رواية خزان الغوص المقايسة: طريقة لدراسة استجابات الإجهاد الفطرية في حمار وحشي

Overview

تصف المقالة طريقة سلوكية لتقييم الإجهاد في سمك الحمار الوحشي. استجابة للإجهاد ، تميل سمكة الحمار الوحشي إلى السباحة في قاع الخزان حتى تتم إزالة الإجهاد. يصف بروتوكول نموذج أسلوب stepwise لتنفيذ المقايسة.

Protocol

1. رواية الإعداد اختبار دبابة

1. إعداد كوب 250 مل مملوءة مسبقا مع مياه نظام الأسماك، واثنين على الأقل عقد الدبابات.
2. في صباح يوم الاختبار، نقل ما لا يقل عن 10 اختبار حمار وحشي الكبار لاستخدامها في كل حالة تجريبية (الضوابط والبالغين التجريبية) من منشأة الأسماك إلى خزان عقد، ونقلها إلى غرفة السلوك، والسماح لهم بالتأقلم لمدة ساعة واحدة على الأقل.
   ملاحظة: وينبغي إجراء تحليل القوة قبل التجريب، ولكن في أيدينا، ن = 10 عادة ما تكون كافية للكشف عن أهمية إحصائية. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن خزان عقد تحتوي على ما لا يزيد عن خمسة أفراد لكل لتر من الماء. التأقلم لمدة ساعة واحدة يكفي حيث ثبت أن البالغين حمار وحشي تعودوا في غضون 30 دقيقة من دبابة جديدة. أيضا ، تتأثر الإيقاعات السلوكية بالعمليات الإيقاعية ، وبالتالي يجب إجراء التكرارات التجريبية التي تتم في أيام مختلفة في نفس الساعات. عادة ما نقوم بإجراء جميع التجارب بين الساعة 11:00 صباحا و6:00 مساء.
3. تسمية الدبابات بحيث حالة أو النمط الجيني للحيوانات أعمى عن المجرب.
   ملاحظة: يمكن بسهولة أن تكون التجارب أعمى إلى المجرب عن طريق وضع العلامات الدبابات باستخدام نظام حرف أو رقم (أي، يسمى دبابة واحدة 'A'، آخر 'B'، الخ). يقوم طرف غير مشارك في التجارب بتسمية الدبابات بمثل هذا النظام، ويخفي الهويات عن المجرب إلى ما بعد اكتمال التحليل.
4. باستخدام شبكة، ضع بلطف شخص بالغ واحد في الكأس المملوءة مسبقا من الخطوة 1.1. اسمح للأسماك البالغة بالتأقلم في الكأس لمدة 10 دقائق.
   ملاحظة: تسجيل جنس البالغ ، لأنه قد يكون من المهم بعد التحليل للبحث عن الاختلافات الخاصة بالجنس.
5. بعد التأقلم في الكأس ، أدخل السمك إلى الخزان الجديد (إعداد التفاصيل أدناه) عن طريق صب الماء والبالغ بلطف من الكأس.
   ملاحظة: تصف الخطوات الموجودة في هذا القسم إعداد المقايسة الجديدة للدبابات. يتم إعطاء رسم تخطيطي للمنتج النهائي في الشكل 1B.
   1. ضع الخزان الجديد في منتصف الطاولة.
   2. ضع أضواء الأشعة تحت الحمراء خلف الخزان وضع ورقة الاكريليك الأبيض أو شاشة الناشر بين الخزان ومصدر ضوء LED.
   3. ضع الناشر بحيث ينشر الضوء القادم من المصابيح ، وكثافة الضوء كافية لإلقاء الضوء على الخزان الجديد. كلما كان المجلس أقرب إلى مصدر الضوء ، كلما كانت الأضواء أكثر إشراقا ، ومع ذلك كلما قل انتشارها. وعلى النقيض من ذلك، فإن وضع لوحة الناشر بعيدا عن مصدر الضوء سيقلل من شدة الضوء، ولكنه ينشر الضوء بشكل أفضل.
   4. ملء ما يقرب من ثلاثة أرباع خزان الرواية مع مياه نظام الأسماك.
      ملاحظة: يتم توليد مياه النظام باستخدام التناضح العكسي لمياه الصنبور، تليها ال دوسينج بحيث الموصلية يساوي 900 ± 100 ميكروس، أن درجة الحموضة محايدة (7.2)، وأن درجة الحرارة هي 27 ± 1 درجة مئوية.
   5. قم بتوصيل الكاميرا بموقف الكاميرا وتوصيل الكاميرا بالكمبيوتر. فتح برنامج اقتناء الفيديو وضبط الكاميرا لمواجهة الجزء الأمامي من الخزان وضمان خزان الرواية بأكملها يمكن أن ينظر إليها وأنه لا توجد مناطق غامضة في الفيديو. ضبط الخزان وأضواء الأشعة تحت الحمراء بحيث يكون هناك إضاءة كافية وحتى في جميع أنحاء الخزان عند ملاحظتها من خلال الكاميرا.
      ملاحظة: قبل الشروع في التجارب ، يمكن أن يكون من المفيد في كثير من الأحيان إجراء تجربة ، حيث يتم التقاط فيديو لسمكة وتنفيذ التتبع. سيضمن هذا الإعداد كافية لتجريب السلوك.
6. بعد إدخال الكبار في خزان الرواية، بدء تسجيل الكاميرا، والابتعاد عن الإعداد لمنع ضائقة إضافية للأسماك.
7. بعد الانتهاء من التسجيل، قم بإزالة الفرد من الخزان الجديد ووضعه في خزان احتجاز جديد.
   ملاحظة: يجب استخدام خزان احتجاز مختلف عن الخزان في الخطوة 1.2 لمنع الاختبار المتكرر على نفس الأفراد.

Representative Results

الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن رسم تخطيطي لإعداد خزان الرواية. (أ)أبعاد خزان الرواية شبه المنحرفة 1.8 L كما رأينا من جانب التسجيل للدبابة. (ب)رسم تخطيطي للإعداد بما في ذلك مواقع أضواء الأشعة تحت الحمراء والكاميرا والحواجز المستخدمة لتقليل التداخل البشري.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Camera			We use Point Grey Grasshopper3 USB camera with lens from Edmund Optics.
Infrared filter	Edmund Optics
Video Acquisition Program			Use programs such as Virtualdub or FlyCapture because the acquisition framerate can be set.
Infrared LED lights
Assay tank	Aquaneering	Part number ZT180	Size: M3 1.8 liter
Stand and clamp, or standard tripod for camera
250mL beaker
Tracking software			We use Ethovision XT 13 from Noldus Information Technology