FISH ما قبل انغراس التشخيص الوراثي

Medicine
 

Summary

توضح هذه المقالة اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على التشخيص الجيني قبل الزرع (PGD) في عملية إعداد سريرية.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Scriven, P. N., Kirby, T. L., Ogilvie, C. M. FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis . J. Vis. Exp. (48), e2570, doi:10.3791/2570 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) هو البديل الذي أنشئ لتشخيص ما قبل الولادة ، وينطوي على اختيار ما قبل زرع الأجنة من الأتراب التي تم إنشاؤها بواسطة تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب (ART). قد تكون هناك حاجة لأن هذا الاختيار أحادي الجين العائلي للمرض (التليف الكيسي على سبيل المثال) ، أو لشريك واحد يحمل كروموسوم إعادة ترتيب (على سبيل المثال إزفاء متبادلة في الاتجاهين). PGD ​​متاحة للأزواج الذين لديهم أطفال المتأثرين السابقة ، و / أو في حالة إعادة ترتيب الكروموسومات والاجهاض المتكرر ، أو العقم. البويضات الملقحة ويستنشق التالية تحفيز المبيض من خلال الانغماس في المختبر في السائل المنوي (IVF) أو عن طريق حقن الحيوان المنوي داخل الهيولى من الفردية (ICSI). وتحتاج فحص ما قبل الزرع في مرحلة الانقسام الأجنة ، وعادة عن طريق إزالة من خلية واحدة في اليوم 3 بعد الإخصاب ، ويتم اختبار الخلايا تحتاج فحص لتحديد الوضع الجيني للجنين. مضان التهجين في الموضع (FISH) على نواة ثابتة من الخلايا تحتاج فحص مع هدف محدد تحقيقات الحمض النووي هو الأسلوب المفضل للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة إعادة ترتيب الكروموسومات ، واختيار الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض الذي لا يوجد أي طفرة معينة الاختبار. كما تم FISH تستخدم لفحص الاجنة لعدم توازن الصبغيات في الكروموسوم عفوية (المعروف أيضا باسم أو PGS AS - PGD) من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني. وصفنا اختيار تحقيقات مناسبة للأسماك وحيدة الخلية ، وتقنيات لنشر قسيم أرومي النوى ، والتهجين في الموقع وسجل إشارة ، تطبق على PGD في عملية إعداد سريرية.

Protocol

1. Lysing ونشر نواة من الخزعة قسيم أرومي

  1. وينبغي أن نكون مستعدين للتحلل الخلية عازلة تنتشر الخلايا (0.2 ٪ Tween20 في حمض الهيدروكلوريك 0.01 م ، ودرجة الحموضة 2.0) 24 ساعة مسبقا وحفظها عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. تحضير 100 مل وتصفية 20 مل في وعاء معقم 30 مل الجميع باستخدام المحاقن المعقمة وتصفية 20 مل حقنة. 1 مل الاستغناء aliquots في 10-15 1.7 مل أنابيب microcentrifuge العقيمة ، وثيقة وتسمية الأنابيب قبل التجميد. فمن المستحسن أن يكون على دفعتين المختلفة الاستخدام ، دفعة جديدة والدفعة السابقة ، والتي تم اختبارها ويمكن استخدامها إذا كانت دفعة جديدة غير مرضية.
  2. تذويب المنطقة العازلة تحلل في درجة حرارة الغرفة 30 دقيقة قبل إجراء الخزعة. للأغراض العملية سوف تكون درجة حرارة الغرفة بين درجة الحرارة ودرجة حرارة اليد.
  3. درجة دائرة صغيرة (قطرها حوالي 5 ملم) على الجانب السفلي من شريحة أمين المغلفة (مثل Genetix) باستخدام قلم الماس والتسمية قبل الشريحة مع رقم القضية ، فريد رقم الشريحة والتاريخ الخزعة. استخدام شريحة منفصلة لكل قسيم أرومي بالترتيب العددي ، والتسمية مع عدد الأجنة. ينبغي أن توضع على الشرائح مع قلم رصاص الصلبة مثل 4H ، و "نشف" مع القفازات المطاطية لإزالة أي غبار الغرافيت.
  4. ضع كمية صغيرة من تحلل العازلة داخل الدائرة.
  5. نقل قسيم أرومي الخزعة في المخزن المؤقت تحلل. إذا لزم الأمر إضافة العازلة تحلل داخل الدائرة حتى يبدأ في الخلية ليز ، وينبغي الخلية ليز تماما والسيتوبلازم تفريق قبل أن يجف العازلة.
  6. مراقبة النواة لضمان بقائه ضمن دائرة وضاع لا ؛ إذا كانت الخلية لا يملك نواة أو قد نوى متعددة ، خزعة خلية أخرى.
  7. ترك الشريحة لتجف في الهواء في درجة حرارة الغرفة.

