Overview
本文描述了一种评估斑马鱼压力的行为方法。为了应对压力，斑马鱼倾向于在水箱底部游泳，直到减除压力。示例协议描述了执行测定的分步方法。
Protocol
1. 新型油箱测试设置
- 准备一个250mL的烧嘴预先装满鱼系统水，和至少两个储罐。
- 在测试的早晨，将至少10只用于每个实验条件的测试成年斑马鱼（控制和实验成人）从鱼设施转移到一个储罐中，将它们转移到行为室，并允许它们适应至少一个小时。
注： 在实验之前应进行功率分析，但在我们手中，n = 10 通常足以检测统计学意义。此外，蓄水池每升水的含水量不应超过五人。一个小时的适应就足够了，因为斑马鱼的成年人已经证明在新鱼缸的30分钟内就习惯了。此外，行为节律受昼夜过程的影响，因此在不同天进行的实验复制应在同一时间内进行。我们通常在上午 11：00 至下午 6：00 之间执行所有实验。 - 给储罐贴上标签，使动物的状况或基因型对实验者视而不见。
注： 通过使用字母或编号系统（即一个罐标有"A"，另一个"B"等）给储罐贴上标签，实验很容易使实验者失明。不参与实验的一方用这种系统给坦克贴上标签，并在分析完成之前掩盖实验者的身份。 - 使用网，轻轻地将一个成年人放在步骤 1.1 的预填充烧嘴中。让成年鱼在烧嘴中浸入10分钟。
注： 记录成人的性别，因为分析后寻找性别差异可能很重要。 - 在烧杯中适应后，通过轻轻地从烧杯中倒出水和成人，将鱼引入新的鱼缸（在下面设置细节）。
注： 本节中的步骤描述了设置新颖的坦克检测。最终产品的图表在图1B中给出。- 把新颖的坦克放在桌子中间。
- 将红外灯放置在油箱后面，并将白色丙烯酸片或扩散器屏幕放置在油箱和 LED 光源之间。
- 放置扩散器，使其最大程度地传播来自 LED 的光线，光线的强度足以照亮新颖的油箱。棋盘离光源越近，灯光就越亮，但扩散得越少。相比之下，将扩散板远离光源会降低光的强度，但会更好地传播光线。
- 用鱼系统水填满大约四分之三的新型水箱。
注： 系统水使用自来水的反渗透产生，然后进行给药，使电导率等于 900 ± 100 μS，pH 为中性 （7.2），温度为 27 ± 1 °C。 - 将摄像机连接到摄像机支架，并将摄像机连接到计算机。打开视频采集软件，调整摄像头，以面对坦克的前部，并确保整个新颖的坦克可以看到，并在视频中没有模糊的区域。调整油箱和红外灯，以便通过摄像机观察到整个油箱时有足够的照明。
注： 在进行实验之前，通常可以进行试运行，在试运行中捕获鱼的视频并进行跟踪。这将确保设置足以进行行为实验。
- 将成人引入新颖的鱼缸后，启动摄像机录制，然后离开设置，以防止对鱼造成额外的困扰。
- 录制完成后，将个人从新款坦克中取出，放入新的储罐中。
注： 应使用与步骤 1.2 不同的储罐，以防止对同一个人进行重复测试。
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Representative Results
图1。新型坦克设置图。（A） 从坦克记录侧看到的 1.8 L 梯形新型坦克的尺寸。（B） 设置图，包括红外灯、照相机和用于尽量减少人类干扰的屏障的位置。
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Camera | We use Point Grey Grasshopper3 USB camera with lens from Edmund Optics. | ||
| Infrared filter | Edmund Optics | ||
| Video Acquisition Program | Use programs such as Virtualdub or FlyCapture because the acquisition framerate can be set. | ||
| Infrared LED lights | |||
| Assay tank | Aquaneering | Part number ZT180 | Size: M3 1.8 liter |
| Stand and clamp, or standard tripod for camera | |||
| 250mL beaker | |||
| Tracking software | We use Ethovision XT 13 from Noldus Information Technology |
