Overview
लेख जेब्राफिश में तनाव का आकलन करने के लिए एक व्यवहार विधि का वर्णन करता है। तनाव के जवाब में, जेब्राफिश एक टैंक के नीचे तैरने की आदत है जब तक तनाव दूर हो जाता है । नमूना प्रोटोकॉल परख करने के लिए स्टेपवाइज विधि का वर्णन करता है।
Protocol
1. उपन्यास टैंक परीक्षण सेटअप
- मछली प्रणाली के पानी से पहले से भरे 250 एमएल बीकर तैयार करें, और कम से कम दो होल्डिंग टैंक।
- परीक्षण की सुबह, मछली की सुविधा से प्रत्येक प्रयोगात्मक स्थिति (नियंत्रण और प्रयोगात्मक वयस्कों) के लिए प्रत्येक प्रायोगिक स्थिति (नियंत्रण और प्रयोगात्मक वयस्कों) के लिए कम से कम 10 परीक्षण वयस्क जेब्राफिश को एक होल्डिंग टैंक में स्थानांतरित करें, और उन्हें कम से कम एक घंटे के लिए स्वीकार करने की अनुमति दें।
नोट: प्रयोग से पहले एक शक्ति विश्लेषण किया जाना चाहिए, फिर भी हमारे हाथों में, एक एन = 10 आमतौर पर सांख्यिकीय महत्व का पता लगाने के लिए पर्याप्त है। इसके अलावा, होल्डिंग टैंक में प्रति लीटर पानी के पांच से अधिक व्यक्ति नहीं होने चाहिए। एक घंटे की एक अभिनंदन पर्याप्त है क्योंकि जेब्राफिश वयस्कों को एक नए टैंक के 30 मिनट के भीतर आदत में दिखाया गया है। इसके अलावा, व्यवहार लय सर्कैडियन प्रक्रियाओं से प्रभावित होते हैं, और इस प्रकार विभिन्न दिनों पर किए गए प्रयोगात्मक प्रतिकृति एक ही घंटों के भीतर की जानी चाहिए। हम आम तौर पर 11:00 बजे और 6:00 बजे के घंटे के बीच सभी प्रयोगों प्रदर्शन करते हैं । - टैंकों को इस तरह लेबल करें कि जानवरों की स्थिति या जीनोटाइप प्रयोगकर्ता से अंधा हो।
नोट: प्रयोगों को आसानी से एक पत्र या संख्या प्रणाली का उपयोग कर टैंक लेबलिंग द्वारा प्रयोगकर्ता को अंधा किया जा सकता है (यानी, एक टैंक को 'ए', दूसरा 'बी' आदि लेबल किया गया है)। प्रयोगों में शामिल नहीं एक पार्टी इस तरह के एक प्रणाली के साथ टैंक लेबल, और मास्क प्रयोगकर्ता से पहचान मास्क जब तक बाद विश्लेषण पूरा हो गया है । - नेट का उपयोग करके, धीरे-धीरे चरण 1.1 से पहले से भरे बीकर में एक वयस्क रखें। वयस्क मछली को 10 मिनट के लिए बीकर में स्वीकार करने की अनुमति दें।
नोट: वयस्क के लिंग को रिकॉर्ड करें, क्योंकि सेक्स-विशिष्ट मतभेदों को देखने के लिए विश्लेषण के बाद महत्वपूर्ण हो सकता है। - बीकर में अभिनंदन के बाद, मछली को उपन्यास टैंक में पेश करें (नीचे दिए गए विवरण स्थापित करें) धीरे-धीरे बीकर से पानी और वयस्क को बाहर निकालें।
नोट: इस खंड में कदम उपन्यास टैंक परख की स्थापना का वर्णन करते हैं। अंत उत्पाद का एक आरेख चित्र 1बीमें दिया गया है ।- उपन्यास टैंक को टेबल के बीच में रखें।
- टैंक के पीछे अवरक्त रोशनी की स्थिति और टैंक और एलईडी प्रकाश स्रोत के बीच में सफेद ऐक्रेलिक शीट या विसारक स्क्रीन जगह है।