2. في الموقع التهجين من نواة واحدة قسيم أرومي

  1. تعد سلسلة الايثانول (70 و 90 و 100 ٪) تتكون في الماء المقطر المعقم.
  2. تشغيل وتعيين كتلة ساخنة (على سبيل المثال أو Hybaid Omnislide Hybrite Vysis) إلى 75 درجة مئوية.
  3. تحقيقات تذويب ، الدوامة ، والطرد المركزي. وينبغي أن شهدت الكواشف والتحقق من أن يكون صحيحا حتى قبل اتخاذ هذا الخليط التحقيق. أحجام ماصة على النحو المحدد من قبل الشركة المصنعة لتعويض خليط التحقيق في أنبوب 0.65 مل microcentrifuge معقمة ودوامة الطرد المركزي وقبل الاستخدام. وينبغي أن الحجم الكلي للخليط التحقيق تكون كافية للسماح لفحصها 2 ميكرولتر في نواة وتقريب تصل إلى 10 ميكرولتر أقرب للسماح بهامش أمان.
  4. قبل غسل الشرائح في الجرار coplin باستخدام الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) (7.0 درجة الحموضة : 0.14 م كلوريد الصوديوم ، 3 مم بوكل ، 10 ملي نا 2 هبو 4 ، 2 مم KH 2 PO 4) لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  5. شطف شرائح مرتين في ماء مقطر معقم.
  6. يذوى الشرائح مع سلسلة الايثانول (70 ، 90 ، و 100 ٪) عن كل 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف. مغمورة تماما ضمان الشرائح وإذا كان أي غبار الغرافيت يطفو على السطح ، وتمتص بمنديل نظيف.
  7. تسجيل موقف للنواة داخل دائرة من خلال وضع تصور للمرحلة مجهر التباين.
  8. يذوى مع الإيثانول بنسبة 100 ٪ لمدة 2 دقيقة في درجة حرارة الغرفة والهواء الجاف.
  9. تطبيق 2 ميكرولتر من خليط التحقيق ، وتغطي مع 9 × 9 ملم ساترة (1 / 4 من 18 × 18 مم ساترة NO.1).
  10. ختم حواف ساترة مع الاسمنت والمطاط (مثل الصمغ البقرة ؛ تدقيق البقرة).
  11. Codenature الشرائح على كتلة الساخنة عند 75 درجة مئوية لمدة 5 دقائق ، ثم بين عشية وضحاها هجن الشرائح (16-20 ح) في غرفة ترطيب عند 37 درجة مئوية. ويمزج التحقيق التي تتكون بالكامل من تحقيقات السنترومير (أي لحالات مرتبطة بالجنس) تعطي نتيجة مرضية بعد 60 دقيقة من التهجين.
  12. يعد حمام مائي مع الجرار coplin كافية والحرارة إلى 71 درجة مئوية.
  13. إعداد 0.4x سيترات المالحة القياسية (SSC) صرامة حل غسل (7.0 درجة الحموضة عند 71 درجة مئوية ، وكلوريد الصوديوم 0.06 M 6 مم ، C 6 H 5 O 7 3 نا 0.2 H 2 O) والحرارة في حمام مائي.
  14. الاستغناء عن 50 مل من غسل صرامة في جرة coplin المطلوبة ، وتأكد من أن درجة الحرارة 71 درجة مئوية قبل استخدامها على الفور باستخدام ميزان حرارة نظيف.
  15. إزالة بعناية الاسمنت والمطاط من كل الشرائح وشطف قبالة باستخدام ساترة 4X SSC/0.05 Tween20 ٪ (الرقم الهيدروجيني 7.0) في درجة حرارة الغرفة.
  16. تغسل الشرائح في غسل SSC 0.4x صرامة في 71 دقيقة لمدة 5 درجة مئوية. غسل ما لا يزيد عن 6 شرائح في جرة coplin.
  17. تغسل الشرائح في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة.
  18. إذا كان يحتوي على مزيج المسبار المسبار المسمى بشكل غير مباشر (ق) ، واستنزاف الشرائح من السوائل الزائدة وتطبيق 20 ميكرولتر من الأجسام المضادة مترافق fluorescently تحت مربع 20 x 20 مم من Parafilm.
  19. احتضان مرطب في غرفة في 37 دقيقة لمدة 15 درجة مئوية.
  20. إزالة Parafilm ويغسل مرة واحدة في 4X Tween20 SSC/0.05 ٪ في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 دقيقة.
  21. تغسل مرتين لمدة 2 دقيقة في برنامج تلفزيونير درجة حرارة الغرفة واستنزاف الشرائح.
  22. 6 تطبيق ميكرولتر من دابي / Vectashield (160 نانوغرام من 4 '،6 - diamidino - 2 - phenylindole هيدروكلوريد في 1 مل من المتوسط ​​Vectashield المتصاعدة ، المتجهات مختبرات) إلى 22 مم 22 × لا. 0 ساترة وعكس الشريحة على ساترة.
  23. وختم وصمة عار على حواف ساترة مع طلاء الأظافر واضحة.

