्रोटोकॉल हैं, और, कई मामलों में, केवल एक प्रकार के ऊतक की जांच की जाती है। यहां, हम माउस और मानव ऊतक में एनईटी को धुंधला करने के लिए आम तौर पर लागू प्रोटोकॉल स्थापित करते हैं।