- विसारक रखें ताकि यह एलईडी से आने वाले प्रकाश को अधिकतम फैलाए, और प्रकाश की तीव्रता उपन्यास टैंक को रोशन करने के लिए पर्याप्त है। बोर्ड प्रकाश स्रोत के करीब है, रोशनी चमकदार हो जाएगा, अभी तक कम यह फैलाना होगा । इसके विपरीत, विसारक बोर्ड को प्रकाश स्रोत से दूर रखने से प्रकाश की तीव्रता कम हो जाएगी, लेकिन प्रकाश को बेहतर ी से फैलाएंगे।
- मछली प्रणाली के पानी के साथ उपन्यास टैंक के लगभग तीन तिमाहियों भरें।
नोट: सिस्टम पानी नल के पानी के रिवर्स ऑस्मोसिस का उपयोग करके उत्पन्न होता है, जिसके बाद इस तरह की चालकता 900 ± 100μs के बराबर होती है, कि पीएच तटस्थ (7.2) है, और तापमान 27 ± 1 डिग्री सेल्सियस है। - कैमरा स्टैंड से अटैच करें और कैमरे को कंप्यूटर से कनेक्ट करें। वीडियो अधिग्रहण सॉफ्टवेयर खोलें और टैंक के सामने का सामना करने के लिए कैमरे को समायोजित करें और यह सुनिश्चित करें कि पूरे उपन्यास टैंक को देखा जा सकता है और वीडियो में कोई अस्पष्ट क्षेत्र नहीं हैं। टैंक और अवरक्त रोशनी को समायोजित करें जैसे कि कैमरे के माध्यम से मनाए जाने पर पूरे टैंक में पर्याप्त और यहां तक कि रोशनी भी है।
नोट: प्रयोगों के लिए आगे बढ़ने से पहले, यह अक्सर एक परीक्षण रन करने के लिए उपयोगी हो सकता है, जिसमें एक मछली के वीडियो पर कब्जा कर लिया है और ट्रैकिंग किया जाता है । यह सुनिश्चित करेगा कि सेटअप व्यवहार के प्रयोग के लिए पर्याप्त है।
- उपन्यास टैंक में वयस्क शुरू करने के बाद, कैमरा रिकॉर्डिंग शुरू, और मछली के लिए अतिरिक्त संकट को रोकने के लिए सेटअप से दूर चले जाएं।
- रिकॉर्डिंग समाप्त होने के बाद, व्यक्ति को उपन्यास टैंक से हटा दें और एक नए होल्डिंग टैंक में रखें।
नोट: एक ही व्यक्तियों पर बार-बार परीक्षण को रोकने के लिए चरण 1.2 में से एक अलग होल्डिंग टैंक का उपयोग किया जाना चाहिए।
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Representative Results
चित्रा 1. उपन्यास टैंक सेटअप का आरेख। (A)1.8 एल ट्रैपेजोइडल उपन्यास टैंक के आयाम, जैसा कि टैंक के रिकॉर्डिंग साइड से देखा गया है। (ख)मानव हस्तक्षेप को कम करने के लिए इस्तेमाल किया अवरक्त रोशनी, कैमरा, और बाधाओं की स्थिति सहित सेटअप के आरेख ।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Camera | We use Point Grey Grasshopper3 USB camera with lens from Edmund Optics. | ||
| Infrared filter | Edmund Optics | ||
| Video Acquisition Program | Use programs such as Virtualdub or FlyCapture because the acquisition framerate can be set. | ||
| Infrared LED lights | |||
| Assay tank | Aquaneering | Part number ZT180 | Size: M3 1.8 liter |
| Stand and clamp, or standard tripod for camera | |||
| 250mL beaker | |||
| Tracking software | We use Ethovision XT 13 from Noldus Information Technology |