3. التحليل باستخدام مجهر الإسفار مجهزة بالمعدات المناسبة مع الفلاتر المناسبة لمجسات مستعملة.

  1. إشارات النتيجة المباشرة التي تصور باستخدام مجهر مضان واحد الفرقة تمرير مرشحات لكل ملون تألقي في مقايسة. وينبغي أن سجل كل نواة من قبل اثنين من المحللين. وينبغي أن يكون المبدأ التوجيهي العام يؤدي الى التهديف من إشارة واحدة حيث إشارتين المتقاربة أقل من مجال واحد (إشارة العرض) وبصرف النظر ، ولكن الحكم على أساس الخبرة يحتاج إلى أن يمارس لتفسير إشارات متفاوتة الحجم والكثافة ، والانفصال.
  2. استخدام برامج التصوير (مثل إيزيس ، MetaSystems ، Altlussheim ، ألمانيا ؛ CytoVision ، Genetix) لالتقاط صورة من نواة لتأكيد التشخيص البصري ، وأرشفة الصور كجزء من خطة لضمان جودة المختبرات.

4. ممثل النتائج :

ينبغي النظر الطورية والطور البيني من نوى الخلايا الليمفاوية مثقف الدم المحيطي للتأكد من أن تحقيقات المختارة هي محددة للصبغيات إزفاء ، بالمعلومات عن نقاط (التحقيقات subtelomere ينبغي هجن فقط على قطاعات وtranslocated التحقيق السنترومير (ق) إلى تتمحور وينبغي أن الجزء (ق)) واشارات في نواة الطور البيني يكون مشرقا ومنفصلة. سجل عدد من الإشارات لكل التحقيق في نواة الطور البيني 100 من كل شريك من المستحسن لتقييم كفاءة الفحص. في هذه الحالة وسجل 2 إشارات في 95 ٪ -99 ٪ من النوى لكل التحقيق. الشكل 1 يبين الطورية ونواة الطور البيني من التحضير لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9.

وينبغي أن الإشارات في نواة الطور البيني من blastomeres الجنين يكون مشرقا ومنفصلة ومستقلة وسجل باستخدام مرشحات تمرير الفرقة عن الألوان المستخدمة. ويبين الشكل 2 نواة قسيم أرومي مع نمط إشارة طبيعية (2 نسخ عن جميع مواضع اختبار) بما يتفق مع الكروموسومات العادي أو متوازنة للكروموسوم 5 و 9 ، ونواة مع إشارة نمط غير طبيعي يتفق مع منتج غير المتوازن للإزفاء الذي أحاد الصبغي (نسخة واحدة) للجزء translocated من كروموسوم 5 و تثلث الصبغي (3 نسخ) للجزء من كروموسوم translocated 9.

الشكل 1
الشكل 1 وانتشار الطورية ونواة الطور البيني المحضرة من مثقف اللمفاويات في الدم المحيطي من حاملة لإزفاء متبادلة بين الأسلحة قصيرة من الكروموزومات 5 و 9 نقاط في 5p14.3 مع و9p24.1 : 46 ، س ص ، ر (5 ؛ 9) (p14.3 ؛ p24.1) العش ر (5 ؛ 9ptel30 ، 5ptel48 + ، + 9cen) ؛ 9) 5ptel48 ، 9ptel30 + ( وقد تم اختيار كل من الأسماك للتحقيقات شرائح translocated (5p14.3 → 5pter ، أحمر Cytocell subtelomere5ptel48 TexasRed ؛ 9p24.1 → 9pter ، الأخضر Cytocell subtelomere 9ptel30 FITC) وتتمحور حول الجزء من الصبغي 9 (9p24.1 → 9qter ، الأزرق ابوت CEP 9 القمر الصناعي SpectrumAqua ألفا).

الشكل 2
القبض على الرقم 2. إشارات في نواة الطور البيني قسيم أرومي من يوم 3 أجنة باستخدام فلتر مختلفة لكل ملون تألقي ودمجها لتكوين صورة مركبة. (أ) اثنان عن كل الإشارات تشير إلى التحقيق نسختين من كل مكان ، وهو ما يتسق مع تكملة طبيعية أو متوازنة لإزفاء الكروموسومات. (ب) والاشارة الحمراء ، وثلاث إشارات خضراء وزرقاء تشير إلى إشارتين نسخة واحدة من الجزء translocated من كروموسوم 5 ، وثلاث نسخ من الجزء translocated من كروموسوم (9) ونسختين من الجزء مركزية من الكروموسوم 9 ، وهو ما يتسق مع المجاورة -1 الفصل بين إزفاء مما أسفر عن المنتجات غير متوازن مع أحاد الصبغي ل5pter → 5p14.3 وتثلث الصبغي ل9pter → 9p24.1.

Discussion

تطبيق مضان التهجين في الموضع (FISH) لخلية جنين واحد (قسيم أرومي) تحديات خاصة على حد سواء في الجوانب العملية وتفسير نمط الإشارة. الخلية الخزعة تحتاج إلى أن تنتشر داخل منطقة محددة مسبقا على الشريحة من أجل تسهيل السمكية في توطين التالية ؛ العناية القصوى يجب أن يؤخذ في ضمان lysed الخلية ، التي تم تفريق السيتوبلازم والنواة التي مرئيا وسليمة ، ولأن التشخيص يعتمد على النتائج من هذه الخلية واحدة ، وسجل الصارمة وتفسيرها وينبغي تطبيق المبادئ التوجيهية. ومع ذلك ، في أيدي ذوي الخبرة ، والسمك هي تقنية قوية لمرحلة ما قبل انغراس التشخيص الوراثي (PGD) في الممارسة السريرية. مبدأ PGD بواسطة FISH هي التي يمكن استخدامها تحقيقات هدف محدد الحمض النووي المسمى مع fluorochromes haptens مختلفة أو للكشف عن عدد النسخ من مواضع محددة ، وبالتالي للكشف عن الخلل الصبغي المرتبطة العزل الانتصافي لإعادة ترتيب الكروموسومات (1) ، بما في ذلك روبرتسوني translocations ، translocations المتبادل ، ظاهرة الانقلاب ، وإعادة ترتيب معقدة (2). ويمكن أيضا أن تستخدم السمكية لتحديد الأجنة الإناث في الأسر التي لديها العاشر مرتبطة المرض ، والتي لا يوجد اختبار طفرة معينة (3 ، 4). الأكثر إثارة للجدل ، كما تم السمكية المستخدمة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم متفرقة من أجل محاولة تحسين كفاءة المساعدة على الإنجاب (5 ، 6) ، إلا أن القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام FSIH ومن المرجح أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في معظم الناس لا ينصح اليدين وذلك للاستعمال السريري الروتيني (7). هذا المقال يركز على الجوانب التقنية والقيود المطبقة على الأسماك وحيدة الخلية التشخيص السريري.

طرق انتشاره وتحديد blastomeres واحدة تشمل الميثانول / حامض الخليك (5 ، 8) ، توين / حمض الهيدروكلوريك (9) ، ومزيج من توين / حمض الهيدروكلوريك والميثانول / حامض الخليك (10). تشمل معالجة الاختلافات ناقص التوتر من الخلايا قبل نشر و / أو البيبسين والعلاج بارافورمالدهيد بعد التثبيت. وينبغي التحقق من صحة الأسلوب المناسب للمختبر (14). يوصف أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك بالتفصيل في هذه المقالة. أسلوب توين / حمض الهيدروكلوريك هو بسيط للغاية من الناحية الفنية واستنساخه في المختبرات المختلفة. ويمكن استخدام هذا الأسلوب لإعداد نواة واحدة لتشخيص السمكية من تحديد الجنس وإعادة ترتيب الكروموسومات مع دقة التشخيص مقبول (7).

يمكن أن يمزج الجمع بين التحقيق مباشرة والمسمى المسمى غير مباشرة التحقيقات ، والتحقيقات من مختلف الصانعين. وينبغي تجنب تحقيقات للتعرف مناطق متعددة الأشكال الصبغي (11 ، 12) ، أو تلك المعروفة العابرة للهجن بشكل كبير مع غيرها من الصبغيات (13) ، رغم أنه يمكن استخدامها إذا ثبت أن تكون محددة ومناسبة لPGD عن طريق اختبار قبل الشركاء على حد سواء الإنجابية . fluorochromes متاح / haptens واستراتيجيات تميز تحقيقات تشمل ما يلي : تكساس الأحمر (TR) ، فلوريسئين ثيوسيانات (FITC) ، SpectrumGreen (Vysis) ، SpectrumOrange (Vysis) ، SpectrumAqua ، مع الكشف عن التحقيقات biotinylated TR - أفيدين ، FITC أفيدين ، أو CY - 5 streptavidin (تصور استخدام عامل تصفية FarRed) ، وهو مزيج من مجسات أحمر وأخضر لإنتاج إشارة الصفراء ، وهي الجولة الثانية من التهجين وخلق لون ثالث من خلال التقاط متتابع للSpectrumOrange باستخدام TexasRed وتصفية SpectrumGold).

وأوصت مجموعة المسبار يحتوي على ثلاثة تحقيقات ومحددة للمناطق السنترومير من كروموزومات X و Y واحد صبغي جسدي ، لتحديد نوع الجنس (14) ، ويستخدم المجس راثي لوضع الصيغة الصبغية وبالتالي التفريق بين تثلث الصبغي X (2N ، 47 ، XXX) ، وتثلث الصيغة الصبغية (3N ، 69 ، XXX) ، وبين رباع الصبغي X (48 ، XXXX) ورباع الصيغة الصبغية (4N ، 92 ، XXXX). تشكيل لتحقيق النموذجية المطبقة في هذا الإعداد هو مزيج يحتوي على AneuVysion ابوت ألفا الساتلية X ، Y ، و 18 ، وقد تم التحقيق أثبتت هذه المجموعة لديها نسبة التعدد قليلة جدا ، وبالتالي ما قبل المعالجة متابعة العمل من الشركاء الإنجابية ليس مطلوبا (14).

وينبغي تحقيق هذا المزيج عن أي إعادة ترتيب معين : تحتوي على الأقل من الناحية المثالية تحقيقات كافية لكشف كل المنتجات المتوقعة لإعادة ترتيب مع الخلل الصبغي. إذا لم يكن هذا ممكنا ، يمزج التحقيق حيث تم تقييم المنتجات التي لم يتم كشفها غير متوازن لتكون غير قابلة للاستمرار في حمل معترف بها ويحتمل أن يكون الانتشار المنخفض جدا قد يكون مقبولا (14). يمكن اختباره على metaphases اللمفاويات مثقف من كل من الشركاء الإنجابية. ينبغي النظر لا يقل عن عشرة ينتشر الطورية لخصوصية التحقيق ، وعبر أشكال متعددة من التهجين ، وحاملة لكروموسوم إعادة ترتيب ، لضمان أن التحقيقات هجن كما هو متوقع لقطاعات مختلفة من إعادة ترتيب. بالإضافة ، يجب أن لا يقل عن 100 سجل نواة الطور البيني من هذه الاستعدادات لتقييم نوعية الإشارة ، والسطوع ، والتحوط (14).

Commeو rcial مجموعات التحقيق PGS المتاحة (مثل ابوت MultiVysion PB أو PGT) ، التي تستهدف في معظم الأحيان الكروموسومات جدت لتكون في المنتجات مختل الصيغة الصبغية من الحمل ، وتضم التحقيق كروموسوم واحد لكل المستهدفة. عادة ما قد يكون نواة التهجين الثاني مع تحقيقات إضافية للصبغيات توفير مقايسة للصبغيات 13 ، 15 ، 16 ، 18 ، 21 ، 22 ، وXY (14). القيمة التنبؤية لهذا الاختبار باستخدام تقنية FISH نشر وصفها هنا من المحتمل أن تكون منخفضة بشكل غير مقبول في أيدي معظم الناس وليس من المستحسن للاستخدام السريري الروتيني (7 ، 15).

تقنيات مثل التهجين الجينومي المقارن (CGH) المطبقة على الخلايا وحيدة قادرة على اختبار لنسخة من كل عدد الكروموسومات (ويلتون وآخرون 2001) ، واستخدام أشكال متعددة من تركيبة واحدة (SNP) صفائف والتحليل الكمي (ويلز وآخرون . 2008) أو "karyomapping" التنميط الجيني (Handyside وآخرون 2009) واعدة تقنيات بديلة للكشف عن عدم توازن الصبغيات في الكروموسوم. ومع ذلك ، فإن قرار الحد من اختلال التوازن والدقة لشريحة لا تزال غير مؤكدة ، ومن المحتمل أن الأسماك سيستمر هذا الأسلوب المفضل لإعادة ترتيب الكروموسومات التي تنطوي على قطاعات صغيرة.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hydrochloric Acid, 2.5L VWR international 101254H
Sodium Chloride, 5Kg VWR international 443827W
Potassium Chloride, 250g VWR international 26764.232
di-Sodium Hydrogen Orthophosphate Anhydrous, 500g VWR international 102494C
Potassium Dihydrogen Orthophosphate, 500g VWR international 10203 4B
Sodium Hydroxide Pellets, 500g VWR international 28245.265
Tween20, 500mL VWR international 663684B
Ethanol, 2.5L VWR international 8.18760.2500 Duty Paid
Tri-Sodium Citrate, 5Kg VWR international 27833.363
Cow Gum, 250mL Cow Proofings Ltd. No longer available Old stocks can still be found in art shops
DAPI/Antifade ES, 0.125μg/mL, 500ul Cytocell Ltd. DES500L 150μl vial rec’d with each Cytocell TEL Probe
Nail Varnish, 12mL Boots 10088316001
Amine-coated Slides, 25 Genetix K2615
DAPI, 0.1mL Sigma-Aldrich D-9542
Vectashield, 10mL Vector Laboratories H1000
Texas-Red-avidin, 0.001mL Vector Laboratories A-2016
FITC-avidin, 0.001mL Vector Laboratories A-2011
Cy-5 Streptavidin, 0.001mL GE Healthcare PA45001
Microcentrifuge Tubes, 1.75mL, box of 500 Thistle Scientific AX-MCT-175-C
Microcentrifuge Tubes, 0.6mL, box of 1000 Thistle Scientific AX-MCT-060-C-CS
30ml Universal Containers, box of 400 Sterilin 128B Available from NHS Supply Chain, Cat No. KCP053
Hot Block
Spirit Burner Spirit Burner Socket Spirit Burner Wick VWR international 451-0107 451-3112 451-3111
Plugged Glass Pipettes Fisher Scientific PMK-300-052R
Dissecting Microscope Wild Heerbrugg
Tissues, 100boxes NHS SUPPLY CHAIN MJT058
Metal Culture Trays
Plastic Melamine Trays VWR international 682-009
Oven
Mouth Pipette Mouthpiece Scientific Laboratory Supplies LTD HAE3700
Tubing
Syringe Filter, 0.2μm pore size, 25mm diameter Fisher Scientific FDM-340-010U
Diamond Pen VWR international 818-0021
Hot Block for Slides Thermo Fisher Scientific, Inc. HBOSBB
Hybridization Chamber
Tissue Roll NHS SUPPLY CHAIN MJT004
Schieferdecker Jar VWR international 631-9313
Coplin Jar VWR international 631-9331
Forceps, Fine VWR international 232-2123
Forceps, Blunt VWR international 232-2113
1000mL Beaker VWR international 213-1642
Phase Contrast Microscope Nikon Instruments E200
Fibre-free Blotting Cards, box of 100 Fisher Scientific SDE1
Blue-Frosted Microscope Slides, box of 100 Scientific Laboratory Supplies LTD MIC3022
Coverslips, 18x18mm, No. 1, box of 200 Scientific Laboratory Supplies LTD MIC3110
Coverslips, 22x22mm, No. 0, box of 200 Scientific Laboratory Supplies LTD MIC3104
Coverslips, 22x50mm, No. 0, box of 100 Scientific Laboratory Supplies LTD MIC3206
1mL Syringe, box of 100 NHS Supply Chain FWC045
1mL Pipette Tip, 10racks of 1000 Thistle Scientific AX-T-1000-C-L-R
Incubator LEEC
Waterbath Grant Equipment W22
Alcohol Thermometer Various sources available
pH Meter Jenway 3305
pH Electrode VWR international 662-1759 BNC Plug to fit Jenway pH meter 3305
Heated Stirrer Bibby HC502
1mL Pasteur Pipettes, box of 500 Scientific Laboratory Supplies LTD PIP4202
Parafilm, 50mm x 75m VWR international 291-1214

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Scriven, P. N., Handyside, A. H., Ogilvie, C. M. Chromosome translocations: segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis. Prenat. Diagn. 18, 1437-1449 (1998).
  2. Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for chromosome rearrangements. Preimplantation Genetic Diagnosis. 2nd Ed, Cambridge University Press. 194-201 (2009).
  3. Harper, J. C., Coonen, E., Ramaekers, F. C. S., Delhanty, J. D. A., Handyside, A. H., Winston, R. M. L., Hopman, A. H. N. Identification of the sex of human preimplantation embryos in two hours using an improved spreading method and fluorescent in situ hybridisation using directly labelled probes. Hum. Reprod. 9, 721-724 (1994).
  4. Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for sex-linked diseases and sex-selection for non-medical reasons. Preimplantation Genetic Diagnosis. 2nd Ed, Cambridge University Press. 230-235 (2009).
  5. Munné, S., Lee, A., Rosenwaks, Z., Grifo, J., Cohen, J. Diagnosis of major chromosome aneuploidies in human preimplantation embryos. Hum. Reprod. 8, 2185-2192 (1993).
  6. Harper, J. C. Preimplantation genetic diagnosis for infertility (preimplantation genetic screening). Preimplantation Genetic Diagnosis. 2nd Ed, Cambridge University Press. 203-229 (2009).
  7. Scriven, P. N., Bossuyt, P. M. Diagnostic accuracy: theoretical models for preimplantation genetic testing of a single nucleus using the fluorescence in situ hybridization technique. Hum Reprod. Cytogenetics. 5, 394-400 (2010).
  8. Coonen, E., Dumoulin, J. C., Ramaekers, F. C., Hopman, A. H. Optimal preparation of preimplantation embryo interphase nuclei for analysis by fluorescence in-situ hybridization. Hum. Reprod. 9, 533-537 (1994).
  9. Dozortsev, D. I., McGinnis, K. T. An improved fixation technique for fluorescence in situ hybridization for preimplantation genetic diagnosis. Fertil. Steril. 76, 186-188 (2001).
  10. Hsu, L. Y., Benn, P. A., Tannenbaum, H. L., Perlis, T., Carlson, A. D. Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study. Am. J. Med. Genet. 26, 95-101 (1987).
  11. Shim, S. H., Pan, A., Huang, X. L., Tonk, V. S., Varma, S. K., Milunsky, J. M., Wyandt, H. E. FISH variants with D15Z1. J. Assoc. Genet. Technol. 29, 146-151 (2003).
  12. Knight, S. J., Flint, J. Perfect endings: a review of subtelomeric probes and their use in clinical diagnosis. J. Med. Genet. 37, 401-409 (2000).
  13. Thornhill, A. R., de Die-Smulders, C. E., Geraedts, J. P., Harper, J. C., Harton, G. L., Lavery, S. A., Moutou, C., Robinson, M. D., Schmutzler, A. G., Scriven, P. N., Sermon, K. D., Wilton, L. ESHRE PGD Consortium (PGS) ESHRE PGD Consortium 'Best practice guidelines for clinical preimplantation genetic diagnosis (PGD) and preimplantation genetic screening (PGS)'. Hum. Reprod. 20, 35-48 (2005).
  14. Munné, S., Wells, D., Cohen, J. Technology requirements for preimplantation genetic diagnosis to improve assisted reproduction outcomes. Fertil. Steril. 94, 408-430 (2010).
  15. Wilton, L., Williamson, R., McBain, J., Edgar, D., Voullaire, L. Birth of a healthy infant after preimplantation confirmation of euploidy by comparative genomic hybridization. N. Engl. J. Med. 345, 1537-1541 (2001).
  16. Wells, D., Alfarawati, S., Fragouli, E. Use of comprehensive chromosomal screening for embryo assessment: microarrays and CGH. Mol. Hum. Reprod. 14, 703-710 (2008).
  17. Handyside, A. H., Harton, G. L., Mariani, B., Thornhill, A. R., Affara, N., Shaw, M. A., Griffin, D. K. Karyomapping, a universal method for genome wide analysis of genetic disease based on mapping crossovers between parental haplotypes. J. Med. Genet. 47, 651-658 (2010).

Comments

1 Comment

  1. tanks very much

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 11, 2011 - 10:49 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics